專利名稱：：穩(wěn)定化的花色素甙組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明主要涉及用于使花色素甙和花色素穩(wěn)定的方法和組合物。
背景技術(shù)：
：花色素甙是水溶性的顏料，其決定著眾多的花朵、水果和葉片誘人的顏色。通常，它們可以通過酸化的含醇的溶劑從植物中提取得到，并且許多在商業(yè)上用作食物著色劑。他們經(jīng)常被作為稀釋劑的麥芽糊精稀釋后供應(yīng),稀釋后的濃度適合于飲料或其它食物，例如谷類食品?；ㄉ兀ㄉ剡暗奶沁芭浠緼<formula>formulaseeoriginaldocumentpage4</formula>通式i:)T，具有如通式I所示的基本結(jié)構(gòu).典型實(shí)例是花青素(在3,5,7,3',4'位羥基化)，翠雀素(在3,5,7,4',5'位羥基化)和天葵素(在3，5，7，3'位羥基化)。羥基基團(tuán)通常被糖基化(如花色素甙)和/或甲氧基化(如二甲翠雀素在3'和5'位的羥基被取代，以及甲基花青素和3'-甲花翠素在3'位的羥基被取代)?；ㄉ剡笆?-苯基苯并吡喃離子或花(色)祥鹽的多羥基和多甲氧基的衍生物的水溶性的糖甙。個(gè)體的花色素甙在分子中存在的羥基基團(tuán)的數(shù)目，這些羥基基團(tuán)的甲基化程度,連接于該分子的糖的特性、編號(hào)和位置，以及該分子中連接于該糖的脂肪酸或芳香酸的編號(hào)和特性--匕有不同。數(shù)以百計(jì)的花色素甙已經(jīng)通過光譜測定工具分離和化學(xué)表征?；ㄇ嗨睾退鼈兊难苌锸谴嬖谟谑卟?、水果和花朵中最普遍的花色素甙?；ㄉ剡肮灿幸粋€(gè)基本炭架，氫、羥基或甲氧基可在其如上所述六個(gè)不同位置上被發(fā)現(xiàn)。在水果和蔬菜中，六個(gè)基本花色素甙化合物占主導(dǎo)地位，它們在位于炭環(huán)上的羥基基團(tuán)數(shù)目和這些羥基基團(tuán)的甲基化程度兩方面有不同。連接于炭架的糖的身份、編號(hào)和位置也是變化的；可以連接于碳-3、碳-5，在某些時(shí)候的碳-7的最普遍的糖是葡萄糖、阿拉伯糖、鼠李糖或半乳糖。在這個(gè)基礎(chǔ)上，鑒別單糖甙、二糖苷和三糖甙是有可能的。另一個(gè)重要的有助于區(qū)別花色素甙化學(xué)結(jié)構(gòu)的變量是可能存在糖組成部分上的?；乃帷Ｗ畛Ｒ姷孽；瘎┦强Х人?、阿魏酸、芥子酸和p-香豆酸，雖然脂肪酸，例如醋酸、蘋果酸、丙二酸、草酸和丁二酸也能夠發(fā)生?；Ｖ钡饺齻€(gè)?；崮軌蛲瑫r(shí)存在。由于它們特殊的化學(xué)結(jié)構(gòu)，花色素甙和花色素具有缺少一個(gè)電子的特性，這使它們對(duì)于活性氧基團(tuán)或分子(ROS)，亦稱自由基,很有活性；它們因此被認(rèn)為是強(qiáng)大的天然的抗氧化劑?；ㄉ剡?部分地由于它們化學(xué)結(jié)構(gòu)的特性,趨向于非穩(wěn)定以及對(duì)降解作用易受影響。另外，花色素甙的穩(wěn)定性受到p:h值、為期數(shù)月的儲(chǔ)存、儲(chǔ)存溫度、酶的存在、光、氧、以及蛋白質(zhì)、類黃酮和礦物質(zhì)存在的影響。更特別地是，由于花色素甙對(duì)PH變化敏感，它們的生物利用率很低。花色素甙通常在pH值為3.5及以下是穩(wěn)定的，因此在胃中是穩(wěn)定的。然而，它們在較高的pH值下降解，比如對(duì)于腸道(pH=7)較為典型的那些pH:,因此有益的吸收和營養(yǎng)價(jià)值大大地減少。所以，存在一種提供穩(wěn)定化的花色素甙的組合物和Z或方法的需要。簡要說明本發(fā)明意外地提供了穩(wěn)定的花色素甙組合物,制備這種組合物的方法，以及應(yīng)用這種組合物治療不同痛苦的方法。本發(fā)明提供了含有花色素甙和促穩(wěn)定化合物的獨(dú)特的組合物，這樣，兩個(gè)組分的結(jié)合保證了花色素甙不易遭受降解。直到本發(fā)明產(chǎn)生之前，眾所周知，花色素甙將在暴露于環(huán)境應(yīng)力下降解,例如空氣、光、蛋白質(zhì)或酶。更傷腦筋的是花色素甙在具有中性或堿性p:h的溶液中的不穩(wěn)定性。本發(fā)明意外地提供了半胱氨酸與花色素甙組合物(無論它是花色素或花色素甙)結(jié)合的應(yīng)用，相對(duì)于攝取沒有半胱氨酸存在的花色素甙組合物的受試者，其促進(jìn)增加了至少兩倍數(shù)量的花色素甙向處于危急中的受試者的傳遞。已經(jīng)意外發(fā)現(xiàn),在有半胱氨酸參與下，4小時(shí)之后,被傳遞的花色素甙血藥濃度的水平，是沒有半胱氨酸參與下傳遞的花色素甙血藥濃度的至少兩倍。所以，通過讓受試者服用有效量的花色素甙和半胱氨酸，本發(fā)明提供了一種提高受試者體內(nèi)可生物利用的花色素甙數(shù)量的方法。給藥可以任何方式，但通常優(yōu)選口服。在一實(shí)施例中，花色素甙對(duì)半胱氨酸的比值為大約io:大約i，以重量份計(jì)?！矫?，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，其包括一種花色素甙提取物和--種具有至少--個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。促穩(wěn)定化合物的適當(dāng)例子包括(還原態(tài))谷胱甘肽、二氫硫辛酸、半胱氨酸、酵母提取物和其混合物。雖然有差不多數(shù)以千計(jì)的花色素甙提取物，但其全部應(yīng)被認(rèn)為包括在本說明書范圍內(nèi)，一定行業(yè)的花色素甙提取物的恰當(dāng)例子包括歐洲越桔提取物、黑醋栗提取物、蔓越橘提取物、黑大豆提取物、越橘提取物、藍(lán)莓提取物和其兩者或兩者以上的混合物。另一方面，該穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物對(duì)于暴露于具有pH大約為2或更高的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的，比如pH大約為3，pH大約為4,pH大約為5，pH大約為6，pH大約為7，pH大約為8，pH大約為9，pH大約為10，pH大約為ll，pH大約為12乃至更高，如14。5另-一個(gè)方面，該穩(wěn)定化的花色素甙提取物是一種花色素甙。另一個(gè)方面，該穩(wěn)定化的花色素甙提取物是一種花色素。在本發(fā)明其它方面，該穩(wěn)定化的花色素甙提取物包括一種或多種花色素甙，說得更精確些就是花葵素、甲基花青素、花青素、二甲翠雀素、3'甲花翠素、翠雀素的糖甙。本發(fā)明也涉及制備所述的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的方法。本發(fā)明進(jìn)一歩涉及不同疾病的治療方法，該方法要求服用一定治療性有效量的所述穩(wěn)定化的花色素甙組合物。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供可生物利用的穩(wěn)定化的花色素甙組合物。雖然公開了多個(gè)實(shí)施例，根據(jù)以下詳細(xì)說明，本發(fā)明仍將有其它實(shí)施例對(duì)本領(lǐng)域技術(shù)人員是顯而易見的。因?yàn)閷⑹秋@而易見的，本發(fā)明可包含不同的顯而易見的方面的改變，均沒有離開本發(fā)明的本質(zhì)和范圍。因此，詳細(xì)說明將被認(rèn)為在本質(zhì)上是解說性的和非限制性的。圖1提供了在l慮olar濃度的谷胱甘肽或DIILA溶液中花青素-3-0-葡糖甙缺乏紅移的證據(jù)。圖2提供了在lmMolar濃度的谷胱甘肽或DHLA溶液中花青素_3_0-葡糖甙缺乏增色移位的證據(jù)。圖3提供了歐洲越桔提取物(不受保護(hù)的)中殘留的花色素甙百分比。圖4提供了受D:HLA保護(hù)的歐洲越桔提取物與圖3中不受保護(hù)的歐洲越桔提取物中殘留的花色素甙百分比的對(duì)比。圖5提供了受GSH保護(hù)的歐洲越桔提取物與圖3中不受保護(hù)的歐洲越桔提取物中殘留的花色素甙百分比的對(duì)比。圖6A-6D提供了DHLA保護(hù)的歐洲越桔提取物的降解動(dòng)力學(xué)的比較。圖7提供了受谷胱甘肽保護(hù)或不受谷胱甘肽保護(hù)的翠雀素-3-0-半乳糖甙的比較降解動(dòng)力學(xué)。圖8提供了受谷胱甘肽保護(hù)或不受谷胱甘肽保護(hù)的3'-甲花翠素-3-0-半乳糖甙的比較降解動(dòng)力學(xué)。圖9提供了受谷胱甘肽保護(hù)或不受谷胱甘肽保護(hù)的翠雀素-3-0-半乳糖甙的比較降解動(dòng)力學(xué)。圖10提供了受谷胱甘肽保護(hù)或不受谷胱甘肽保護(hù)的花青素-3-0-半乳糖甙在兩個(gè)pH值下的比較降解動(dòng)力學(xué)。圖11提供了受DHLA保護(hù)的歐洲越桔中15種花色素甙的降解對(duì)比。圖12提供了受谷胱甘肽(GSH)保護(hù)的歐洲越桔中15種花色素甙的降解對(duì)比。圖13表明了在37t:、pII為7,并有谷胱甘肽保護(hù)的條件下,主要花色素甙(紅醋栗)在緩沖溶液中相對(duì)時(shí)間的穩(wěn)定性。圖14表明了CaCo-2細(xì)胞在37t:和pH為7的條件下，有谷胱甘肽保護(hù)的主要_花色素甙(紅醋栗)在培養(yǎng)基中相對(duì)時(shí)間的穩(wěn)定性。圖15表明了主要-花色素甙進(jìn)入CaCo-2細(xì)胞的細(xì)胞吸收。6圖16提供了歐洲越桔花色素甙在有/無谷胱甘肽存在下的降解(37°C、pH=7.0下，l小時(shí))。圖17表明了歐洲越桔花色素甙在有/無谷胱甘肽存在下進(jìn)入CaCo-2細(xì)胞的細(xì)胞吸收。圖18提供了所述CaCo-2實(shí)驗(yàn)的HP1X分析的梯度分布。圖19是pH為3-11范圍內(nèi)殘留比值的圖示，以說明GSH處理后的歐洲越桔提取物的穩(wěn)定性和GSH沒有處理的歐洲越桔提取物的不穩(wěn)定性(在相同的pH值)。圖20是一定pH范圍內(nèi)GSH:保護(hù)作用的圖示。圖21是樣品20070601新鮮溶液在零時(shí)的HPLC色譜圖。圖22是樣品20070601在37°C4小時(shí)后的HPLC色譜圖。圖23是樣品20070602新鮮溶液在零時(shí)的HPLC色譜圖。圖24是樣品20()7()6()2在37°C4小時(shí)后的HPLC色譜圖。圖25提供了樣品20070601在37°C下零時(shí)和4小時(shí)后的HPLC峰值比較。圖26提供了樣品20070602在37°C下零時(shí)和4小時(shí)后的HPLC峰值比較。圖27提供了用歐洲越桔提取物或用本發(fā)明所述的歐洲越桔./半胱氨酸組合物處理后，人血漿中觀測到的花色素的比較。圖28a和28b分別地提供了用歐洲越桔提取物或用本發(fā)明所述的歐洲越桔Z半胱氨酸組合物處理后，人血漿中觀測到的總花青素和總翠雀素的比較。圖29提供了用歐洲越桔提取物或用本發(fā)明所述的歐洲越桔/半胱氨酸組合物處理后，人血漿中觀測到的總3'-甲花翠素的比較；上部虛線代表歐洲越桔/半胱氨酸組合；下層的短折線代表的僅是歐洲越桔提取物。圖30提供了用歐洲越桔提取物或用本發(fā)明所述的歐洲越桔/半胱氨酸組合物處理后，人血漿中觀測到的總甲基花青素的比較；上部虛線代表歐洲越桔/半胱氨酸組合；下層的短折線代表的僅是歐洲越桔提取物。圖31提供了用歐洲越桔提取物或用本發(fā)明所述的歐洲越桔/半胱氨酸組合物處理后，人血漿中觀測到的總二甲翠雀素的比較；上部虛線代表歐洲越桔/半胱氨酸組合；下層的短折線代表的僅是歐洲越桔提取物。圖32提供了在第1天觀測到的歐洲越桔提取物與歐洲越桔提取物/半胱氨酸的組合物中的花青素、翠雀素、3'_甲花翠素、甲基花青素和二甲翠雀素的最大濃度的比較。圖33提供了在第7天觀測到的歐洲越桔提取物與歐洲越桔提取物/半胱氨酸的組合物中的花青素、翠雀素、3'-甲花翠素、甲基花青素和二甲翠雀素的最大濃度的比較。圖34提供了在第1天觀測到的歐洲越桔提取物與歐洲越桔提取物/半胱氨酸的組合物中的花青素、翠雀素、3'_甲花翠素、甲基花青素和二甲翠雀素的AUCQ—inf的比較。圖35提供了在第7天觀測到的歐洲越桔提取物與歐洲越桔提取物/半胱氨酸的組合物中的花青素、翠雀素、3'-甲花翠素、甲基花青素和二甲翠雀素的AUC?！猧nf的比較。圖36A提供了沒有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總花青素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖36B提供了有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物，在4小時(shí)、第1天、第7天的總花青素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。7圖37A提供了沒有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物，在4小時(shí)、第1天、第7天的總翠雀素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖37B提供了有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總翠雀素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表()時(shí)和0.5小時(shí)。圖38A提供了沒有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物，在4小時(shí)、第1天、第7天的總3'-甲花翠素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖38B提供了有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總3'-甲花翠素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖39A提供了沒有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總甲基花青素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖39B提供了有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總甲基花青素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表()時(shí)和0.5小時(shí)。圖40A提供了沒有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物，在4小時(shí)、第1天、第7天的總二甲翠雀素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。圖40B提供了有半胱氨酸保護(hù)的歐洲越桔提取物,在4小時(shí)、第1天、第7天的總二甲翠雀素的血液濃度，在第4天的兩個(gè)點(diǎn)分別代表0時(shí)和0.5小時(shí)。詳細(xì)描述本發(fā)明涉及包含一種或多種花色素甙和一種或多種促穩(wěn)定化合物的組合物。由于所述的花色素甙在規(guī)定的時(shí)期內(nèi)不輕易地降解，因而所述的組合物是"穩(wěn)定的"。在說明書和權(quán)利要求書中，術(shù)語〃包括"和"包含〃是開放式術(shù)語并應(yīng)解釋為"包括，但不限于...