專利名稱：：植物性餌料培養(yǎng)方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及一種海水養(yǎng)殖生產中的活餌，尤其是一種植物性餌料培養(yǎng)方法。
背景技術：
：人工大量培養(yǎng)藻類作為海產動物幼體的活餌料來源，餌料是海水育苗成功的關鍵之一，它不僅直接影響苗種的生長繁殖，而且在高密度培養(yǎng)條件下殘餌伴隨排泄物等分解后還可能敗壞水質，影響苗種的生長繁殖，造成生產成本的增加。因此，為了進一步解決海產經(jīng)濟動物育苗的餌料問題，有必要改進培養(yǎng)方法、提高培養(yǎng)效果。
發(fā)明內容有鑒于此，本發(fā)明的主要目的在于提供一種在提高出成率的同時降低生產成本的植物性餌料培養(yǎng)方法。為達上述目的，本發(fā)明提供了一種植物性餌料培養(yǎng)方法，其中，藻種經(jīng)一級培養(yǎng)和二級培養(yǎng)，培養(yǎng)用海水經(jīng)消毒處理，—級培養(yǎng)，710天，每1000毫升加入營養(yǎng)鹽康維方的配備步驟配備甲液，該甲液組分的重量比為三氯化鐵50克、氯化錳1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四鈉225克、磷酸二氫鉀100克、和硼酸鈉500克，配備乙液，該乙液組分的重量比為氯化鋅0.5克、氯化鈷0.5克、鉬酸銨0.25克、和硫酸銅O.5克，將乙液倒入甲液中，再加入維生素Bl和B12;二級培養(yǎng)，半個月至1個月，保持充氣，加入培養(yǎng)液母液，該培養(yǎng)液母液的組分重量比為硝酸鈉50克、磷酸二氫鉀5克、檸檬酸鐵銨0.5克、和消毒海水1000毫升。所述二級培養(yǎng)液母液的組分重量比中，還包括硅酸鈉210克、尿素1020克、或維生素B1、B12。所述二級培養(yǎng)之后還進行三級培養(yǎng)，每噸水體加入培養(yǎng)液母液的組分重量比為硝酸鈉2550克、磷酸二氫鉀2.55克、和檸檬酸鐵銨0.30.7克；培養(yǎng)57天，在培養(yǎng)初期的11.5小時內充氣，或者每天攪拌34次。所述培養(yǎng)用海水消毒處理步驟—級培養(yǎng)用海水加溫煮沸，保持12min，冷卻后使用；二級培養(yǎng)用海水中，加入次氯酸鈉消毒，在一噸水體中加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉1501000卯m，通氣810小時，再用硫代硫酸鈉中和，用量為14140克/噸水；或者二級培養(yǎng)用海水中，加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉消毒，用量為250500mL/噸水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸鈉中和。所述三級培養(yǎng)用海水消毒處理步驟三級培養(yǎng)用海水中，加入次氯酸鈉消毒，在一噸水體中加入含有效氯濃度為8310%的次氯酸鈉1501000卯m，通氣810小時，再用硫代硫酸鈉中和，用量為14140克/噸水；或者三級培養(yǎng)用海水中，加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉消毒，用量為250500mL/噸水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸鈉中和。