專(zhuān)利名稱(chēng)：：一種煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明提供一種煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌及其生產(chǎn)的菌劑，屬于生物高
技術(shù)領(lǐng)域：
，是利用微生物的方法降解化學(xué)農(nóng)藥殘留，適用于現(xiàn)代農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中綠色無(wú)公害農(nóng)產(chǎn)品的生產(chǎn)。二
背景技術(shù)：
：化學(xué)農(nóng)藥的使用大大地促進(jìn)了現(xiàn)代農(nóng)業(yè)的發(fā)展，為農(nóng)業(yè)生產(chǎn)挽回了大量因植物病、蟲(chóng)、草害等原因造成的損失，并極大地提高了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的勞動(dòng)效率和機(jī)械化程度，在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的現(xiàn)代化進(jìn)程中起了不可估量的作用。但同時(shí)農(nóng)藥是一些有毒有害化學(xué)物質(zhì)，它們進(jìn)入生態(tài)環(huán)境后，不僅殺死了對(duì)人類(lèi)有害的生物，同時(shí)也對(duì)生態(tài)系統(tǒng)造成了嚴(yán)重的危害。農(nóng)藥的大量使用引起農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留超標(biāo)，嚴(yán)重影響了人們的身體健康及農(nóng)產(chǎn)品的出口創(chuàng)匯。隨著人們生活水平的提高和環(huán)境保護(hù)意識(shí)的增強(qiáng)，全社會(huì)對(duì)農(nóng)藥殘留帶來(lái)的直接危害和潛在影響也越來(lái)越關(guān)注，人們迫切需要無(wú)農(nóng)藥殘留污染的清潔綠色農(nóng)產(chǎn)品。但從目前我國(guó)的農(nóng)業(yè)生產(chǎn)形式和人口狀況來(lái)看，以停止農(nóng)藥使用降低農(nóng)業(yè)產(chǎn)量為代價(jià)的無(wú)公害生產(chǎn)模式是行不通的，農(nóng)藥作為控制植物病、蟲(chóng)、草害的有效手段還將繼續(xù)在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中發(fā)揮巨大的作用。如何能解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中的這個(gè)兩難問(wèn)題就成為各個(gè)學(xué)科的研究熱點(diǎn)。實(shí)驗(yàn)室和實(shí)際應(yīng)用研究都表明利用微生物來(lái)降解土壤中的農(nóng)藥殘留，從而降低糧食、蔬菜、茶葉等農(nóng)產(chǎn)品中的農(nóng)藥殘留，提高農(nóng)產(chǎn)品的品質(zhì)和經(jīng)濟(jì)價(jià)值是可行的。現(xiàn)有技術(shù)中本課題組己擁有降解菌的發(fā)明專(zhuān)利(ZL96106317.3，公開(kāi)號(hào)CN1145408A，公開(kāi)日1997年3月19日)，該專(zhuān)利是一株芽孢桿菌J5，能有效地降解甲胺磷農(nóng)藥殘留。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問(wèn)題本發(fā)明的目的在于針對(duì)生產(chǎn)實(shí)踐中的實(shí)際問(wèn)題和需求，開(kāi)發(fā)研制出一種新型的農(nóng)藥殘留降解菌劑，使用本菌劑可以使土壤中煙嘧磺隆的殘留量降低72%以上，生產(chǎn)和使用成本較低。使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)過(guò)程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。技術(shù)方案下面為本發(fā)明的主要內(nèi)容本發(fā)明提供一種消除煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色陰性菌YM3，2008年12月3日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2781，經(jīng)鑒定為假單胞菌(i^Wow朋氾sp.)。主要生物學(xué)特性為G—，菌體為桿狀，大小為0.5-1.0xl.5-5.0pm，接觸酶、硝酸鹽還原為陽(yáng)性；氧化酶、V.P.反應(yīng)、甲基紅、吲哚反應(yīng)為陰性；不能水解淀粉和明膠，不能利用檸檬酸鹽。使用上述煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)菌劑的工藝為:試管斜面種一搖瓶種一種子罐一生產(chǎn)罐一產(chǎn)品(包裝劑型為液體菌劑或固體吸附菌劑)。本發(fā)明的詳細(xì)實(shí)施步驟為1.將煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌YM3試管種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2.