專利名稱：用于固定生物物質(zhì)的生物相容性三維基質(zhì)的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制造攜帶有生物物質(zhì)的固體涂布載體的方法。此外，本發(fā)明涉及 一種連接有生物物質(zhì)的固體涂布載體以及所述固體涂布載體用于制備醫(yī)療產(chǎn)品的應(yīng)用。此 外，本發(fā)明提供了一種用于接觸、過濾或清潔患者血液、淋巴或腦脊髓液或其部分的方法、 用于診斷疾病的方法以及診斷組合物。整個本說明書提到了多篇文獻。此處以引用的方式并入包括生產(chǎn)商手冊在內(nèi)的所 述文獻的全部公開內(nèi)容。
背景技術(shù)：
例如單克隆抗體或其他分子的全身性施用對于治療腫瘤患者、代謝失調(diào)、免疫疾 病或其他疾病是重要的且在不斷發(fā)展的領(lǐng)域。然而，這些分子的全身性施用是極其昂貴的， 并且經(jīng)常伴隨著嚴(yán)重的副作用和較高的死亡率。此外，所注射的生物制劑的去向通常難以 確定，并且不能預(yù)見在個體患者中的嚴(yán)重副作用。新治療方法的施用的一種選擇是使用具有經(jīng)固定的抗體的(醫(yī)學(xué))裝置。該方法 優(yōu)于利用抗體功能性的標(biāo)準(zhǔn)治療，沒有全身性施用所可能存在的不利影響。因此，利用基于 (醫(yī)學(xué))裝置的該安全方法未見到全身性使用抗體經(jīng)常觀察到的嚴(yán)重副作用。該裝置在血 流中的暫時或永久施用目的在于用固定在限定表面上的高度限定量的生物物質(zhì)(例如可 能意味著在限定的體積內(nèi)有限定密度的生物物質(zhì))控制生理機能、免疫系統(tǒng)、免疫細(xì)胞或 其他血液成分、或流動的腫瘤細(xì)胞，這將可以避免某些藥物的全身性施用導(dǎo)致的重荷載。在使用失活抗體如Remieade HTNFa失活的領(lǐng)域中描述有各種治療方法。然 而，已知將該抗體簡單地施用于患者會伴隨著嚴(yán)重甚至是致命的副作用(失明、休克和過 敏反應(yīng)等)。此外，完整抗體或其片段或衍生物的施用要求抗體的人源化和/或其他修飾， 以減少或避免由于人類患者對抗體的免疫反應(yīng)導(dǎo)致的抗體失活。已知本領(lǐng)域描述的另一方法名為“TheraSorb ”(Miltenyi BiotechGmbH, Bergisch-Gladbach，德國)(參見 R. Bambauer 等，Ther Apher Dial. 2003,7(4) :382_390 禾口 G Wallukat 等，International Journal of Cardiology,1996,54(2) 191 — 195)。 TheraSorb 用于除去LDL-膽固醇、免疫球蛋白、免疫復(fù)合物、抗體片段或纖維蛋白原。該 方法中利用的分離柱(apheresiscolumn)包含結(jié)合有多克隆抗體的瓊脂糖。該方法需要分 離出細(xì)胞，以將血漿輸送到所述柱中。這是該系統(tǒng)的一個主要缺點，因為這是一種過度開 支。流速較低，因此僅能處理少量的血漿。而且，該系統(tǒng)因其復(fù)雜性而非常昂貴。上述討論表明，迄今為止可用于治療所述疾病的方法和系統(tǒng)伴隨有嚴(yán)重副作用或 者相當(dāng)難以實現(xiàn)。因此，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供能夠用例如細(xì)胞和蛋白質(zhì)等生 物物質(zhì)治療患者的手段和方法，這將改善所述情況。通過權(quán)利要求書中描述的實施方式可 以解決該技術(shù)問題。

發(fā)明內(nèi)容
因此，在第一實施方式中，本發(fā)明提供了一種制造攜帶有生物物質(zhì)的固體涂布載 體的方法，所述方法包括以下步驟(a)用包含0. 1 % 10% (重量/重量)或(體積/體積)的至少一種硅烷或其 他適宜的偶聯(lián)劑的溶液溫育固體載體，隨后除去所述溶液；(b)通過用包含所述生物物質(zhì)的優(yōu)選經(jīng)緩沖的水性溶液溫育所述載體，隨后除去 所述水性溶液，從而將所述生物物質(zhì)連接至所述載體上；和(c)在⑴包含選自(多)肽、氨基酸、淀粉、糖、磷酸鹽、多元醇、聚乙二醇(PEG) 或其混合物的一種或多種物質(zhì)的水性溶液、(ii)離子液體或(iii)相容性溶質(zhì)中或它們的 混合物中，溫育所述載體，以使所述生物物質(zhì)部分或全部由所述一種或多種物質(zhì)覆蓋。按上述次序進行步驟(a)、(b)和(C)。術(shù)語“固體載體”在本發(fā)明上下文中定義為固體材料構(gòu)成的載體。所述載體的材 料可以是緊實結(jié)構(gòu)或多孔性結(jié)構(gòu)。如下文所述，優(yōu)選所述載體的材料選自由以下材料組成 的組玻璃、聚氨酯、聚酯、聚砜、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸類(polyacryl)、聚丙烯腈、聚酰 胺、聚甲基丙烯酸甲酯(PMMA)、羊毛填料、開孔泡沫塑料或玻璃、網(wǎng)狀塑料或玻璃和得自海 綿動物(多孔動物)的結(jié)構(gòu)體。本發(fā)明術(shù)語“優(yōu)選經(jīng)緩沖的”是指優(yōu)選為緩沖溶液。術(shù)語“生物物質(zhì)”在本發(fā)明上下文中是指從活的或死的生物體或其部分分離的物 質(zhì)或能夠在人造生物系統(tǒng)中產(chǎn)生的物質(zhì)以及所述物質(zhì)的化學(xué)修飾衍生物。人造生物系統(tǒng)的 實例包括體外合成核酸分子或(多)肽或用重組DNA技術(shù)進行制備的手段。如下文所詳 細(xì)描述的，該生物物質(zhì)的實例包括真核細(xì)胞、真核細(xì)胞碎片、原核生物、原核生物碎片、古細(xì) 菌、古細(xì)菌碎片、病毒和病毒碎片。真核細(xì)胞、原核生物、古細(xì)菌和病毒的所述碎片包括一種 或多種(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖或其任何組合。作為選擇，即使在自然界中沒 有發(fā)現(xiàn)對應(yīng)物并且是例如(半)合成或重組制造的，這些(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和 多糖仍然為該術(shù)語生物物質(zhì)所涵蓋(見下文)。本文使用的術(shù)語“(多)肽”是指包括肽組以及多肽組的分子組。肽組由至多30 個氨基酸分子組成，多肽組由超過30個氨基酸分子組成。根據(jù)本發(fā)明，“多肽”組包括“蛋 白質(zhì)”。此外，根據(jù)所述定義，術(shù)語“(多)肽”描述了蛋白質(zhì)片段。該術(shù)語的定義還包括作 為二聚物、三聚物和更高的低聚物的多肽，即由超過一條的氨基酸分子鏈(經(jīng)連接的氨基 酸鏈)組成的多肽。如上所述，在蛋白質(zhì)從真核細(xì)胞、原核生物、古細(xì)菌和病毒中分離得到 的情況下，所述蛋白質(zhì)也可被理解為真核細(xì)胞、原核生物、古細(xì)菌和病毒的碎片。該術(shù)語也 適用于通過重組DNA技術(shù)制備的(多)肽或通過利用例如制備所述化合物所用的細(xì)胞的其 他技術(shù)制備的(多)肽。術(shù)語“寡核苷酸”在本發(fā)明上下文中是指由至少10個到至多30個核苷酸組成的 核酸分子。術(shù)語“多核苷酸”是指由超過30個核苷酸組成的核酸分子。本文所述的寡核苷 酸和多核苷酸可以是DNA、RNA和PNA等。包括在多核苷酸內(nèi)的分子組還包括完整的基因或 染色體及其片段。所述定義還包括載體，例如克隆載體和表達載體。術(shù)語“多糖”在本發(fā)明上下文中定義為由兩個以上的糖構(gòu)成的聚合物，因此該術(shù)語 包括本領(lǐng)域中另外稱為低聚糖的分子。所述多糖可以由支化或非支化糖鏈組成。
本發(fā)明上下文中使用的術(shù)語“硅烷”與國際純粹與應(yīng)用化學(xué)聯(lián)合會(IUPAC)的定 義一致，指的是由硅基質(zhì)和氫組成的化合物的組。按照該定義的硅烷可以是支化的(異硅 烷和新硅烷)或非支化的(正硅烷)。適宜的偶聯(lián)劑或偶聯(lián)試劑是雙官能或多官能化的有機分子，例如，二氨基烷烴 (如1，6_ 二氨基己烷)、二羧酸(如1，6_己二酸)或者由例如氰基、氨基或羧基所官能化
的聚乙二醇。術(shù)語“體液”在本發(fā)明上下文中定義為可在來自患者(優(yōu)選人類患者)的樣品中 獲得的液體。該體液的實例包括血液、淋巴或腦脊髓液或其部分，例如血漿或包含清蛋白的 液體部分，以及富集的白細(xì)胞(例如得自白細(xì)胞去除術(shù))。整個本發(fā)明中使用的術(shù)語“患者”包括生病或患病的以及健康的對象。根據(jù)本發(fā) 明，患者是任何接受醫(yī)學(xué)護養(yǎng)、護理或治療的人。該人通常(但不一定)是生病或受傷的人， 如果是生病或者受傷的人，則需要由醫(yī)師或其他醫(yī)療專業(yè)人員治療。換言之，術(shù)語“患者”與 可能生病或可能沒有生病的“對象”可以互換使用。對象可以是動物，優(yōu)選為哺乳動物，最 優(yōu)選的是人類。如上所述，患者還可以是例如針對疾病或健康狀態(tài)進行急診或常規(guī)診斷的 健康人類。換言之，本發(fā)明可以用于發(fā)現(xiàn)患者是否患有某種疾病(或多種疾病的組合)、是 否容易感染該疾病或其組合。除去溶液可以理解為溶液的定性除去。因此，至少將溶液除去至剩余溶液不會顯 著改變本發(fā)明方法的隨后步驟中使用的溶液的品質(zhì)的程度?？梢岳缤ㄟ^吸取(例如通過 利用可以連接移液管等的常規(guī)泵等)、壓縮或吹風(fēng)進行該除去?？蛇x的是，將這些步驟組合， 并可以進一步結(jié)合風(fēng)干進行。優(yōu)選的是，將該溶液除去至少95體積％，例如至少98體積％ 或至少99體積％、99. 5體積％或99. 8體積％。術(shù)語“溫育”是指在使步驟(a)至(C)中所述的化合物能夠連接至所述載體或步 驟(a)和/或(b)中所提及的分子層(可選地經(jīng)間接結(jié)合進行)的條件下進行的溫育。溫 育條件包括取決于所述步驟和溫度，進行20分鐘至12小時的溫育。通常，抗體在37°C溫 育1小時，37°C是IgM抗體穩(wěn)定的最高溫度。IgG抗體可以被溫育至至高50°C。溫度范圍 可以是4°C 50°C，優(yōu)選為20°C 37°C，這取決于所述步驟和溫育時間。優(yōu)選的是，在步驟 (a)中，溫育在室溫下進行20分鐘，在步驟(b)中，溫育在37°C進行1小時，在步驟(c)中， 溫育在室溫下進行1小時。應(yīng)當(dāng)理解的是，為了加快該過程或為了改善結(jié)果，可以根據(jù)溫育 中使用的物質(zhì)改變溫育的時間和溫度。例如，如果使用甲醇作為步驟(a)中的溶劑，應(yīng)該保 持20°C左右的較低溫度，例如約15°C 約25°C，以使甲醇不發(fā)生蒸發(fā)。本領(lǐng)域技術(shù)人員知道，術(shù)語“室溫”可以指不同的溫度，這取決于位置和外部溫度。 室溫通常為17V 23°C。本發(fā)明的方法的步驟(a)中所述的溶液可以是水性溶液或非水性溶液。除了硅 烷，本發(fā)明的方法的步驟(a)中的水性溶液可以還包含經(jīng)稀釋的蛋白質(zhì)和其他經(jīng)稀釋的成 分，例如糖或醇。在本文中，優(yōu)選的蛋白質(zhì)是清蛋白。根據(jù)本發(fā)明，清蛋白包括來自動物(優(yōu) 選哺乳動物，更優(yōu)選來自人類)和來自植物種子的清蛋白。清蛋白形成哺乳動物中血清的 主要成分。本發(fā)明的其他清蛋白的實例是動物的α-乳清蛋白和卵清蛋白、來自豌豆的豆 清蛋白、來自小麥、黑麥或大麥的麥清蛋白或來自豆科植物的豆清蛋白。在可能的過敏原的 情況下，優(yōu)選對清蛋白進行水解，特別是增強與人類或其他動物體的相容性。