專利名稱：：微生物菌劑及其制備方法和生產(chǎn)生物腐植酸的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種微生物菌劑及其制備方法和使用該微生物菌劑通過甘蔗制糖殘?jiān)a(chǎn)生物腐植酸的方法。
背景技術(shù)：
：甘蔗是我國重要的糖料作物，也是我國糖分的主要來源。由甘蔗制糖的過程中，大部分的糖分被提取出來，而剩余的非糖分有機(jī)物大部分都存在于副產(chǎn)物中，形成殘?jiān)Ｔ跉堅(jiān)泻懈收峤?jīng)破碎和提取蔗汁后甘蔗莖的纖維性物質(zhì)，約為甘蔗重量的25%左右，我國每年產(chǎn)生甘蔗制糖殘?jiān)f噸。目前甘蔗制糖殘?jiān)饕挥米魅剂隙鴳?yīng)用于糖廠鍋爐發(fā)電和供應(yīng)蒸汽，小部分被用于造紙以及生產(chǎn)動物飼料等。雖然甘蔗制糖殘?jiān)苯尤紵翘幚砀收嶂铺菤堅(jiān)詈啙嵖焖俚姆椒?，但是甘蔗制糖殘?jiān)闹苯尤紵壤速M(fèi)甘蔗制糖殘?jiān)Y源，又會產(chǎn)生大量C02等溫室氣體，對空氣和自然環(huán)境造成嚴(yán)重的污染。甘蔗制糖殘?jiān)旒堖^程中又會產(chǎn)生大量的廢水，對環(huán)境造成二次污染。由于甘蔗制糖殘?jiān)心举|(zhì)素的含量高達(dá)20%以上，直接用作飼料可引起動物消化系統(tǒng)的損傷和紊亂，現(xiàn)國內(nèi)只限于用甘蔗制糖殘?jiān)鼇砦古?、羊等反?dāng)動物，且用量不超過日糧的20%，因而限制了甘蔗制糖殘?jiān)鳛轱暳系拈_發(fā)和利用。因此，對甘蔗制糖殘?jiān)挠行幚沓蔀槠惹行枰鉀Q的問題。
發(fā)明內(nèi)容基于目前存在的問題，本發(fā)明的發(fā)明人提供了一種微生物菌劑及制備該微生物菌劑的制備方法，并利用所述微生物菌劑使甘蔗制糖殘?jiān)l(fā)酵，將殘?jiān)械挠袡C(jī)成分進(jìn)行分解和轉(zhuǎn)化，從而將殘?jiān)D(zhuǎn)化成為生物腐植酸，實(shí)現(xiàn)了對甘蔗制糖殘?jiān)挠行Ю?。根?jù)本發(fā)明的一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus咖yloliquefaciens)、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Str印tomycessp)禾卩煙曲霉(Aspergillusfumigatus)，其中，每克所述復(fù)合微生物菌劑所含的總活菌數(shù)為O.5-1.5乂109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種微生物菌劑的制備方法，其中，該方法包括將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，使得到的每克微生物菌劑的總活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，3所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)生物腐植酸的方法，其中，該方法包括將本發(fā)明提供的微生物菌劑接種于甘蔗制糖殘?jiān)?，之后將所述殘?jiān)b入透氣性包裝體中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降至50°C以下，得到生物腐植酸。本發(fā)明提供的微生物菌劑使用了幾種重要的功能微生物的特異組合，能夠?qū)崿F(xiàn)對甘蔗制糖殘?jiān)目焖侔l(fā)酵，且殘?jiān)恍枰M(jìn)行任何預(yù)處理。經(jīng)本發(fā)明提供的微生物菌劑和方法發(fā)酵后，能夠得到富含有機(jī)質(zhì)、水溶性腐植酸、氨基酸和大量有益菌群的一種混合物，即生物腐植酸(bio-activehumicacid，簡稱BHA)。生物腐植酸是一種具有多效性的混合物，與礦物腐植酸相比，生物腐植酸具有分子量小、含有活性基團(tuán)多、水溶性較好、易于被動植物組織吸收、以及生物活性較高等優(yōu)點(diǎn)，可以用作水體修復(fù)制劑、飼料添加劑和肥料。從而使甘蔗制糖殘?jiān)玫搅擞行У奶幚砗屠?，真正的?shí)現(xiàn)了變廢為寶。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供了一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus咖yloliquefaciens)、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Str印tomycessp)和煙曲霉(Aspergillusfumigatus)，其中，每克所述復(fù)合微生物菌劑所含的總活菌數(shù)為O.5-1.5乂109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。根據(jù)本發(fā)明，所述培養(yǎng)基的種類可以在很大范圍內(nèi)改變，可以為各種能夠用于培養(yǎng)枯草芽包桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、地衣芽？包桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Str印tomycessp)禾口煙曲霉(Aspergillusfumigatus)，例如，可以為以下培養(yǎng)基中的一種或幾種用于培養(yǎng)地衣芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和解淀粉芽孢桿菌中的一種或幾種的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基；用于培養(yǎng)鏈霉菌的豆餅粉培養(yǎng)基；和用于培養(yǎng)煙曲霉的豆餅粉培養(yǎng)基。所述營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基的組成為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，以該培養(yǎng)基的總重量為基準(zhǔn)，該培養(yǎng)基中蛋白胨的含量可以為0.25-1重量％、NaCl的含量可以為0.25_1重量％、牛肉膏的含量可以為0.2-0.5重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為6.5-7.5。