將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，種子罐所用的培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HPO40.2%，MgSO40.05%，NaC10.01%，CaC030.3%,酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3.將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:0.6-1.2，攪拌速度為180-240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30-35°C，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液即為菌劑。有益效果使用該發(fā)明生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑具有生產(chǎn)使用成本低，使用方便，去除效果好的優(yōu)點(diǎn)，適合在全國(guó)糧油蔬菜生產(chǎn)出口基地或有綠色食品商標(biāo)標(biāo)志的地區(qū)大面積推廣使用。本發(fā)明對(duì)于保護(hù)生態(tài)環(huán)境，保護(hù)人民的身體健康，提高農(nóng)產(chǎn)品的附加值具有重要的意義。降解菌YM3能將土壤中煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解72%以上(表1)，使用該降解菌劑可以在農(nóng)作物的正常生長(zhǎng)過(guò)程中正常使用化學(xué)農(nóng)藥進(jìn)行草害防治而保證農(nóng)產(chǎn)品中農(nóng)藥殘留含量符合綠色食品要求。本發(fā)明成功地解決了農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題，既充分發(fā)揮了化學(xué)農(nóng)藥在草害防治中的高效快速的作用，又可以生產(chǎn)出無(wú)毒無(wú)公害的綠色農(nóng)產(chǎn)品。具體實(shí)施例方式本發(fā)明提供一種消除煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留的降解菌劑，所用菌株為革蘭氏染色陰性菌YM3，分離自山東省泰安市長(zhǎng)期使用煙嘧磺隆農(nóng)藥的農(nóng)田土壤。2008年12月3日保藏4于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2781，經(jīng)鑒定為假單胞菌(Pw"^w2W7oysp.)。主要生物學(xué)特性為G—，菌體為桿狀，大小為0.5-1.0xl.5-5.0pm，接觸酶、硝酸鹽還原為陽(yáng)性；氧化酶、V.P.反應(yīng)、甲基紅、吲哚反應(yīng)為陰性；不能水解淀粉和明膠，不能利用檸檬酸鹽。無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中降解菌YM3降解特性測(cè)定挑取YM3單菌落于3mlLB液體培養(yǎng)基(蛋白胨10克，酵母膏5克，NaCl10克，水1000毫升，pH7.0-7.2)中，30°C、160rmp/min振蕩培養(yǎng)12h，獲得新鮮菌液。在100ml的50mg/l煙嘧磺隆的無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基(葡萄糖1.0克，K2HP04l.5克，KH2PO40.5克，MgSO40.23￡，NaCl0.5克，水1000毫升，pH7.0-7.2)中，接入3ml離心懸浮后的菌液(菌液濃度為107個(gè)細(xì)胞/毫升)，于3(TC搖床培養(yǎng)(160rmp/min)，定時(shí)取樣測(cè)定，測(cè)定煙嘧磺隆的含量，結(jié)果見(jiàn)表1，無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中降解菌YM3對(duì)煙嘧磺隆的降解率達(dá)到81.46%。土壤中降解菌YM3對(duì)煙嘧磺隆降解特性測(cè)定稱(chēng)取1000g土壤，加入煙嘧磺隆，使土壤中含藥濃度為10mg/kg，加入YM3菌液，使土壤中的YM3濃度為108個(gè)細(xì)胞/克土，混勻，置于3(TC培養(yǎng)箱中黑暗條件下恒溫培養(yǎng)，定時(shí)取樣測(cè)定煙嘧磺隆在土壤中的殘留量，結(jié)果見(jiàn)表l，土壤中降解菌YM3降解煙嘧磺隆達(dá)到72.41%。表1:菌株YM3在無(wú)機(jī)鹽液體培養(yǎng)基中和土壤中對(duì)煙嘧磺隆的降解特性<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>將本發(fā)明的農(nóng)藥殘留降解菌YM3的原種在培養(yǎng)皿上活化，接種于試管斜面上備用。試管斜面培養(yǎng)基配方蛋白胨10克，酵母膏5克，NaC110克，水1000毫升，瓊月旨2克，pH7.0隱7.2。