〃。這些術(shù)語包含進(jìn)一步限制性的術(shù)語〃實(shí)質(zhì)....匕由...組成"和〃由...組成〃。必須注意的是，除非上下文以另外方式明確規(guī)定，如在這里和附加的權(quán)利要求書中使用的單數(shù)形式"a"、"an"和"t.he"包括復(fù)數(shù)內(nèi)涵。術(shù)語"a"("an")、"一個(gè)或多個(gè)〃和〃至少一個(gè)〃在這里也可以互換使用。也要注意的是術(shù)語〃包含〃、"包括〃、"以...為特征〃和〃具有〃可以互換使用。除非以另外方式限定，在這里使用的所有技術(shù)和學(xué)術(shù)術(shù)語，與本發(fā)明所屬領(lǐng)域的普通技術(shù)人員的普遍理解一樣，具有相同的含義。在這里明確提到的所有出版物和專利，通過引證的方式，處于全部目的，被合并為一個(gè)整體；這些目的包括描述和披露在可能與本發(fā)明有聯(lián)系的出版物上被報(bào)道的化學(xué)制品、儀器、統(tǒng)計(jì)分析和方法。本說明書引用的所有參考文獻(xiàn)都將被用作指示所述領(lǐng)域的技術(shù)水平。在這里沒有任何內(nèi)容被推論為承認(rèn)本發(fā)明沒有資格預(yù)料由于在先發(fā)明公開的所述內(nèi)容?！矫?，本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定化的花色素甙組合物，其包括一種花色素甙提取物和一種具有至少一個(gè)-SII基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。在這里使用的術(shù)語"花色素甙"意指包括糖基化的花色素(花色素甙)以及所述花色素甙的糖甙配基(花色素)。貫穿整個(gè)說明書,對(duì)糖基化花色素的引證經(jīng)常被提及，但除非另外注明，決不應(yīng)被推論為限制。兩者之中任一術(shù)語在哪里被使用，除非另外注明，該術(shù)語是可互換地被使用并意指包括糖基化的部分以及糖基物質(zhì)本身?；ㄉ?，花色素甙的糖基化部分，具有一如通式II所示的基本結(jié)構(gòu)通式II<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>這里&至r7提供了花色素的代表性實(shí)例。所述的糖基化形態(tài)的花色素甙比花色素有更好的水溶性和穩(wěn)定性。花色素甙通過它們包含的糖基單元的數(shù)量進(jìn)行分類。單糖甙包括一個(gè)糖的部分,其主要與該糖甙配基的3-位羥基相連。雙糖甙一般包含3位和5位羥基的位置的兩個(gè)單糖,個(gè)別包含3位和7位羥基位置的兩個(gè)單糖。三糖甙一般具有3位上的兩個(gè)糖單元和5位或者7位上的--個(gè)糖。在3位、4位和/或5位的糖基化也是可能的?；ㄉ剡爸凶钇毡榈奶前▎翁瞧咸烟恰⑹罄钐?、半乳糖、阿拉伯糖和木糖?；ㄉ剡白罱?jīng)常發(fā)現(xiàn)的雙糖和三糖是蕓香二糖、葡糖葡糖苷、sambubiose和glucorutinose?；ㄉ剡翱梢院汪人嶂械囊粋€(gè)或多個(gè)羥基發(fā)生酰化。所述的酸最為常見的是連接于單糖的6位，但是單糖的2、3和4位也是可能的。常見的脂肪酸包括丙二酸、乙酸、蘋果酸、琥珀酸和草酸。常見的芳香酚酸和脂肪族二羧酸包括香豆酸、咖啡酸、芥子酸、阿魏酸、草酸、丙二酸、蘋果酸、琥珀酸和五倍子酸。所述的術(shù)語"提取物"意指為從植物來源獲得的花色素甙物質(zhì)，比如葉片、嫩枝、樹皮、根、莖、種子、花、漿果、果實(shí)，比如,通過常規(guī)分離方法從適當(dāng)?shù)闹参飦碓吹玫?，但需要注意的是，并非限于此處的那些描述。有不同的方法適用于本領(lǐng)域技術(shù)人員所了解的花色素甙。這些方法的一部分被描述在，例如，美國專利5，817，354;美國專利5，200，186;美國專利5，912，363;美國專利4，211，577;美國專利4，302，200(每個(gè)通過引用的方式被合并)。包含花色素甙的適當(dāng)?shù)闹参飳?shí)例包括，但是不限于,果實(shí)、蔬菜、花和從后面組群中挑選出來的其它植物，該組群由Acermacrophyllura、Acerplatanoides、金虎尾、Ajugar印tans、蘋果、杏、Artictbramble、鍔梨、香蕉、伏?；?、大麥、Begoniasemperfiorens、雛菊、白芨、歐洲越桔，黑豆、黑大豆、黑色、藍(lán)色和紫色馬鈴薯、黑莓、藍(lán)莓、篤斯越桔、博伊森樹莓、蕎麥、可可、茶、廳草、高加索藍(lán)莓、蠟梅、芹菜、甜櫻桃、櫻桃、桂櫻、菊苣、細(xì)香蔥、花楸果、歐亞山茱萸、矢車菊、枸子屬植物、越橘、酸果蔓、巖高蘭、菊花、Cynomoriuracoccineum、大麗花、矮接骨木、鹿果、石斛屬、矮化山茱萸、Echinaceapurpea、茄子、接骨木、fababean、八角金盤、費(fèi)約果、無花果樹、大蒜、大丁草、人參、朝鮮薊、醋栗、葡萄、番石榴、山楂、木槿或者洛神葵、hibiscusSabdaiffa、傘房花越桔、蜀葵、忍冬、牽?；ā⒂裣s花、爪哇李、洋姜、kokum、Laeliocattleya、小扁豆、大楊莓、lupine、蒸枝、玉蜀黍、芒果、倒捻子、m叫ui、紫羅蘭、綠絨蒿屬、Metrosiderosexce1sa、粟、花楸、桑樹、桃金娘、橄欖樹、洋蔥、橙、觀賞櫻桃、西番蓮果、豌豆、桃子、花生、梨樹、紫蘇屬、矮牽?；?、蝶蘭、Phalsa、牽牛屬、菠蘿、阿月渾子樹、李子、石榴、Phragmitesaustralis、紫色胡蘿卜、溫柏、兔眼越橘、蘿卜、紅醋栗、黑覆盆子、紅球甘藍(lán)、水稻、大黃、rosehip、黑麥、番紅花、瓶子草屬、莢迷屬落葉灌木、Sophronitiscoccinea、高粱、sparkleberry、草莓、FragadaVesca、甘蓆、向日葵、舌l(xiāng)t櫻杉li、甘薯、tamarillo、羅望子、芋頭、酸櫻桃、Tulipgreigii、蕪菁甘藍(lán)、睡蓮、錦帶花屬、小麥、茭白、美女櫻、山藥和其混合物組成。雖然有差不多數(shù)以千計(jì)的花色素甙提取物，但其全部應(yīng)被視為包括在本說明書所述范圍內(nèi)，特定行業(yè)的花色素甙提取物的適當(dāng)例子包括歐洲越桔提取物、黑醋栗提取物、酸果蔓提取物、黑大豆提取物、越橘提取物、藍(lán)莓提取物和其兩個(gè)或多個(gè)的混合物。有代表性地，提取物通過不同方法被濃縮以提供一種富含花色素甙的溶液。例如，通過分子量分離，超濾可用于除去不需要的部分。過濾產(chǎn)生的保留物可作為液體儲(chǔ)存，或者，例如,通過噴霧干燥、冷凍干燥、急驟干燥、流化床干燥、環(huán)式干燥、盤式干燥、真空干燥、高頻千燥或者微波千燥，可以進(jìn)一步濃縮為粉末。最后，所述的提取物應(yīng)該含有至少10%重量計(jì)的花色素甙。市場上可買到的花色素甙可以從諸如ArtemisInternational.FortWayne、Indiana獲得。商業(yè)上得到的花色素甙提取物應(yīng)含有至少1()%重量計(jì)的花色素甙。所述的提取物因此包含花色素甙和其它植物物質(zhì),例如其它類黃酮、糖、等等?；ㄉ剡疤崛∥锟赏ㄟ^一種或多種所述領(lǐng)域中已知的方法進(jìn)一步純化，諸如色譜法、凝膠色譜法、高效液相色譜法、結(jié)晶、親和色譜法、分配色譜法等等。特定花色素甙的鑒定可通過那些為本領(lǐng)域技術(shù)人員所知的方法實(shí)現(xiàn)，i:H核磁共振、化學(xué)降解、色譜和光譜,尤其是用于分離后的花色素甙化合物表征的同核和異核二維核磁共振技術(shù)。術(shù)語"純化的"或者"分離的"被用于提及如....匕所述花色素甙提取物的一種或多重花色素甙的提純和/或分離。再一次利用所述領(lǐng)域中已知的常規(guī)方法,所述的花色素甙提10取物的不同組分可被分離成為純凈物質(zhì)。--方面,本發(fā)明所述提取物中的花色素甙實(shí)質(zhì)上是通過本領(lǐng)域已知技術(shù)純化和分隔的。經(jīng)純化的化合物的純度一般至少為大約90%，優(yōu)選至少大約95%,最優(yōu)選至少大約99%并且更多優(yōu)選至少大約99.9%(例如大約100%),按重量計(jì)算。根據(jù)本發(fā)明所述，花色素甙提取物包含--個(gè)或多個(gè)花色素甙和Z或花色素，其由甲基花青素、花青素、天葵素、翠雀素、3'-甲花翠素的、二甲翠雀素、鄰igenindin、auratinidin、eapensinidirueuropinidin、三甲花翠素、6-羥基花青素、木梶黃定、5-甲基花青素、pulchel:l.idin、rosinidin、tricetnidin、其衍生物和混合物構(gòu)成的組群中挑選出來。在--個(gè)實(shí)施例中，花色素甙和花色素是從花青素、甲基花青素、二甲翠雀素、3'-甲花翠素、翠雀素中選出來的，他們的配醣衍生物和在其中混合物。在另一個(gè)實(shí)施例中，所述的提取物包含至少一個(gè)基于花青素的花色素甙。用于本發(fā)明的花色素甙，描述于此，包括但不限于花青素-3-葡萄糖甙、花青素-3-葡萄糖基蕓香甙、花青素-3-龍膽二糖甙、花青素-3-蕓香糖甙、花青素-3-苯乙腈葡糖苷、花青素_3-苯乙腈葡糖苷-5-葡萄糖甙、花青素-3-半乳糖甙、甲基花青素-3-蕓香糖甙、甲基花青素-3-葡萄糖甙、甲基花青素-3-半乳糖甙、甲基花青素、花青素、花青素-3-槐糖甙、花葵素、翠雀素、翠雀素-3-葡萄糖甙、翠雀素-3-半乳糖甙、3'-甲花翠素、3'_甲花翠素-3-葡萄糖甙、3'-甲花翠素-3-半乳糖甙、二甲花翠素、二甲花翠素-3-阿拉伯糖甙、二甲花翠素_3-葡萄糖甙、二甲花翠素-3-半乳糖甙、山萘酚、橘皮甙、龍膽翠雀花素、桔?；ㄉ啊inerarin等等。來自不同植物的花色素甙的適合實(shí)例包括但不限于如下物質(zhì)大葉槭，花青素衍生物，挪威槭，花青素-3-(2〃，3〃-雙沒食子酰_|3-吡喃葡萄糖(3%),花青素-3-(2〃-沒食子酰-P-吡喃葡萄糖(37%)，花青素-3-P-吡喃葡萄糖甙(60%)，金虎尾，Malpighiamarginata，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，紫唇草，花青素-3-(二-對(duì)-香豆酰)槐糖甙-5-葡萄糖甙,蘋果，海棠，花青素-3-半乳糖甙，花青素_3-半乳糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素_3-木糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素3-木糖甙，杏，杏，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3葡萄糖甙，Artiebramble,懸鉤子屬，鱷梨,鱷梨屬，乙酰花青素-3，5-二葡萄糖甙，花青素3-半乳糖甙，花青素-3-半乳糖甙,香蕉，野芭蕉，拔蕉/野蕉，Barberrv，小檗屬，花青素_葡萄糖甙，花青素_葡萄糖甙，大麥，大麥，花青素和氰化糖甙,豆，Pheseolusvulgaris(severalcultivars)，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3，5-二葡萄糖甙，四季秋海棠，花青素衍生物，Benibana-cha,茶，花青素-3-0-13-D-半乳糖甙，花青素-3-0-15-D-半乳糖甙，雛菊，3-花青素-3-衍生物，白芨，乙?；ㄇ嗨?,7，3'_三葡萄糖甙衍生物，越桔，歐洲越橘，Artemis/Iprona;Indena,花青素-3-半乳糖甙(22%);花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-葡萄糖甙(9%)，花青素-3-葡萄糖甙，黑豆，菜豆，花青素-3-葡萄糖甙(96%)，花青素-3-葡萄糖甙，黑莓(歐洲及美洲)，Moriferiveri,歐洲木莓/露莓，美洲黑莓，高大黑莓，沙黑莓，長毛根螨，R.trivia:l.s，花青素-葡萄糖甙(70-100%)，花青素-葡萄糖甙，花青素-蕓香甙，黑葡萄，很多種類，黑馬鈴薯，馬鈴薯，花青素-糖甙，黑樹莓，黑帽莓，花青素-桑布雙糖甙(20%);花青素-桑布雙糖甙，花青素-木糖基蕓香甙(40%);花青素-葡萄糖甙，花青素-葡萄糖甙，(17%),花青素-蕓香11甙(23%)，黑大豆，大豆，花青素-3-葡萄糖甙(96%)，花青素-3-葡萄糖甙，藍(lán)莓，F(xiàn)ivecommonVacciniumspp，花青素-葡萄糖甙(3%);花青素_葡萄糖甙，花青素_半乳糖甙(3%),花青素半乳糖甙，花青素-阿拉伯糖甙(3%),花青素-3-阿拉伯糖甙,篤斯越橘，篤斯越橘，花青素3-葡萄糖甙(14%)，花青素-3-葡萄糖甙(14%)，花青素阿拉伯糖甙(10%),花青素_3-阿拉伯糖甙(10%)，花青素-3-半乳糖甙(6.5%)，花青素-3-半乳糖甙(6.5%)，博伊森莓，新西蘭，花青素-3-槐糖甙(44.5%)，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙(26.4%),花青素-3-糖基蕓香甙(25.8%)，花青素-蕓香甙(3.3%),蕎麥，F(xiàn)agopyrumspecies,花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙，花青素3-半乳糖甙，花青素_3-半乳糖甙，可可樹，可可，花青素-3-葡萄糖甙(疑似)，花青素-3-葡萄糖甙(疑似)，芹菜，芹菜屬，月桂櫻，月桂櫻，花青素_3-阿拉伯糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，菊苣，Cichoriumintybus，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，細(xì)香蔥，Alliumschoenoprasuni，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-乙酰葡萄糖甙，花青素_3-(6-丙二?；咸烟沁?，花青素-3-(3，6-二丙二酰基葡萄糖甙)，阿隆尼亞苦味果，黑果腺肋花楸，Artemis/lprona，花青素_3_半乳糖甙(64.5%)，花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙(28.9%)，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素-3-葡萄糖甙(2.4%)，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-木糖甙(4.2%)，花青素-3-木糖甙，叻P非，小果咖啡cv.BourbonVermelho，花青素-3-糖甙，花青素3，5-二糖甙，花青素-3-糖甙，枸子，枸子屬，花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素-3半乳糖甙，越橘,V.vitis-idaea,花青素半乳糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，蠟梅，花青素-3-0-葡萄糖甙，花青素-3-0-葡萄糖甙，乙?