專利名稱：可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)器皿，特別涉及一種可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì) 胞培養(yǎng)皿。
背景技術(shù)：
細(xì)胞是一切生命活動(dòng)的基本結(jié)構(gòu)和功能單位。而顯微鏡是觀察細(xì)胞的主要工具， 也是進(jìn)行生命科學(xué)研究的主要方法。近年來激光共聚焦顯微鏡作為一種現(xiàn)代檢測(cè)技術(shù)已經(jīng) 被廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)研究中?，F(xiàn)在常用的激光共聚焦顯微鏡的物鏡的工作距離都比較 小，特別是放大倍數(shù)在60倍以上的物鏡，工作距離都在0. 18mm以下，而普通的一次性細(xì)胞 培養(yǎng)皿多是采用透明高分子材料聚苯乙烯材料，且透光性差，培養(yǎng)皿壁較厚(約1mm左右)， 不適合用激光共聚焦顯微鏡來觀察和成像。目前市場(chǎng)上銷售的共聚焦專用培養(yǎng)皿都是采用 厚度為0. 13 0. 17mm厚的玻璃底培養(yǎng)皿，這種培養(yǎng)皿結(jié)構(gòu)是在普通一次性細(xì)胞培養(yǎng)皿底 部打一直徑為10mm的洞，然后在培養(yǎng)皿底用生物膠粘上一片厚度為0. 13 0. 17mm的方形 蓋玻片，這種培養(yǎng)皿只能一次性使用。由于生物膠的技術(shù)國(guó)內(nèi)還沒有大的突破，目前國(guó)內(nèi)使 用的這種培養(yǎng)皿主要依賴于進(jìn)口，且售價(jià)很高，約36元/個(gè)。這對(duì)于從事生命科學(xué)及其相 關(guān)研究的單位和個(gè)人來說都是筆不小的費(fèi)用。至今為止國(guó)內(nèi)外還沒有出現(xiàn)商品化可以重復(fù) 使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿。因而研制可重復(fù)使用激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿必將會(huì)為眾生命科學(xué)的 研究提供一種經(jīng)濟(jì)實(shí)用的細(xì)胞培養(yǎng)工具。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，采用不銹鋼材料為主體，將細(xì)胞培養(yǎng)皿的 主體分成三部分，利用精密機(jī)械加工技術(shù)實(shí)現(xiàn)三部分與蓋玻片的有機(jī)結(jié)合，從而提供一種 多功能可重復(fù)使用的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿。本發(fā)明的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，包括細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋、 凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底、細(xì)胞培養(yǎng)皿芯、上下墊片、蓋玻片。在底部開有通光孔的所述的凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底中放置有所述的下墊片，在下墊片 上放置有所述的蓋玻片，在蓋玻片上放置有所述的上墊片，在上墊片上放置有所述的細(xì)胞 培養(yǎng)皿芯，且細(xì)胞培養(yǎng)皿芯與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底密封結(jié)合；所述的上墊片、下墊片和細(xì)胞培 養(yǎng)皿芯上開有與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底上的通光孔大小相同且位置相對(duì)應(yīng)的通光孔；在細(xì)胞培 養(yǎng)皿芯上蓋有所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋。所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外邊緣帶有外螺紋，凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁的內(nèi)側(cè)帶 有內(nèi)螺紋，細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外螺紋與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁的內(nèi)螺紋嚙合密封。所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋、細(xì)胞培養(yǎng)皿芯和凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底均是用不銹鋼材料經(jīng)精 加工而成。所述的上墊片和下墊片均是由聚四氟乙烯材料加工而成。
所述的蓋玻片是激光共聚焦顯微鏡專用蓋玻片，厚度可為0. 13 0. 17mm。被檢測(cè)
的培養(yǎng)細(xì)胞負(fù)載于蓋玻片上(與上墊片接觸的一面)。 所述的蓋玻片的大小與上墊片或下墊片的大小一樣或略小。上述的通光孔可以是圓形孔也可以是方形孔，孔的大小和數(shù)量可以根據(jù)實(shí)際需要 設(shè)計(jì)。如所述的凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)成直徑為25mm、30mm、35mm、40mm、 45mm、50mm等；通光孔的直徑可為 10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm等；通光孔