這也適用于步驟(a)的替代實施方式中的非水性溶液。在本發(fā)明上下文中，術(shù)語“水性溶劑”不局限于(但包括)H2O,而且擴展至可與水 混合因此能形成均相的親水性溶劑。水性溶劑的實例包括但是不限于H20、甲醇、乙醇或高級醇或其混合物。非水溶劑 的實例包括但是不限于二甲亞砜(DMSO)、苯、甲苯、二甲苯和乙基苯，或脂肪族溶劑，如戊 烷、己烷、庚烷或其混合物。優(yōu)選的是，步驟(a)中的溶液的溶劑是H20、甲醇、乙醇或其混合物、二甲亞砜(DMSO)、 苯、甲苯、二甲苯和乙基苯或戊烷、己烷、庚烷或其混合物。步驟(a)的溶液的最優(yōu)選溶劑是甲 醇或乙醇。相應(yīng)地，溶液是指包含溶劑的溶液，而水性溶液是指包含親水性溶劑的溶液。根據(jù)本發(fā)明，所述方法的步驟(a)中的所述至少一種硅烷的濃度為0. 10% (重量/重量或體積/體積)，其中，該范圍同時限定了所述溶液中的全部硅烷的濃度。換 言之，如果使用多于一種的硅烷，則全部硅烷一共的總量為0. 10% (重量/重量或體 積/體積)。優(yōu)選的是，所述濃度為0. 5% 5% (重量/重量或體積/體積)。根據(jù)本發(fā)明的方法的步驟(b)，將生物物質(zhì)連接至固體載體可以理解為在載體上 固著所述物質(zhì)。可以通過將生物物質(zhì)直接結(jié)合至固體載體進行該固著。作為選擇，可以利 用第三化合物，例如覆蓋固體載體的一種以上硅烷的層，通過間接結(jié)合進行該固著。根據(jù)本 發(fā)明，術(shù)語“覆蓋”包含固體載體的全部覆蓋以及部分覆蓋。在兩種替代方案中，結(jié)合可以 是通過共價鍵或非共價鍵進行的結(jié)合。按照本發(fā)明，共價鍵可以例如通過生物物質(zhì)與載體 材料之間的化學(xué)反應(yīng)或(涂布載體材料的)硅烷與生物物質(zhì)之間的化學(xué)反應(yīng)獲得。在后一 情況中，硅烷用作分子橋。非共價鍵結(jié)合的實例包括弱鍵，例如范德華鍵或其他極性鍵。例 如在(多)肽與具有聚乙烯表面的固體載體之間存在所述非共價鍵。優(yōu)選的是，用于連接生物物質(zhì)例如抗體的水性溶液是經(jīng)緩沖的，并具有低鹽含量。 本發(fā)明所述的低鹽含量定義為0.9% (重量/重量)以下的鹽濃度，優(yōu)選低于0.2% (重量 /重量)。通常，但不是絕對地，對于IgG和IgY類，可以使用例如由15mM碳酸鈉和35mM碳 酸氫鈉水溶液組成的更為堿性的緩沖液(PH = 9)，但是對于連接IgM，優(yōu)選使用更為中性的 緩沖液(PH 7. 0至7. 4)，例如磷酸鹽緩沖液(如PBS)。由于根據(jù)本發(fā)明的方法的步驟(C)將連接有步驟(b)中的生物物質(zhì)的所述載體在 水性溶液中溫育，生物物質(zhì)包埋在涂布層/涂布基質(zhì)中。通過該包埋，使生物物質(zhì)的可及性 表面最小化。這意味著可及性表面被部分或全部覆蓋。整個本發(fā)明中所用的“全部覆蓋”表 示，生物物質(zhì)的可及性表面上所有可能的結(jié)合位點被占據(jù)/覆蓋。在非特異性結(jié)合的情況 中，將生物物質(zhì)全部覆蓋的分子非特異性地結(jié)合。因此，在部分覆蓋的情況中，可及性表面 上僅有一部分特異性或非特異性結(jié)合位點被覆蓋。由于部分或全部覆蓋所致，生物物質(zhì)不 再受到其他物質(zhì)的影響以及如輻射等非物質(zhì)影響，或者至少降低了對于這二者的可及性。步驟(c)的水性溶液優(yōu)選具有如上所述的低鹽含量。所述水性溶液可以可選地是 經(jīng)緩沖的水性溶液。本發(fā)明的方法的所述步驟可以分批進行，其中交換各相應(yīng)的溶液。本發(fā)明的方法提供了涂布有基質(zhì)的固體載體，而基質(zhì)中包埋有所述的生物物質(zhì)。 示于圖1的示意圖中的剖面例示了本發(fā)明中所構(gòu)想的包含所包埋的生物物質(zhì)的所述固體 涂布載體的實施方式和本發(fā)明的方法的兩個優(yōu)選實施方式。
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由本發(fā)明的方法制造的固體載體可以用于治療和診斷。所述治療包括脫除體液的毒素，例如二噁英、肉毒桿菌毒素、破傷風(fēng)毒素、脂多糖 (LPS)、腐敗毒等。該載體還可以用于治療細(xì)菌或病毒疾病。本發(fā)明的方法制造的載體一種 設(shè)想的替代性應(yīng)用是用于需要刺激、消除或除去患者某些細(xì)胞的治療。消除特定細(xì)胞群可 以見于例如增殖性疾病(例如，一般在治療癌癥，特別是治療微量殘留癌中)、自身免疫疾 病的治療或器官移植前的疾病的治療。例如在通過激活免疫系統(tǒng)細(xì)胞進行的疾病治療中可 以設(shè)計對特定細(xì)胞群進行刺激，所述免疫系統(tǒng)細(xì)胞在激活后適于消除特定的患病細(xì)胞群。 另一治療方法是利用其中包埋有基因或以其他方式操縱的(例如通過與合成或天然化合 物如細(xì)胞因子、丁酸、佛波醇肉豆蔻酸酯-乙酸酯(phorbol myristate acetate)或全反式 視黃酸溫育而分化的或通過物理操縱如熱激、深低溫保藏、離心而分化的)重組供體細(xì)胞 或非操縱供體細(xì)胞的固體涂布載體。包埋的細(xì)胞可以分泌化合物，例如能夠減輕或治愈內(nèi) 分泌失調(diào)或代謝紊亂的激素。以下將詳細(xì)描述上述治療方法的實例。該治療方法可以包括 在(醫(yī)學(xué))裝置的情況下的本發(fā)明的方法制造的載體的體內(nèi)應(yīng)用以及間接體內(nèi)(ex vivo) 應(yīng)用。因此，可以將包含固體涂布載體的裝置植入患者中進行體內(nèi)應(yīng)用。對于間接體內(nèi)應(yīng) 用，可以將包含固體涂布載體的裝置與待處理體液的循環(huán)連接。例如可以將源自患者動脈 或靜脈的血液引導(dǎo)通過該裝置，隨后導(dǎo)回到該患者中(與血流連接)。作為選擇，可以將體 液樣品與載體進行體外溫育。在后一種治療的隨后步驟中，可以將體液再導(dǎo)入患者體內(nèi)。本發(fā)明的方法制造的固體載體的診斷應(yīng)用是例如需要檢測體液中毒素或特定細(xì) 胞群的診斷方法。利用本發(fā)明制造的固體涂布載體的診斷應(yīng)用可以用于毒素或特定細(xì)胞群 的定量檢測。在這些應(yīng)用中，可以使用連接有單種類型的生物物質(zhì)(例如抗體)的載體。將 所述載體與得自患者的限定體積的體液溫育，將能夠在分析通過樣品中連接的生物物質(zhì)所 檢測到的化合物的量之后，定量推算出患者的整體的化合物的量。例如，使用連接有許多不 同類型生物物質(zhì)的載體，可以對毒素或特定細(xì)胞群進行定性檢測。將所述固體涂布載體與 來自患者的體液進行溫育之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠分析被樣品中連接的生物物質(zhì)特異性 結(jié)合/檢測到的是哪些毒素或細(xì)胞群。上述治療方法中，包埋的生物物質(zhì)例如對血液、淋巴或腦脊髓液會具有治療作用， 由于所述生物物質(zhì)固著在固體載體上，因而不會將連接/固定的生物物質(zhì)釋放到體液中。 優(yōu)選的是無顯著量的連接/固定的生物物質(zhì)釋放到體液中。因此，治療或診斷用的生物物 質(zhì)的所需量得以最小化。由于治療或診斷用生物物質(zhì)的固定，還可以使因循環(huán)活性生物物 質(zhì)引起的藥物代謝動力學(xué)問題最小化。本發(fā)明方法可以制造出載體表面包埋有明確限定密度的生物物質(zhì)的載體。因此， 可以明確且可再現(xiàn)地限定在所制造載體的基質(zhì)中包埋的生物物質(zhì)的有效性。此外，利用本 發(fā)明的方法制造的載體的治療可以例如通過將包含所述載體的(醫(yī)學(xué))裝置與體液循環(huán)連 接來實現(xiàn)治療的限定起始，并且可以例如通過將所述裝置與體液循環(huán)斷開來實現(xiàn)治療的限 定終止。本發(fā)明的方法制造的載體的另一個優(yōu)異特征是，與通常制造的物質(zhì)相比，包埋的 生物物質(zhì)的穩(wěn)定性(保存期限)得到改善。盡管本申請人不希望受任何理論的約束，但是 據(jù)信該改善是通過提供涂布基質(zhì)實現(xiàn)的，該涂布基質(zhì)通過部分或全部覆蓋生物物質(zhì)的表面 而減小了其可及性表面，否則該表面可能發(fā)生變質(zhì)過程。根據(jù)這一理解，包埋的生物物質(zhì)被
10周圍的涂布基質(zhì)保護并支撐其結(jié)構(gòu)。例如，由于施加至涂布了抗體之后的載體的第二層可 保護并穩(wěn)定這些抗體，因此可以延遲或抑制涂布至本發(fā)明載體上的抗體的降解或分解。本發(fā)明的方法和所制造的涂布載體的另一優(yōu)異特征是，施加至本發(fā)明的方法的步 驟(C)中的載體的涂布層能夠?qū)⑺圃斓妮d體滅菌。因此，本發(fā)明首次公開了一種制造涂 布有通常相當(dāng)不穩(wěn)定且易變的生物物質(zhì)的固體涂布載體的方法，該固體涂布載體能夠被滅 菌，因此可以用于治療患者或用于需要無菌環(huán)境的方法中。如上所討論的和如所附實施例 中所示，除了增強生物物質(zhì)的穩(wěn)定性以外，第二層或涂布基質(zhì)還可以很好地防止涂布到載 體上的生物物質(zhì)由于β射線輻射、Y射線輻射或X射線輻射而發(fā)生的降解。在本發(fā)明的優(yōu)選實施方式中，所述方法在步驟(C)之后還包括步驟(d)(d)將所述載體干燥至殘留水含量< 20% (重量/重量)。根據(jù)本發(fā)明的該優(yōu)選實施方式，可以按已知的測定木材水含量的方式計算殘留水 含量。在木材的情況下，通過計算樣品中的水質(zhì)量(mw)與含水木材樣品的質(zhì)量(mu)之比， 再乘以100，可確定木材水含量的百分比(χ)。可以通過從含水木材樣品的質(zhì)量(mu)減去 干燥之后的該樣品的質(zhì)量，來確定該樣品中的水質(zhì)量(mw)。因此，用下列公式計算木材水含 量的百分比^(%) = — xl00
mU可以類似地測定載體制備中的殘留水含量，其中mw是載體樣品中的水質(zhì)量，!!^是 徹底干燥載體樣品后的載體樣品的質(zhì)量。在海綿狀載體的情況下，在將多余的水?dāng)D出空隙 之后測定πν。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中，所述方法在步驟(a)之后還包括步驟(a’ )(a’ )將所述載體干燥至溶液的殘留含量小于初始施用溶液的10%，優(yōu)選為低于 5%，更優(yōu)選低于2%，例如低于1%、0.5%或0.2%。優(yōu)選的干燥方法如上所述。最優(yōu)選的 是采用風(fēng)干法進行干燥。本發(fā)明的方法可以在步驟(b)之后且在步驟(C)之前進一步包括步驟(b’)(b’ )在包含封閉劑的經(jīng)緩沖的水性溶液中溫育所述載體，并除去所述水性溶液。封閉劑可用于固體載體的制造方法中，以防止在該方法的后續(xù)步驟中加入的材料 的非特異性結(jié)合。在根據(jù)步驟(c)于水性溶液中溫育載體之前，該封閉還可以對生物物質(zhì) 的構(gòu)象穩(wěn)定性具有積極的作用。根據(jù)本發(fā)明，封閉劑包括但是不局限于人類或動物血清和該血清的蛋白質(zhì)(例如 清蛋白)、奶、卵蛋白、植物源性(例如黃豆、小麥)蛋白，包括所述蛋白質(zhì)的水解產(chǎn)物(例 如明膠、膠原)。包含所述封閉劑的經(jīng)緩沖的水性溶液還可以包含氨基酸(優(yōu)選為甘氨酸、 天冬氨酸和/或谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丙氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、 肉堿、鳥氨酸、羥脯氨酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、瓜氨酸、菊粉、苯丙氨酸、賴氨酸、亮氨酸、 異亮氨酸、組氨酸、甲硫氨酸、絲氨酸、纈氨酸、酪氨酸、蘇氨酸、色氨酸)或氨基酸的衍生物 (例如N-乙酰基-色氨酸、β-丙氨酸、黑色素、多巴(D0PA))、糖(優(yōu)選為葡萄糖、蔗精、 蔗糖)、多元醇(優(yōu)選為山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、木糖醇)、聚乙二醇(PEG)、羥乙基淀粉 (HES)、磷酸鹽(例如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉)、兩性物質(zhì)(優(yōu)選為清潔劑，如聚山梨酯、 Triton X-100)、緩沖劑(優(yōu)選 TRIS、HEPES)。