；ㄇ嗨?3-0-葡萄糖甙,花青素糖甙，蔓越橘(美洲和歐洲)，蔓越橘，蔓越莓，花青素_半乳糖甙(16-24%)，花青素-半乳糖武,蔓越莓/小紅果，花青素阿拉伯糖甙(13-25%),花青素-阿拉伯糖甙，巖高蘭，巖高蘭，花青素3-葡萄糖甙，花青素3，5二葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-槐糖甙，菊花，DendranthemaGrandifiorum，花青素-3-0-(6'-0-丙二酰_0_吡喃葡萄糖甙，醋栗(紅的和黑的)，Ribesrub進(jìn)，R.nigrum,花青素-葡萄糖甙(2-10%),花青素-葡萄糖甙，花青素-接骨木二糖甙，花青素-蕓香甙(8-17%)，花青素-接骨木二糖甙(9-31%)，花青素-槐糖甙(4-9%)，花青素木糖基蕓香甙(28-73%)，花青素_葡萄糖基蕓香甙(14-28%)，Cyneinonurncocci畫m，花青素-3-0-葡萄糖甙(92%)，花青素-3-0-葡萄糖甙(92%)，花青素-3-0-(6-0-鼠李糖基葡萄糖甙(8%)，矮接骨木，Sambucusebulus，花青素3-木糖基葡萄糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙-5-葡萄糖甙，花青素_3，5-二葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-阿拉伯糖葡萄糖甙，石斛蘭，石斛蘭屬，花青素衍生物，御膳桔，Comussuecica，花青素-3-葡萄糖甙(4%)，花青素_3_葡萄糖甙(4%)，花青素-3-半乳糖甙(16%)，2-花青素衍生物(80%),Echinacea,Echinaceaspp.，接骨木，Sambucusnigra,Artemis/lprona，花青素-3-葡萄糖武(42%),花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙(43%)，花青素-3，5-二葡萄糖甙(2%)，花青素_3-接骨木二糖甙_5-葡萄糖甙(9%)，龍膽，花青素-3-0-13-D-葡萄糖甙和3種其它衍生物,花青素—3—0—e-D-葡萄糖甙，八角金盤,花青素-3-半乳糖木糖甙,非油果，鳳榴，花青素_3-葡萄糖甙，花青素_3-葡萄糖甙，無花果，無花果，花青素-3-鼠李糖葡萄糖甙，花青素3，5-二葡萄糖甙，花青素3-葡萄糖甙，連翹，intermediacv，SpringGlory，花青素衍生物，大蒜，Alliumsativum,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素3-葡萄糖甙，單乙酰化花青素3-葡萄糖甙,三乙?；ㄇ嗨?3-葡萄糖甙,人參，Panaxginseng,Panaxquinquefolius，花青素-3-0-13_D_吡喃木糖基_(12)-13_D_吡喃葡萄糖甙，朝鮮薊，Cynarascolymus，花青素_3_咖啡酰葡萄糖甙，花青素_3_咖啡?；碧沁?，花青素_3_二咖啡?；碧沁埃桌?Ribesspp.，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-蕓香甙，葡萄，Vinisvinifera，花青素-3-單葡萄糖甙，花青素-3-單葡萄糖甙，花青素-3單葡萄糖甙-乙酸酯，花青素-3-單葡萄糖甙-p-香豆酸酯，番石榴，Psidiumguajavica，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，山楂，Crataegusspp.，花青素_3_半乳糖甙，花青素-3-半乳糖甙,花青素-3-阿拉伯糖甙,花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙，木槿或洛神葵，Hibiscussabdariffa，花青素-接骨木二糖甙(30%)，蜀葵，Althaearosea,花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙,花青素-3-葡萄糖甙，其它花青素葡萄糖甙，金銀花，Loniceranitida，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，葛尾屬，花菖蒲，花青素3RG,花青素3RG5G,花青素3Rgac5G，Ipornoeapurpurea，六乙酰化花青素-3-槐糖甙-5-葡萄糖甙，爪哇李，Mytcianajaboticaba，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，洋姜，Heliant.hustuberosus，Kokum，印度藤黃，花青素-3-葡萄糖甙，花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙，Laelioeat.tleyacvMinipurple，乙?；ㄇ嗨匮苌?，Lactucasaliva,花青素-3-0-(6〃-丙二酰葡萄糖甙)，羅甘莓植物，Rubusloganbaccus，花青素-槐糖甙(48.1%)，花青素-葡萄糖甙，花青素-葡萄糖甙(21.6%)，花青素-蕓香甙(6.2%),羽扇豆，Lupi皿sspp，花青素糖甙，Lyehee，荔枝，Litchichinensis，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3_葡萄糖甙，花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-半乳糖甙,玉米，Zeamays,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-(6"-丙二酰葡萄糖甙)，花青素-3-(3"，6"二丙二酰-葡萄糖武)，芒果，Mangiferaindica，(花青素糖武，莽吉柿，Garcinamangost.ana，花青素_3-槐糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，智利酒果，Aristotellachilensis,花青素-3-,5-二葡萄糖甙，紫羅蘭，四?；ㄇ嗨?3-接骨木雙糖甙-5-葡萄糖甙，稷，Pernnisetumamericanuni，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花揪果，山梨屬，花青素_3-半乳糖甙，花青素_3，5-二葡萄糖甙，花青素-3-13-D-吡喃葡萄糖甙，桑葚，黑桑，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3，5-二葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-槐糖甙，愛神木果實(shí)，Myrtuscommimis，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-二葡萄糖甙，橄欖，木樨欖，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙,花青素衍生物，洋蔥，Alliums印a，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-二葡萄糖甙，花青素-3-laminarioside,橙子，Citrussinensis,花青素-3-葡萄糖甙(95%),花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3,5-二葡萄糖甙，西番蓮果，百香果，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙，豌豆，Pisumsativum,花青素_3-槐糖甙，花青素-3-接骨木二糖甙-5-葡萄糖甙，桃，Pr麗spersica，花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素衍生物，花生，Arachishypogaea,花青素葡萄糖甙，梨，Pyruscommunis,花青素-3-半乳糖甙，花青素-3-半乳糖甙，花青素_3-阿拉伯糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，紫蘇，Perillafrutescens，花青素-3,5-二葡萄糖甙，花青素_3，5-衍生物，矮牽牛花，花青素-3-蕓香甙，捕魚木，Grewiaspp，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，菠蘿，Ananscomosus，花青素-3-半乳糖武，花青素-3-半乳糖武，阿月渾子，Pistaciavera,Pragraitesaustralis，花青素-3-衍生物，李子，2000亞種，15種,花青素_葡萄糖甙(37%)，花青素葡萄糖甙，花青素_蕓香甙(45%)，石榴，P皿icagranatam，花青素-葡萄糖甙(30%)，花青素-葡萄糖甙，花青素-二葡萄糖甙(17%),紫胡蘿卜，Daucuscarota，花青素-葡萄糖甙，花青素葡萄糖甙，花青素-葡萄糖基半乳糖甙，花青素-半乳糖甙，花青素-二半乳糖甙，花青素-半乳糖甙，溫柏樹，Cydoniaoblonga，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3，5_二葡萄糖甙,花青素衍生物，蘿卜，Raph薩ssativus，?；ㄇ嗨豞3_槐糖甙_5_葡萄糖甙，?；ㄇ嗨豞3_二葡萄糖武-5-葡萄糖武，紅球甘藍(lán)，Brassicaoleracea■c即itata，花青素糖武，盧蘋，Phalarisarundinacea，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-(6〃—丙二酰葡萄糖甙)，花青素-3-(3"，6"二丙二酰-葡萄糖甙)，洋蔥，Alliumc印a，花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，酰化花青素-3-葡萄糖甙衍生物，紅矮牽?；?，Petuniaspp,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-槐糖甙，紅樹莓，:Rubusidaeus，花青素-葡萄糖甙(17%)，花青素-葡萄糖甙，花青素-蕓香甙(7%),花青素_槐糖甙(50%)，花青素糖基蕓香甙(26%)，花青素-二葡萄糖甙，大黃，R畫mspp，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙，稻，0ryzaspp，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-鼠李糖甙，花青素-3,5-二葡萄糖甙，刺玫果，Rosacanina,花青素-3-蕓香甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3，5-二葡萄糖甙，黑麥，Secalecereale，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3-鼠李糖基葡萄糖甙，花青素-3-鼠李糖二葡萄糖甙，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-蕓香甙衍生物，花青素-3-龍膽二糖甙,莢蓮，Viburnumspp,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-阿拉伯糖基接骨木二糖甙，高粱，Sorghumbicolor，花青素，花青素糖甙，Sparkleberry，臼莓，花青素_3_葡萄糖甙，花青素_3_葡萄糖甙，花青素-3-阿拉伯糖甙，花青素-3-半乳糖甙，草莓，F(xiàn)ragariaa謹(jǐn)assa，花青素-葡萄糖甙(minor),花青素—葡萄糖甙，向日葵，I-Iellanthusan皿us,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，?；ㄇ嗨?3-葡萄糖甙，花青素-3-木糖甙，花青素-3-木糖甙，?；ㄇ嗨豞3-木糖甙，花青素-3-香草基接骨木二糖甙，甜櫻桃，Pr畫savintn，花青素-葡萄糖甙，花青素_葡萄糖甙，花青素_蕓香甙；花青素_3-槐糖甙，甘薯，IpornoeabatatasSophronitiscoccinea，花青素衍生物，五?；ㄇ嗨?3，3'，7-三葡萄糖甙，番茄或西紅柿樹，Cyphomandreabetacea，花青素-3-蕓香甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，羅望子，T塞rindusindica，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，芋頭，Colocasiaesculenta，花青素-3_葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3_蕓香甙，酸櫻桃(balaton)，Pr麗scerasuscv.Bala;ton,營養(yǎng)物，花青素-3-蕓香武-己糖(75%),花青素-3-蕓香甙-戊糖(3%)，花青素-3-蕓香甙(18%)，蒙特默倫西櫻桃，:Pru皿scerasuscvMontmorency,營養(yǎng)物，花青素-3-槐糖甙(80%)，花青素-3-葡萄糖甙(20%)，花青素-3-葡萄糖甙(20%)，郁金香，Tulipaspp，花青素-3-0-(6"_鼠李糖基葡萄糖甙)，花青素-3-0-衍生物，蕪菁，brissicar鄰a,花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素_3-二葡萄糖甙_5-葡萄糖甙，荷花，Nymphasaalba,花青素-3_0_(6〃-乙?；?13-galactopyrosinase(23%)，花青素-3-0-半乳糖甙(2%)，花青素-3-0-半乳糖甙(2%)，錦帶花,花青素-3-0-葡萄糖甙,花青素-3-0-葡萄糖甙,花青素-3-0-葡萄糖甙木糖，小麥，Triticuraspp，花青素-3-葡萄糖甙,花青素-3-葡萄糖甙，酰化花青素葡萄糖甙，花青素_3-蕓香甙,?；ㄇ嗨?3-蕓香甙,花青素-3-龍膽二糖，野生稻，水生菰，花青素_3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-鼠李糖基葡萄糖甙，山藥，Dioscoraceaspp,花青素-3,5-二葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-葡萄糖甙，花青素-3-鼠李糖基葡萄糖甙，花青素3-龍膽二糖甙，?；ㄇ嗨仄咸烟沁?。此處使用的術(shù)語"花色素甙"不僅意指花色素甙單體，而且涉及二聚和多聚(也就是包含3-20個(gè)花色素單體殘基)形態(tài)的花色素甙和無色花色素(又名黃烷-3，4-二醇)。所述的花色素甙可含有取代基(例如烷基、烷氧基等等)和特別是可以被如上所述的氧-糖基化。所述的組合物中的花色素甙可以是單獨(dú)的花色素甙，或者含有花色素甙的混合物。特別地，該花色素甙是從由二甲翠雀素、花青素、翠雀素、甲基花青素、天葵素和3'-甲花翠素以及它們的葡萄糖甙組成的組群中選出來的。一個(gè)典型實(shí)例是二甲翠雀甙(二甲翠雀素二葡糖苷)氯化物，其以純化形態(tài)可在市場上買到。另外，花色素甙可以通過含有花色素甙的植物提取得到，例如如上所述的葡萄、黑色胡蘿卜、紅球甘藍(lán)、黑莓、黑加侖、酸果蔓坐坐寸寸。此處使用的短語"穩(wěn)定化的花色素甙組合物"意指花色素甙，或者作為糖甙(花色素甙)，或者作為糖甙配基(花色素)，例如，在大約37。C，p:H值大約為7.()，從花色素甙最初的百分比開始，經(jīng)過至少大約3.5小時(shí),剩余了至少大約50%未降解的花色素甙。同樣，該短語包括pH值大約為4、5、6、8時(shí)有相似的穩(wěn)定性。此處使用的術(shù)語"促穩(wěn)定化合物"意指包括具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的那些化合物。不被理論約束，人們相信巰基和花色素甙之間發(fā)生了相互作用，以致于含有的巰基基團(tuán)被氧化(經(jīng)常形成二硫化物，-s-s-)并且花色素甙接收隨后釋放的一個(gè)氫原子。