由以上技術方案可以看出本發(fā)明具有以下有益效果在一級、二級、三級培養(yǎng)中分別加入營養(yǎng)鹽康維方、營養(yǎng)鹽等，使餌料的營養(yǎng)成分含量相對較高，細胞內蛋白質和總糖含量比較高，作為蝦夷扇貝、剌參、大西洋浪蛤等海洋經(jīng)濟動物早期生長所需的餌料，既能達到好的培養(yǎng)效果，又極大地節(jié)約生產成本；在一級、二級、三級培養(yǎng)時，對培養(yǎng)用海水分別采用加熱消毒、或用藥消毒，不僅達到充分消滅原生動物的效果，而且成本低，適于大規(guī)模生產；藻種經(jīng)一級、二級后，經(jīng)過三級擴充培養(yǎng)，在投喂時還可減少餌料的損失，為規(guī)模生產提供充足的餌料；另外，三級擴充培養(yǎng)時的培養(yǎng)液，每噸水體加入硝酸鈉2050克、磷酸二氫鉀25克、檸檬酸鐵銨0.30.7克，餌料的濃度適宜，凈化穩(wěn)定水質的能力好，能抑制有害藻類過度繁殖，提高苗種幼體成活率，出苗整齊，抗病力增強，有明顯的增效節(jié)約的功效。具體實施例方式本發(fā)明植物性餌料培養(yǎng)方法適用于蝦夷扇貝、剌參、大西洋浪蛤等苗種生產時進行的植物性佴料培養(yǎng)，分一級、二級、三級培養(yǎng)，其中，一級培養(yǎng)也稱保種，三級培養(yǎng)也稱生產性培養(yǎng)。下面將對本發(fā)明植物性餌料培養(yǎng)方法作進一步說明。餌料培養(yǎng)室設在靠近貝類、海產育苗室地勢較高、地面平坦、無遮蔭、陽光充足和通風好的地方，培育室的屋頂采用透光率70%以上的透明玻璃鋼瓦及陽光板為宜，房屋四壁應多建門窗以利于采光和通風。培養(yǎng)室可分保種室和生產室兩部分。保種室中放置5000ml三角燒瓶保種架；生產室中建立大小一致的水泥池，池子為長方形，容積約為420立方米，池邊高為80IOO厘米。餌料生產池水體與育苗水體的比例為1:2或1:3。餌料藻種，從宏觀上觀察，藻種顏色正常，藻種細胞上浮和分布狀態(tài)好，呈云霧狀或霧狀等；從微觀上觀察，細胞個體均勻，藻種細胞活力強，藻種純、干凈無雜藻，藻種沒有敵害、原生動物。作為餌料藻種，其中三角褐指藻和新月菱形藻屬低溫性藻類，小球藻、金藻、等邊金藻3011、叉鞭金藻、角毛藻、鹽藻和扁藻屬于高溫性藻類。各種餌料培育條件見表1。表1序號藻種最適鹽度最適生溫度最適光照強度PH值三級密度1三角褐指藻25%030%01822°C40001ux左右7.58.5200萬/mL2新月菱形藻25%030%01528°C60001ux左右7.58.5200萬/mL3等邊金藻301120%。以上2025°C100001ux左右7.58.5100萬個/mL4<table>tableseeoriginaldocumentpage5</column></row><table>其中，單細胞藻類的生長測定，使用血球計數(shù)板計算藻的密度。角毛藻和鹽藻在海參育苗時，根據(jù)情況可不作三級培養(yǎng)；扁藻一般在投喂時采用撇去上層上浮餌料投喂，這種濃縮方法一般密度會達到1000萬/毫升。就密度而言，小個體的藻種要達到相同的生長效果需相應加大密度，藻體大密度就要小一些，藻體小密度可以大一些；且在適宜的密度下，餌料培養(yǎng)系統(tǒng)可排斥弧菌，尤其是在微藻細胞密度達到高峰時，排斥弧菌能力最強。在上述密度下，膠狀體濃度適宜，幼體攝食能力強，出成率高，而且餌料殘留少，極大地減少了對水質的影響。由表1所示參數(shù)，可獲得各種藻類較佳的培養(yǎng)效果，在較短的繁殖間隔內、較快生長，并獲得較高的生物密度，以及較大的生物量，最適光照強度使可溶性蛋白、可溶性糖和葉綠素的含量增加。但是，餌料培養(yǎng)是一個復雜的過程，影響?zhàn)D料生長繁殖的因素很多，如接種密度、溫度、鹽度、光照、pH、及非離子氨等各種因子，各因子之間還相互關聯(lián)，相互影響。