的數(shù)量可為1 8個(gè)等。所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)成直徑為24. 8mm, 29. 8mm, 34. 8mm、 39. 8mm、44. 8mm、49. 8mm 等；通光孔的直徑可為 10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、 45mm等；通光孔的數(shù)量可為1 8個(gè)等。所述的上下墊片可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)成直徑為24. 8mm、29. 8mm、34. 8mm、39. 8mm、 44. 8mm、49. 8mm 等，通光孔的直徑可為 10mm、15mm、20mm、25mm、30mm、35mm、40mm、45mm 等，通
光孔的數(shù)量可為1 8個(gè)等。所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋可以根據(jù)需要設(shè)計(jì)成直徑為26mm、31mm、36mm、41mm、46mm、 51mm 等。本發(fā)明適合于采用激光共聚焦顯微鏡檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)，可以實(shí)現(xiàn)多孔板的功能。本發(fā)明具有(1)本發(fā)明采用不銹鋼材料作為培養(yǎng)皿的主體材料，該材料與常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)液不 發(fā)生任何反應(yīng)，且容易清洗，實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)皿主體的重復(fù)使用；(2)采用聚四氟乙烯材料做上下墊片，且細(xì)胞培養(yǎng)皿芯與細(xì)胞培養(yǎng)皿底通過螺紋 嚙合保證了培養(yǎng)皿的主體密封性；(3)本發(fā)明的多孔結(jié)構(gòu)可以實(shí)現(xiàn)多孔培養(yǎng)板的功能；(4)本發(fā)明的裝置結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單，易于操作，經(jīng)濟(jì)實(shí)用，能應(yīng)用于化學(xué)、生物、醫(yī)學(xué)、材 料、環(huán)境、安全等多個(gè)領(lǐng)域。為納米科學(xué)、材料科學(xué)、生物化學(xué)及交叉領(lǐng)域的科學(xué)問題的深入 研究提供了高效率研究手段。


圖1.本發(fā)明的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿結(jié)構(gòu)示意圖。圖2 (a).本發(fā)明實(shí)施例1的用細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞在激光共聚焦顯微鏡下 觀察其明場(chǎng)的圖像。圖2(b).本發(fā)明實(shí)施例1的用細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng)的貼壁細(xì)胞在加入熒光探針HgL 后，在激光共聚焦顯微鏡下觀察的熒光圖。附圖標(biāo)記1.細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋 2.通光孔 3.細(xì)胞培養(yǎng)皿底 4.蓋玻片5.細(xì)胞培養(yǎng)皿芯 6.上墊片 7.下墊片
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例來對(duì)本發(fā)明做進(jìn)一步的解釋和說明。
實(shí)施例1請(qǐng)參見圖1。可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，包括細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋 1、凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底3、細(xì)胞培養(yǎng)皿芯5、上墊片6、下墊片7、蓋玻片4。在底部開有通光孔2的由不銹鋼材料制備成的凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底3中放置有由 聚四氟乙烯材料加工而成的下墊片7，在下墊片上放置有激光共聚焦顯微鏡專用蓋玻片4， 蓋玻片的厚度為0. 13 0. 17mm，在蓋玻片上放置有由聚四氟乙烯材料加工而成的上墊片 6，在上墊片上放置有由不銹鋼材料制備成的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯5 (其作用是將上墊片6、下墊片 7及蓋玻片4壓緊)，且細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外邊緣帶有外螺紋，凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁的 內(nèi)側(cè)帶有內(nèi)螺紋，細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外螺紋與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁內(nèi)側(cè)的內(nèi)螺紋嚙合 密封；所述的上墊片、下墊片和細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上開有與細(xì)胞培養(yǎng)皿底上的通光孔大小相同 且位置相對(duì)應(yīng)的圓形通光孔；在細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上蓋有由不銹鋼材料制備成的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋 1。