促穩(wěn)定化合物的適當(dāng)?shù)膶?shí)例包括酵母提取物(例如啤酒酵母)，二氫硫辛酸；二氫硫辛酸鹽，諸如氨基酸鹽；半胱氨酸；半胱氨酸衍生物，諸如N-乙酰半胱氨酸；谷胱甘肽，谷胱甘肽鹽；巰基蛋白酶，諸如木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、無花果蛋白酶、木瓜凝乳蛋白酶以及它們的混合物；巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸，含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵了的牡蠣提取物，豆腐乳，含巰基殼聚糖，含巰基凝膠或其混合物。—方面，該促穩(wěn)定化合物/花色素甙的摩爾比大約為0.1-10之間，更優(yōu)選大約為().5-5之間，進(jìn)一步優(yōu)選大約為1。不被理論約束，以下是關(guān)于本發(fā)明意外的--個(gè)獨(dú)特發(fā)現(xiàn)的說明?；ㄉ剡巴ㄟ^形成無色衍生物來表現(xiàn)對(duì)pH值改變是敏感的?；?色)祥陽離子和醌式堿是有色的，并且該平衡一般不受兩者是pH值依賴性[pll值小于2]的影響。(見示意圖1)人們相信這個(gè)平衡是很快形成的，而且該反應(yīng)是可逆的。在適當(dāng)?shù)臈l件下，水的"進(jìn)攻"產(chǎn)生一系列無色的衍生物(甲醇假堿，査爾酮)。反應(yīng)進(jìn)程的這個(gè)部分是緩慢的，并且不是常態(tài)可逆的。褪色過程在pH值大于3.5的情況下開始發(fā)生。通過分子保護(hù)防止水的進(jìn)攻，提供了本說明書自始至終描15Flavylium-cationQuinonoidalbase述的花色素甙的穩(wěn)定。示意圖1OHCarbinolbase基于理論,輔色作用(描述在"輔色素"存在下，花色素甙增強(qiáng)的穩(wěn)定性)的已知:生了向紅效應(yīng)(最大波長向較高波長的移動(dòng))和增色效應(yīng)(對(duì)于相同濃度，最大的波長處的吸收增加)。因此，巰基化合物是否能作為輔色素著手開始澄清?；诶碚摚ㄉ剡澳芡ㄟ^自締合作用增強(qiáng)他們的穩(wěn)定性。濃度越高，自締合作用的可能性越大。自締合作用發(fā)生在溶液濃度約大于().()()OIM的溶液中。自締合作用可以幫助遮蔽巰基化合物的保護(hù)效應(yīng)；因此要在不同濃度下研究該保護(hù)效應(yīng)?；诶碚摚o助著色作用應(yīng)該產(chǎn)生紅移(最大波長向較高波長的移動(dòng))和吸收增強(qiáng)(對(duì)于相同濃度，最大的波長處的吸收增加)。如圖1和2所示，目前基于UV光譜學(xué)的研究發(fā)現(xiàn)DHLA(二氫硫辛酸)既不產(chǎn)生紅移或者增色效應(yīng)，GSH(谷胱甘肽)也不產(chǎn)生紅移或者增色效應(yīng)。因此，穩(wěn)定性增加很可能另外的機(jī)理有關(guān)。如圖1和2所示，剛剛?cè)芙獾幕ㄇ嗨?3-0-葡萄糖甙(受保護(hù)和不受保護(hù))的光譜特性就最大波長的改變對(duì)于不同PH值而言是一致的。歐洲越桔提取物(不同濃度，摩爾濃度以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)的穩(wěn)定性，借助紫外光譜測量特定PH值對(duì)應(yīng)的最大波長處的吸收，在谷胱甘肽或者二氫硫辛酸存在/不存在的情況下進(jìn)行研究。如圖3，4和5，本研究表明在所有受試濃度下，特別是在pH值大于5-6的情況下，花色素甙在谷胱甘肽(0.65聽lar)和二氫硫辛酸(1.44mmolar)保護(hù)下避免了降解。不同受試pH值下，無保護(hù)溶液和受保護(hù)溶液的最大波長沒有不同。既然可以看出花青素葡萄糖甙存在下增色效應(yīng)沒有發(fā)生,那么含有巰基的保護(hù)劑的穩(wěn)定作用被認(rèn)為是與輔助著色作用不同的。通過紫外光譜，在不同pH值以及不存在Z存在二氫硫辛酸(1.44mmolar溶液)的情況下，研究了0.0001摩爾濃度(以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)的歐洲越桔提取物相對(duì)時(shí)間的穩(wěn)定性。圖6A-6D所示的實(shí)驗(yàn)表明了，在不受保護(hù)的花色素甙迅速降解的pH值(pH:值大于5-6)中，二氫硫辛酸保護(hù)了花色素甙。最有趣的是，當(dāng)用統(tǒng)計(jì)模型(回歸分析)擬合這些數(shù)據(jù)時(shí)，不受保護(hù)的降解動(dòng)力學(xué)適合線性回歸，而二氫硫辛酸保護(hù)下的降解動(dòng)力學(xué)適合指數(shù)回歸分析。這指明了一種建立于時(shí)間的保護(hù)機(jī)理。在pH值二7，25。C，存在/不存在谷胱甘肽(0.65聽lar溶液)的條件下培養(yǎng)之后，通過HPLC研究了歐洲越桔提取物中挑選的花色素甙的降解動(dòng)力學(xué)。在選定的時(shí)間點(diǎn)，通過IIPLC檢驗(yàn)了翠雀素-3-0-半乳糖甙(對(duì)降解很敏感)、3'-甲花翠素-3-0半乳糖甙(中等敏感度)和花青素-3-0-半乳糖甙(相當(dāng)穩(wěn)定)的峰面積(參見圖7、8和9)。在谷胱甘肽存在的情況下，觀察到的促穩(wěn)定特性與指數(shù)回歸分析吻合地很好。因此推斷該保護(hù)機(jī)理與輔助著色作用是不同的，并涉及一種相對(duì)時(shí)間而建立的保護(hù)效應(yīng)的機(jī)理是合理的?；ㄇ嗨?3-0半乳糖甙(0.001摩爾溶液)在pH值=3.1或pH:值=7.()時(shí)溶解，每個(gè)條件下分別存在含有/不含有二氫硫辛酸(1.44mm總計(jì)lar溶液)的對(duì)比。平行測定培養(yǎng)通過高壓液相色譜法，在25°CF在3天內(nèi)進(jìn)行。如圖IO所示，二氫硫辛酸的作用具有令人驚訝的長效。在pH二7.0，25。C，培養(yǎng)3天之后，在二氫硫辛酸存在下，發(fā)現(xiàn)大約47%的花青素-3-0-半乳糖苷，而無保護(hù)的樣品幾乎是0%的花青素-3-0-半乳糖苷。對(duì)于pH=3.1的條件下,分別的對(duì)比含量是95%和61%。通過高壓液相色譜,研究了有/無二氫硫辛酸(圖11)和谷胱甘肽(圖12)保護(hù)的歐洲越桔提取物中的花色素甙的降解動(dòng)力學(xué)。評(píng)價(jià)的焦點(diǎn)是，在某種程度上,花色素的基本骨架是否涉及所述的保護(hù)效應(yīng)。當(dāng)關(guān)注得到的結(jié)果時(shí)，巰基化合物的保護(hù)效應(yīng)，與不受保護(hù)的降解的敏感度呈負(fù)相關(guān)，似乎是合理的?；ㄉ氐墓羌茉绞敲舾校入赘孰幕蛘叨淞蛐了岬谋Ｗo(hù)效應(yīng)就越好。觀察到谷胱甘肽的絕對(duì)作用略微好些。下表記錄了存在于歐洲越桔提取物中的花色素的取代型式花色素取代型式(B-環(huán))翠雀素3',4',5'OH3'_甲花翠素3'-0CH3，4'，5'OH二甲翠雀素3'，5'-0CH3，4'0H花青素3',4'()H甲基花青素3'-()CH:3，4'()H:如上表所述，存在與(a)降解作用有關(guān)的結(jié)構(gòu)和(b)保護(hù)機(jī)理的證據(jù)。首先，花色素甙的取代基的數(shù)量有一定作用，其次，在相同數(shù)量的取代基的情況下，甲氧基-基團(tuán)的存在影響著穩(wěn)定性。最敏感的花色素是翠雀素，在B環(huán)上帶有3個(gè)羥基基團(tuán)。最穩(wěn)定的是甲基花青素，帶有1個(gè)羥基基團(tuán)和1個(gè)甲氧基基團(tuán)(優(yōu)于花青素中的2個(gè)羥基基團(tuán))。推薦的新發(fā)現(xiàn)的機(jī)理被認(rèn)為與花(色)鋅離子在pH值=7.0時(shí)的穩(wěn)定性有關(guān)。所有受試化合物均帶有羧酸基團(tuán)和游離的巰基基團(tuán)。17半胱氨酸具有二個(gè)與花色素甙結(jié)合的定位點(diǎn)。第--，存在所述巰基部分的強(qiáng)相互作用(可能與花色素在4位乃至到糖的部分有緊密的聯(lián)系)，第二，所述的羧酸官能保護(hù)了<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>相似的機(jī)理被推薦適用于二氫硫辛酸。巰基的存在被認(rèn)為是錨定了二氫硫辛酸和花色素，以使所述的羧基官能團(tuán)可以幫助保護(hù)該分子?；蛟S，和半胱氨酸中的單獨(dú)巰基相比，二氫硫辛酸相對(duì)于半胱氨酸的增強(qiáng)作用可以被歸為兩個(gè)巰基的更穩(wěn)定的"締合作用"。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>相似地，描繪與還原態(tài)谷胱甘肽的反應(yīng)是有可能的。既然這樣，通過兩個(gè)羧酸官能團(tuán)替代一個(gè)，得到了較高的活性。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>所述的機(jī)理被認(rèn)為是與花(色)祥離子被用作自由基清除劑時(shí)的反應(yīng)級(jí)聯(lián)有關(guān)。受試的2個(gè):R-SH/R-SS-R化合物的氧化還原電位低于花色素甙的氧化還原電位。例如，2個(gè)GSHZGSSG=-0.22V，而所述的氧化還原電位A-OH/A=0=0.20-0.75V(見下文)。以F反應(yīng)說明了花色素甙的清除特性R=H，花色素；R二糖，花色素甙<formula>formulaseeoriginaldocumentpage19</formula>R醌-/半醌結(jié)構(gòu)(有色產(chǎn)品，實(shí)例)。這些(半)奎寧的穩(wěn)定性被認(rèn)為與取代型式有關(guān)，因?yàn)轷Y(jié)構(gòu)要求4'-取代。一旦所述的醌形成，逆轉(zhuǎn)產(chǎn)生花(色)牟g結(jié)構(gòu)的反應(yīng)是不大可行的。另一方面，任何在5'_位置的取代，阻礙了所述的半醌的形成。那也許解釋了為什么3'-0H和4'-甲氧基取代結(jié)構(gòu)好象是最穩(wěn)定的它形成了一個(gè)半醌，其不能被水攻擊而形成無色產(chǎn)品。這樣的半醌可能或多或少容易再轉(zhuǎn)變到所述的花(色)祥陽離子。通過以下反應(yīng)，花色素/花色素甙(A-OH)被轉(zhuǎn)變?yōu)榘膈?醌(A=()):A-0H—A=0+H++e—R-SH化合物經(jīng)歷了以下反應(yīng)全部過程2RSH—R-SS-R+2H++2e細(xì)節(jié)R-SH:—R-S—+H+—R-S°+e—+H:+2R_S°—R-SS-R(RS。...基團(tuán))這樣的機(jī)理指出了1:1消耗的過程，2分子花色素甙能從2分子R-SH形成1分子R-SS-R，余下的作為半醌。如果沒有發(fā)生替換反應(yīng)，以下反應(yīng)cascade是合理的在中性pH值下，R-SH和花色素甙的結(jié)合過程中，R-SH主要轉(zhuǎn)變?yōu)镽_S°。R-S°的一部分是被花色素甙(A-OH)清除的，A-OH從而轉(zhuǎn)變?yōu)锳=0半-醌，再一次產(chǎn)生R-SH。在ph值=7時(shí)，A=0通過消耗R-SH再轉(zhuǎn)變?yōu)锳-()H，然后按照已知方式最終漸漸降解。促穩(wěn)定化合物的適當(dāng)?shù)膶?shí)例包括酵母提取物，二氫硫辛酸；二氫硫辛酸鹽，諸如氨基酸鹽；半胱氨酸，半胱氨酸衍生物，諸如N-乙酰半胱胺酸；谷胱甘肽,谷胱甘肽的鹽；SH-蛋白酶，諸如木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶，無花果蛋白酶，木瓜凝乳蛋白酶，和它的混合物；巰基蛋白酶、巰基金屬蛋白酶、含有半胱氨酸的縮氨酸、含有谷胱甘肽的縮氨酸、發(fā)酵的牡蠣提取物、豆腐乳、含巰基殼聚糖、含巰基凝膠或者其混合物。一方面,所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約在0.1-10之間，優(yōu)選在().5-5之間，更優(yōu)選為1。另--方面,所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物對(duì)暴露于含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的，該環(huán)境的pH值大約為2、3、4、5等等，直至14，例如，pH值為7或更大。另一方面，所述的穩(wěn)定化的花色素甙(anthocyanin)提取物是花色素甙(anthocyanosicle)。另一方面，所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物是花色素。在本發(fā)明所述的其它方面，所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物包括一種或多種花色素甙,也就是花葵素、甲基花青素、花青素、二甲翠雀素、3'-甲花翠素、翠雀素的糖甙。本發(fā)明也涉及此處描述的穩(wěn)定化的花色素甙的制備方法。本發(fā)明提供的促穩(wěn)定化合物可以和含有植物原料的花色素甙一起，在提取和Z或制造過程中混合，從而減少或者去除所述花色素甙的氧化破壞，該氧化破壞通常發(fā)生在處理過程、甚至在存儲(chǔ)過程中。例如一個(gè)或多個(gè)促穩(wěn)定化合物，以這里通常描述的比例，在提取過程中加入到所述的提取介質(zhì)(溶劑)中，所述的提取過程可參照2()()2年2月14日公開的美國專利2002/0018821，發(fā)明人是ChrysteleSoulieret.al.，該專利中所述的含量以其整體被合并于此。典型地,所述的花色素甙提取物直接與所述的促穩(wěn)定化合物混合。這可以通過將作為固體的兩種原料簡單混合、研磨、合并等方式實(shí)現(xiàn)，或者通過將其溶解在溶劑內(nèi)實(shí)現(xiàn)，例如水。額外的添加劑，諸如載體、維生素、抗氧化劑等等，按照本說明書中以下描述，可以通過常規(guī)方法添加到所述的混合物中。在一個(gè)實(shí)施例中，含有花色素甙的紅色果實(shí)提取物，溶解于水溶液，并按照本說明書所描述，用含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理。所述的水提物被冷卻至其達(dá)到--個(gè)低于15°C的均一溫度。所述的提取物被過濾，并按照本說明書所描述，用含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理,所得到的滲透液被回收并載入大孔交聯(lián)聚合樹脂。所述的樹脂然后被軟化水沖洗，按照本說明書所描述，用含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理，然后得到的樹脂用醇洗提液洗提，其可以按照本說明書所描述，用含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理。得到的洗脫液被濃縮，按照本說明書所描述，用含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理，然后千燥。在另外的實(shí)施例中，所述的穩(wěn)定處理過程在一種含醇的紅色果實(shí)提取物中進(jìn)行，該提取物根據(jù)下列過程得到。