如上所述，優(yōu)選的是包含封閉劑的水性溶液是經(jīng)緩沖的水性溶液并具有低鹽含 量。所附實施例中給出了本發(fā)明的包含封閉劑的經(jīng)緩沖的水性溶液的實例。優(yōu)選在室溫下 進行封閉，通常1至4小時，優(yōu)選為1小時。作為步驟(b’)的替代，本發(fā)明方法包括在步驟(b)之后且在步驟(C)之前進行的 步驟(b”)(b”)利用包含0. 5% 10% (重量/重量)的下述物質(zhì)的水性溶液封閉非結(jié)合 的結(jié)合位點，所述物質(zhì)選擇由(多)肽(例如清蛋白、明膠或膠原)，羥乙基淀粉(HES)、甘 露糖醇、山梨糖醇和聚乙二醇(PEG)、源自奶、大豆、小麥或蛋的蛋白質(zhì)組成的組。在一個更加優(yōu)選的實施方式中，步驟(b’)或(b”)進一步包括在封閉后，利用限定 的適用于上述步驟(b)的水性溶液進行一次或多次洗滌步驟。適用于該實施方式的水性溶 液是例如含有人清蛋白的PBS。進行所述一次或多次洗滌步驟，以除去過量的封閉劑。 根據(jù)載體的表面，通常優(yōu)選在室溫下進行10秒至10分鐘的所述洗滌。在另一個優(yōu)選的實施方式中，在包含一種以上下述物質(zhì)的水性溶液中溫育步驟 (c)中的載體，所述物質(zhì)選自由清蛋白、羥乙基淀粉(HES)、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇 (PEG)和伴娘蛋白組成的組。伴娘蛋白在本領(lǐng)域中公知為參與折疊過程、蛋白質(zhì)的轉(zhuǎn)運或易 位的蛋白，或者在與其他蛋白質(zhì)接觸時顯示保護性的蛋白。在原核生物和真核生物中可發(fā) 現(xiàn)所述伴娘蛋白。伴娘蛋白的主要實例是屬于熱激蛋白族系的蛋白，例如Hsp60和Hsp 10、 Hsp 70,Hsp 90和Hsp 100。其他的伴娘蛋白是細(xì)菌GroES/GroEL復(fù)合物或哺乳動物DnaK 蛋白。伴娘蛋白還稱為相容性溶質(zhì)，也存在于極端嗜鹽細(xì)菌中。它們是兩性的、結(jié)合水的 有機分子，可形成較大的水合外殼，并據(jù)報道可將嗜極生物中的蛋白和核酸穩(wěn)定在其原生 態(tài)。相容性溶質(zhì)的特征在于其被排斥于蛋白表面之外的性質(zhì)。該性質(zhì)使得細(xì)胞能夠積蓄高 濃度的這些化合物，而同時不會影響它們的蛋白的結(jié)構(gòu)和功能。此外，在所述細(xì)胞中產(chǎn)生的 相容性溶質(zhì)的不均勻分布對于蛋白的結(jié)構(gòu)具有穩(wěn)定作用。迄今為止，已經(jīng)設(shè)計出了這些伴 娘蛋白的合成衍生物。在本發(fā)明中也設(shè)計了天然的相容性溶質(zhì)及其合成衍生物。示例性的 相容性溶質(zhì)是依克多因((4S) -2-甲基-3，4，5，6-四氫嘧啶-4-羧酸)、羥基依克多因、甜菜 堿、甘氨酸_甜菜堿、脯氨酸_甜菜堿及其衍生物。作為選擇，在離子液體中溫育步驟(C)中的載體。離子液體是這樣的鹽其中的離 子配位不良，結(jié)果導(dǎo)致這些溶劑為液體。至少一種離子具有離域化電荷，并且一種成分是有 機成分，以防止形成穩(wěn)定的晶格。原材料和其他溶劑的諸如熔點、粘度和溶解度等性質(zhì)由有 機成分上的取代基和反離子決定。一些離子液體，如硝酸乙基銨，處于動態(tài)平衡，其中在任何時間多于99. 99%的液 體均由離子物種而非分子物種構(gòu)成。不過在廣義上，該術(shù)語包括所有的熔融鹽，例如高于 800°C的溫度下的氯化鈉，在本發(fā)明的上下文中，術(shù)語“離子液體”限定的是熔點相對較低 (低于100°C)的液體鹽。特別是，在室溫時為液體的鹽稱為室溫離子液體或RTIL，這些鹽在 本發(fā)明中尤其優(yōu)選。RTIL由大體積的不對稱有機陽離子構(gòu)成，例如甲基咪唑鐺離子(mim)、 1-烷基-3-甲基咪唑鐺離子(例如，乙基-mim(emim)、丁基-mim)、吡啶鐺離子(py)、1_烷 基吡啶鐺離子(例如，丁基_py、丁基-甲基-py)、N-甲基N-烷基吡咯烷鐺離子或銨離子。 大范圍的陰離子可以使用，從通常表現(xiàn)高熔點的簡單鹵離子至無機陰離子，如四氟硼酸根和六氟磷酸根(PF6)，直至較大的有機陰離子，如雙三氟磺酰亞胺、三氟甲磺酸根或甲苯磺 酸根。也可以使用具有簡單的非鹵化有機陰離子的離子液體，所述有機陰離子例如為甲酸 根、烷基硫酸根、烷基磷酸根或甘醇酸根。作為一個實例，具有咪唑骨架的1-丁基-3-甲基 咪唑四氟硼酸鹽或[bmim] [BF4]的熔點為約-80°C，其是無色液體，在室溫時具有很高的粘 度。第一 RTIL 之一是[emim]Cl 與 AlCl3 的混合物，形成[emim] [AlCl4]、[emim] [Al2Cl7]和 [emim] [Al3Cl10]之間的一系列平衡。該RTIL是對水不穩(wěn)定的。示例性的水不溶性RTIL是 [bmim] [PF6]。示例性的離子液體是(1_正丁基_3_甲基咪唑-六氟磷酸鹽(BMIM[PF6])、 BMIM雙(三氟甲烷磺酰)_亞胺(BMIM[Tf2N])、甲基三辛基銨-[Tf2N] (0MA[Tf2N])或1， 3_ 二甲基-咪唑甲基硫酸鹽[MMIM] [MeS04]。離子液體顯示出適合于保護涂布的物質(zhì)而由此免受潛在的有害物的影響或輻射。 在本發(fā)明的上下文中，離子液體被認(rèn)為能夠使生物物質(zhì)在滅菌時不會分解。根據(jù)本發(fā)明，進一步優(yōu)選的是由本發(fā)明方法制造的載體的材料具有多孔性結(jié)構(gòu)。為了獲得用作(醫(yī)療)產(chǎn)品的涂布載體的緊實設(shè)計，優(yōu)選的是載體顯示出與其總 體量度相比相對較大的表面。這可以例如利用具有開孔結(jié)構(gòu)的泡沫、羊毛(填料)或利用許 多平行小管或細(xì)絲的設(shè)置，例如類似于目前在血液透析中使用的多孔性中空纖維設(shè)計(參 JAL 例如 http://www.fmc-ag.eom/internet/fmc/fmcag/agintpub.nsf/Content/Mode:rn_ hemodialysis_+the_first_hollow-fiber_dialyzers_2004)的那些來實現(xiàn)。該設(shè)計優(yōu)選允 許全血或上述其他體液自由流動，并且優(yōu)選的是利用流入物和流出物之間的最小壓差并使 設(shè)備內(nèi)任一點的血液流速< 1米/秒而在流變學(xué)上優(yōu)化載體。優(yōu)選的是沒有“盲端”，并且 針對血液成分與基質(zhì)的活性表面的接觸進行優(yōu)化。具有多孔性結(jié)構(gòu)的載體的具體優(yōu)點是增 加能夠與生物物質(zhì)連接的載體表面。即，通過增加單位載體體積的載體表面，增加可以連接 /包埋于載體上的生物物質(zhì)的量。更優(yōu)選的是，載體材料的特征在于表面/氣體容積比為30CHT1 300CHT1。載體的 表面被理解為全部管束(trabecula)表面的總和。氣體容積被理解為具有多孔性結(jié)構(gòu)的載 體的全部管束中的氣體的體積的總和?？梢酝ㄟ^例如切割具有限定的總體量度的泡沫小塊來測定表面/氣體容積比。對 所述泡沫塊的全部管束進行計數(shù)并通過顯微鏡進行測量。利用管束的平均長度和直徑以及 每cm3的管束計數(shù)，可以精確地獲得比表面(XX cm2/cm3，其單位為cnT1，表示限定體積的材 料的內(nèi)表面)(假設(shè)管束的形狀是圓形的)。優(yōu)選的是，具有多孔性結(jié)構(gòu)的載體的材料的特征為材料體積比未壓縮/壓縮為
4 40。術(shù)語“材料體積比”在本發(fā)明上下文中理解為包含固體和氣體成分的未壓縮多孔 性材料和壓縮多孔性材料之間的比例。在多孔性彈性泡沫例如PU泡沫的情況下，例如主要可以如下測定該比例。將具有 20ml體積的圓柱形泡沫塊(未壓縮)放入具有20ml體積的注射器中，在將活塞完全壓下 后，可從注射器標(biāo)記上讀取壓縮體積。用于壓縮該材料(在PU多孔性泡沫的情況下)的力 限定為至少20千克/平方厘米。體積減少的端點定義為將壓縮壓力加倍(在PU多孔性泡 沫的情況下，該壓力是40千克/平方厘米)也不會使體積進一步減少達10%時的體積?？?以重復(fù)該過程(將壓力加倍)，直至材料的體積不再進一步減小達10%。
根據(jù)本發(fā)明方法，進一步優(yōu)選的是，載體材料選自由玻璃、聚氨酯(PU)、聚酯、聚 砜、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸類(polyacryl)、聚丙烯腈、聚酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、羊毛 填料、開孔泡沫塑料或玻璃、網(wǎng)狀塑料或玻璃和得自海綿動物(多孔動物)的結(jié)構(gòu)體組成 的組。例如，可以按照對來自Pall，Dreieich(德國)的裝置LG6的描述來使用聚酯羊毛 (polyesterfleece) 0玻璃細(xì)絲的非限定性實例包括南京雙威科技實業(yè)有限責(zé)任公司銷售 的具有白細(xì)胞濾器(Leukocyte Removal Filter)的輸血裝置用生物過濾膜。合適的海綿 動物的實例例如在D.Green等人的TissueEngineering. (2003)第9卷，第6期第1159 1166頁中有描述。本發(fā)明的方法中可以使用的材料可以具有中空纖維的結(jié)構(gòu)。優(yōu)選的中空纖維包裝 件優(yōu)選具有這樣的特征材料體積比未壓縮/壓縮為1 10，和/或表面/氣體容積比是 200CHT1 2000CHT1。在本發(fā)明的方法的又一個優(yōu)選實施方式中，步驟(a)中的溶液是水性溶液。在本 發(fā)明的方法的一個替代性優(yōu)選實施方式中，步驟(a)中的溶液是非水性溶液。前文已經(jīng)說 明相應(yīng)溶液和優(yōu)選溶液的實例。按照本發(fā)明的方法，優(yōu)選所述至少一種硅烷選自由烷氧基硅烷、有機官能性硅烷、 氫硅(氧)烷、硅氧烷和包括具有其他官能團的甲硅烷基化合物在內(nèi)的有機硅烷組成的組。本發(fā)明上下文中的所述組的可使用的硅烷的實例包括N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]乙二胺N-環(huán)己基氨基甲基甲基二乙氧基硅烷N-環(huán)己基氨基甲基三乙氧基硅烷N-苯基氨基甲基三甲氧基硅烷(甲基丙烯酰氧基甲基)甲基二甲氧基硅烷甲基丙烯酰氧基甲基三甲氧基硅烷(甲基丙烯酰氧基甲基)甲基二乙氧基硅烷甲基丙烯酰氧基甲基三乙氧基硅烷(異氰酸甲基)甲基二甲氧基硅烷N-三甲氧基甲硅烷基甲基-0-甲基氨基甲酸酯N- 二甲氧基(甲基)甲硅烷基甲基-0-甲基-氨基甲酸酯N-環(huán)己基-3-氨基丙基三甲氧基硅烷3-氨基丙基三乙氧基硅烷N-(2-氨基乙基)-3-氨基丙基甲基二甲氧基硅烷3-氨基丙基三甲氧基硅烷3-甲基丙烯酰氧基丙基三甲氧基硅烷3-甲基丙烯酰氧基丙基三乙酰氧基硅烷3-異氰酸丙基三甲氧基硅烷3-縮水甘油氧基丙基三甲氧基硅烷3-縮水甘油氧基丙基三乙氧基硅烷3_(三乙氧基甲硅烷基)丙基琥珀酸酐3-(氨基丙基)三[2- (2-甲氧基乙氧基)乙氧基]硅烷