采用該細(xì)胞培養(yǎng)皿，能夠在二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)貼壁細(xì)胞和不貼壁細(xì)胞。圖2(a)和圖2(b)為采用可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿培養(yǎng) 的HEK293細(xì)胞的激光共聚焦圖片。將購(gòu)買得到的HEK293細(xì)胞以MEM培養(yǎng)液(質(zhì)量濃度為 10% PBS,2mM L-glu)作為培養(yǎng)基，在斜頸細(xì)胞培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)，溫度37°C，C02的質(zhì)量濃度為 5%，每隔3日換液一次。傳代，凍存?zhèn)溆?。測(cè)試前一日，復(fù)蘇凍存的HEK293細(xì)胞，選取生長(zhǎng) 狀態(tài)良好的HEK293細(xì)胞，用胰蛋白酶消化后吹打分散，然后裝在具有上述結(jié)構(gòu)的經(jīng)紫外線 消毒后的細(xì)胞培養(yǎng)皿中的蓋玻片上(與上墊片接觸的一面)后密封細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中，凹型 細(xì)胞培養(yǎng)皿底的直徑為40mm，蓋玻片的厚度為0. 13mm，通光孔的數(shù)量為1個(gè)，通光孔的直徑 為30mm，細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋的直徑為41mm ；將上述裝有HEK293細(xì)胞的細(xì)胞培養(yǎng)皿在二氧化碳培 養(yǎng)箱中培養(yǎng)24小時(shí)，在普通光學(xué)顯微鏡下觀察，大部分細(xì)胞呈貼壁狀態(tài)；實(shí)驗(yàn)前用PBS緩沖 液(磷酸鹽緩沖液)將培養(yǎng)基沖洗掉，然后放在共聚焦顯微鏡下觀察其明場(chǎng)圖像如圖2(a) 所示，加入識(shí)別生物巰基化合物熒光探針HgL (參看CN200810112996. X，“檢測(cè)谷胱甘肽還 原酶及生物活性巰基化合物的熒光探針及其合成方法和用途”)孵育5分鐘，得到激光共聚 焦熒光圖2 (b)，從圖2 (a)和圖2 (b)兩張圖中能看出細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好，能夠在激光共聚焦 顯微鏡下清洗成像。實(shí)施例2采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用原位雜交蓋玻片，能夠?qū)崿F(xiàn)原位雜交實(shí)驗(yàn)觀察。實(shí)施例3采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用載玻片，能夠培養(yǎng)多種細(xì)胞用于普通生物顯微鏡觀察與成像。實(shí)施例4采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用石英蓋玻片，能夠培養(yǎng)多種細(xì)胞用于紫外共聚焦顯微鏡及普通紫外熒光顯微鏡 觀察與成像。實(shí)施例5采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中蓋玻片采用硅化防脫蓋玻片，能夠用于抗原修復(fù)過程過程的熒光標(biāo)記共聚焦成像觀察。實(shí)施例6將具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿中的已 經(jīng)有貼壁細(xì)胞的蓋玻片取出，可以直接將貼壁細(xì)胞固定封片；而可重復(fù)使用的激光共聚焦 顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿中的多個(gè)通光孔可以為不同測(cè)試環(huán)境，可得到不同測(cè)試環(huán)境下的多 封片樣品。實(shí)施例7采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，并且 在細(xì)胞培養(yǎng)皿底的外壁貼上帕爾貼，通過電路設(shè)計(jì)可將可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專 用細(xì)胞培養(yǎng)皿實(shí)現(xiàn)為恒溫培養(yǎng)皿。實(shí)施例8將具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿設(shè)計(jì)成 長(zhǎng)方形，并按實(shí)驗(yàn)要求開有更多的通光孔(6孔、12孔、24孔、48孔、72孔、96孔)，可以實(shí)現(xiàn) 6孔、12孔、24孔、48孔、72孔、96孔的多培養(yǎng)板的功能。實(shí)施例9采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用多聚賴氨酸片基，適用活寡核苷酸探針熒光共聚焦成像。實(shí)施例10采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用醛基化玻璃片基，適用氨基修飾的DNA探針共聚焦成像。實(shí)施例11采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用異硫氰酸片或瓊脂糖片基，適用內(nèi)多肽、小分子抗原共聚焦成像。實(shí)施例12采用具有實(shí)施例1結(jié)構(gòu)的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其中 蓋玻片采用氨基化玻璃片基，適用DNA探針熒光共聚焦成像。