所述用于培養(yǎng)鏈霉菌的豆餅粉培養(yǎng)基的組成為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，以該培養(yǎng)基的總重量為基準(zhǔn)，該培養(yǎng)基可中玉米淀粉的含量可以為1-5重量％、蔗糖的含量可以為O.5-1.5重量％、豆餅粉的含量可以為2-5重量X、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為6.5-7.5。所述用于培養(yǎng)煙曲霉的豆餅粉培養(yǎng)基的組成為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，以該培養(yǎng)基的總重量為基準(zhǔn)，該培養(yǎng)基可中葡萄糖的含量可以為2-5重量％、蛋白胨的含量可以為1-3重量％、豆餅粉的含量可以為2-5重量％、酵母膏的含量可以為0.1-1重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為5.5-6.5。本發(fā)明中，所述枯草芽孢桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Str印tomycessp)和煙曲霉(Aspergillusfumigatus)的菌種可以商購得到，例如，購自中國農(nóng)業(yè)菌種保藏中心的枯草芽孢桿菌(ACCC11089)、解淀粉芽孢桿菌(ACCC10388)、地衣芽孢桿菌(ACCC11080)、鏈霉菌(ACCC40044)、煙曲霉(ACCC30367)。本發(fā)明還提供了一種微生物菌劑的制備方法，其中，該方法包括將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，使得到的每克微生物菌劑的總活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。本發(fā)明中，所述將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法可以在很大范圍內(nèi)改變，例如，該方法可以包括在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉；并將分別培養(yǎng)得到的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉按照比例進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。本發(fā)明中，所述枯草芽孢桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillus咖yloliquefaciens)、地衣芽抱桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Str印tomycessp)和煙曲霉(Aspergillusfumigatus)的菌種可以商購得到，例如，中國農(nóng)業(yè)菌種保藏中心保藏的枯草芽孢桿菌(ACCC11089)、解淀粉芽孢桿菌(ACCC10388)、地衣芽孢桿菌(ACCC11080)、鏈霉菌(ACCC40044)、煙曲霉(ACCC30367)。根據(jù)本發(fā)明，所述枯草芽孢桿菌的培養(yǎng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種2-5重量份的枯草芽孢桿菌的菌株，35-4(TC發(fā)酵培養(yǎng)，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明，所述解淀粉芽孢桿菌的培養(yǎng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種2-5重量份的解淀粉芽孢桿菌的菌株，35-4(TC發(fā)酵培養(yǎng)，直至解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明，所述地衣芽孢桿菌的培養(yǎng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種2-5重量份的地衣芽孢桿菌的菌株，35-4(TC發(fā)酵培養(yǎng)，直至地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明，所述鏈霉菌的培養(yǎng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，在100重量份的豆餅粉培養(yǎng)基中接種2-5重量份的鏈霉菌的菌株，25-3(TC發(fā)酵培養(yǎng)，直至鏈霉菌的活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。根據(jù)本發(fā)明，所述煙曲霉的培養(yǎng)方法為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知，例如，在100重量份的豆餅粉培養(yǎng)基中接種2-5重量份的煙曲霉的菌株，25-3(TC發(fā)酵培養(yǎng)，直至煙曲霉的活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。優(yōu)選情況下，將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉培養(yǎng)至與得到的微生物菌劑中所期望的單位培養(yǎng)基中所含的活菌數(shù)相同，這樣在后續(xù)的混合步驟中只需要按照上述微生物活菌數(shù)之間的比例混合即可，而不用擔(dān)心制得的微生物菌劑的總活菌數(shù)是否符合需要的范圍。根據(jù)本發(fā)明，所述混合的條件沒有特別的限制，只要能夠使得到的微生物菌劑滿足以下條件即可使得到的微生物菌劑中，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10_30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)生物腐植酸的方法，其中，該方法包括將本發(fā)明提供的微生物菌劑接種于甘蔗制糖殘?jiān)?，之后將所述殘?jiān)b入透氣性包裝體中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5t:以上，隨后自然下降至5(TC以下，得到生物腐植酸。