專利名稱：螠蟶組織提取物的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種提取物的制備方法，特別是一種螆蟶組織提取物的制備方法，該
提取物具有抑菌活性好、抑菌普廣的特點(diǎn)，同時(shí)具有強(qiáng)的清除超氧陰離子和羥自由基的活 性的作用，可作為治療和預(yù)防與清除體內(nèi)過(guò)氧化物相關(guān)的藥物、保健食品、食品的添加劑。
背景技術(shù)：
鎰蟶(Sinonovacula constricta Iamarck)俗名蟶子、青子、竹蚶、海蟶，隸屬于 軟體動(dòng)物門(Mollusca)、瓣鰓綱(LameUibranchia)、真瓣鰓目(Eulamellibranchia)、蟶科 (Pharellidae)，是中國(guó)和日本特有的種類，也是中國(guó)沿海養(yǎng)殖的重要貝類之一。螆蟶肉味 鮮美，營(yíng)養(yǎng)豐富，蛋白質(zhì)含量5.5%，脂肪0.8%，糖1.8%和無(wú)機(jī)鹽1. 1%。螆蟶的軟體部還 有補(bǔ)虛的作用，對(duì)陰虛、血虛效果最佳，產(chǎn)后、病后多用之。近年來(lái)，海洋貝類的研究已引起 人們極大重視，海洋貝類中具有多種生物活性肽、多糖、不飽和脂肪酸，是研制海洋保健食 品和功能食品的重要原材料，如Bordenave等將太平洋牡蠣(Crassostrea gigas)用胃蛋 白酶水解得到具有抑制ACE能力的水解產(chǎn)物；文蛤(Meretrix meretrix(Linnaeus))多糖 對(duì)不同劑量的環(huán)磷酰胺(CTX)引起的遲發(fā)型超敏反應(yīng)(DTH)有雙向調(diào)節(jié)功能等。但是目前 關(guān)于螆蟶的研究多集中在干制品加工及營(yíng)養(yǎng)成分分析方面，對(duì)其生物活性的研究甚少，產(chǎn) 品品種單調(diào)，價(jià)格偏低，在一定程度上限制了螆蟶養(yǎng)殖業(yè)和螆蟶組織利用的發(fā)展。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種工藝簡(jiǎn)單、好操作、易控制、成本低的螆蟶組織提取物的 制備方法，為治療和預(yù)防與清除體內(nèi)過(guò)氧化物相關(guān)的藥物、保健食品、食品提供一種良好的 添加劑，克服現(xiàn)有技術(shù)的不足。
本發(fā)明的螆蟶組織提取物的制備方法，由如下步驟組成
將新鮮的螆蟶肉用組織搗碎，形成肉糜； 向上述肉糜內(nèi)加入蒸餾水浸泡20小時(shí) 30小時(shí)，肉糜與蒸餾水的用量比為30g 肉糜加入45mL 55mL蒸餾水； 將肉糜與蒸餾水的混合物置于70°C 9(TC水浴中加熱1. 5小時(shí) 2. 5小時(shí)；過(guò)
濾，分離出濾液備用；按上述方式向分離出的濾渣中加蒸餾水并加溫第二次制備濾液備用； 再向?yàn)V渣中加蒸餾水并加溫第三次制備濾液備用； 對(duì)上步三次形成的濾液進(jìn)行合并冷凍干燥，形成螆蟶組織提取物。 本發(fā)明的螆蟶組織提取物的制備方法，工藝步驟簡(jiǎn)單，好操作，易控制，加工成本
低，原料來(lái)源廣闊，為治療和預(yù)防與清除體內(nèi)過(guò)氧化物相關(guān)的藥物、保健食品、食品提供了
一種良好的添加劑。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的方法由如下步驟組成
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1、將新鮮的螆蟶肉用組織搗碎，形成肉糜； 2、將上述肉糜裝入三角瓶，向瓶?jī)?nèi)加入蒸餾水加塞浸泡20小時(shí)或24小時(shí)或26小 時(shí)或30小時(shí)，即在20小時(shí) 30小時(shí)之間均可，肉糜與蒸餾水的用量比為30g肉糜加入45mL 或50mL或55mL蒸餾水，即蒸餾水控制在45mL 55mL之間均可； 3 、將肉糜與蒸餾水的混合物置于70°C或80°C或90°C的水浴中加熱，溫度在 7(TC 9(TC之間均可，加熱時(shí)間為1. 5小時(shí)或2小時(shí)或2. 5小時(shí)，在1. 5小時(shí) 2. 5小時(shí)之 間均可； 4、過(guò)濾，分離出濾液備用；按上述方式向分離出的濾渣中加蒸餾水并加溫第二次