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(3-氨基丙基)三(三甲基甲硅烷氧基)硅烷(4-甲氧基苯基)三(鄰甲苯基)硅烷(4-苯氧基苯基)(苯基)(鄰甲苯基)硅烷二環(huán)己基-甲基-硅烷二甲基(3-苯基丙基)硅烷二甲基雙(2，3，4，5-四甲基-2，4-環(huán)戊二烯-1-基)硅烷二苯基(3-苯基丙基)硅烷二苯基(4-甲氧基苯基)硅烷二苯基(4-苯氧基苯基)硅烷二苯基(二苯基甲氧基)(二苯基甲基)硅烷二苯基(二苯基甲基)硅烷二苯基(間甲苯基)硅烷二苯基(鄰甲苯基)(4-三甲基甲硅烷基)苯基)硅烷二苯基(對甲苯基)硅烷二苯基二(間甲苯基)硅烷二苯基二(鄰甲苯基)硅烷二苯基甲基(鄰甲苯基)硅烷二苯基苯乙基(鄰甲苯基)硅烷十二烷基三(2_聯(lián)苯基)硅烷十二烷基三(2-環(huán)己基乙基)硅烷十二烷基三(3-氟苯基)硅烷十二烷基三(間甲苯基)硅烷乙氧基三(鄰甲苯基)硅烷乙氧基三(2-甲氧基苯基)硅烷(1)乙基-雙_(2，4，6_三甲基苯基)_硅烷(1)亞乙基雙(三(癸基)硅烷)(1)十六烷基硫基乙炔基_三甲基-硅烷異丁基(三甲氧基)硅烷(2)甲基-三(三甲基甲硅烷氧基)硅烷(1)甲基苯基(4_(三甲基甲硅烷基甲基)苯基)硅烷(1)甲基苯基(間甲苯基)硅烷(1)甲基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷苯基(鄰甲苯基)硅烷(1)苯基-三(三甲基甲硅烷氧基)硅烷(1)苯基三(間甲苯基)硅烷(1)苯基三(鄰甲苯基)硅烷(1)苯基三(對甲苯基)硅烷苯基三(2-環(huán)己基乙基)硅烷苯基三(2-乙基己基)硅烷
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苯基三(2-甲氧基乙氧基)硅烷苯基三(4-(三甲基甲硅烷基)苯基)硅烷苯基三(9-乙基-3-咔唑基)硅烷三(鄰甲苯基)硅烷三乙酰氧基(乙基)硅烷三乙酰氧基(甲基)硅烷三乙酰氧基(乙烯基)硅烷三乙氧基(1-苯基乙烯基)硅烷三乙氧基(3-異氰酸丙基)硅烷三乙氧基(3-硫氰酸丙基)硅烷三乙氧基(4-甲氧基苯基)硅烷三乙氧基[4-(三氟甲基)苯基]硅烷三乙氧基(乙基)硅烷三乙氧基(異丁基)硅烷三乙氧基(辛基)硅烷三乙基(硅烷-d)三(十六烷基)(4-(三甲基甲硅烷基)苯基)硅烷三甲氧基[2- (7-氧雜雙環(huán)[4. 1. 0]庚-3-基)乙基]硅烷三甲氧基(2-苯乙基)硅烷三甲氧基[3_(甲基氨基)丙基]硅烷三甲氧基[3-(苯基氨基)丙基]硅烷三甲氧基(7-辛烯-1-基)硅烷三甲氧基(十八烷基)硅烷三甲氧基(辛基)硅烷三甲氧基(丙基)硅烷三甲氧基(乙烯基)硅烷三甲基(1，2，3，4，5-五甲基-2，4-環(huán)戊二烯-1-基)硅烷三甲基-(1-甲基-1-苯基丙氧基)-硅烷三甲基(1-丙烯基)硅烷三甲基(2，3，4，5-四甲基-2，4-環(huán)戊二烯-1-基)硅烷三甲基(2-苯基-1，1-雙(三甲基甲硅烷基)乙基)硅烷三甲基_(4'-萘-I-基-聯(lián)苯-4-基)硅烷三甲基-(4-硝基-苯基乙炔基)硅烷三甲基(4-(三甲基甲硅烷基)丁氧基)硅烷三甲基(甲硫基)硅烷三甲基(苯氧基)硅烷三甲基(苯基)硅烷三甲基(苯基硒代甲基)硅烷三甲基(苯硫基)硅烷
三甲基(苯硫基甲基)硅烷三甲基(炔丙基)硅烷三甲基(丙氧基)硅烷三甲基(乙烯基)硅烷三苯基(1，2，2-三苯基乙基)硅烷三苯基(3-(三苯基甲鍺烷基)丙基)硅烷三苯基(三苯基甲基)硅烷三苯基(乙烯基)硅烷三(I-萘基)硅烷三(2-聯(lián)苯基)硅烷三(4-(三甲基甲硅烷基)苯基)硅烷三(癸基)硅烷三(十六烷基)硅烷三(異丙硫基)硅烷三(苯乙基)硅烷三(三甲基甲硅烷氧基)硅烷三(三甲基甲硅烷基)硅烷三乙基硅烷1_( 二甲基甲硅烷基)-2_苯乙炔3_(三乙氧基甲硅烷基)丙基異氰酸酯3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基甲基丙烯酸酯3-[三(三甲基甲硅烷氧基)甲硅烷基]丙基甲基丙烯酸酯烯丙基(4-甲氧基苯基)二甲基硅烷二甲氧基-甲基-十八烷基硅烷甲氧基聚乙二醇5，000三甲基甲硅烷基醚N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]苯胺炔丙基三甲基硅烷硅2，3-萘酞菁雙(三己基甲硅烷基氧化物)叔丁基二甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯四烯丙基原硅酸酯四烯丙基硅烷四(二甲基甲硅烷基)原硅酸酯四甲基_dl2原硅酸酯三甲基甲硅烷基三氟甲烷磺酸酯三(二甲基甲硅烷氧基)苯基硅烷乙烯基三甲氧基硅烷乙烯基三甲基硅烷乙烯基三甲基硅烷3-(2_氨基乙基氨基)丙基-二甲氧基甲基硅烷
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[3-(2-氨基乙基氨基)丙基]三甲氧基硅烷烯丙基三甲基硅烷，和甲基2-(三甲基甲硅烷基)丙酸酯根據(jù)本發(fā)明的方法，另外優(yōu)選的是，所述生物物質(zhì)選自由真核細(xì)胞、真核細(xì)胞碎 片、原核生物、原核生物碎片、古細(xì)菌、古細(xì)菌碎片、病毒和病毒碎片組成的組。真核細(xì)胞、原 核生物、古細(xì)菌和病毒的所述碎片包括(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸、多糖和它們的組合。真核細(xì)胞組包括酵母細(xì)胞、低級植物和高級植物的細(xì)胞、昆蟲細(xì)胞和高等動物細(xì) 胞。優(yōu)選的是，所述高等動物細(xì)胞是哺乳動物細(xì)胞，更優(yōu)選為人類細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，真核細(xì)胞、原核生物和古細(xì)菌的碎片應(yīng)理解為包括膜部分(膜泡) 或細(xì)胞區(qū)室(例如來自真核細(xì)胞的細(xì)胞核或細(xì)胞器)或細(xì)菌細(xì)胞壁的成分(例如脂多糖 (LPS)、肽聚糖和脂磷壁酸)。真核細(xì)胞、原核生物和古細(xì)菌的碎片組還可以包括(多)肽， 例如抗原性蛋白質(zhì)(如菌毛、蛋白酶、熱激蛋白、甲?；?甲硫氨?；暮投舅?、Toll樣受 體(TLR)、核苷酸結(jié)合寡聚化結(jié)構(gòu)域蛋白(Nod)和G-蛋白偶聯(lián)受體、甲?；?甲硫氨酰基 肽受體、蛋白酶激活受體和糖蛋白。糖蛋白組包括免疫受體和配體。免疫受體和配體包括 MHC復(fù)合物(負(fù)載有抗原性肽或單獨的MHC分子)和共刺激分子。根據(jù)本發(fā)明，病毒碎片的實例包括但是不限于諸如對于與宿主細(xì)胞膜的相互作用 和融合具有重要作用的病毒外膜多肽(例如包膜蛋白)等分子。病毒碎片的其他實例還包 括核病毒蛋白及其片段。在本發(fā)明的方法的替代性實施方式中，所述生物物質(zhì)選自由通過合成或半合成或 重組制得的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖組成的組。通過對本發(fā)明的方法中使用的 生物物質(zhì)的該替代性限定，在自然界中沒有對應(yīng)物的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖， 以及自然存在的和人造的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖的化學(xué)修飾衍生物也包括在 內(nèi)。合成或半合成或重組制備(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖的方法在本領(lǐng)域中是已 知的。根據(jù)本發(fā)明，特別優(yōu)選所述(多)肽是受體。相應(yīng)受體的實例包括膜結(jié)合受體和 胞內(nèi)受體以及可溶性受體。這種受體的特別優(yōu)選實施方式是抗體。本發(fā)明上下文中的受 體可理解為與配體(受體的對應(yīng)物；在抗體的情況下為抗原)發(fā)生特異性相互作用。功能 性受體(優(yōu)選為信號轉(zhuǎn)導(dǎo)受體，與非轉(zhuǎn)導(dǎo)性受體或截短受體相對)與其配體的相互作用可 以導(dǎo)致信號通路的啟動。該功能性受體的實例包括參與免疫系統(tǒng)細(xì)胞的激活的T細(xì)胞受 體(TCR)和B細(xì)胞受體(BCR)或共刺激受體(例如CD28)。功能性受體與其配體的相互作 用還可以導(dǎo)致不同細(xì)胞信號的啟動，例如通過Fas(CD95)或TNF超家族的其他受體(包括 TNF-α受體家族、TRAIL、死亡受體(DeathRec印tor)、Toll樣受體和Fc-受體)引起的細(xì) 胞凋亡。此外，按照本發(fā)明，功能性受體與其配體的相互作用還可能導(dǎo)致抑制信號(例如通 過CTLA-4的信號)的啟動。如上所述，進一步優(yōu)選所述受體是抗體、抗體片段或抗體衍生物。本發(fā)明上下文中描述的抗體能夠與表位特異性結(jié)合/相互作用。該表位可以是 多肽結(jié)構(gòu)，以及不包含氨基酸的化合物。本發(fā)明使用的術(shù)語“特異性結(jié)合/相互作用”是 指抗體或抗體片段不與或者基本上不與類似結(jié)構(gòu)的表位交叉反應(yīng)。例如可以通過評估所 研究的一組抗體在常規(guī)條件下與所關(guān)注的表位的結(jié)合以及與多種或多或少(在結(jié)構(gòu)上和/或功能上)緊密相關(guān)的表位的結(jié)合，來測試所述抗體組的交叉反應(yīng)性。只有在抗體的相關(guān) 情況下(例如蛋白結(jié)構(gòu)中的特定基序)與所關(guān)注的表位結(jié)合，但不與或基本上不與任何其 他表位結(jié)合的那些抗體才被認(rèn)為是對所關(guān)注的表位具有特異性。相應(yīng)方法在例如Harlow 禾口 Lane 的 Antibodies :A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1988 或 Harlow 禾口 Lane 的 UsingAntibodies :A Laboratory Manual(Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1999)中有描述?？贵w或抗體片段或抗體衍生物與抗原的構(gòu)象表位或連續(xù)表位特異性結(jié)合/相互 作用。多肽抗原的構(gòu)象表位或非連續(xù)表位的特征為存在兩個以上離散的氨基酸殘基，其 在一級序列上是分開的，但是當(dāng)多肽折疊為天然蛋白/抗原時聚集在分子表面上(Sela， (1969) Science 166，1365 ；和 Laver，(1990) Cell 61,553-556) 構(gòu)成表位的兩個以上離散 的氨基酸殘基存在于一條或多條(多)肽鏈的不同區(qū)域上。當(dāng)所述一條或多條(多)肽鏈 折疊成三維結(jié)構(gòu)以構(gòu)成表位時，這些殘基聚集在分子的表面上。相反，線性表位或連續(xù)表位 由兩個以上離散的氨基酸殘基構(gòu)成，其中氨基酸殘基存在于(多)肽鏈的單條線性節(jié)段中?？贵w可以是任何類別抗體的單克隆抗體或多克隆抗體。術(shù)語“抗體”還包括仍保持有結(jié)合特異性的抗體衍生物或片段。本發(fā)明的抗體還 包括例如合成的、嵌合的、單鏈的和人源化的抗體以及抗體片段等實施方式。術(shù)語“抗體片段”涉及諸如Fab，F(xiàn)(ab2)，或Fv片段等片段。術(shù)語“抗體衍生物”在 本發(fā)明上下文中定義的是經(jīng)化學(xué)修飾的抗體和抗體片段。這包括scFv片段、單域抗體等。 因此，抗體衍生物通常是來自抗體分子的(多)肽和/或經(jīng)化學(xué)/生物化學(xué)或分子生物學(xué) 方法修飾的(多)肽?？