優(yōu)選情況下，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降至40°C以下，在這樣的發(fā)酵條件下能夠進(jìn)一步地提高發(fā)酵效果，使得到的生物腐植酸中的黃腐酸的含量和有益微生物的數(shù)量進(jìn)一步的提高。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語"生物腐植酸(bio-activehumicacid，簡稱BHA)"是指一種混合物，它富含有機(jī)質(zhì)、水溶性腐植酸、氨基酸和大量有益菌群。所述微生物菌劑的接種量可以在很大范圍內(nèi)改變，優(yōu)選情況下，相對于100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)?，所述微生物菌劑的接種量為0.5-10重量份。優(yōu)選情況下，在進(jìn)行發(fā)酵之前，將所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至50-70重量％，在這樣的條件下，發(fā)酵更為快速且發(fā)酵效果更好。本發(fā)明中，所述透氣性包裝體的材料沒有特別的限制，只要能夠?qū)崿F(xiàn)發(fā)酵所需的透氣功能即可，例如，所述透氣性包裝體的材料可以為透氣性織物和/或透氣性塑料薄膜。另一方面，所述透氣性包裝體也可以由非透氣性材料制成，例如，所述透氣性包裝體可以為由非透氣性材料制成的具有透氣孔的包裝體。下面，通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更加詳細(xì)的說明。實(shí)施例1本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。(1)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種3重量份的地衣芽孢桿菌的菌株(ACCC11080，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(2)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種4重量份的枯草芽孢桿菌的菌株(ACCC11089，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。6(3)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種2重量份的解淀粉芽孢桿菌的菌株(ACCC10388，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(4)在100重量份的用于培養(yǎng)鏈霉菌的豆餅粉培養(yǎng)基中接種2重量份的鏈霉菌的菌株(ACCC40044，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，28t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至鏈霉菌的活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，玉米淀粉(廣東汕頭市西隴化工廠)的含量可以為4.5重量％、蔗糖的含量為1重量％、豆餅粉(北京恩希培養(yǎng)基技術(shù)有限公司)的含量為3重量X、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為7.0。(5)在100重量份的用于培養(yǎng)煙曲霉的豆餅粉培養(yǎng)基中接種4重量份的煙曲霉菌株(ACCC30367，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，2『C發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至煙曲霉的活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，葡萄糖的含量為3重量％、蛋白胨的含量為1.5重量％、豆餅粉的含量為3重量％、酵母膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為6.0。(6)將步驟(1)至(5)中得到的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉按照比例進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為0.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的28%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的28%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的6%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的8%，得到微生物菌劑Al。實(shí)施例2本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。(1)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種5重量份的地衣芽孢桿菌的菌株(ACCC11080，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)為1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(2)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種3重量份的枯草芽孢桿菌的菌株(ACCC11089，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(3)在100重量份的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中接種3重量份的解淀粉芽孢桿菌的菌株(ACCC10388，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.75重量X、NaCl的含量為0.75重量％、牛肉膏的含量為0.2重量％、余量為無菌水，pH為7.0。