其中，在溫度適宜其他培養(yǎng)條件相同時，溫度條件對培養(yǎng)有明顯的影響，即高溫季節(jié)高峰期短，低溫季節(jié)的高峰期長。培養(yǎng)用的玻璃瓶在使用前用刷子沾去污粉或1%濃度稀鹽酸浸泡祛除臟物，然后用水充分沖洗，加干凈紙封口備用。橡皮筋、水泵、塑料桶、塑料勺等，用水洗凈后，經(jīng)過消毒才能使用，消毒時，可用煮沸水沖洗，也可用加次氯酸鈉水浸洗，然后用加硫代硫酸鈉中和過的水沖凈使用，這樣可極大地減少對藻種的生長抑制。保種用營養(yǎng)鹽最好為試劑級的，生產用的營養(yǎng)鹽可以使用化肥級的。一級、二級培養(yǎng)時，加入表2所示的培養(yǎng)液母液，三級培養(yǎng)時，每噸水體加入表2所示的配制液，例如，硝酸鈉50克、磷酸二氫鉀5克、檸檬酸鐵銨0.5克，可選的硅酸鈉210克、或維生素Bl、B12、或尿素1020克。表25<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>表2中營養(yǎng)鹽重量在生產上根據(jù)當?shù)厮袪I養(yǎng)鹽含量進行季節(jié)性調整。育苗生產餌料培養(yǎng)過程中，營養(yǎng)鹽的添加量一般按照經(jīng)驗配方，這樣投喂餌料中未消耗完的營養(yǎng)鹽會對養(yǎng)殖動物造成危害的同時，對環(huán)境也造成很大的污染，營養(yǎng)鹽的含量升高會增加赤潮發(fā)生的幾率，尤其是為了滿足規(guī)模生產，進行三級擴充培養(yǎng)時，對環(huán)境的影響不容忽視。因此，為了精細化管理和開源節(jié)流，降低污染，根據(jù)海區(qū)營養(yǎng)鹽的變化，調整餌料培養(yǎng)中營養(yǎng)鹽添加量就顯得十分的必要。在跟蹤測定營養(yǎng)鹽添加量調整后的培養(yǎng)過程中營養(yǎng)鹽的消耗情況，數(shù)據(jù)顯示，在不影響?zhàn)D料密度的情況下，調整餌料中的營養(yǎng)鹽，不但能減低對動物的危害，同時也將減少成本。因此，根據(jù)當?shù)厮袪I養(yǎng)鹽含量進行季節(jié)性調整，例如，三級培養(yǎng)中，每噸水體加入表2所示的部分配制液減半，即硝酸鈉25克、磷酸二氫鉀2.5克、檸檬酸鐵銨0.5克，或者每噸水體加入硝酸鈉2050克、磷酸二氫鉀25克、檸檬酸鐵銨0.30.7克，適當加入可選的硅酸鈉210克、或維生素B1、B12、或尿素1020克。接種前先用顯微鏡檢查藻種，看有無敵害生物污染、混種、細菌等。選擇好藻種后，進行細胞計數(shù)確定投入量。在生產性培養(yǎng)池中，接種密度不宜太低，一般在2040萬個細胞/ml左右?！壴宸N培養(yǎng)采用三角燒瓶，一級培養(yǎng)7IO天后分瓶，在適宜的條件下，藻種培養(yǎng)7IO天，密度合適，無敵害生物，生長狀態(tài)良好，就可以進行接種。培養(yǎng)時加入營養(yǎng)鹽康維方，每1000毫升水中營養(yǎng)鹽康維方的配比如表2所示，按表2分別配備甲液、乙液后，再將乙液倒入甲液中，觀察顏色變化，先是蘋果綠，后變?yōu)樯钭仙偌尤?支維生素B1、2支B12。然后，接種到二級20升大瓶或100升桶，增大密度，二級高密度培養(yǎng)根據(jù)光照強度大小、營養(yǎng)鹽等情況培養(yǎng)半個月至20天，或者1個月；二級高密度培養(yǎng)時，始終保持充氣，同時加入如表2所示的培養(yǎng)液母液，以硝酸鈉替代硝酸銨作為氮源時，觀察水體顏色，若顏色發(fā)黃、或顯黃色，可適當加入尿素。