首先果肉從整個(gè)紅色果實(shí)中分離，然后所述的果肉被置于含醇的提取溶液中，該溶液可以選擇性地包含-一種本說明書所述的含巰基促穩(wěn)定化合物。固相與從液相分離，然后所述的液相可以用本說明書所述的含巰基促穩(wěn)定化合物選擇性處理。所述液相包含的酒精殘留的主要部分在真空下被蒸發(fā)，以便獲得一種含醇的濃縮物。用于醇提的溶劑可便利地從甲醇、乙醇、丁醇以及丙酮中選取。在實(shí)踐中，所述的醇提在室溫下，以至少兩個(gè)連續(xù)的步驟進(jìn)行，每個(gè)步驟各持續(xù)20分鐘。然后溶劑被蒸發(fā)掉。另外，不從單獨(dú)的果肉，而從整個(gè)果實(shí)中，也能實(shí)現(xiàn)所述花色素甙的提取。根據(jù)本發(fā)明所述，穩(wěn)定處理的過程，可以市售水果的提取物開始，或者以預(yù)先純化的花色素甙提取物開始，其分別以液體或者粉末形態(tài)供應(yīng)。假如這樣的話,所述的果實(shí)提取物或者預(yù)先純化的提取物，在純化步驟以前，或者用酒精溶解，優(yōu)選甲醇，或者用水溶解，并用本說明書所述含巰基促穩(wěn)定化合物處理。在本發(fā)明所述的純化過程中，所述的紅色果實(shí)提取物被便利地冷卻至提取物達(dá)到均-的小于iot;的溫度，優(yōu)選小于5"C,所述的溫度保持至少大約12小時(shí)。關(guān)于所述水提物或醇提物的過濾步驟，它可以用纖維素過濾器或者不銹鋼金屬絲網(wǎng)進(jìn)行，截取0-100微米之間或等效的部分。為了進(jìn)一步提高所述最終提取物中的穩(wěn)定化的花色素甙的滴定量和濃度,從樹脂中洗提穩(wěn)定化的花色素甙所用的醇溶液是乙醇的水溶液，其乙醇濃度在10%_90%之間，優(yōu)選接近于40%。得到的所述穩(wěn)定化的洗脫液,在30°C附近的受控溫度下被濃縮，然后冷凍干燥或噴霧干燥，以便獲得一種穩(wěn)定化的粉末。在一個(gè)實(shí)施例中，例如，歐洲越桔提取物的濃縮物和鹽酸L-半胱氨酸鹽被合并(9:i，重量份)，然后噴霧千燥以提供一種粉末態(tài)的穩(wěn)定化歐洲越桔提取物。通常，所述的歐洲越桔提取物與游離半胱氨酸的比例大約是io:i重量份。通過服用一定治療有效量的所述的穩(wěn)定化的花色素甙組合物,本發(fā)明進(jìn)一步涉及不同疾病的治療方法。疾病包括，增加的抗氧化劑量的需要，疼痛的減輕，炎癥。疼痛的減輕或者消除包括疼痛的不同型式，包括關(guān)節(jié)炎、痛經(jīng)、頭痛、關(guān)節(jié)痛、肌肉疼痛、骨關(guān)節(jié)炎、老年黃斑病變(AMD)、白內(nèi)障、視網(wǎng)膜病、及其組合。因此,本發(fā)明進(jìn)一步提供了可生物利用的穩(wěn)定化的花色素甙組合物，其對(duì)治療本說明書所述的不同的苦痛有作用。所述的穩(wěn)定化的花色素甙組合物可通過如F文論述的許多方法用于治療。令人驚訝地是，本發(fā)明提供了半胱氨酸與花色素甙組合物(無論它是花色素還是花色素甙)的混合物的應(yīng)用，其有助于提高危急中的受試者的花色素甙的傳遞，相對(duì)于攝取無半胱氨酸存在的花色素甙組合物的受試者，花色素甙的傳遞至少提高了兩倍數(shù)量。已經(jīng)意外地發(fā)現(xiàn)，有半胱氨酸存在的花色素甙的血藥濃度,在用藥4小時(shí)后，至少是沒有半胱氨酸情況下傳遞的花色素甙的血藥濃度的至少兩倍。因此,本發(fā)明通過給受試者服用一定有效量的花色素甙和半胱氨酸，提供了一種提高受試者體內(nèi)可生物利用的花色素甙的數(shù)量的方法。用藥可以是以任何手段，但是通常優(yōu)選口服。在一個(gè)實(shí)施例中，所述的花色素甙與半胱氨酸的比例大約是100.l，更具體的是大約10-0.5，更加具體的是大約10-1，以重量計(jì)。重要的是注意沒有應(yīng)用半胱氨酸的情況下，如本說明書中描述的實(shí)施例表明，花色素甙的生物利用率顯著地減少。用藥之后，有半胱氨酸存在的花色素甙的生物利用率的增量，通常是單獨(dú)服用花色素甙的生物利用率的至少兩倍。理論上,通過混入半胱氨酸提高生物利用率，導(dǎo)致所述的生物利用率超過沒有包含半胱氨酸的等效的花色素甙的3倍、4倍、5倍、1()倍和20倍。這是-個(gè)意外的發(fā)現(xiàn)。本發(fā)明所述的組合物可以被合并進(jìn)入不同的食物、飲料、小吃等等。一方面，所述的組合物可以在消費(fèi)之前，撒在食品上。如果撒在食品上，適當(dāng)?shù)妮d體，如淀粉、蔗糖或者乳糖，可用于幫助分散所述的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的濃度，使其易于應(yīng)用到所述的食品中。本發(fā)明所述的組合物也可以在不同的預(yù)制食品中，作為添加劑被提供。針對(duì)本申請的該目的，預(yù)制食品意指任何天然食品、加工食品、日常飲食或非日常飲食食品，其中已經(jīng)添加了本發(fā)明所述的組合物。本發(fā)明所述的組合物可以直接被合并進(jìn)入許多預(yù)制好的日常飲食食品，包括但不限于日常飲食飲料、飲食棒和預(yù)制好的冰凍食物。此外，本發(fā)明所述的組合物可以被合并進(jìn)入許多預(yù)制好的非日常飲食產(chǎn)品中，包括但不限于糖果，快餐產(chǎn)品，諸如炸馬鈴薯片，預(yù)制好的肉類產(chǎn)品，乳制品，奶酪,酸奶，運(yùn)動(dòng)食品，蛋黃醬，色拉味調(diào)料，面包和任何其它含有脂肪或油的食物。如本說明書中使用的，術(shù)語"食品"指的是適于人或動(dòng)物消費(fèi)的任何物質(zhì)。本發(fā)明所述的組合物可以被添加至不同的飲料，諸如果汁、奶昔、乳制品等等。優(yōu)選的服用方法是口服。本發(fā)明所述的組合物可以用適合的載體制成配方，適合的載體如淀粉、藥片中的蔗糖或乳糖、膠囊、溶液、糖漿和乳劑。本發(fā)明所述的藥片或膠囊可以用腸溶衣包覆，該腸溶衣溶解于PH值大約為6.0-7.0的環(huán)境。適合的腸溶衣是醋酸纖維素，其在小腸溶解但不在胃里溶解。進(jìn)入軟膠囊中的，本發(fā)明所述組合物的配方可以通過許多本領(lǐng)域已知方法實(shí)現(xiàn)。所述配方經(jīng)常包含一種可接受的載體，如油，或其它懸浮劑或乳化劑。適合的可選擇的載體包含但不限于,例如，脂肪酸，其來自任何來源的酯和鹽，不受限地包括天然的或合成的油，脂肪，蠟或者它們的組合。此外，所述的脂肪酸可以不受限地來自非氫化的油，部分氫化的油，完全氫化的油或者它們的組合。非限制性的脂肪酸(他22們的酯和鹽)的典型來源包含植物油，魚油或海洋生物油脂，canola油，植物油，紅花油，葵花油，旱金蓮種子油，芥菜籽油，橄欖油，芝麻油，豆油，玉米油，花生油，棉花子油，米糠油，巴巴蘇棕櫚果油，棕櫚油，lowerucic菜籽油，棕櫚仁油，羽扇豆油，椰子油，亞麻籽油，月見草油，荷荷巴油，小麥胚油，動(dòng)物脂,牛脂，黃油，雞油，豬油，乳品乳脂，牛油樹脂或它們的。具體的非限制性典型的魚油或海洋生物油來源包含甲殼水生動(dòng)物油，金槍魚油，鯖魚油，鮭魚油，鯡魚油，鳳尾魚油，青魚油，鱒魚油，沙丁魚油或者它們的組合。特別地，所述脂肪酸的來源是魚油或海洋生物油(DM或EPA),豆油或亞麻籽油。另外，或與上述被確定的載體之一結(jié)合,蜂蠟?zāi)鼙挥米鲞m合的載體，以及諸如硅石(二氧化硅)的懸浮劑。本發(fā)明所述的配方也被看作保健食品。術(shù)語"保健食品"在所述的領(lǐng)域是公認(rèn)的并被用來描述食物中具體的化合物，其可以預(yù)防疾病或改善不良狀況。本發(fā)明所述的配方可以進(jìn)一步包含不同的組分以幫助促使穩(wěn)定,或者幫助促進(jìn)本發(fā)明有益組合物的組分的生物利用率,或者作為輔助營養(yǎng)素進(jìn)入個(gè)人的日常飲食。適合的添加劑可以包含維生素和生物學(xué)上可接受的礦物質(zhì)。維生素的非限制性實(shí)例包含維生素A，B族維生素，維生素C，維生素D，維生素E，維生素K和葉酸。礦物質(zhì)的非限制性實(shí)例包含鐵，鈣，鎂,鉀,銅，鉻，鋅,鉬，碘，硼，硒,錳，它們的衍生物或者它們的組合。這些維生素和礦物質(zhì)可以不受限制地來自于任何來源或者來源的組合。非限制性的B族維生素不受限制地包含硫胺，煙霧胺，吡哆醇，核黃素，氰鈷維生素，生物素，泛酸或它們的組合。不同的添加劑可以被合并進(jìn)入本發(fā)明組合物。本發(fā)明組合物的可選擇的添加劑不受限制地包含，透明質(zhì)酸，磷脂，淀粉，糖，脂肪,抗氧化劑，氨基酸，蛋白質(zhì),調(diào)味品，著色劑，水解淀粉和它們的衍生物或它們的組合。如本說明書中使用的，術(shù)語"抗氧化劑"在本領(lǐng)域中是公知的，指的是那些阻止或延遲化合物的氧化變質(zhì)的合成或天然物質(zhì)。典型的抗氧化劑包含生育酚，類黃酮，兒茶酚，過氧化物歧化酶，卵磷脂，Y-谷維素；維生素,諸如維生素A、維生素C(抗壞血酸)和維生素E和|3-胡蘿卜素；天然組分，諸如在迷迭香和山楂提取物中發(fā)現(xiàn)的caniosol，ca鵬sic酸和rosmanol，諸如在葡萄籽或松樹皮提取物以及綠茶提取物中發(fā)現(xiàn)的原花色素。包含本發(fā)明所述的穩(wěn)定化花色素甙組合物的組合物可以通過傳統(tǒng)方法制得，如混合,溶解,造粒,糖衣丸制造，研磨成粉，乳化，制成膠囊，包埋或升華干燥過程。所述組合物可以使用傳統(tǒng)方法配制，利用一種或多種生理學(xué)上可接受的載體，稀釋劑，賦形劑或輔助劑，以便于將穩(wěn)定化花色素甙組合物制成能被使用的配制品。本發(fā)明所述的組合物可以采取適于任何有效服用方式的形式，包括，例如，口服，口腔用藥，內(nèi)吸收，注射,透過皮膚起作用，直腸吸收，陰道吸收等等,或者適于通過吸入或者注氣服用的形式。內(nèi)吸收的配方包含那些用于注射給藥的設(shè)計(jì)，例如，皮下注射,靜脈注射，肌肉注射，鞘內(nèi)注射或腹腔內(nèi)注射，以及那些設(shè)計(jì)用于透過皮膚起作用的用藥方式，經(jīng)粘膜吸收，口服或肺部吸收的用藥方式。有效的注射用配制品包含含水媒介或油性媒介中的所述穩(wěn)定化花色素甙組合物的無菌的懸浮液,溶液或乳劑。所述的組合物也可以包含復(fù)配助劑，諸如懸浮劑，促穩(wěn)定劑和/或分散劑。所述用于注射的配方可以單位劑量形式存在，例如，安瓿或multidose容器，并可包含添加的防腐劑。23另外，所述注射用配方可以粉末形式提供，用于在使用前和適合的媒介物-起恢復(fù)原狀，包括但不限于，無菌無熱原的水，緩沖溶液，葡萄糖溶液等等。所述穩(wěn)定化的花色素甙組合物可以通過任何的已知的技術(shù)被干燥，諸如凍干法,并在使用前恢復(fù)原狀。對(duì)于經(jīng)粘膜吸收用藥,適于透過屏障的滲透劑被用于所述的配方。這樣的滲透劑在所屬
技術(shù)領(lǐng)域：
中是已知的。對(duì)于口服，本發(fā)明的組合物可以采取錠劑，片劑或膠囊的形式，例如，通過傳統(tǒng)方法和藥學(xué)上可接受的賦形劑進(jìn)行制備，所述的賦形劑諸如粘合劑(例如，預(yù)糊化玉米淀粉,聚乙烯吡咯烷酮或羥丙基甲基纖維素)；裝填物(例如，乳糖，微晶纖維素或磷酸氫鈣)；潤滑劑(例如，硬脂酸鎂，滑石或硅石)；分解質(zhì)(例如，馬鈴薯淀粉或羥基淀粉乙酸鈉)；或者潤濕劑(例如，十二烷基硫酸鈉)。所述片劑可以通過所屬領(lǐng)域眾所周知的方法，例如，用糖，薄膜或腸溶衣包覆。用于口服的液體藥劑可以采取例如酏劑，溶液，糖漿或懸浮液的形式,或者它們可以作為--種干燥的產(chǎn)品存在，在使用前與水或其它適合的媒介物還原配制。這樣的液體藥劑可以通過傳統(tǒng)方法與藥學(xué)上可接受的添加劑制備得到，所述的添加劑如懸浮劑(例如，山梨糖醇糖漿，纖維素衍生物或氫化食用脂肪)；乳化劑(例如，卵磷脂或阿拉伯樹膠)；非水媒介物(例如，杏仁油，油酯，乙醇,或精餾植物油)；以及防腐劑(例如，甲基或丙基p-羥基安息香酸鹽或山梨酸)。所述的配制品也可以酌情包含緩沖鹽，防腐劑，調(diào)味品，著色劑和甜味劑。用于口服的配制品可以按照眾所周知的方式,適當(dāng)?shù)嘏渲?，以?shí)現(xiàn)穩(wěn)定化花色素甙組合物的受控釋放。對(duì)于口腔用藥，所述的組合物可以采取片劑或錠劑的形式，以傳統(tǒng)方法配制而成。對(duì)于直腸和陰道途徑的用藥，穩(wěn)定化花色素甙組合物可被配制為溶液(用于保留灌腸法)，栓劑或膏劑，其含有傳統(tǒng)的栓劑基質(zhì)，諸如可可脂或其它甘油酯。對(duì)于鼻部給藥或者通過吸入或吹入的給藥，所述的穩(wěn)定化花色素甙組合物可以借助于適合的拋射劑，例如，二氯二氟甲烷，三氯氟甲烷，二氯四氟乙烷，碳氟化合物，二氧化碳或其它適合的氣體，從密封容器或噴霧器中以氣溶膠噴射的形式，被方便地傳遞。就加壓氣霧劑而言，所述的劑量單位,可以通過提供一個(gè)閥來決定所釋放的計(jì)量數(shù)量。供吸入器或吹藥器(例如由凝膠組成的膠囊和藥盒)用的膠囊和藥盒可以復(fù)配含有粉末混合物，該粉末混合物由所述化合物和適合的粉末基料組成，諸如乳糖或淀粉。為了持續(xù)傳遞，所述的穩(wěn)定化花色素甙組合物可以作為用于植入給藥或肌肉注射給藥的儲(chǔ)存制品被配制。所述的穩(wěn)定化花色素甙組合物可以與適合的聚合材料或者疏水材料(例如，在可接受的油中作為乳劑)或離子交換樹脂，或者作為微溶的衍生物，例如，作為--種微溶的鹽，進(jìn)行配制。另外，作為-種吸盤或膜片制造的透過皮膚起作用的輸送系統(tǒng)能被使用，其緩慢釋放所述穩(wěn)定化花色素甙組合物用于經(jīng)皮吸收。至此，滲透增強(qiáng)劑可用于促進(jìn)所述穩(wěn)定化花色素甙組合物的皮膚滲透。適合的皮膚膜片被描述在例如美國專利5，407，713;美國專利5，352，456;美國專利5，332，213;美國專利5，336，168;美國專利5，290，561;美國專利5，254，346;美國專利5，164，189;美國專利5，163，899;美國專利5，088，977;美國專利5，087，240;美國專利5，008，110;和美國專利4，921，475。另外，可以采用其它的傳遞系統(tǒng)。脂質(zhì)體和乳劑是被熟知的傳遞載體，其可用于傳遞穩(wěn)定化花色素甙組合物。確定的有機(jī)溶劑，諸如二甲亞砜(DMSO),也可以被采用，雖然通常以大的毒性為代價(jià)。所述的組合物，如果需要,可以存在于一種包裝或者分配器裝置中，其可以包含一種或多種含有所述穩(wěn)定化花色素甙組合物的單位劑量型式。所述的包裝可以，例如，含有金屬或者塑料薄片,諸如泡罩包裝。所述的包裝或分配器裝置可以附有藥的服用說明。軟凝膠或軟膠膠囊可以被制備，例如，不受限制地，通過在適當(dāng)?shù)拿浇槲?例如，米糠油和/或蜂蠟)中分散所述成分，以形成一種高粘度混合物。然后這些混合物與凝膠一同被做成膠囊，基于軟凝膠工業(yè)技術(shù)人員所知的薄膜應(yīng)用技術(shù)和機(jī)械設(shè)備。所述膠囊成型后被干燥至恒重。典型地，所述膠囊的重量大約在100-2500毫克之間，優(yōu)選在大約1500-1900毫克之間，更準(zhǔn)確地說在大約1500-2000毫克之間。例如，當(dāng)制備軟凝膠殼時(shí),所述的殼可以包含大約20-70%的凝膠,通常還有增塑劑和大約5-60%按重量計(jì)算的山梨醇。所述軟膠膠囊的充填料是液體(主要是載體,諸如米糠油或者小麥胚油和Z或蜂蠟，如果需要的話)并可以包含除所述穩(wěn)定化花色素甙組合物以外的親水性的基質(zhì)。所述親水性基質(zhì)，如果存在的話，是具有大約200-1000平均分子量的聚乙二醇。