7(4)在100重量份的用于培養(yǎng)鏈霉菌的豆餅粉培養(yǎng)基中接種4重量份的鏈霉菌的菌株(ACCC40044，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，28t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至鏈霉菌的活菌數(shù)為1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，玉米淀粉的含量為2.5重量％、蔗糖的含量為1.2重量％、豆餅粉的含量為2重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為7.0。(5)在100重量份的用于培養(yǎng)煙曲霉的豆餅粉培養(yǎng)基中接種3重量份的煙曲霉菌株(ACCC30367，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，2『C發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至煙曲霉的活菌數(shù)為1.5X108個(gè)/克的培養(yǎng)基。其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，葡萄糖的含量可以為2重量％、蛋白胨的含量為1重量％、豆餅粉的含量為3重量％、酵母膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為6.0。(6)將步驟(1)至(5)中得到的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉按照比例進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為1.5X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，得到微生物菌劑A2。實(shí)施例3本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。(1)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種3重量份的地衣芽孢桿菌的菌株(ACCC11080，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至地衣芽孢桿菌的活菌數(shù)為1乂109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(2)在100重量份的營養(yǎng)肉汁培養(yǎng)基中接種2重量份的枯草芽孢桿菌的菌株(ACCC11089，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為1乂109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(3)在100重量份的營養(yǎng)肉湯培養(yǎng)基中接種4重量份的解淀粉芽孢桿菌的菌株(ACCC10388，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，37t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至短小芽孢桿菌的活菌數(shù)為1乂109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述肉汁培養(yǎng)基中，蛋白胨的含量為0.5重量X、NaCl的含量為0.5重量％、牛肉膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，pH為7.0。(4)在100重量份的用于培養(yǎng)鏈霉菌的豆餅粉培養(yǎng)基中接種4重量份的鏈霉菌的菌株(ACCC40044，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，28t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵培養(yǎng)過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至鏈霉菌的活菌數(shù)為1X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，玉米淀粉的含量可以為3重量％、蔗糖的含量為1重量％、豆餅粉的含量為3重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為7.0。(5)在100重量份的用于培養(yǎng)煙曲霉的豆餅粉培養(yǎng)基中接種3.5重量份的煙曲霉菌株(ACCC30367，購自中國農(nóng)業(yè)微生物菌種保藏中心)，28t:發(fā)酵培養(yǎng)，在發(fā)酵過程中進(jìn)行取樣并通過顯微鏡直接計(jì)數(shù)法進(jìn)行觀察，直至煙曲霉的活菌數(shù)為1X109個(gè)/克的培養(yǎng)基。其中，所述豆餅粉培養(yǎng)基中，葡萄糖的含量為3重量％、蛋白胨的含量為3重量％、豆餅粉的含量為3.5重量％、酵母膏的含量為0.3重量％、余量為無菌水，該培養(yǎng)基的pH為6.0。(6)將步驟(1)至(5)中得到的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉按照比例進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為1Xl(f個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，得到微生物菌劑A3。實(shí)施例4本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法制備微生物菌劑A4，不同在于，分別在步驟(1)至(5)中培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉，直至它們的活菌數(shù)為1.2X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，之后按照比例將它們進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為1.2X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，得到微生物菌劑A4。