再接種到生產池中，進行三級培養(yǎng)，培養(yǎng)57天，以硝酸鈉替代硝酸銨作為氮源時，可適當加入尿素，在培養(yǎng)初期的11.5小時內，進行充氣，或者每天攪拌34次。生產池中藻種45天就可以達到最高密度，在此高峰期，餌料新鮮、有活力，無老化現(xiàn)象，這時池內的藻液可以作為餌料用于育苗投喂，投喂后池子經(jīng)過清洗、消毒后繼續(xù)使用。培養(yǎng)藻類的海水必須經(jīng)過嚴格的消毒處理，一級培養(yǎng)用海水需加熱處理，海水經(jīng)過加溫煮沸，保持一段時間，約12min，冷卻后使用，這樣充分除去水體中的原生動物等有害物質。在二級培養(yǎng)和三級培養(yǎng)時，生產性培養(yǎng)用水用次氯酸鈉消毒，在一噸水體中加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉1501000卯m，通氣8小時以上，或8IO小時，再用硫代硫酸鈉中和，用量為14140克/噸水，中和后的水才能加入肥料進行接種培養(yǎng)；或者消毒時，含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉，用量為250300mL/噸水、500mL/噸水，然后按l:10的比例用硫代硫酸鈉中禾P，例如硫代硫酸鈉用量為30克、40克、50克。培養(yǎng)用海水消毒、中和后，觀測水體PH值是否在培養(yǎng)適用范圍內。這樣，可極大地減少對藻種的生長抑制，有效氯濃度為0.5mg/L時，還有輕微的促進作用。接種時還要預先對接種容器進行消毒，操作人員的手進行消毒。培養(yǎng)過程中，如表1所示，保持溫度，一般冬季水溫在2(TC左右，夏季在28°C以下，在此溫度范圍，低溫藻培養(yǎng)溫度稍低些，高溫藻培養(yǎng)溫度稍高些。在霧天、雨天等采光較差的情況下，用日光燈、大燈連續(xù)光照，以增加光源。培養(yǎng)時，可采用半連續(xù)培養(yǎng)、連續(xù)培養(yǎng)方式。半連續(xù)培養(yǎng)，當培養(yǎng)系統(tǒng)達到對數(shù)生長期末期開始，按比例一定時間收獲含有微藻細胞的培養(yǎng)液，同時補充不含微藻細胞的新培養(yǎng)基。連續(xù)培養(yǎng)，把新培養(yǎng)基連續(xù)供給均勻混合的培養(yǎng)系統(tǒng)，同時以相同速度把含有細胞和產物的培養(yǎng)液抽出，保證微藻對營養(yǎng)物質的需要，使微藻保持較長高速生長，排出部分有害代謝物；連續(xù)培養(yǎng)可縮短培養(yǎng)周期，提高設備利用率，節(jié)省出料和設備滅菌的時間，便于餌料工廠化培養(yǎng)、自動化管理。接種時，所加入的培養(yǎng)液中的常量元素對藻類的生長非常重要，氮、磷是藻類生長的必須元素，硅是硅藻生長所必需的，碳在光合作用中起著重要的作用，因此，培養(yǎng)液中常量元素的組成對藻類生長的影響顯得尤為重要。表2所示的培養(yǎng)液，提供藻生長所需的常量元素的較佳配方，其營養(yǎng)豐富，含有生物活性物質，是雙殼貝類、海參等幼體的優(yōu)質餌料。表2中作為氮源的硝酸鈉，也可用硝酸鉀、氯化銨和硝酸銨、尿素等替代，其中以硝酸鈉、尿素效果好，可獲得更高的生長速率；在富含氮、磷的培養(yǎng)液可使細胞始終保持旺盛生長和富含多不飽和脂肪酸(EPA)的狀態(tài)，而且藻生長迅速、細胞顆粒小、營養(yǎng)比較全面，同時具有較薄細胞壁。培養(yǎng)時，避免使用培養(yǎng)廢液，一方面會造成產量顯著降低，另一方面培養(yǎng)液的循環(huán)使用會引起細胞聚合物的形成、培養(yǎng)物逐漸退化。