進(jìn)一步的組分可選擇的是增稠劑和/或乳化劑。在一個(gè)實(shí)施例中，所述的親水性基質(zhì)包括具有大約200-1000平均分子量的聚乙二醇，5-15%的甘油，和5-15%按重量計(jì)算的水。所述聚乙二醇也可以攙雜丙二醇和/或碳酸丙烯。在另外實(shí)施例中，所述的軟凝膠膠囊是從凝膠、甘油、水和不同添加劑制備得到的。典型地，所述凝膠的百分比(按重量計(jì)算)在大約30-50%之間，優(yōu)選為大約35-15之間，更優(yōu)選大約42%。所述配方包括大約15-25%重量百分?jǐn)?shù)之間的甘油，更優(yōu)選的在大約17-23%重量百分?jǐn)?shù)之間，以及最優(yōu)選的為大約20%重量百分?jǐn)?shù)甘油。所述膠囊的剩余部分典型地是水。該數(shù)量在大約15_40%重量百分?jǐn)?shù)之間變化，更優(yōu)選在30-35%重量百分?jǐn)?shù)之間，最優(yōu)選為大約35%重量百分?jǐn)?shù)。該膠囊的其他部分通?？梢栽诖蠹s2-1()%重量百分?jǐn)?shù)之間變化，由調(diào)味劑、糖、著色劑、等等或它們的組合組成。在該膠囊加工之后，最終膠囊的含水率經(jīng)常是在大約5-10重量百分?jǐn)?shù)之間，更具體的在大約7-12重量百分?jǐn)?shù)，更準(zhǔn)確地說在大約9-10重量百分?jǐn)?shù)之間。至于制造,標(biāo)準(zhǔn)軟殼膠囊制造技術(shù)可用于制備該軟殼產(chǎn)品是可預(yù)期的。有效的制造技術(shù)的實(shí)例是平板法，:R.P.Scherer開創(chuàng)的旋轉(zhuǎn)沖模過程工藝，應(yīng)用Norton膠囊設(shè)備的過程工藝，以及Accogel設(shè)備和Lederle開發(fā)的過程工藝。這些過程工藝每個(gè)都是成熟技術(shù)，并對(duì)任何一個(gè)希望制備軟膠膠囊的人，都可廣泛得到。所述乳化劑可用于促進(jìn)溶解軟膠囊內(nèi)的組分。表面活性劑、乳化劑、或泡騰劑的特定例子包括D-山梨醇、乙醇、角叉菜膠、聚羧乙烯、羧甲基纖維素鈉、瓜耳豆膠、甘油、脂肪酸甘油酯、膽固醇、白蜂蠟、丁二酸二辛基磺酸鈉、蔗糖脂肪酸酯、十八醇、硬脂酸、聚氧乙烯(40)硬脂酸鹽、失水山梨醇倍半油酸酯、鯨蠟醇、明膠、失水山梨醇脂肪酸酯、滑石、失水山梨醇三油酸酯、石蠟、馬鈴薯淀粉、羥丙基纖維素、丙二醇、丙二醇脂肪酸酯、果膠、聚氧乙烯(105)聚氧丙烯(5)乙二醇、聚氧乙烯(160)聚氧丙烯(30)乙二醇、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油40、聚氧乙烯氫化蓖麻油60、聚氧乙烯(35)蓖麻油、聚山梨酸酯20、聚山梨酸酯60、聚山梨醇酯80、聚乙二醇400、辛基十二醇肉豆蔻酸酯、甲基纖維素、失水山梨醇單油酸酯、單硬脂酸甘油酯、失水山梨醇單棕櫚酸酯、失水山梨醇單月桂酸酯、十二烷基二甲胺氧化物溶液、十二烷基硫酸鈉、聚桂醇、干燥碳酸鈉、酒石酸、氫氧化鈉、精制大豆卵磷脂、大豆卵磷脂、碳酸鉀、碳酸氫鈉、中鏈甘油三酸酯、檸檬酸酐、棉籽油-大豆油混合物，和液體石蠟。本發(fā)明也提供了已包裝制劑，其包括本發(fā)明所述組合物以及該產(chǎn)品在適當(dāng)條件下的使用說明書。典型情況下,無論其以什么形式,該已包裝制劑是用于有使用需要的個(gè)體。典型情況下，其劑量要求為一天大約1到大約4次用量。雖然本發(fā)明描述了本發(fā)明所述組合物用于治療不同的癥狀的軟膠囊制劑、使用、制造和包裝,但不應(yīng)認(rèn)為其僅限于軟膠囊。本發(fā)明可吸收的組合物可以以如上所述的傳統(tǒng)的片劑、丸劑、錠劑、酏劑、乳液、硬膠囊、液體、懸浮液等劑型傳遞。本發(fā)明所述的穩(wěn)定化花色素甙組合物，或者它們的組合物，通常以一定有效劑量用于完成所述的預(yù)期結(jié)果,例如以一定有效劑量治療或者預(yù)防與發(fā)炎有關(guān)的癥狀。所述的組合物可以有療效地服用以實(shí)現(xiàn)治療學(xué)目的，或者預(yù)防性地實(shí)現(xiàn)預(yù)防疾病的目的。依據(jù)治療目的，是指被處理的潛的紊亂的根除或者改善，和/或-個(gè)或多個(gè)與潛在紊亂有聯(lián)系的癥狀的根除或者改善，以使該病人報(bào)告在感受或癥狀上的改善，盡管該病人仍可能經(jīng)受該潛在紊亂的折磨。例如，不僅當(dāng)該潛在癥狀被根除或改善時(shí),而且當(dāng)該病人報(bào)告與病痛有關(guān)的身體不適的嚴(yán)重程度或持續(xù)時(shí)間減小時(shí),本發(fā)明組合物的服用，對(duì)遭受病痛折磨的病人提供了治療學(xué)的效益。對(duì)于預(yù)防性用藥，該組合物可用于處于逐步顯示出前述癥狀之一的風(fēng)險(xiǎn)中的病人。該組合物服用的劑量將依賴多種因素，包括,例如，接受治療的特定征兆，給藥方式，無論所期望的效果是預(yù)防性的還是治療性的，接受治療的征兆的嚴(yán)重程度以及病人的年齡和體重等等。有效劑量的確定處于所屬領(lǐng)域技術(shù)人員的能力范圍之內(nèi)。穩(wěn)定化花色素甙組合物的總劑量將代表性地處于0.0001mg/kg/天或0.001mg/kg/天或0.Olmg/kg/天到l()(Mg/kg/天范圍之內(nèi)，但是,根據(jù)其它因素中的組分活性、其生物利用率、給藥方式以及上述討論過的多種因素,其可以更高或更低。用藥劑量和間隔可單獨(dú)調(diào)整，以使所述化合物的血藥濃度足以維持治療性或預(yù)防性效果。例如，根據(jù)其他情況中的給藥方式、被治療的特定適應(yīng)癥和醫(yī)囑,所述化合物可以每周服用一次，每周服用數(shù)次(例如，每隔一天)，每日服用一次或每日服用多次。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員不需要非常規(guī)實(shí)驗(yàn)就可以優(yōu)化有效局部用量。下列從1到91段，連續(xù)列舉了本發(fā)明的不同的方面。在一個(gè)實(shí)施例中，在第一段(l),本發(fā)明提供了一種穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，其包含一種花色素甙提取物和一種含有至少一個(gè)SH的促穩(wěn)定化合物,并規(guī)定該促穩(wěn)定化合物不是谷胱甘肽。2.段落1中的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物,在其中的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物，二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物，半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，巰基蛋白酶，巰基金屬蛋白酶,含有半胱氨酸的縮氨酸,含有谷胱甘肽的縮氨酸,發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖，含巰基凝膠或者它們的混合物。3.段落1或2中的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中花色素甙提取物是歐洲越桔提取物，黑醋栗提取物，酸果蔓提取物，黑大豆提取物，越橘提取物，藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。4.段落卜3中的任何--種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是0.1-10。5.段落卜4中的任何一種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有P:H大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。6.段落卜5中任何--種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中的花色素甙提取物包含一種花色素甙。7.段落1中的穩(wěn)定化花色素甙提取物，在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。8.段落7中的穩(wěn)定化花色素甙提取物，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素，花青素，二甲翠雀素，3'_甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。9.一種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其包含一種花色素甙提取物和一種具有至少--個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。10.段落9中的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物,二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物,半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，谷胱甘肽，谷胱甘肽的衍生物，巰基蛋白酶，巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸,含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖,含巰基凝膠或者它們的混合物。11.段落9或10中的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中所述的花色素甙提取物是歐洲越桔提取物，黑醋栗提取物,酸果蔓提取物,黑大豆提取物，越橘提取物,藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。12.段落9-11中的任何-一種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是O.卜10。13.段落9-12中的任何一種穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有P:H大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。14.段落9-13中的任何一種穩(wěn)定化花色素甙提取物，在其中所述的花色素甙提取物包含一種花色素甙。15.段落9中所述的穩(wěn)定化花色素甙提取物,在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。16.段落15中所述的穩(wěn)定化花色素甙提取物，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素，花青素，二甲翠雀素，3'-甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們的兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。17.—種使花色素甙提取組合物穩(wěn)定的方法,其包含一個(gè)將花色素甙提取物與足量的具有至少--個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物混合的步驟，并規(guī)定所述的促穩(wěn)定化合物不是還原態(tài)谷胱甘肽，以使所述的花色素甙提取物穩(wěn)定。18.段落17所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物,二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物,半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，巰基蛋白酶，巰基金屬蛋白酶,含有半胱氨酸的縮氨酸，含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖，含巰基凝膠或者它們的混合物。19.段落17或18中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物是歐洲越27桔提取物,黑醋栗提取物，酸果蔓提取物，黑大豆提取物，越橘提取物，藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。20.段落17-19中任何一個(gè)所述的方法,在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是().卜l()。21.段落17-20中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有pH大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。22.段落17-21中任何一個(gè)所述的方法,在其中所述的花色素甙提取物包含一種花色素甙。23.段落17所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。24.段落23所述的方法，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素，花青素，二甲翠雀素，3'-甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們的兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。25.段落17所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物在周圍環(huán)境條件下至少一天是穩(wěn)定的。26.段落22所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化花色素甙在pH值為7時(shí)至少6小時(shí)是穩(wěn)定的。27.段落26所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化花色素甙在pH值為7的條件下，大約在4小時(shí)內(nèi)至少維持以糖甙形式存在的50%的花色素甙。28.—種使花色素甙提取組合物穩(wěn)定的方法，其包含一個(gè)將花色素甙提取物與足量的具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物混合的步驟，以使所述的花色素甙提取物穩(wěn)定。29.段落28所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物，二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物，半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，谷胱甘肽，谷胱甘肽的衍生物，巰基蛋白酶,巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸,含有谷胱甘肽的縮氨酸,發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖,含巰基凝膠或者它們的混合物。30.