贵w片段與其特異性抗原的特異性相互作用的最低要求是在能夠?qū)?現(xiàn)抗體片段和表位配合的條件下存在來自母體抗體的可變重鏈(Vh)和可變輕鏈的一 個或多個CDR?？梢岳煤线m的抗體骨架來提供所述條件。如本領(lǐng)域已知的，術(shù)語“骨架” 在抗體或抗體衍生物的情形中是指下述氨基酸序列，其起到CDR之間的間隔子的作用，并 延伸CDR的N-末端和C-末端，提供能夠使CDR形成抗原結(jié)合位點的結(jié)構(gòu)。為例如改善結(jié) 合親合性而通過分子生物學(xué)方法對骨架或CDR序列進行的修飾可以包括利用本領(lǐng)域已知 的傳統(tǒng)技術(shù)對(多)肽進行的修飾，所述傳統(tǒng)技術(shù)例如為單獨使用或組合使用本領(lǐng)域已知 的氨基酸缺失、插入、取代、增加和/或重組和/或任何其他修飾(例如翻譯后修飾和化學(xué) 修飾，如糖基化和磷酸化)。將所述修飾引入構(gòu)成免疫球蛋白鏈氨基酸序列基礎(chǔ)的DNA序列 的方法對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言是已知的(參見例如Sambrook等人的MolecularCloning A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory Press, 1989 年第 2 版禾口 2001 年第 3 版；Gerhardt 等人的 Methods for General andMolecular Bacteriology, ASM Press,1994 ；Lefkovits 白勺 ImmunologyMethods Manual :The Comprehensive Sourcebook of Techniques, AcademicPress,1997 ；或 Golemis 的 Protein-Protein Interactions :A Molecular CloningManual, Cold Spring Harbor Laboratory Press，2002)o在本發(fā)明的另外更為優(yōu)選的實施方式中，所述生物物質(zhì)是細(xì)胞因子或生長因子。 細(xì)胞因子是本領(lǐng)域中公知的生長因子，包括例如骨形態(tài)生成蛋白(BMP)、白細(xì)胞介素(IL) 或干擾素(IF)。在進而更為優(yōu)選的實施方式中，所述細(xì)胞因子是BMP-2或BMP-7。在其他更優(yōu)選的實施方式中，所述生物物質(zhì)是血管生成刺激生長因子。該生長因 子包括基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP)、VEGF(血管內(nèi)皮生長因子)、PLGF(胎盤生長因子)、血管生
19成素、GFG、DII4(A樣配體4)和PDGF (血小板源性生長因子)。具有血管生成作用的適宜 的炎性介質(zhì)例如是IL-1、IL-6和MCP-1。在進而更優(yōu)選的實施方式中，血管生成刺激生長 因子是PDGF。如上所述，進一步優(yōu)選抗體是單克隆抗體。最優(yōu)選的是所述(單克隆)抗體屬于IgG類、IgM類或IgY類。按照本發(fā)明的方法的另一個優(yōu)選實施方式，步驟(b)中連接的生物物質(zhì)共價鍵合 到所述載體。在上文中已經(jīng)描述了如何通過共價鍵實現(xiàn)生物物質(zhì)與載體的連接的方法。按照本發(fā)明的方法的另一個優(yōu)選實施方式，在裝有載體的轉(zhuǎn)動的管體系中進行步 驟(a)至步驟(c)。此外，按照本發(fā)明的方法的另一個優(yōu)選實施方式，通過泵在所述管體系中轉(zhuǎn)動所 述溶液。在本發(fā)明的方法的另一個特別優(yōu)選的實施方式中，由具有多孔性結(jié)構(gòu)的材料制成 的載體包含至少一種其他材料。例如，在本發(fā)明的載體由上述的提供一種以上化學(xué)物質(zhì)的 材料之一制成的情況下，可以加入一種以上其他材料，以提供不同化學(xué)物質(zhì)或改變載體性 質(zhì)。這在載體由兩種、三種或更多種材料制成的情況下也同樣適用。換言之，除以上所限定 的物質(zhì)之外，可用于本發(fā)明的涂布的載體還包括至少一種其他材料。在制造載體時，可以通 過混合各成分或通過用所述一種以上其他材料填充載體，將所述材料加工到載體中。優(yōu)選 的是，所述至少一種其他材料選自由碳、二氧化硅(SiO2)、羥乙基淀粉(HES)和生物素組成 的組。包含一種其他材料的多孔性載體的實例包括例如來自Kinetic Concepts Inc. (KCI， Texas, USA)的碳填充聚氨酯和聚醚泡沫。按照本發(fā)明的方法的另一個優(yōu)選實施方式，步驟(a)至(C)中的所述溶液是包含 0. 5% 10% (體積/體積)清蛋白和0. 5% 5% (體積/體積)甘露糖醇的水性溶液。 根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的是，步驟(a)至(c)中的所述水性溶液包含0.6% 3% (體積/體 積)的清蛋白。該水性溶液優(yōu)選包含0.6% 3% (體積/體積)的糖(例如甘露糖醇)。在一個替代性的實施方式中，步驟(a)中的所述溶液是含0. 10% (體積/體 積)硅烷的醇，步驟(b)中的所述溶液是包含生物物質(zhì)(例如抗體)的水性溶液，步驟(C) 中的所述溶液是包含0.5% 10% (體積/體積)清蛋白和0.5% 5% (體積/體積) 甘露糖醇的水性溶液。根據(jù)本發(fā)明特別優(yōu)選的是，步驟(a)至(c)中的所述水性溶液包含 0. 6% 3% (體積/體積)清蛋白。該水性溶液優(yōu)選包含0. 6% 3% (體積/體積)的 糖(例如甘露糖醇)。本發(fā)明的方法可以進一步包括對所述固體涂布載體進行滅菌的步驟(e)。對本發(fā) 明的方法制造的固體涂布載體進行滅菌的能力尤其可實現(xiàn)在非無菌或半無菌的條件下制 造所述固體涂布載體，其中如此制造的載體仍然可以用于包括使該固體涂布載體與體液的 體內(nèi)接觸或間接體內(nèi)接觸的本發(fā)明的方法。這代表了本發(fā)明的方法和如此制造的載體的又 一個優(yōu)異特征，因為由于具有這樣的特征，與制造不能進行滅菌的載體的成本相比，所述固 體載體的制造成本可以降低。這是因為在制造過程中，不需要無菌的條件。眾所周知，常規(guī) 制備的載體不適于滅菌，因此必須在完全無菌的條件下制造。此外，對成本有利的特征是， 所述載體在使用后可以通過滅菌而得以再生。該再生的載體可以隨后用于進一步處理同一 患者或不同患者，或者用于同樣包括載體與體液的體內(nèi)或間接體內(nèi)接觸的另一種診斷方法或同一診斷方法。優(yōu)選的是，根據(jù)載體材料，通過環(huán)氧乙烷(EO)、β輻射、Y輻射、X射線、熱滅活、高 壓滅菌或等離子體滅菌進行載體的滅菌或再生。最優(yōu)選的是，通過β輻射或Y輻射進行 載體滅菌。適用于該實施方式的是利用IOMeV的電子加速器，以25kGray (千格雷)的劑量 進行β輻射。在一定程度上，環(huán)氧乙烷滅菌可以用于本發(fā)明的載體。通常，必須選擇滅菌 方法以不傷害到涂布生物物質(zhì)的所需活性。這種方法可以用于上述的細(xì)胞碎片、(多)肽 (特別是抗體或受體)、多核苷酸或多糖或它們的復(fù)合物。迄今為止還未知對任何種類的細(xì) 胞均適合的滅菌手段。因此，活細(xì)胞用作所述生物物質(zhì)并且對載體進行滅菌的實施方式不 是本發(fā)明的一部分。本發(fā)明的方法還可包括在步驟(e)之后洗滌所述涂布載體的步驟(f)。以上提及的洗滌步驟用于部分或全部除去步驟(C)中所施用的涂層，即第二涂 層。該洗滌步驟可以無視涂層是否全部或部分覆蓋生物物質(zhì)而應(yīng)用。這樣，生物物質(zhì)，優(yōu)選 生物物質(zhì)的功能性部分，如抗體的抗原結(jié)合位點、酶的催化位點或(多)肽上的蛋白相互作 用位點，通常能夠再次在本發(fā)明的載體的表面上部分或全部地可及，并履行其功能。利用基 于所用生物物質(zhì)的生物功能的測試，能夠定量地測定生物物質(zhì)由第二覆蓋層顯露的程度。 在抗體用作生物物質(zhì)的情況中，功能性部分(即，該情況中的抗原結(jié)合位點)的可及性可 以例如通過使用與可檢測標(biāo)記物結(jié)合的特異性抗原進行測定，正如本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知 的。同樣，酶的催化位點的可及性或(多)肽的蛋白相互作用位點的可及性一般可通過使 相應(yīng)酶的底物或經(jīng)標(biāo)記的相互作用配對物或其相互作用片段與載體接觸并檢測底物的周 轉(zhuǎn)或相互作用配對物的存在而進行評估。為了確保用于本申請中別處所述目的的本發(fā)明的 載體在洗滌步驟和測定生物物質(zhì)的功能性部分的可及性之后仍然無菌，只對一個載體進行 測試，而同一批中的其他載體用于其目的。洗滌步驟優(yōu)選使用適合于第二涂層中所含成分的溶液進行，該溶液可包含適當(dāng)?shù)?鹽和/或酶。加入的酶可用于分解第二層的某些成分，例如，蛋白或淀粉衍生物。即使洗滌 溶液中包含酶，步驟(f)也仍然視為除去部分或全部的第二涂層的洗滌步驟。洗滌溶液的 溫度和PH值同樣適合于源自所用第二涂層的成分的具體要求。最簡單的洗滌溶液例如可 以是等滲鹽溶液。對于某些應(yīng)用，所述溶液還可包含血漿替代物。根據(jù)涂布載體的應(yīng)用，洗 滌步驟還可例如以間接體內(nèi)的方式用于體液在例如透析、心肺機或用于傷口的敷治的過 程中使載體與血液或血漿流接觸。除了暴露部分生物物質(zhì)或所述生物物質(zhì)的全部表面之外，上述洗滌步驟還可用于 除去松散連接于載體的顆粒以獲得所有部分均緊密連接的載體。所述洗滌步驟在滅菌過程之后進行，不過優(yōu)選在使用前即刻進行。這將確保新近 滅菌的本發(fā)明的涂布載體不會因載體與(洗滌)溶液的在先接觸而被污染。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了一種通過本發(fā)明的方法能夠制造或已經(jīng)制得 的固體涂布載體。在另一個替代性的實施方式中，本發(fā)明提供了一種連接有生物物質(zhì)的固體涂布載 體，其中生物物質(zhì)包埋到涂布基質(zhì)中，該涂布基質(zhì)由直接接觸載體的至少一種硅烷形成的 第一層和部分或全部覆蓋所述第一層的第二層構(gòu)成，其中第二層由選自由至少一種(多) 肽、至少一種氨基酸、淀粉、至少一種糖、至少一種磷酸鹽(酯)、至少一種多元醇和聚乙二醇(PEG)或其混合物組成的組中的至少一種物質(zhì)構(gòu)成。更優(yōu)選的是，所述第二層中的所述 至少一種物質(zhì)選自包括尤其是人或動物的血清和該血清的蛋白(例如清蛋白)、伴娘蛋 白、奶、卵蛋白、植物(例如大豆、小麥)源性蛋白(包括所述蛋白的水解產(chǎn)物(例如明膠、膠 原))的組；氨基酸(優(yōu)選為甘氨酸、天冬氨酸和/或谷氨酸、脯氨酸、精氨酸、丙氨酸、天冬 酰胺、天冬氨酸、谷氨酸、谷氨酰胺、肉堿、鳥氨酸、羥基脯氨酸、半胱氨酸、高半胱氨酸、瓜氨 酸、菊粉、苯丙氨酸、賴氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、組氨酸、甲硫氨酸、絲氨酸、纈氨酸、酪氨酸、 蘇氨酸、色氨酸)或氨基酸衍生物(例如N-乙?；彼?、β-丙氨酸、黑色素、多巴)的 組；糖(優(yōu)選葡萄糖、蔗精、蔗糖)、多元醇(優(yōu)選為山梨糖醇、甘露糖醇、甘油、木糖醇)、聚 乙二醇(PEG)、羥乙基淀粉(HES)的組；磷酸鹽(例如磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉)或其混合 物的組。作為選擇，第二層由離子液體或相容性溶質(zhì)構(gòu)成。