經(jīng)過一級、二級、三級培養(yǎng)，分別培養(yǎng)出一級餌料、二級餌料、三級餌料，輸送到育苗池中。投喂前，可將餌料進行離心處理，將鮮藻液濃縮，投喂水產動物能減少水質污染，投喂方便，可全年保證對蝦、扇貝、鮑魚等苗種的餌料供應，一方面除去部分藻液，另一方面還可去除有害指標。投喂量，根據(jù)苗種種類、幼體大小、密度、以及攝取情況，適時調整餌料的投喂量，投喂一種餌料，也可以混合投喂多種餌料。投喂餌料在一段時間內，進行攪拌，保持餌料懸浮在水體內，使苗種幼體充分攝取餌料，還可進行微充氣，使餌料繼續(xù)懸浮在水體內，提高餌料的利用率，促進動物生長，還可提高機體抗病能力和免疫力，減少沉入水底的餌料還可避免浪費、減少水質污染，從而保持水質，降低生產成本。另外，進行如下日常管理。溫度的調節(jié)注意氣溫和室溫變化。春季氣溫低時，對高溫種類加強升溫保溫措施；夏季室溫較高時將低溫種類移至陰涼通風處，開窗通風降溫。光照的調節(jié)三角褐指藻、新月菱形藻應避免太陽直射。中午光線過強時要遮光；陰天光線過暗時，可以設碘鎢燈等補充光照。鹽度的調節(jié)角毛藻對鹽度比較敏感，當海水鹽度超過32%。時，應用適量淡水降低鹽度。生長情況的檢查每天巡池檢查生長情況。觀察水色接種后，隨著藻類細胞數(shù)量的增加，水色由淺逐漸變深。如果水色不變或發(fā)灰、混濁，很可能受到原生動物的污染。鏡檢取一滴培養(yǎng)液，在顯微鏡下觀察藻體游動情況、有無原動物、有無其它藻類混入等。若有原生動物，視情況可在培育池內加入鹽酸進行酸化處理。采用本發(fā)明，在一級、二級、三級培養(yǎng)中分別加入營養(yǎng)鹽康維方、營養(yǎng)鹽等，餌料的營養(yǎng)成分含量相對較高，細胞內蛋白質和總糖含量比較高，作為蝦夷扇貝、剌參、大西洋浪蛤等海洋經(jīng)濟動物早期生長所需的餌料，另外，例如硅藻，附著能力相對較強，附著能力越強其分泌的胞外粘液就越多，這是苗種幼體早期生長所需的重要食物來源；苗種幼體吸收、利用藻細胞的胞內物質，所以攝食餌料的個體生長良好；餌料培養(yǎng)液中營養(yǎng)鹽含量適宜，使用濃度適宜，凈化穩(wěn)定水質的能力好，能抑制有害藻類過度繁殖，提高苗種幼體成活率，體長增加10%以上，出苗時間縮短12天，出苗整齊，抗病力增強，有明顯的增效節(jié)約的功效；在一級、二級、三級培養(yǎng)時，分別加熱消毒、或用藥消毒，充分消滅原動物，成本低，適于大規(guī)模生產；藻種經(jīng)一級、二級后，根據(jù)藻種和所投喂幼體的種類、餌料生產、生產規(guī)模等實際情況，選擇進行三級培養(yǎng)，經(jīng)過三級擴充培養(yǎng)，在投喂時還可減少餌料的損失，為規(guī)模生產提供充足的餌料；本發(fā)明植物性餌料培養(yǎng)方法，成本低、出成率高，具有易培養(yǎng)、繁殖迅速、營養(yǎng)豐富的特點，適用于蝦夷扇貝、剌參、大西洋浪蛤苗種生產時進行的植物性餌料工廠化培養(yǎng)；而且培養(yǎng)方式和培養(yǎng)液，為無公害的，擴充的餌料安全。以上所述，僅為本發(fā)明的較佳實施例而已，并非用于限定本發(fā)明的保護范圍。