段落28或29所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物是歐洲越桔提取物，黑醋栗提取物，酸果蔓提取物，黑大豆提取物，越橘提取物，藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。31.段落28-30中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是O.卜10。32.段落28-30中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有pH大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。33.段落28-32中所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物包含一種花色素甙。34.段落28所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。35.段落34所述的方法，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素，花青素，二甲翠雀素，3'-甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們的兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。36.段落28所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物在周圍環(huán)境條件下至少--天是穩(wěn)定的。37.段落33所述的，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在pH值為7時(shí)至少6小時(shí)是穩(wěn)定的。38.段落37所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在pH值為7的條件下，大約在4小時(shí)內(nèi)至少維持以糖甙形式存在的50%的花色素甙。39.—種pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，其包含一種花色素甙提取物和一種具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。40.段落39所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物，二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物，半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，谷胱甘肽，谷胱甘肽的衍生物，巰基蛋白酶,巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸,含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵的牡蠣提取物,含巰基殼聚糖，含巰基凝膠或者它們的混合物。41.段落39或40任何一個(gè)所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的花色素甙提取物是歐洲越桔提取物，黑醋栗提取物，酸果蔓提取物，黑大豆提取物，越橘提取物，藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。42.段落39-41中任何一個(gè)所述的p:H值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是o.卜IO。43.段落39-42中任何一個(gè)所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有PH大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。44.段落39-43中任何一個(gè)所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取，在其中所述的花色素甙提取物包含一種花色素甙。45.段落39所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。46.段落45所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素，花青素，二甲翠雀素，3'-甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們的兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。47.段落39所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物在周圍環(huán)境條件下至少一天是穩(wěn)定的。48.段落44所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在PH值為7時(shí)至少6小時(shí)是穩(wěn)定的。49.段落48所述的pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在pH:值為7的條件下，大約在4小時(shí)內(nèi)至少維持以糖甙形式存在的5()%的花色素甙。50.—種pH值穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物的制備方法，其包含一種花色素甙提取物和一種具有至少一個(gè)-SII基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物，以使所述的花色素甙提取物穩(wěn)定。51.段落50所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物，二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物,半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，谷胱甘肽，谷胱甘肽的衍生物,巰基蛋白酶，巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸，含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖,含巰基凝膠或者它們的混合物。52.段落50或51中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物是歐洲越桔提取物，黑醋栗提取物，酸果蔓提取物，黑大豆提取物，越橘提取物,藍(lán)莓提取物或者它們的兩個(gè)或多個(gè)的混合物。53.段落50-52中任何一個(gè)所述的方法,在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙29提取物的摩爾比大約是O.1-10。54.段落50-53中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的組合物對(duì)于暴露于具有pH大約為2-12之間的含水環(huán)境中的降解是穩(wěn)定的。55.段落50-54中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物包含一種花色素甙。56.段落50所述的方法，在其中所述的花色素甙提取物包括一種花色素甙。57.段落56所述的方法，在其中所述的花色素甙是花葵素，甲基花青素,花青素，二甲翠雀素，3'-甲花翠素，翠雀素的糖甙或者它們的兩個(gè)或多個(gè)糖甙的混合物。58.段落50所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物在周圍環(huán)境條件下至少一天是穩(wěn)定的。59.段落55所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在pll值為7時(shí)至少6小時(shí)是穩(wěn)定的。60.段落59所述的方法，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙在pH值為7的條件下，大約在4小時(shí)內(nèi)至少維持以糖甙形式存在的50%的花色素甙。61.—種對(duì)受試者提供一種有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的方法,其包含給受試者服用一定有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的步驟，其在段落1-16或段落39-49中的任何一段中得到描述。62.—種治療動(dòng)脈硬化的方法，其包含給受試者服用一定有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的步驟，其在段落1-16或段落39-49中的任何一段中得到描述。63.—種提高或者保持細(xì)胞內(nèi)花色素甙的抗氧化劑濃度的方法，其包含服用一定有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的步驟，其在段落卜16或段落39-49中的任何一段中得到描述。64.—種減輕或者減少疼痛的方法,其包含服用一定有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的步驟，其在段落1-16或段落39-49中的任何一段中得到描述。65.段落4，12或者42中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是0.5-5。66.段落4,12或者42中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約是1。67.段落1-16或39-49中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，在其中所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物是藥丸，藥片，粉末，顆粒，薄膜，膏劑，乳膏劑，糊劑，溶液，混合劑,糖漿，粘膠,乳濁液，酊劑,酒精酊劑,涂料或煎劑的形式。68.段落1-16或39-49中所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，進(jìn)一步包含一種生理學(xué)上可接受的佐劑。69.段落68所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，在其中所述的佐劑是稀釋劑，粘合劑，崩解劑，潤滑劑,基料，調(diào)味劑，甜味劑,著色劑，防腐劑，抗氧化劑，表面修飾劑,成膜材料，溶劑，增溶劑，潤濕劑，吸收劑，過濾助劑，乳化劑，表面活性劑，懸浮劑，增粘劑,增塑劑，螯合劑，霧化推進(jìn)劑，發(fā)泡劑，酸化劑，堿化劑，緩沖劑或它們的混合物。70.段落20，31或者53中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約為0.5-5。71.段落20，31或者53中任何-一個(gè)所述的方法，在其中所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比大約為1。72.段落65或66中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的花色素甙提取物，在其中所述的半胱氨酸的衍生物是N-乙酰半胱胺酸，以及所述的巰基蛋白酶是木瓜蛋白酶，菠蘿蛋白酶,無花果蛋白酶，木瓜凝乳蛋白酶或者它們的混合物。73.—種富含花色素甙的提取物的穩(wěn)定方法，其包含該步驟將富含花色素甙的提取物與至少一個(gè)具有至少一個(gè)-SII基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物接觸，在其中，所述的促穩(wěn)定化合物可以與所述的花色素甙，可以在提取過程中的任何時(shí)間接觸。74.根據(jù)段落73所述的方法，在其中所述的具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物是酵母提取物，二氫硫辛酸,半胱氨酸，谷胱甘肽或者它們的混合物。75.段落73所述的方法，在其中所述的具有至少一個(gè)-SH:基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物與所述的花色素甙化合物的摩爾比在大約0.1-10之間。76.段落75所述的方法，在其中所述的摩爾比在大約0.5_5之間。77.段落75所述的方法，在其中所述的摩爾比大約是1。78.段落73-77中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的具有至少一個(gè)-S:H基團(tuán)的化合物，在與所述的富含花色素甙的提取物接觸之前，被添加到所述的萃取溶劑中。79.段落73-77中任何一個(gè)所述的方法，在其中所述的具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物，在所述的富含花色素甙的提取物與萃取溶劑合并后,被添加到所述的萃取溶劑中。80.—種治療老年黃斑病變(AMD),白內(nèi)障，或者視網(wǎng)膜病的方法，其包含給有需要的受試者服用一定有療效劑量的穩(wěn)定化的花色素甙組合物的步驟，其在段落卜16或段落39-49中的任何一段中得到描述。81.—種穩(wěn)定化的歐洲越桔組合物,其包含歐洲越桔提取物和半胱氨酸。82.段落81所述的穩(wěn)定化的歐洲越桔組合物，在其中所述的歐洲越桔提取物與半胱氨酸的比例大約是10-1重量比。83.段落81或82中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的歐洲越桔組合物，在其中所述的被噴霧干燥。84.段落81-83中任何一個(gè)所述的穩(wěn)定化的歐洲越桔組合物，在其中所述的穩(wěn)定化的組合物，在至少大約6個(gè)月時(shí),通過HPLC分析測定,保持至少大約80%的最初的花色素甙。85.—種提高花色素甙組合物的生物利用率的方法,其包含給受試者提供一種花色素甙組合物的步驟，該花色素甙組合物包含花色素甙和具有至少一個(gè)-SH:基團(tuán)的化合物，在其中，與缺少具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物的花色素甙組合物的樣本相比，受試者體內(nèi)所述的花色素甙的數(shù)量被提高至少兩倍。86.段落85所述的方法，在其中所述的花色素甙原料是一種提取物。87.段落86所述的方法，在其中所述的提取物是歐洲越桔提取物。88.段落85所述的方法,在其中所述的花色素甙原料與所述的具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物的比例大約在10:0.l和l:l重量比之間。89.段落87所述的方法，在其中所述的歐洲越桔提取物中的花色素甙與所述的具有至少--個(gè)-SH基團(tuán)的化合物的比例大約在10-1之間。90.段落85所述的方法，在其中，服用4小時(shí)后，在有半胱氨酸存在情況F的花色素甙的血藥濃度，是沒有具有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物存在情況下的花色素甙的血藥濃度的至少兩倍。