優(yōu)選的是，根據(jù)本發(fā)明的方法制造所述固體涂布載體。根據(jù)本發(fā)明的方法提供的載體、生物物質(zhì)、生物物質(zhì)與涂布基質(zhì)材料的連接的定 義和說明等可以比照適用于本發(fā)明的固體涂布載體。此外，本發(fā)明的固體涂布載體的特別優(yōu)異的特征已經(jīng)在上文中的本發(fā)明的方法的 特征表述的內(nèi)容中進行了描述。如在本發(fā)明的固體涂布載體的制造方法的部分中所述，還優(yōu)選的是，載體材料選 自由玻璃、聚氨酯、聚酯、聚砜、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸類、聚丙烯腈、聚酰胺、聚甲基丙烯 酸甲酯、羊毛填料、開孔泡沫塑料、網(wǎng)狀塑料和得自海綿動物(多孔動物)的結(jié)構(gòu)體組成的組。根據(jù)本發(fā)明的固體涂布載體的一個優(yōu)選實施方式，生物物質(zhì)選自由真核細(xì)胞、真 核細(xì)胞碎片、原核生物、原核生物碎片、古細(xì)菌、古細(xì)菌碎片、病毒和病毒碎片組成的組。優(yōu) 選的是，真核細(xì)胞碎片、原核生物碎片、古細(xì)菌碎片或病毒碎片選自由(多)肽、寡核苷酸、 多核苷酸和多糖組成的組。在本發(fā)明的固體涂布載體的一個替代性實施方式中，生物物質(zhì)選自由通過合成或 半合成或重組制得的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖。在本發(fā)明的載體的一個同樣優(yōu)選的實施方式中，第二層中的所述至少一種(多) 肽是清蛋白，第二層中的所述淀粉是羥乙基淀粉(HES)，和/或第二層中的所述至少一種糖 是甘露糖醇或山梨糖醇。優(yōu)選的是具有多孔性結(jié)構(gòu)的載體材料的特征在于表面/氣體容積比為30CHT1 300CHT1。還優(yōu)選的是，具有多孔性結(jié)構(gòu)的載體材料的特征在于材料體積比未壓縮/壓縮為
4 40。在另一個優(yōu)選的實施方式中，載體材料是中空纖維。中空纖維包裝件優(yōu)選具有 如下特征材料體積比未壓縮/壓縮為1 10，和/或表面/氣體容積比為200CHT1 2000cm-1 ο另外優(yōu)選的是，所述第一層中的所述至少一種硅烷選自由烷氧基硅烷、有機官能 性硅烷、氫硅(氧)烷、硅氧烷、有機硅烷(包括具有其他官能團的甲硅烷基化合物)組成 的組。上文中已經(jīng)提供適當(dāng)硅烷的實例。按照本發(fā)明，所述載體的第二層可以是包含清蛋白和甘露糖醇的優(yōu)選為干燥的混合物。優(yōu)選的是，所述混合物進一步包含聚乙二醇(PEG)。特別是，根據(jù)本發(fā)明，將所述混合 物以液體形式施用于所述載體，隨后在本發(fā)明的載體的表面上干燥。優(yōu)選用風(fēng)干法進行干 燥。在另一個優(yōu)選的實施方式中，第二層包含伴娘蛋白或由離子液體或相容性溶質(zhì)構(gòu)成，正 如上文中關(guān)于本發(fā)明的方法所述。 在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中，生物物質(zhì)共價結(jié)合至所述載體。上文和所附 實施例2描述了實現(xiàn)生物物質(zhì)與固體載體的共價結(jié)合的方法。對于本發(fā)明的固體涂布載體而言進一步優(yōu)選的是，在(b)項中包埋在涂布基質(zhì)中 的(多)肽是受體。更優(yōu)選的是，所述受體是抗體或抗體片段。根據(jù)本發(fā)明的另一優(yōu)選實 施方式特別設(shè)計的是，所述抗體是單克隆抗體。包埋到本發(fā)明的載體的涂布基質(zhì)中的(單克隆)抗體可以是任何抗體種類的抗 體。優(yōu)選的是，所述抗體屬于IgG類、IgY類或IgM類。在另一個優(yōu)選的實施方式中，(多)肽是正如上文中關(guān)于本發(fā)明的方法所述的細(xì) 胞因子或促血管生成生長因子。更優(yōu)選的是細(xì)胞因子為BMP，最優(yōu)選BMP-2或BMP-7。在另 一個更優(yōu)選的實施方式中，促血管生成生長因子是PDGF。特別優(yōu)選的是，本發(fā)明的載體包含至少一種其他材料。例如，在本發(fā)明的載體由上 述的提供一種以上化學(xué)物質(zhì)的材料之一制成的情況下，可以加入一種以上其他材料，以提 供不同化學(xué)物質(zhì)或改變載體性質(zhì)。這在載體由兩種、三種或更多種材料制成的情況下也同 樣適用。換言之，除以上所限定的物質(zhì)之外，可用于本發(fā)明的涂布的載體還包括至少一種其 他材料。在制造載體時，可以通過混合各成分或通過用所述一種以上其他材料填充載體，將 所述材料加工到載體中。優(yōu)選的是，所述至少一種其他材料選自由碳、二氧化硅(SiO2)、羥 乙基淀粉(HES)和生物素組成的組。在本發(fā)明的另一個優(yōu)選實施方式中，通過β輻射或Y輻射對載體進行滅菌。適 用于該實施方式的是利用IOMeV的電子加速器，以25kGray的劑量進行β輻射。在另一個替代性實施方式中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的固體涂布載體在制備用于接 觸、過濾或清潔患者的血液、淋巴或腦脊髓液的(醫(yī)療)設(shè)備中的應(yīng)用。本發(fā)明上下文中的 術(shù)語“(醫(yī)療)設(shè)備”是指包括本發(fā)明的固體涂布載體或用本發(fā)明的方法制造的固體涂布載 體的設(shè)備。以下舉例說明了該設(shè)備的實例。如上文中(固體涂布載體的制造方法的上下文 中)所述，該設(shè)備適于實現(xiàn)通過將其與患者體液循環(huán)連接而接觸、過濾或清潔患者的血液、 淋巴或腦脊髓液，從而治療患者。此外，同樣如部分上文所述，所述(醫(yī)療)設(shè)備可以適用 于定性或定量檢測患者體液樣品中的化合物以及俘獲某些細(xì)胞，例如干細(xì)胞。干細(xì)胞包括 多潛能性干細(xì)胞、多能性干細(xì)胞或全能性干細(xì)胞。通過利用適當(dāng)涂布有一種以上的上述生 物物質(zhì)的本發(fā)明的載體，俘獲某些細(xì)胞或一種以上細(xì)胞群(所述生物物質(zhì)通過在體液樣品 中進行接觸，特異性地結(jié)合到這些細(xì)胞或細(xì)胞群)，可以從樣品中除去至少部分的這些細(xì)胞 或細(xì)胞群。通常，通過在細(xì)胞表面上存在不同抗原，可以區(qū)別不同的細(xì)胞系、細(xì)胞物種或細(xì) 胞的發(fā)育階段。通過用例如抗原的相應(yīng)受體或針對所述抗原的抗體涂布本發(fā)明的載體，可 以實現(xiàn)所需細(xì)胞的選擇性俘獲。在整個本申請中使用的術(shù)語“接觸、過濾或清潔”是指從溶液中除去一種以上化合 物的替代性手段。因此，術(shù)語“接觸”可以是過濾和清潔的起始步驟。所公開的優(yōu)選的醫(yī)療設(shè)備可用于包括從體液脫除毒素(例如二噁英、肉毒桿菌毒素、破傷風(fēng)毒素、LPS、腐敗毒等)的治療中。此外，所述設(shè)備可用于治療細(xì)菌性疾病或病毒 性疾病，特別是與血液或其他體液中的主要病毒負(fù)載有關(guān)的疾病(例如出血熱、a型肝炎、b 型肝炎、c型肝炎、d型肝炎、e型肝炎、HIV、登革熱)或與血液或其他體液中的主要細(xì)菌負(fù) 載有關(guān)的疾病(例如與腦膜炎球菌或肺炎球菌有關(guān)的敗血癥)。所公開的醫(yī)療設(shè)備的另一 個設(shè)想的替代性應(yīng)用是用于需要刺激或除去患者某些細(xì)胞的治療。除去特定細(xì)胞群例如見 于增殖性疾病(例如微量殘留癌)、自身免疫疾病的治療或器官移植所引起的疾病的治療。 刺激特定細(xì)胞群例如見于通過激活免疫系統(tǒng)細(xì)胞而可以治愈或減輕的疾病的治療。激活細(xì) 胞群適于消除特定的生病細(xì)胞群。此外，利用固著至固體載體的適當(dāng)抗體(例如抗CD34或CD133)俘獲干細(xì)胞是該 設(shè)備的有用的應(yīng)用。俘獲后，通過酶促釋放、冷卻液、機械力(振動等)或這些技術(shù)的組合 收集細(xì)胞。圖3和4示意地描述了所公開的(醫(yī)療)設(shè)備的實施方式的實例。(醫(yī)療)設(shè)備的一種實施方式包括暫時性或永久性植入物，其特征為表面本身是 固體涂布載體，或表面連接有本發(fā)明的固體涂布載體或本發(fā)明的方法所制造的固體涂布載 體。這包括接骨設(shè)備、重建外科手術(shù)等使用的材料以及新型支架。這種新型支架可以具有 免疫催化特征(如上所述的刺激、抑制或消除特征)。(醫(yī)療)設(shè)備的另外的實施方式包括引入體外系統(tǒng)中的導(dǎo)管、線路、設(shè)備，例如 動脈濾器、充氧器、貯器、白細(xì)胞抑制模塊(LIM)、白細(xì)胞刺激模塊(LSM)、耐受誘導(dǎo)模塊 (Tolerance Induction Module)或人造淋巴結(jié)，其包含固體涂布載體，或者連接有本發(fā)明 的固體涂布載體或根據(jù)本發(fā)明的方法制造的固體涂布載體。所述模塊已經(jīng)被描述過例 如，Scholz M 等，ASAIO J 2005 ；51 144-147 ；Scholz M,Cinatl J Med Res Rev 2005 ；25 331-342 ；Scholz M 等，J Thorac Cardiovasc Surg 2004 ；127 :1735_1742 ；Moreno JB 等， Perfusion 2004 ；19 :11_16。此外，(醫(yī)療)設(shè)備的另一個替代性實施方式是內(nèi)壁為固體涂布載體的(醫(yī)療) 設(shè)備，或連接有固體涂布載體的(醫(yī)療)設(shè)備，包括間接體內(nèi)疫苗接種容器，分離設(shè)備 (apheresis device)、干細(xì)胞分離設(shè)備、清洗設(shè)備、注射器和暫時性或永久性血液存儲設(shè)備 (例如血庫，還有常規(guī)實驗室或研究實驗室中的實驗室裝置)。診斷用(醫(yī)療)設(shè)備的實例 是ELISA板，其中該板(或至少反應(yīng)孔)的表面是固體涂布載體或連接有固體涂布載體。上述疾病的實例包括具有各種起因的嚴(yán)重高脂血癥、純合子型家族性高膽固醇血 癥、雜合子型家族性高膽固醇血癥、Apo B-100缺陷癥、分離型脂蛋白(a)升高、全身性紅斑 狼瘡(SLE)、干燥綜合征(:Sj6gren’S syndrome)、混合性結(jié)締組織病、擴張性心肌病(DCM)、 與凝血因子抑制劑有關(guān)的疾病、特發(fā)性血小板減少性紫癜(ITP)、血栓性血小板減少性紫 癜(TTP)、自身免疫性溶血性貧血、高丙種球蛋白血癥中的高粘滯綜合征、重癥肌無力、格 林-巴利綜合征、慢性炎性脫髓鞘性多發(fā)性神經(jīng)病(CIDP)、異常蛋白血癥性多神經(jīng)病、骨髓 移植、內(nèi)分泌眼病、I型糖尿病(IDDM)、肺出血-肺炎綜合征(Goodpasture’ s syndrome)、 由免疫球蛋白或免疫復(fù)合物沉積引起的腎病、冷球蛋白血癥、天皰瘡、特應(yīng)性皮炎、移植物 抗宿主(GvH)疾病、宿主抗移植物(HvG)疾病和各種形式的血管炎。本發(fā)明還提供了患者血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控制的方法，所述方法包括 將所述血液、淋巴或腦脊髓液與本發(fā)明的固體涂布載體接觸。