實(shí)施例5本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法制備微生物菌劑A5，不同在于，分別在步驟(1)至(5)中培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉，直至它們的活菌數(shù)為1.3X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，之后按照比例將它們進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為1.3X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的25%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的15%，得到微生物菌劑A5。實(shí)施例6本實(shí)施例用于說明本發(fā)明提供的微生物菌劑及其制備方法。根據(jù)與實(shí)施例3相同的方法制備微生物菌劑A6，不同在于，分別在步驟(1)至(5)中培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉，直至它們的活菌數(shù)為0.8X109個(gè)/克的培養(yǎng)基，之后按照比例將它們進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中的總活菌數(shù)為0.8乂109個(gè)/克的培養(yǎng)基，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的20%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10%，得到微生物菌劑A6。實(shí)施例7本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的使用甘蔗制糖殘?jiān)a(chǎn)生物腐植酸的方法。9在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N0.5重量份的實(shí)施例1中制備的微生物菌劑A1，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至75重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降到5(TC，得到生物腐植酸Dl。實(shí)施例8在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N5重量份的實(shí)施例2中制備的微生物菌劑A2，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至48重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降到50°C，得到生物腐植酸D2。實(shí)施例9在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N1重量份的實(shí)施例3中制備的微生物菌劑A3，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至55重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降到50°C，得到生物腐植酸D3。實(shí)施例10在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N10重量份的實(shí)施例4中制備的微生物菌劑A4，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至60重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬?5°C以上，隨后自然下降到50°C，得到生物腐植酸D4。實(shí)施例11在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N10重量份的實(shí)施例5中制備的微生物菌劑A5，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至60重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降到40°C，得到生物腐植酸D5。實(shí)施例12在100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)薪臃N4重量份的實(shí)施例6中制備的微生物菌劑A6，之后將所述殘?jiān)b入透氣性編織袋(松溪縣包裝廠，PP編織袋)中并將殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至60重量％，之后進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?8°C以上，隨后自然下降到38°C，得到生物腐植酸D6。實(shí)施例13-18本實(shí)施例用于說明本發(fā)明的生物腐植酸的檢測方法。(—)分別采用本領(lǐng)域中通用的容量法分別對實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸Dl-D6中的主要成分黃腐酸的含量進(jìn)行檢測，具體步驟如下1)稱取生物腐植酸樣品0.5克并將其加入到裝有80ml蒸餾水的250ml錐形瓶中，在瓶口插上玻璃漏斗，置于IO(TC沸水浴中震蕩保溫30min，取出冷卻至室溫；2)將溶液及殘?jiān)哭D(zhuǎn)入到250ml容量瓶中，用蒸餾水稀釋至250ml，搖勻，用干燥的中速定性濾紙過濾，準(zhǔn)確移取濾液5ml于250ml錐形瓶中，加入2ml0.8mol/L重鉻酸鉀溶液，緩慢加入10ml濃硫酸，于沸水浴中加熱氧化30min;將氧化后的溶液從水浴中取下，冷卻至室溫，加入約70ml蒸餾水、100ii1鄰菲羅啉-硫酸亞鐵銨混合指示劑；3)使用硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液c[(NH4)2Fe(S04)2]=0.lmol/L進(jìn)行滴定，溶液由橙色經(jīng)亮綠色轉(zhuǎn)變?yōu)榇u紅色為終點(diǎn)。同時(shí)做空白試驗(yàn)。黃腐酸質(zhì)量(C)通過以下公式計(jì)算<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>式中V。