權(quán)利要求
一種可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其包括細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋、凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底、細(xì)胞培養(yǎng)皿芯、上下墊片、蓋玻片；其特征是在底部開有通光孔的所述的凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底中放置有所述的下墊片，在下墊片上放置有所述的蓋玻片，在蓋玻片上放置有所述的上墊片，在上墊片上放置有所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯，且細(xì)胞培養(yǎng)皿芯與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底密封結(jié)合；所述的上墊片、下墊片和細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上開有與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底上的通光孔大小相同且位置相對(duì)應(yīng)的通光孔；在細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上蓋有所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特征 是所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外邊緣帶有外螺紋，凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁的內(nèi)側(cè)帶有內(nèi) 螺紋，細(xì)胞培養(yǎng)皿芯的外螺紋與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底的凹型壁的內(nèi)螺紋嚙合密封。
3.根據(jù)權(quán)利要求1和2所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特 征是所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿芯和凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底均是用不銹鋼材料加工而成。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特征 是所述的細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋是用不銹鋼材料加工而成。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特征 是所述的上墊片和下墊片均是由聚四氟乙烯材料加工而成。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特征 是所述的蓋玻片是激光共聚焦顯微鏡專用蓋玻片。
7.根據(jù)權(quán)利要求1或6所述的可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿，其特 征是所述的蓋玻片的厚度為0. 13 0. 17mm。
全文摘要
本發(fā)明屬于細(xì)胞培養(yǎng)器皿，特別涉及一種可重復(fù)使用的激光共聚焦顯微鏡專用細(xì)胞培養(yǎng)皿。本發(fā)明的細(xì)胞培養(yǎng)皿是在底部開有通光孔的凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底中放置有下墊片，在下墊片上放置有蓋玻片，在蓋玻片上放置有上墊片，在上墊片上放置有細(xì)胞培養(yǎng)皿芯，且細(xì)胞培養(yǎng)皿芯與凹型細(xì)胞培養(yǎng)皿底密封結(jié)合；所述的上墊片、下墊片和細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上開有與細(xì)胞培養(yǎng)皿底上的通光孔大小相同且位置相對(duì)應(yīng)的通光孔；在細(xì)胞培養(yǎng)皿芯上蓋有細(xì)胞培養(yǎng)皿蓋。本發(fā)明采用不銹鋼材料作為培養(yǎng)皿的主體材料，該材料與常規(guī)細(xì)胞培養(yǎng)液不發(fā)生任何反應(yīng)，且容易清洗，實(shí)現(xiàn)了培養(yǎng)皿主體的重復(fù)使用，并且多孔結(jié)構(gòu)可以實(shí)現(xiàn)多孔培養(yǎng)板的功能。
文檔編號(hào)C12M3/04GK101876748SQ200910082988
公開日2010年11月3日 申請(qǐng)日期2009年4月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年4月28日
發(fā)明者劉衛(wèi)敏, 張洪艷, 汪鵬飛 申請(qǐng)人:中國(guó)科學(xué)院理化技術(shù)研究所