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術(shù)語體液的“組成的控制”定義為影響體液或不同體液樣品的特性特征的過程。這 包括液體的過濾或清潔。在這種情況下，載體上的生物物質(zhì)，例如受體，將結(jié)合至體液的成 分上，并保持所述成分。優(yōu)選在上述生理條件下進行該步驟。該定義還包括誘導(dǎo)樣品中包 含的細(xì)胞的活化狀態(tài)的變化，以及除去一種以上特定細(xì)胞群。根據(jù)本發(fā)明，可以在體內(nèi)、間接體內(nèi)或體外進行患者血液、淋巴或腦脊髓液的組成 的控制。在患者的血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控制的方法的間接體內(nèi)或體外實施方式 的后續(xù)步驟中，在與固體涂布載體接觸后，從所述載體除去所述血液、淋巴或腦脊髓液。在生物物質(zhì)是細(xì)胞(例如供體細(xì)胞或基因工程細(xì)胞/重組細(xì)胞)的實施方式中， 包含包埋的生物物質(zhì)的載體的接觸能夠使包埋的細(xì)胞產(chǎn)生的物質(zhì)分泌到患者體液中。所分 泌的物質(zhì)是治療患者疾病的有效物質(zhì)?？梢杂迷摲椒ㄖ委煹募膊“ɡ缣悄虿?利用胰 島細(xì)胞或分泌胰島素的其他細(xì)胞)、內(nèi)分泌疾病(例如利用來自甲狀腺或松果體的細(xì)胞或 其他分泌有助于治療疾病的激素的細(xì)胞)。因此，本文所述的患者的血液、淋巴或腦脊髓液 的組成的控制方法使得能夠治療患者且副作用風(fēng)險最小。這是因為如果以體外/間接體內(nèi) 方式施用，供體細(xì)胞或基因工程細(xì)胞/重組細(xì)胞不會進入患者。即使是體內(nèi)應(yīng)用(如上所 述，其同樣構(gòu)成了本發(fā)明的實施方式)，由于所述的與固體載體連接的模式，這些細(xì)胞不會 釋放到血流或其他體液中。優(yōu)選的是，本發(fā)明的上述應(yīng)用和方法的特征為血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控 制在包含固體涂布載體的間歇容器中進行。作為選擇，血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控制 在包含固體涂布載體的流通式容器中進行。在另一個實施方式中，本發(fā)明提供了一種診斷疾病的方法。該方法包括以下步 驟(a)使患者的體液與其中包埋有受體的本發(fā)明的固體涂布載體在適宜使指示所述 疾病的病原體或標(biāo)記蛋白與所包埋的受體特異性結(jié)合的條件下進行接觸；和(b)檢測用于指示所述疾病的所述病原體或標(biāo)記蛋白是否已經(jīng)結(jié)合至所包埋的受 體。可以以體內(nèi)、間接體內(nèi)或體外方式進行所述方法。優(yōu)選的是，所述受體是抗體或其 片段或衍生物。最優(yōu)選的是，所述抗體是單克隆抗體。根據(jù)本發(fā)明，術(shù)語“其中包埋有受體的本發(fā)明的固體涂布載體”是指，通過本發(fā)明 的方法能夠制造或已經(jīng)制得的固體涂布載體，其中所述方法的步驟(b)中的所述生物物質(zhì) 構(gòu)成所述受體或包含所述受體。利用本發(fā)明的診斷方法可診斷的疾病的實例包括以上在本發(fā)明的醫(yī)學(xué)用途和治 療方法的內(nèi)容中所描述的疾病?？梢岳美缈贵w樣抗P24(HIV)(參見例如Schupbach 等，J Aquir Immune Defic Syndr 2005；40 :250_256·)或抗 gB(HCMV)(參見例如 Just-Nubling G等，Infection 2003 ；31 :318_323)來檢測所述病原體或標(biāo)記蛋白。可以通過在生理條件下根據(jù)本發(fā)明使患者體液樣品與抗體覆蓋的表面接觸，來獲 得使用于指示所述疾病的病原體或標(biāo)記蛋白與所連接的抗體特異性結(jié)合的適宜條件。本發(fā)明的診斷方法可以包括在細(xì)胞培養(yǎng)條件下溫育體液樣品材料以富集病原體 (如病毒、細(xì)菌或單細(xì)胞真核生物病原體)的步驟。
此外，本發(fā)明還提供了一種診斷組合物，所述診斷組合物包括本發(fā)明的固體涂布 載體。本發(fā)明的診斷組合物將優(yōu)選用于診斷疾病。使用本發(fā)明的診斷組合物可診斷的疾病的實例已在上文中進行了描述。此外，本發(fā)明提供了一種純化化合物的方法，所述方法包括使包含待純化的化合 物的混合物與本發(fā)明的固體涂布載體接觸。根據(jù)連接或涂布至載體的分子以及與化合物的 特異性結(jié)合，本發(fā)明的方法可以用于純化例如蛋白質(zhì)、核酸、蛋白質(zhì)復(fù)合物或生物來源或無 機物來源的其他分子。本發(fā)明的所述方法還適合于利用本發(fā)明的所述涂布載體，分離具有不同磷酸化狀 態(tài)或具有不同的翻譯后修飾的同類蛋白質(zhì)，其中涂布至載體的分子特異性地識別這些狀態(tài) 或修飾中的一種。本發(fā)明方法的原理對應(yīng)于本領(lǐng)域公知的親和純化的原理。本領(lǐng)域技術(shù)人員會意識 到可使用不同形式來實施本發(fā)明的方法。例如，通常采用的形式是填充有親和性材料(即 本發(fā)明的涂布載體)的柱子。在本發(fā)明的方法的一個優(yōu)選實施方式中，連接至所述載體的分子例如是上述的抗 體。


附圖展示了圖 1 固定生物物質(zhì)的涂布程序的示意圖。舉例說明的是用于如抗體或細(xì)胞(或片段) 等生物物質(zhì)的程序和它們在應(yīng)力條件下的功能保持性。該圖描述了還包括滅菌步驟和額外 的洗滌步驟的優(yōu)選方法。圖 2 展示所附實施例1中所述的實驗結(jié)果的流式細(xì)胞計數(shù)斑點印跡分析。該分析揭示 了 EO滅菌后抗體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡誘導(dǎo)的保持。圖3:治療性毒素陷阱(trap)(例如二噁英陷阱)的實施例的示意性設(shè)計。該例舉設(shè)計 可實現(xiàn)低血流和預(yù)充容量。因此還可以例如在危重癥護理中的創(chuàng)傷、休克和敗血癥和其他 情形之后/期間用于不同的導(dǎo)管系統(tǒng)(例如Sheldon導(dǎo)管)。圖 4 (醫(yī)療)裝置的實例的示意性圖示，所述(醫(yī)療)裝置由帶有固定的抗體(例如 抗CD95)的載有塑料盒體的聚氨酯泡沫組成。通過涂布，嗜中性粒細(xì)胞可以暫時粘附至通 過涂布而被包埋的抗體上?？贵w的結(jié)合可以引發(fā)嗜中性粒細(xì)胞失活信號。
具體實施例方式下列各實施例用于闡述本發(fā)明。實施例1 利用本發(fā)明的固體涂布載體誘導(dǎo)細(xì)胞群中的細(xì)胞凋亡。該試驗方法的目標(biāo)是確定涂布程序在用環(huán)氧乙烷或β輻射滅菌之后的固定的抗
26Fas (⑶95 ；AP0-1) IgM抗體的功能活性方面的保護作用。NUNC 8孔室玻片的涂布和抗Fas IgM的固定使用兩個8孔室玻片進行涂布。在室溫下，用250μ1含有4% (2% 5% ) N-[3-(三甲氧基甲硅烷基)丙基]乙二胺的甲醇對每個孔進行30分鐘的處理。反向離心 并在層流下干燥10分鐘之后，在37°C和90%濕度，用200μ1含抗體的緩沖液(1 100表 示在0. 64cm2上每孔有1 μ g抗體)對部分的孔進行1小時的溫育。未處理孔用作對照。隨 后，用封閉溶液(含有5%血清和5%甘露糖醇的PBS)處理各孔30分鐘，用封閉溶液洗滌三 次，并如上所述進行干燥。經(jīng)涂布的孔可以在4°C保存數(shù)周。在1.7巴、45°C、180分鐘6% E0,94% CO2條件下進行滅菌，最高溫度為47°C。用Jurkat細(xì)胞進行的分析于分裂后3至5天，在2%血清的存在下，向每個所準(zhǔn)備的孔(根據(jù)上述說明)中 加入IX IO5Jurkat細(xì)胞并溫育過夜。48小時后，將8 μ 1碘化丙啶(PI)和Ιμ 膜聯(lián)蛋白 V加入各孔中。凋亡細(xì)胞結(jié)合膜聯(lián)蛋白V，而壞死細(xì)胞吸收ΡΙ。15分鐘后，從各個孔中逐漸 除去細(xì)胞，并用流式細(xì)胞計測定熒光(細(xì)胞凋亡FL1 ；壞死FL2)。用PBS仔細(xì)洗滌各孔，并保存在4°C，以測試較晚時間點涂布程序的保存期。結(jié)果如圖2中代表性圖示的，經(jīng)歷自然細(xì)胞凋亡㈧的Jurkat細(xì)胞的百分比是6. 9% (范圍6% 8% )。與在無固定抗體的情況下經(jīng)歷滅菌⑶的涂布孔接觸的Jurkat細(xì)胞 表現(xiàn)出稍微增強的細(xì)胞凋亡(17. 9%;范圍16% 20% )。按照上述涂布程序(C)固定的 抗Fas誘導(dǎo)了 54. 7%細(xì)胞發(fā)生細(xì)胞凋亡(范圍54% 58% )。用環(huán)氧乙烷(EO)滅菌后， Jurkat細(xì)胞中抗體介導(dǎo)的細(xì)胞凋亡的誘導(dǎo)(D)是43. (范圍40% 44% )。因此，與 未滅菌的對照(沒有EO氣體的程序)相比，EO介導(dǎo)的抗體功能下降為約25%。斑點印跡 分析(圖2)顯示了各細(xì)胞群的熒光分布(FLl =細(xì)胞凋亡；FL2 =壞死)。實施例2 白細(xì)胞抑制模塊(LIM)的制造為了制造LIM，將泡沫浸泡在98%甲醇和2% (3_縮水甘油氧基丙基)三甲氧基硅 烷(Sigma)的混合物中20分鐘，然后干燥，隨后在37°C在緩沖液中溫育100 μ g抗體2小 時，所述緩沖液由15mM碳酸鈉和35mM碳酸氫鈉的水溶液組成(pH 9)。作為選擇，PBS可以 用作抗體用緩沖液。然后，加入包含2%人清蛋白的蛋白質(zhì)濃度的等滲NaCl溶液，再進行1 小時的溫育。隨后利用包含人清蛋白的等滲氯化鈉溶液進行10次洗滌循環(huán)。最后，用 包含5%人清蛋白和5%甘露糖醇的等滲鈉溶液溫育30分鐘然后干燥。環(huán)氧乙烷殺菌使抗 體活性(用Jurkat細(xì)胞測試)降低約60%。利用IOMeV電子加速器以25kGray劑量進行 β輻射后，與未滅菌的活性相比，抗體活性保留約70%。作為選擇，可以利用Y輻射(例 如利用Co6tl源)進行滅菌。圖4圖示了 LIM的示意圖。
權(quán)利要求
一種制造攜帶有生物物質(zhì)的固體涂布載體的方法，所述方法包括以下步驟(a)用包含0.1％～10％(重量/重量)或(體積/體積)的至少一種硅烷或其他適宜的偶聯(lián)劑的溶液溫育固體載體，隨后除去所述溶液；(b)通過用包含所述生物物質(zhì)的優(yōu)選經(jīng)緩沖的水性溶液溫育所述載體，隨后除去所述水性溶液，從而將所述生物物質(zhì)連接至所述載體上；和(c)在(i)包含選自(多)肽、氨基酸、淀粉、糖、磷酸鹽、多元醇、聚乙二醇(PEG)或其混合物的一種或多種物質(zhì)的水性溶液、(ii)離子液體或(iii)相容性溶質(zhì)中或它們的混合物中，溫育所述載體，以使所述生物物質(zhì)部分或全部由所述一種或多種物質(zhì)覆蓋。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述方法還包括步驟(d)(d)將所述載體干燥至殘留水含量<20% (重量/重量)。
3.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述方法還包括步驟(a’)(a’ )將所述載體干燥至所述溶液的殘留含量小于初始施用溶液的10%。
4.如權(quán)利要求1或2所述的方法，所述方法還包括在所述步驟(b)之后且在步驟(c) 之前的步驟(b，)(b’ )在包含封閉劑的經(jīng)緩沖的水性溶液中溫育所述載體，并除去所述水性溶液。
5.如權(quán)利要求1 3中任一項所述的方法，所述方法還包括在所述步驟(b)之后且在 步驟(c)之前的步驟(b”)(b”)利用包含0.5% 10% (重量/重量)的下述物質(zhì)的水性溶液封閉未結(jié)合的結(jié)合 位點，所述物質(zhì)選自由(多)肽、羥乙基淀粉(HES)、甘露糖醇、山梨糖醇和聚乙二醇(PEG)、 源自奶、大豆、小麥或卵的蛋白質(zhì)組成的組；并可選地在封閉后利用水性溶液進行一次或多 次洗滌步驟。