制備濾液備用；再向?yàn)V渣中加蒸餾水并加溫第三次制備濾液備用； 5、對(duì)上步三次形成的濾液進(jìn)行合并冷凍干燥，形成螆蟶組織提取物。 本發(fā)明的方法制備的提取物具有抑菌活性好、抑菌普廣的特點(diǎn)，同時(shí)具有強(qiáng)的清
除超氧陰離子和羥自由基的活性的作用，可作為治療和預(yù)防與清除體內(nèi)過(guò)氧化物相關(guān)的藥
物、保健食品、食品的添加劑。 實(shí)例l :將螆蟶肉用組織搗碎勻漿機(jī)勻漿搗碎、稱重30g，裝入三角瓶，加入50mL蒸 餾水，加塞浸泡24h ;然后置于8(TC水浴中加熱2h，過(guò)濾分離出濾液，再向?yàn)V渣中加入50mL 蒸餾水再次水浴加熱2h，分離濾液；再加入30mL蒸餾水，水浴處理lh，分離濾液。將3次所 得濾液合并冷凍干燥。 濾紙片法檢測(cè)抑菌活性，鄰苯三酚法檢測(cè)超氧陰離子自由基(02—)清除作用， Fenton法檢測(cè)羥自由基(*0H)清除作用。結(jié)果表明該螆蟶組織提取物可以作為治療和預(yù)防 清除體內(nèi)過(guò)氧化物的藥物或保健食品，能與輔料混合形成各種形式的丸劑、散劑、片劑、膏 劑，粉劑、水劑，顆粒劑、膠囊等；使用可以任意選用生理鹽水，穩(wěn)定劑，懸浮劑或乳化劑等； 制備成保健食品可以是液體的比如像清涼飲料，口服液，乳酸飲料，調(diào)味品；作為食品添加 劑，比如加入到面食類，果凍，冰淇淋，腌制品，火腿，點(diǎn)心中。 實(shí)例2 :將螆蟶肉用組織搗碎勻漿機(jī)勻漿搗碎、稱重30g，裝入三角瓶，加入50mL蒸 餾水，加塞浸泡24h ;然后置于8(TC水浴中加熱2h，過(guò)濾分離出濾液，再向?yàn)V渣中加入50mL 蒸餾水再次水浴加熱2h，分離濾液；再加入30mL蒸餾水，水浴處理lh，分離濾液。將3次所 得濾液合并冷凍干燥。 濾紙片法檢測(cè)組織提取液的抑菌活性大腸桿菌Escherichia coli(EC)、變形 桿菌Proteus vulgaris (PV)、金黃色葡萄球菌Staphylococcus aureus (SA)、產(chǎn)氣桿菌 Enterobacter aerogenes (EA)禾口枯草芽孢桿菌Bacillussubtilis (BS)用牛肉膏蛋白胨培 養(yǎng)基，乳酸菌Lactobacterium delbruckii (LD)用MRS培養(yǎng)基。釀酒酵母菌Saccharomyces cerevisiae(SC)用YPD培養(yǎng)基。以上各種菌分別接種于相應(yīng)的液體培養(yǎng)基，振蕩培養(yǎng)24h 作指示菌。分別用移液槍取指示菌液lOOii L于相應(yīng)的固體培養(yǎng)基，用無(wú)菌三角涂棒涂抹均 勻，然后將平板分成六個(gè)區(qū)，每個(gè)區(qū)分別放入一張濾紙片，再分別用移液槍移取組織提取液 樣品10iiL滴入濾紙片中央，置于37t:培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。每個(gè)處理做3次重復(fù)，陽(yáng)性對(duì)照為 75%酒精，陰性對(duì)照為無(wú)菌水。三天后觀察指示菌的生長(zhǎng)情況，測(cè)定抑菌圈的直徑大小。結(jié) 果這種水提物對(duì)大腸桿菌、變形桿菌、枯草芽孢桿菌、酵母菌作用較強(qiáng)，對(duì)金黃色葡萄球菌、 產(chǎn)氣桿菌均有抑制活性，而金黃色葡萄球菌、變形桿菌、大腸桿菌和產(chǎn)氣桿菌分別屬于革蘭 氏陽(yáng)性和革蘭氏陰性菌，因此用這種螆蟶組織提取物開發(fā)功能性食品或食品添加劑可因其抑菌活性而延長(zhǎng)產(chǎn)品的保藏時(shí)間。 超氧陰離子自由基(02—)清除作用的測(cè)定取鄰苯三酚O. lmL于試管中，加入 pH 8. 2的Tris-HCl緩沖溶液5mL，加入組織提取物溶液0. 25mL，迅速混勻。在25。C反應(yīng) 15min。使用1cm比色皿，以蒸餾水做空白對(duì)照，在320nm處時(shí)測(cè)吸光度At，并測(cè)定本底扣除 水解液自身的干擾。酶解液對(duì)超氧陰離子自由基清除率的計(jì)算公式如下清除率S(X)= Ao-(Ai-Aj)/AoX100X。式中，Ao為試劑空白的吸光度值為樣液的吸光度值；A」為樣液 本底的吸光度值。