9權利要求一種植物性餌料培養(yǎng)方法，其特征在于，藻種經(jīng)一級培養(yǎng)和二級培養(yǎng)，培養(yǎng)用海水經(jīng)消毒處理，一級培養(yǎng)，7～10天，每1000毫升加入營養(yǎng)鹽康維方的配備步驟配備甲液，該甲液組分的重量比為三氯化鐵50克、氯化錳1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四鈉225克、磷酸二氫鉀100克、和硼酸鈉500克，配備乙液，該乙液組分的重量比為氯化鋅0.5克、氯化鈷0.5克、鉬酸銨0.25克、和硫酸銅0.5克，將乙液倒入甲液中，再加入維生素B1和B12；二級培養(yǎng)，半個月至1個月，保持充氣，加入培養(yǎng)液母液，該培養(yǎng)液母液的組分重量比為硝酸鈉50克、磷酸二氫鉀5克、檸檬酸鐵銨0.5克、和消毒海水1000毫升。2.根據(jù)權利要求1所述的植物性餌料培養(yǎng)方法，其特征在于，所述二級培養(yǎng)液母液的組分重量比中，還包括硅酸鈉210克、尿素1020克、或維生素B1、B12。3.根據(jù)權利要求1或2所述的植物性餌料培養(yǎng)方法，其特征在于，所述二級培養(yǎng)之后還進行三級培養(yǎng)，每噸水體加入培養(yǎng)液母液的組分重量比為硝酸鈉2550克、磷酸二氫鉀2.55克、和檸檬酸鐵銨0.30.7克；培養(yǎng)57天，在培養(yǎng)初期的11.5小時內充氣，或者每天攪拌34次。4.根據(jù)權利要求1所述的植物性餌料培養(yǎng)方法，其特征在于，所述培養(yǎng)用海水消毒處理步驟一級培養(yǎng)用海水加溫煮沸，保持12min，冷卻后使用；二級培養(yǎng)用海水中，加入次氯酸鈉消毒，在一噸水體中加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉1501000卯m，通氣810小時，再用硫代硫酸鈉中和，用量為14140克/噸水；或者二級培養(yǎng)用海水中，加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉消毒，用量為250500mL/噸水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸鈉中和。5.根據(jù)權利要求3所述的植物性餌料培養(yǎng)方法，其特征在于，所述三級培養(yǎng)用海水消毒處理步驟三級培養(yǎng)用海水中，加入次氯酸鈉消毒，在一噸水體中加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉1501000卯m，通氣810小時，再用硫代硫酸鈉中和，用量為14140克/噸水；或者三級培養(yǎng)用海水中，加入含有效氯濃度為810%的次氯酸鈉消毒，用量為250500mL/噸水，然后按1:10的比例加入硫代硫酸鈉中和。全文摘要本發(fā)明涉及一種植物性餌料培養(yǎng)方法，藻種經(jīng)一級、二級培養(yǎng)，培養(yǎng)用海水經(jīng)消毒處理，一級培養(yǎng)7～10天，每1000mL所加入營養(yǎng)鹽康維方的步驟配備甲液，其組分的重量比為三氯化鐵50克、氯化錳1.8克、硼酸168克、乙二胺四乙酸四鈉225克、磷酸二氫鉀100克和硼酸鈉500克，配備乙液，其組分的重量比為氯化鋅0.5克、氯化鈷0.5克、鉬酸銨0.25克和硫酸銅0.5克，將乙液倒入甲液中，加入維生素B1和B12；二級培養(yǎng)0.5～1個月，保持充氣，所加入培養(yǎng)液母液的組分重量比為硝酸鈉50克、磷酸二氫鉀5克、檸檬酸鐵銨0.5克和消毒海水1000毫升。采用本發(fā)明植物性餌料培養(yǎng)方法，既能降低生產成本又能提高出成率。文檔編號C12N1/12GK101781622SQ20091001327公開日2010年7月21日申請日期2009年8月17日優(yōu)先權日2009年8月17日發(fā)明者張蕓,王詩歡申請人:大連獐子島漁業(yè)集團股份有限公司