-空白試驗(yàn)時(shí)，消耗的硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升(ml);V「領(lǐng)U定試樣時(shí)，所消耗的硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的體積，單位為毫升(ml);C「硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L);m-生物腐植酸樣品的質(zhì)量，單位為克(g);D-定容體積與吸取體積之比；0.003-與1L的濃度為1.OOOmol/L的硫酸亞鐵銨標(biāo)準(zhǔn)滴定溶液相當(dāng)?shù)奶假|(zhì)量，g;0.5-黃腐酸的碳系數(shù)。將得到的黃腐酸的質(zhì)量除以生物腐植酸樣品再乘以100%，得到生物腐植酸樣品中黃腐酸的質(zhì)量百分比含量。(二)生物腐植酸Dl-D6以及發(fā)酵前的甘蔗制糖殘?jiān)悬S腐酸的量如表1所示。采用本領(lǐng)域通用的稀釋涂板法分別檢測生物腐植酸Dl-D6中有益微生物的數(shù)量，具體步驟如下將5克生物腐植酸樣品加到含45ml無菌水的錐形瓶中，再從搖勻的錐形瓶中取lml液體加入到9ml無菌水中(此時(shí)為10—0，之后依次做10倍遞增稀釋直到10—8，根據(jù)所用培養(yǎng)基選取三個(gè)合適的稀釋度。分別吸取0.lml稀釋度為10—5、10—6、10—7的稀釋液，注入平板計(jì)數(shù)培養(yǎng)基(培養(yǎng)放線菌的改良高氏一號培養(yǎng)基，海博生物技術(shù)有限公司，HB8550)的培養(yǎng)皿中，每個(gè)稀釋度做3個(gè)平行重復(fù)。在3(TC恒溫培養(yǎng)，選取菌落數(shù)在30-300之間的培養(yǎng)皿，計(jì)數(shù)并計(jì)算菌落數(shù)，取平均值。生物腐植酸Dl-D6以及發(fā)酵前的甘蔗制糖殘?jiān)杏幸嫖⑸锏臄?shù)量如表1所示。此處，術(shù)語"有益微生物"泛指對除致病微生物以外的其他微生物，主要包括對農(nóng)業(yè)有益微生物和能降解農(nóng)藥、N、P、有機(jī)廢棄物的環(huán)境有益微生物，在顯微鏡下，致病微生物與有益微生物可以通過其各自的形態(tài)特征被區(qū)別開，這使得微生物菌落數(shù)的計(jì)數(shù)得以進(jìn)行。表l<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>從上表1可以看出，使用本發(fā)明的微生物菌劑Al-A6對蔗糖殘?jiān)M(jìn)行發(fā)酵處理而得到的生物腐植酸D1-D6中黃腐酸的含量顯著提高，提高了77.2%以上；并且有益微生物的數(shù)量也顯著的增加，提高了兩個(gè)數(shù)量級以上。特別地，與實(shí)施例13和14相比，實(shí)施例15-18中檢測的D3-D6的黃腐酸的含量更高，并且有益微生物的數(shù)量更多，這說明在發(fā)酵之前將甘蔗制糖殘?jiān)暮靠刂圃?0-70重量％之內(nèi)時(shí)發(fā)酵效果更好。此外，與實(shí)施例16相比，實(shí)施例17和18中檢測的D5和D6的黃腐酸的含量更進(jìn)一步地提高，并且有益微生物的數(shù)量也進(jìn)一步地增多，這說明在優(yōu)選的發(fā)酵條件下(發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降至40°C以下)，能夠進(jìn)一步地提高發(fā)酵效果，從而進(jìn)一步地提高得到的生物腐植酸中的黃腐酸的含量和有益微生物的數(shù)量。實(shí)施例19-24將從豬場取新鮮糞水裝于聚氯乙烯桶(直徑0.4m，高0.6m)，每桶裝50kg廢水。分別將實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸Dl-D6制備成1重量％濃度的滅菌生物腐植酸(在115t:下滅菌20分鐘后得到的生物腐植酸)溶液和未滅菌的生物腐植酸溶液，各1L。分別將滅菌的生物腐植酸溶液和未滅菌的生物腐植酸溶液加入到聚氯乙烯桶中與糞水混勻。自然發(fā)酵8天，將未加入溶液而直接發(fā)酵糞水的組作為空白對照組。發(fā)酵前后通過重鉻酸鹽法(GB11914-89)測定糞水的COD^見表2。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>空白對照組發(fā)酵8天后的COD&為1820mgL—、CODcr去除率只有31.4%，而從表2可以看出添加本發(fā)明的生物腐植酸D1-D6進(jìn)行發(fā)酵的，相對于空白對照組去除率均顯著提高，并且，未滅菌的去除率高于滅菌的處理的去除率，這說明有益微生物的代謝，能促進(jìn)黃腐酸的作用，加快有機(jī)物的分解，以使CODcr降低。由此可以看出，使用本發(fā)明提供的微生物菌劑制得的生物腐植酸中，黃腐酸和有益微生物二者相輔相成，協(xié)同促進(jìn)了有機(jī)廢物的分解，從而可以應(yīng)用于水體修復(fù)。實(shí)施例25-30將實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸D1-D6稀釋100倍，配制成滅菌的生物腐植酸(在115t:下滅菌20分鐘后得到的生物腐植酸)溶液和未滅菌的生物腐植酸溶液。在無菌條件下，用鑷子將20粒玉米種子放入無菌培養(yǎng)皿中，每皿種子稱量初重，用無菌移液管取40mL浸種液加入培養(yǎng)皿內(nèi)，置于28t:培養(yǎng)箱內(nèi)，浸種12h。12h后，把種子移入鋪有無菌濾紙的培養(yǎng)皿中，加入無菌水，置于2『C培養(yǎng)箱中催芽。并隨時(shí)觀察催芽情況，補(bǔ)水，保持平皿內(nèi)濕潤環(huán)境。催芽24h后，記錄發(fā)芽數(shù)。將催芽后的種子轉(zhuǎn)移至無菌的250mL三角瓶內(nèi)，每瓶裝10粒種子，加入定量無菌水，置于25t:光照培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)72h，隨時(shí)觀察生長情況，定量補(bǔ)水。培養(yǎng)72h后，測量種子根增長長度、莖葉增長長度、粒量。試驗(yàn)以無菌水來浸種作為空白對照處理。結(jié)果如表3所示。