雖然超氧陰離子自由基(02—)不能直接誘導(dǎo)生物和食品體系中的脂類氧 化，但它會(huì)在金屬離子催化下發(fā)生Fenton反應(yīng)產(chǎn)生有高活性的 0H，因此常用樣品對(duì)超氧 陰離子自由基(02—)的清除能力來(lái)反映其抗氧化活性。試劑空白時(shí)的吸光度值A(chǔ)o為0. 862， 經(jīng)清除率公式S(X) = Ao-(Ai-Aj)/AoX100計(jì)算超氧陰離子自由基清除率。結(jié)果螆蟶組 織提取物的超氧陰離子自由基清除率高達(dá)83. 06% 。因此可用作抗氧化藥物的制備或食品 抗氧化添加劑。羥自由基('0H)清除作用的測(cè)定取9mmol/L的FeS04 lmL、9mmol/L的水楊酸-乙 醇溶液lmL、樣品溶液lmL，最后加入8. 8mmol/L的HA lmL啟動(dòng)反應(yīng)。在37。C反應(yīng)30分 鐘。以水為參比，用可見光分光光度計(jì)在510nm下測(cè)各個(gè)提取液吸光度值。提取物對(duì)羥自 由基的清除效果用清除率表示，按下式計(jì)算
SA = [ (Ac-As) / (Ac-Ao) ] X 100 % 式中，Ac為對(duì)照組0D值；As為樣品組0D值；A。為空白組0D值。
羥基自由基(*0H)是一種能夠激發(fā)油脂過(guò)氧化反應(yīng)的較強(qiáng)的氧化劑，被認(rèn)為是體 內(nèi)最活躍的活性氧自由基，輻射損傷等物理、化學(xué)因子都會(huì)促進(jìn)其形成，是造成生物有機(jī)體 過(guò)氧化損傷的主要因素。羥自由基可介導(dǎo)許多病理變化，如引發(fā)不飽和脂肪酸的脂質(zhì)過(guò)氧 化反應(yīng)，并損傷生物膜的功能和結(jié)構(gòu)，因此羥自由基的清除對(duì)于生物體具有重要意義。H202 和Fe2+混合發(fā)生Fenton反應(yīng)，生成具有很高反應(yīng)活性的*0H，能被水楊酸有效的捕捉，并生 成有色物質(zhì)；但若加入具有清除作用的物質(zhì)，便會(huì)與水楊酸競(jìng)爭(zhēng)，從而使有色產(chǎn)物生成量減 少。 對(duì)照組0D值A(chǔ)c為1. 243，空白組0D值A(chǔ)o為0. 031 。經(jīng)公式SA = [ (Ac-As) / (Ac-Ao) ] X 100%算出羥自由基清除率S%，結(jié)果該提取物的清除率達(dá)44. 9%，因此可用作 抗氧化藥物的制備或食品抗氧化添加劑。
權(quán)利要求
一種螠蟶組織提取物的制備方法，其特征在于由如下步驟組成a、將新鮮的螠蟶肉用組織搗碎，形成肉糜；b、向上述肉糜內(nèi)加入蒸餾水浸泡20小時(shí)～30小時(shí)，肉糜與蒸餾水的用量比為30g肉糜加入45mL～55mL蒸餾水；c、將肉糜與蒸餾水的混合物置于70℃～90℃水浴中加熱1.5小時(shí)～2.5小時(shí)；d、過(guò)濾，分離出濾液備用；按上述方式向分離出的濾渣中加蒸餾水并加溫第二次制備濾液備用；再向?yàn)V渣中加蒸餾水并加溫第三次制備濾液備用；e、對(duì)上步三次形成的濾液進(jìn)行合并冷凍干燥，形成螠蟶組織提取物。
全文摘要
一種螠蟶組織提取物的制備方法，由如下步驟組成將新鮮的螠蟶肉用組織搗碎，形成肉糜；向上述肉糜內(nèi)加入蒸餾水浸泡20小時(shí)～30小時(shí)，肉糜與蒸餾水的用量比為30g肉糜加入45mL～55mL蒸餾水；將肉糜與蒸餾水的混合物置于70℃～90℃水浴中加熱1.5小時(shí)～2.5小時(shí)；過(guò)濾，分離出濾液備用；按上述方式向分離出的濾渣中加蒸餾水并加溫第二次制備濾液備用；再向?yàn)V渣中加蒸餾水并加溫第三次制備濾液備用；對(duì)上步三次形成的濾液進(jìn)行合并冷凍干燥，形成螠蟶組織提取物。工藝步驟簡(jiǎn)單，好操作，易控制，加工成本低，原料來(lái)源廣闊，為治療和預(yù)防與清除體內(nèi)過(guò)氧化物相關(guān)的藥物、保健食品、食品提供了一種良好的添加劑。
文檔編號(hào)A23L1/29GK101732351SQ20091024896
公開日2010年6月16日 申請(qǐng)日期2009年12月29日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月29日
發(fā)明者張付云 申請(qǐng)人:大連水產(chǎn)學(xué)院