將試管斜面菌種接種于含200ml肉湯培養(yǎng)基(牛肉膏3克，蛋白胨10克，NaC15克，水1000毫升，pH7.0-7.2)的1000ml搖瓶中，恒溫振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期，準(zhǔn)備接種種子罐。種子罐500升，投料量400升，培養(yǎng)基配方(質(zhì)量百分比)葡萄糖0.8%，NH4N031%，K2HPO40.2%，MgSO40.05%，NaC10.01%，CaCO30.3%，酵母膏0.02%，pH7.2-7.5。投料完畢后12rC高壓濕熱滅菌，冷卻至30'C后，將上述培養(yǎng)好的搖瓶菌種按體積比10%的接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，攪拌速度為220轉(zhuǎn)/分，無(wú)菌空氣通入量為1:0.8。將到達(dá)對(duì)數(shù)期的種子液按10%的接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基成分與種子罐培養(yǎng)基相同。生產(chǎn)罐容量5噸，投料量4.5噸。投料后的生產(chǎn)罐l.lkg/cm2的壓力下，12rC高壓濕熱滅菌，滅菌后冷卻至35匸以下，通無(wú)菌空氣保持無(wú)菌狀態(tài)備用。接種后的生產(chǎn)罐溫度控制在30-35°C，生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:0.8-1.0，攪拌速度為240轉(zhuǎn)/分，整個(gè)工藝流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)。發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上。發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。權(quán)利要求1.一種煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留的降解菌YM3，為革蘭氏陰性菌，經(jīng)鑒定為假單胞菌(Pseudomonassp.)，2008年12月3日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心，菌種保藏號(hào)為CGMCCNo.2781。2.—種用權(quán)利要求1所述的煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌生產(chǎn)的農(nóng)藥殘留降解菌劑，是通過(guò)以下方法生產(chǎn)而成的1)將煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留降解菌YM3菌種接種于肉湯培養(yǎng)基搖瓶中，振蕩培養(yǎng)至對(duì)數(shù)期；2)將上述培養(yǎng)好的菌種按種子罐培養(yǎng)基的體積比10%接種量接種入500升種子罐，培養(yǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，種子罐所用的質(zhì)量百分比培養(yǎng)基配方為葡萄糖0.8%，NH4N031%,K2HP040.2%，MgS040.05%，NaCl0.01%,CaC030.3%，酵母膏0.02%，pH值7.2-7.5;3)將種子液按生產(chǎn)罐培養(yǎng)基的體積10%接種量接入生產(chǎn)罐培養(yǎng)，生產(chǎn)罐所用培養(yǎng)基與種子罐培養(yǎng)基相同；4〕在種子罐和生產(chǎn)罐的培養(yǎng)過(guò)程中無(wú)菌空氣的通氣量為1:0.6-1.2，攪拌速度為180-240轉(zhuǎn)/分，培養(yǎng)溫度為30-35°C，全流程培養(yǎng)時(shí)間為36-48小時(shí)，發(fā)酵結(jié)束后菌體數(shù)量達(dá)到10億個(gè)/ml以上，發(fā)酵完成后培養(yǎng)液出罐直接用塑料包裝桶或包裝瓶分裝成液體劑型或采用泥炭吸附用包裝袋分裝成固體菌劑劑型。全文摘要本發(fā)明提供一種消除煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留的降解菌劑，屬于生物高
技術(shù)領(lǐng)域：
。所用菌株為革蘭氏染色陰性菌YM3，經(jīng)鑒定為假單胞菌(Pseudomonassp.)。主要生物學(xué)特性為G^-，菌體為桿狀，大小為0.5-1.0×1.5-5.0μm，接觸酶、硝酸鹽還原為陽(yáng)性；氧化酶、V.P.反應(yīng)、甲基紅、吲哚反應(yīng)為陰性；不能水解淀粉和明膠，不能利用檸檬酸鹽。將YM3菌種發(fā)酵完成后的培養(yǎng)液即為菌劑。降解菌劑產(chǎn)品的施用可使土壤中煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留量降低72％以上，可以解決農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中煙嘧磺隆農(nóng)藥殘留超標(biāo)問(wèn)題。文檔編號(hào)C12N1/20GK101486985SQ20091002475公開(kāi)日2009年7月22日申請(qǐng)日期2009年2月13日優(yōu)先權(quán)日2009年2月13日發(fā)明者孫紀(jì)全,李順鵬,哲王,馬吉平,星黃申請(qǐng)人:南京農(nóng)業(yè)大學(xué)