表3實(shí)施例的編PJ腐植酸的編號種子發(fā)芽率(％)增重(克/粒)根增長長度(毫米)莖葉增長-《度(毫米)滅菌處理未滅菌處理滅菌處理未滅菌處理滅菌處理未滅菌處理滅菌處理未滅菌處理實(shí)例25Dl8092.51.08U6127.99134.9775.4682.23實(shí)例26D281.789.91.091.32126.66136.6975.8683.29實(shí)例27D388.2951.161.33136.7544.0776.5886.64實(shí)例28D49092.71.21.38151.02159.1180.5188.28實(shí)例29D5卯.497.51.241.41148.58166.3583.8990.32實(shí)例30D690.792.51.251.39139.68146.7983,0587.56空白對照組的玉米種子發(fā)芽率、增重、根增長長度、莖葉增長長度分別為86.9%、1.1克/粒、125.15毫米、63.83毫米。從表3可以看出，相對于空白對照組，使用滅菌的或未滅菌的實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸稀釋液處理種子的效果顯著提高，為滅菌的稀釋液的處理效果明顯好于滅菌的稀釋液，這說明有益微生物的代謝，能提高黃腐酸對植物生長的促進(jìn)的作用。由此可以看出，使用本發(fā)明提供的微生物菌劑制得的生物腐植酸中，黃腐酸和有益微生物二者相輔相成，能夠協(xié)同促進(jìn)植物的生長，可以用作肥料。實(shí)施例31-36采用溫室盆栽試驗(yàn)來研究實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸Dl-D6的肥效。供試植物為紫花苜蓿，試驗(yàn)土樣采自中國農(nóng)科院河北廊坊實(shí)驗(yàn)站，基本養(yǎng)分指標(biāo)為有機(jī)質(zhì)2.69gkg—1;全氮0.65gkg—1;速效磷8.63mgkg—1;速效鉀105.15mgkg—1;Cul.07mgkg—1;Fe6.OOmgkg—1;Zn3.llmgkg—1;Mn5.44mgkg—、每個(gè)花盆稱取1600g土，分別加入0.05重量X的滅菌生物腐植酸(在115t:下滅13菌20分鐘后得到的生物腐植酸)和未滅菌的生物腐植酸，并將未加入生物腐植酸的花盆設(shè)為空白對照組，試驗(yàn)時(shí)間3個(gè)月。在紫花苜蓿種下2個(gè)月后，用無菌打孔器在花盆中五點(diǎn)取樣，取樣深度0-10cm，所取土樣風(fēng)干，過lmm篩，用水合熱重鉻酸鉀氧化_比色法測定土壤有機(jī)質(zhì)，具體方法參照魯如坤的《土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法》。在紫花苜蓿種下3個(gè)月時(shí)，取紫花苜蓿地上部分，105°C烘2-3h，至恒重后，稱重得到紫花苜蓿生物量。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表4。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>空白對照組中的土壤有機(jī)質(zhì)含量和生物量分別為6.13g*kg—1和0.17g/株。從表4的結(jié)果可以看出，相對于空白對照組，加入滅菌的和未滅菌的生物腐植酸D1-D6的使土壤有機(jī)質(zhì)含量、植物生物量都得到較快而顯著的提高，說明實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸Dl-D6能使土壤質(zhì)量得到很到改善，具有較好的肥效。實(shí)施例37-42采用小區(qū)試驗(yàn)來研究實(shí)施例7-12中制備的生物腐植酸Dl-D6對退化土壤的修復(fù)作用。試驗(yàn)地位于新疆阜康222團(tuán)80畝核心示范基地，屬大陸性中溫帶氣候區(qū)，年均氣溫6.7°C;日照時(shí)數(shù)2931.3h;有效積溫3551.5";無霜期174d;降雨量205mm。試驗(yàn)地前茬為小麥。土壤類型為鹽堿度中等的砂質(zhì)土，基本養(yǎng)分指標(biāo)如下pH8.42;全氮0.244gkg—1;全磷0.726gkg—1;全鉀15.Ogkg—1;有機(jī)質(zhì)4.97gkg—、在播種甘草種子前深耕30cm左右，翻耕后整平耙細(xì)。每個(gè)小區(qū)面積為1/15hm、播種前每個(gè)小區(qū)施入生物腐植酸30kg。本試驗(yàn)所用甘草的種源為烏拉爾甘草(Glycyrrhizauralensis)的干燥成熟種子。播前用碾米機(jī)磨種皮，使種皮粗糙，增加透水性，再將種子在45t:溫水中浸泡10h。播種方法為機(jī)械播種，采用條播，播深2-3cm，行距為25cm，播后適當(dāng)鎮(zhèn)壓。播種量折合45kg*hm—2。播種6個(gè)月后，取土樣測定土壤主要理化指標(biāo)，包括土壤機(jī)械組成、土壤全氮、全磷、全鉀、有機(jī)質(zhì)；土壤酶活性，包括堿性磷酸酶、脲酶和過氧化氫酶；土壤微生物學(xué)指標(biāo)，主要包括土壤中功能微生物，即自生固氮菌和氨氧化細(xì)菌的數(shù)量，微生物生物量碳，微生物商。土壤各理化指標(biāo)測定方法及具體操作步驟參見魯如坤的《土壤農(nóng)業(yè)化學(xué)分析方法》。土壤機(jī)械組成分析采用吸管法，土壤粒級劃分如下極粗砂粒2-lmm;粗砂粒1-0.5mm;中砂粒0.5-0.25mm;細(xì)砂粒0.25-0.1mm;極細(xì)砂粒0.1-0.05mm;粉粒0.05-0.005mm;粘粉粒<0.005mm;粘粒<0.002mm，各粒級土壤所占含量如表5所示。表5單位(％)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>采用采用凱氏消煮法檢測土壤全氮；采用堿溶-鉬蘭比色法檢測全磷；采用氫氧化鈉熔融_火焰光度計(jì)法檢測土壤全磷；采用油浴加熱重鉻酸鉀容量法檢測土壤有機(jī)質(zhì)，結(jié)果見表6。表6實(shí)<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>土壤沙化的特征是土壤粘粉粒、有機(jī)質(zhì)和全氮含量的下降，并且土壤有機(jī)質(zhì)和全氮的損失主要是源于由風(fēng)蝕所引起的土壤粘粉粒比例的減少，土壤質(zhì)地(尤其是粘粉粒含量)與土壤養(yǎng)分具有非常密切的關(guān)系。評價(jià)修復(fù)效果的好壞，就是要看土壤質(zhì)地(尤其是粘粉粒含量)是否得到了改善，以及土壤全氮、有機(jī)質(zhì)等重要養(yǎng)分含量是否得到了有效積累。