6.如權(quán)利要求1 5中任一項所述的方法，其中，步驟(c)中的所述載體在包含選自由 清蛋白、羥乙基淀粉(HES)、甘露糖醇、山梨糖醇、聚乙二醇(PEG)和伴娘蛋白組成的組中的 一種或多種物質(zhì)的水性溶液中溫育。
7.如權(quán)利要求1 5中任一項所述的方法，其中，步驟(c)中的所述載體在離子液體中溫育ο
8.如權(quán)利要求1 7中任一項所述的方法，其中，所述載體的材料具有多孔性結(jié)構(gòu)。
9.如權(quán)利要求8所述的方法，其中，所述載體的材料的特征在于表面/氣體容積比為 30CHT1 300CHT1。
10.如權(quán)利要求8或9所述的方法，其中，所述載體的材料的特征在于材料體積比未壓縮/壓縮為4 40。
11.如權(quán)利要求9所述的方法，其中，所述載體的材料具有中空纖維結(jié)構(gòu)，優(yōu)選具有如 下特征材料體積比未壓縮/壓縮為1 10和/或所述表面/氣體容積比為200CHT1 2000cm-1 ο
12.如權(quán)利要求1 11中任一項所述的方法，其中，所述載體的材料選自由玻璃、聚氨 酯、聚酯、聚砜、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸類、聚丙烯腈、聚酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、羊毛填 料、開孔泡沫塑料或玻璃、網(wǎng)狀塑料或玻璃、以及得自海綿動物(多孔動物)的結(jié)構(gòu)體組成 的組。
13.如權(quán)利要求1 12中任一項所述的方法，其中，步驟(a)中的所述溶液是水性溶液。
14.如權(quán)利要求1 12中任一項所述的方法，其中，步驟(a)中的所述溶液是非水性溶液。
15.如權(quán)利要求1 12中任一項所述的方法，其中，所述至少一種硅烷選自由烷氧基硅 烷、有機官能性硅烷、氫硅(氧)烷、硅氧烷和包括具有其他官能團的甲硅烷基化合物在內(nèi) 的有機硅烷組成的組。
16.如權(quán)利要求1 15中任一項所述的方法，其中，所述生物物質(zhì)選自由真核細(xì)胞、真 核細(xì)胞碎片、原核生物、原核生物碎片、古細(xì)菌、古細(xì)菌碎片、病毒和病毒碎片組成的組。
17.如權(quán)利要求16所述的方法，其中，所述真核細(xì)胞碎片、原核生物碎片、古細(xì)菌碎片 或病毒碎片選自由(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖組成的組。
18.如權(quán)利要求1 15中任一項所述的方法，其中，所述生物物質(zhì)選自由合成、半合成 或重組制得的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖組成的組。
19.如權(quán)利要求17或18所述的方法，其中，所述(多)肽是受體。
20.如權(quán)利要求19所述的方法，其中，所述受體是抗體、抗體片段或抗體衍生物。
21.如權(quán)利要求20所述的方法，其中，所述抗體是單克隆抗體。
22.如權(quán)利要求20或21所述的方法，其中，所述抗體為IgG類、IgY類或IgM類。
23.如權(quán)利要求17或18所述的方法，其中，所述(多)肽是細(xì)胞因子或血管生長因子。
24.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述細(xì)胞因子是BMP-2或BMP-7。
25.如權(quán)利要求23所述的方法，其中，所述血管生長因子是PDGF。
26.如權(quán)利要求1 25中任一項所述的方法，其中，所述生物物質(zhì)通過共價鍵連接至步 驟(b)中的所述載體上。
27.如權(quán)利要求1 26中任一項所述的方法，其中，所述步驟(a)至步驟(c)在裝有所 述載體的轉(zhuǎn)動的管體系中進行。
28.如權(quán)利要求1 27中任一項所述的方法，其中，所述溶液通過泵在所述管體系中轉(zhuǎn)動。
29.如權(quán)利要求8 28中任一項所述的方法，其中，由具有多孔性結(jié)構(gòu)的材料制成的所 述載體包含至少一種其他材料。
30.如權(quán)利要求29所述的方法，其中，所述至少一種其他材料選自由碳、Si02、羥乙基 淀粉和生物素組成的組。
31.如權(quán)利要求1 30中任一項所述的方法，其中，步驟(a)至(c)中的所述溶液是包 含0. 5% 10% (體積/體積)清蛋白和0. 5% 5% (體積/體積)甘露糖醇的水性溶 液。
32.如權(quán)利要求1 30中任一項所述的方法，其中，步驟(a)中的所述溶液是含有 0. 10% (體積/體積)硅烷的醇，步驟(b)中的所述溶液是包含所述生物物質(zhì)的水 性溶液，步驟(c)中的所述溶液是包含0. 5% 10% (體積/體積)清蛋白和0. 5% 5% (體積/體積)甘露糖醇的水性溶液。
33.如權(quán)利要求1 32中任一項所述的方法，所述方法還包括對所述固體涂布載體進 行滅菌的步驟(e)。
34.如權(quán)利要求33所述的方法，其中，通過環(huán)氧乙烷(EO)、β輻射、γ輻射、X射線、熱滅活、高壓滅菌或等離子體滅菌對所述載體進行滅菌。
35.如權(quán)利要求33所述的方法，所述方法還包括在步驟(e)之后的步驟(f)洗滌所述 涂布載體。
36.一種通過權(quán)利要求1 35中任一項所述的方法能夠制造或者已經(jīng)制得的固體涂布 載體。
37.一種連接有生物物質(zhì)的固體涂布載體，其中，所述生物物質(zhì)包埋到涂布基質(zhì)中，該 涂布基質(zhì)由直接接觸所述載體的至少一種硅烷形成的第一層和部分或全部覆蓋所述第一 層的第二層構(gòu)成，所述第二層由選自由至少一種(多)肽、至少一種氨基酸、淀粉、至少一種 糖、至少一種磷酸鹽、至少一種多元醇和聚乙二醇(PEG)或它們的混合物組成的組中的至 少一種物質(zhì)構(gòu)成。
38.如權(quán)利要求37所述的載體，其中，所述載體的材料具有多孔性結(jié)構(gòu)。
39.如權(quán)利要求37或38所述的載體，其中，所述載體的材料選自由玻璃、聚氨酯、聚酯、 聚砜、聚乙烯、聚丙烯、聚丙烯酸類、聚丙烯腈、聚酰胺、聚甲基丙烯酸甲酯、羊毛填料、開孔 泡沫塑料、網(wǎng)狀塑料和得自海綿動物(多孔動物)的結(jié)構(gòu)體組成的組。
40.如權(quán)利要求37 39中任一項所述的載體，其中，所述生物物質(zhì)選自由真核細(xì)胞、真 核細(xì)胞碎片、原核生物、原核生物碎片、古細(xì)菌、古細(xì)菌碎片、病毒和病毒碎片組成的組。
41.如權(quán)利要求40所述的載體，其中，所述真核細(xì)胞碎片、原核生物碎片、古細(xì)菌碎片 或病毒碎片選自由(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖組成的組。
42.如權(quán)利要求37 39中任一項所述的載體，其中，所述生物物質(zhì)選自由合成或半合 成或重組制得的(多)肽、寡核苷酸、多核苷酸和多糖組成的組。
43.如權(quán)利要求37 42中任一項所述的載體，其中，所述第二層的所述至少一種(多) 肽是清蛋白，所述第二層的所述淀粉是羥乙基淀粉(HES)，和/或所述第二層的所述至少一 種糖是甘露糖醇或山梨糖醇。
44.如權(quán)利要求37 43中任一項所述的載體，其中，具有多孔性結(jié)構(gòu)的所述載體的材 料的特征在于表面/氣體容積比為SOcnT1 SOOcnT1。
45.如權(quán)利要求38 44中任一項所述的載體，其中，具有多孔性結(jié)構(gòu)的所述載體的材 料的特征在于材料體積比未壓縮/壓縮為4 40。
46.如權(quán)利要求38 44中任一項所述的載體，其中，所述載體的材料是中空纖維，優(yōu)選 具有如下特征材料體積比未壓縮/壓縮為1 10，和/或表面/氣體容積比為200CHT1 2000cm-1 ο
47.如權(quán)利要求37 46中任一項所述的載體，其中，所述第一層的所述至少一種硅烷 選自由烷氧基硅烷、有機官能性硅烷、氫硅(氧)烷、硅氧烷、包括具有其他官能團的甲硅烷 基化合物在內(nèi)的有機硅烷組成的組。
48.如權(quán)利要求37 47中任一項所述的載體，其中，所述第二層是包含清蛋白和甘露 糖醇的優(yōu)選為干燥的混合物。
49.如權(quán)利要求48所述的載體，其中，所述第二層還包含聚乙二醇(PEG)。
50.如權(quán)利要求37 49中任一項所述的載體，其中，所述生物物質(zhì)通過共價鍵連接至 所述載體。
51.如權(quán)利要求41 50中任一項所述的載體，其中，所述(多)肽是受體。
52.如權(quán)利要求51所述的載體，其中，所述受體是抗體、抗體片段或抗體衍生物。
53.如權(quán)利要求52所述的載體，其中，所述抗體是單克隆抗體。
54.如權(quán)利要求47或48所述的載體，其中，所述抗體為IgG類、IgY類或IgM類。
55.如權(quán)利要求41 50中任一項所述的載體，其中，所述(多)肽是細(xì)胞因子或血管 生成生長因子。
56.如權(quán)利要求37 55中任一項所述的載體，其中，所述載體包含至少一種其他材料。
57.如權(quán)利要求56所述的載體，其中，所述至少一種其他材料選自由碳、二氧化硅、羥 乙基淀粉和生物素組成的組。
58.如權(quán)利要求37 57中任一項所述的載體，其中，所述載體通過β輻射或γ輻射 進行滅菌。
59.權(quán)利要求37 58中任一項所述的固體涂布載體在制備用于接觸、過濾或清潔患者 的血液、淋巴或腦脊髓液的醫(yī)療產(chǎn)品中的應(yīng)用。
60.一種控制患者的血液、淋巴或腦脊髓液的組成的方法，所述方法包括將所述血液、 淋巴或腦脊髓液與權(quán)利要求37 58中任一項所述的固體涂布載體接觸。
61.如權(quán)利要求59所述的應(yīng)用或如權(quán)利要求60所述的方法，其中，在包含所述固體涂 布載體的間歇容器中進行患者的血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控制。
62.如權(quán)利要求59所述的應(yīng)用或如權(quán)利要求60所述的方法，其中，在包含所述固體涂 布載體的流通式容器中進行患者的血液、淋巴或腦脊髓液的組成的控制。
63.一種診斷疾病的方法，所述方法包括以下步驟(a)使患者的體液與權(quán)利要求51 58中任一項所述的固體涂布載體在適宜使指示所 述疾病的病原體或標(biāo)記蛋白與所包埋的受體特異性結(jié)合的條件下進行接觸；和(b)檢測指示所述疾病的所述病原體或標(biāo)記蛋白是否已經(jīng)結(jié)合至所包埋的受體。
64.如權(quán)利要求63所述的方法，其中，所述受體是抗體、抗體片段或抗體衍生物。
65.一種診斷組合物，所述診斷組合物包含權(quán)利要求37 58中任一項所述的固體涂布 載體。
66.一種純化化合物的方法，所述方法包括將包含待純化的所述化合物的混合物與 權(quán)利要求37 58中任一項所述的固體涂布載體接觸。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制造攜帶有生物物質(zhì)的固體涂布載體的方法。此外，本發(fā)明還涉及連接有生物物質(zhì)的固體涂布載體以及所述固體涂布載體在制備醫(yī)療產(chǎn)品中的應(yīng)用。此外，本發(fā)明還提供了一種接觸、過濾或清潔患者的血液、淋巴或腦脊髓液的方法、診斷疾病的方法以及診斷組合物。
文檔編號C12Q1/68GK101910202SQ200880124134
公開日2010年12月8日 申請日期2008年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2007年11月7日
發(fā)明者延斯·阿爾特里克特, 斯特凡·馬格拉夫, 馬丁·肖爾茨 申請人:白血球保健股份有限公司