從表5和表6可看出施用了本發(fā)明的生物腐植酸D1-D6后，使土壤的機(jī)械組成發(fā)生了變化，土壤粗粒含量減少，粘粉粒和粘粒含量顯著增加，土壤質(zhì)地得到明顯改善，并且顯著地提高了土壤全氮和有機(jī)質(zhì)的含量，這充分說明了使用本發(fā)明提供的微生物菌劑得到的生物腐植酸對退化土壤的修復(fù)具有良好的效果。綜上所述，通過本發(fā)明的微生物菌劑發(fā)酵得到的生物腐植酸可以用作水體、土壤的修復(fù)制劑和肥料，從而使甘蔗制糖殘?jiān)玫搅擞行У奶幚砗屠?，真正的?shí)現(xiàn)了變廢為寶。權(quán)利要求一種微生物菌劑，該微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其特征在于，所述菌體包括枯草芽孢桿菌(Bacillussubtitlis)、解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)、地衣芽孢桿菌(Bacilluslicheniformis)、鏈霉菌(Streptomycessp)和煙曲霉(Aspergillusfumigatus)，其中，每克所述復(fù)合微生物菌劑所含的總活菌數(shù)為0.5-1.5×109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30％，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30％，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30％，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15％，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15％。2.權(quán)利要求1所述的微生物菌劑的制備方法，其中，該方法包括將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，使得到的每克微生物菌劑的總活菌數(shù)為0.5-1.5X109個(gè)，其中，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的制備方法，所述將枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉接種于培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)的方法包括在各自獨(dú)立的培養(yǎng)體系中分別培養(yǎng)枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉；并將分別培養(yǎng)得到的枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉按照比例進(jìn)行混合，使得到的微生物菌劑中，以得到的微生物菌劑的總活菌數(shù)為基準(zhǔn)，所述枯草芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述解淀粉芽孢桿菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述地衣芽孢桿菌的總活菌數(shù)為總活菌數(shù)的10-30%，所述鏈霉菌的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%，所述煙曲霉的活菌數(shù)為總活菌數(shù)的5-15%。4.一種生產(chǎn)生物腐植酸的方法，其特征在于，該方法包括將權(quán)利要求1所述的微生物菌劑接種于甘蔗制糖殘?jiān)?，之后將所述殘?jiān)b入透氣性包裝體中進(jìn)行發(fā)酵，發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5t:以上，隨后自然下降至5(TC以下，得到生物腐植酸。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中，所述發(fā)酵的條件使得所述透氣性包裝體內(nèi)的殘?jiān)臏囟壬咧?5°C以上，隨后自然下降至40°C以下。6.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，相對于100重量份的甘蔗制糖的殘?jiān)?，所述微生物菌劑的接種量為0.5-10重量份。7.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，在進(jìn)行發(fā)酵之前，將所述透氣性包裝體中的殘?jiān)暮空{(diào)節(jié)至50-70重量％。8.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，所述透氣性包裝體的材料為透氣性織物和/或透氣性塑料薄膜。9.根據(jù)權(quán)利要求4或5所述的方法，其中，所述透氣性包裝體為由非透氣性材料制成的具有透氣孔的包裝體。全文摘要本發(fā)明提供了一種微生物菌劑及其制備方法和使用該微生物菌劑通過甘蔗制糖殘?jiān)a(chǎn)生物腐植酸的方法。本發(fā)明提供的微生物菌劑包括培養(yǎng)基和菌體，其中，所述菌體包括枯草芽孢桿菌、解淀粉芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌、鏈霉菌和煙曲霉，并且，每克所述復(fù)合微生物菌劑所含的總活菌數(shù)為0.5-1.5×109個(gè)。本發(fā)明的微生物菌劑能夠?qū)崿F(xiàn)對甘蔗制糖殘?jiān)目焖侔l(fā)酵，從而得到生物腐植酸。與礦物腐植酸相比，生物腐植酸具有分子量小、含有活性基團(tuán)多、水溶性較好、易于被動植物組織吸收、以及生物活性較高等優(yōu)點(diǎn)，可以用作水體、土壤的修復(fù)制劑和肥料。從而使甘蔗制糖殘?jiān)玫搅擞行У奶幚砗屠?，真正的?shí)現(xiàn)了變廢為寶。文檔編號C12N1/00GK101717722SQ20091024136公開日2010年6月2日申請日期2009年11月30日優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日發(fā)明者俞曉蕓,劉麗輝,葉婧,朱昌雄,李瑞波,田云龍,郭萍申請人:中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院農(nóng)業(yè)環(huán)境與可持續(xù)發(fā)展研究所;開創(chuàng)陽光環(huán)?？萍及l(fā)展(北京)有限公司