91.段落85-90中任何--個(gè)所述的方法，在其中所述的具有至少-個(gè)-SH基團(tuán)的化合物是酵母，二氫硫辛酸，二氫硫辛酸的衍生物，半胱氨酸，半胱氨酸的衍生物，谷胱甘肽，谷胱甘肽的衍生物，巰基蛋白酶，巰基金屬蛋白酶，含有半胱氨酸的縮氨酸，含有谷胱甘肽的縮氨酸，發(fā)酵的牡蠣提取物，含巰基殼聚糖，含巰基凝膠或者它們的混合物。下列實(shí)施例對(duì)本發(fā)明不意謂著限制，而是對(duì)本發(fā)明提供額外的信息和支持。出現(xiàn)的涉及歐洲越桔提取物和紅醋栗提取物的示范性部分如下表如所示<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>實(shí)施例1樣品a)60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmo1花色素甙，以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)被添加到一個(gè)lOOmL燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.o)至刻度線并攪拌至完全溶解。立即取lmL樣品用蟻酸酸化至pH值=1.0,并用H:PLC分析花色素甙(新樣品)的含量。剩余溶液在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。其后另外的樣品(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解，取樣并酸化。樣品b)20mg還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.065,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份],pH值二7.0)的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。然后添加60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.()48miio:I.,以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)，并向燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37t;(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。樣品c)30mg二氫硫辛酸(0.144,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份],p:H值=7.0)的l()(M」燒瓶中，并攪拌至完全溶解。然后添加60rag歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmo1，以花青素_3_0-葡萄糖甙表示)，并向燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣品并立即用蟻酸酸化至p:H值=1.0，并用:HPLC分析花色素甙的含量。降解用各個(gè)樣品的峰的峰面積的減小來表示(以4小時(shí)后剩余％計(jì)算)。根據(jù)下表推斷，當(dāng)和空白樣品(不受保護(hù)的)對(duì)比，在pH值二7.0，37tTF，花色素甙實(shí)質(zhì)上在二氫硫辛酸或者谷胱甘肽存在的情況下，是更穩(wěn)定的。4小時(shí)后，空白試樣顯示大約25%的殘留花色素甙被觀測到，而受保護(hù)的樣品產(chǎn)生超過60%的殘留花色素甙。3()mg二氫硫辛酸的保護(hù)效能比得上20mg谷胱甘肽。所述的保護(hù)效能似乎是與基本花色素甙_骨架有關(guān)系，通過翠雀素葡萄糖甙舉例說明，當(dāng)和花青素葡萄糖甙對(duì)比，翠雀素葡萄糖甙保護(hù)32的不太好。對(duì)于每個(gè)受試的個(gè)體花色素甙，觀測保護(hù)效應(yīng)，例如，當(dāng)和空白試樣對(duì)比時(shí)，更多花色素甙殘留。表，在37。C培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙的峰面積峰ID.<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>Dp...翠雀素，Cn...花青素，Pt....3'-甲花翠素，Pe...甲基花青素,Mv...二甲翠雀素，Gal...半乳糖甙，Glc...葡萄糖甙，Ara...阿拉伯糖甙如下所述IIPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例2樣品a)60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmo1花色素甙，以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)被添加到一個(gè)l()()ra:L.燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)至刻度線并攪拌至完全溶解。立即取lmL樣品用蟻酸酸化至pH值=1.0,并用HPLC分析花色素甙(新樣品)的含量。剩余溶液在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存,并且每15分鐘采樣lmL(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解。對(duì)于選定的花色素甙,通過:HPLC分析樣品。樣品b)20mg還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.065mmol)被添加到--個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)的lOOmL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmol,以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)，并向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線,在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存。每15分鐘取樣lmL并對(duì)選定的花色素甙通過HPLC進(jìn)行分析。根據(jù)F表推斷，當(dāng)和空白樣品(不受保護(hù)的)對(duì)比，在pH值二7.0，37°C下，花色素甙實(shí)質(zhì)上在谷胱甘肽存在的情況下，是更穩(wěn)定的。如選定的花色素甙相對(duì)時(shí)間的相對(duì)衰退表明，保護(hù)作用在溶解之后立即開始，并持續(xù)至少4小時(shí)。該保護(hù)作用再次被認(rèn)為與花色素甙-骨架有關(guān)，舉例說明，在培養(yǎng)4小時(shí)30分鐘后，翠雀素-3-0-半乳糖殘留65%，3'-甲花翠素-3-0-半乳糖殘留67%和花青素3-0-半乳糖殘留77%。對(duì)于每個(gè)受試的個(gè)體花色素甙，觀測保護(hù)效應(yīng)，例如，當(dāng)和空白試樣對(duì)比時(shí)，更多花色素甙殘留。表，在37'C培養(yǎng)后的花色<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>沒有取樣表,在37。C培養(yǎng)后的花色素甙(谷胱甘肽保護(hù)樣品)的<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>表，在37。C培養(yǎng)4.30小時(shí)后的花色素甙殘留％<table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>如下所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例3樣品a)60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037mmo1花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)被添加到一個(gè)l()OraL燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線并攪拌至完全溶解。立即取lmL樣品用蟻酸酸化至pH值二1.0，并用HPLC分析花色素甙(新樣品)的含量。剩余溶液在37t:(水浴)和帶有攪拌條件F保存4小時(shí)。其后采樣并酸化(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解。樣品b)2()rag還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.065irano1)被添加到一個(gè)含有6(ML磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=70)的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037mmo1，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)，并向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份],pH值二7.0)至刻度線,在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。樣品c)20mg二氫硫辛酸(0.096mmo1)被添加到--個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037,1，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)，并向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37"C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。樣品d)20mgL-半胱氨酸(0.165,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH:值=7.0)的l()(ML燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加60rag紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037翻1，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)，并向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣品并立即用蟻酸酸化至p:H值=1.0，并用:HPLC分析花色素甙的含量。降解用各個(gè)樣品的峰的峰面積的減小來表示(以4小時(shí)后剩余％計(jì)算)。根據(jù)下表，確定了當(dāng)和空白樣品對(duì)比時(shí)，在pH值二7.0，37°CF，花色素甙實(shí)質(zhì)....匕在二氫硫辛酸,谷胱甘肽或者L-半胱氨酸存在的情況下，是更穩(wěn)定的。4小時(shí)后，空白試樣中有9.533.4%的花色素甙殘留被觀測到，而受谷胱甘肽保護(hù)的樣品產(chǎn)生了50.4-65.()%花色素甙殘留。對(duì)于二氫硫辛酸，比較數(shù)字是36.7-38.9%。對(duì)于每個(gè)受試的個(gè)體花色素甙，觀測保護(hù)效應(yīng)，例如，當(dāng)和空白試樣對(duì)比時(shí)，更多花色素甙殘留被觀測到。表，在37t:培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙的峰面積<table>tableseeoriginaldocumentpage36</column></row><table>Dp...翠雀素，Cn...花青素，Glc...葡萄糖甙，Rut...蕓香糖甙如下所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例4樣品a)60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037,1花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)被添加到一個(gè)100mL燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線并攪拌至完全溶解。該溶液在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。其后采樣并酸化(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解。樣品b-e)5，10，20或60mg二氫硫辛酸(0024-0.288mmo1)被添加到-一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二70的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。向每個(gè)燒瓶添加60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037翻1花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)。該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.())至刻度線，在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。樣品f-i)5，10，20或60mg谷胱甘肽(0.016-0.192畫1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。向每個(gè)燒瓶添加6()mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.()37mrao1花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)。該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。樣品j-m)5，10,20或60mgL_半胱氨酸(0.041-0.492,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)的lOOmL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。向每個(gè)燒瓶添加60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037mmol花色素甙，以花青素-3-()-蕓香糖甙表示)。該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH:值二7.0)至刻度線，在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣品并立即用蟻酸酸化至KI值=1.0，并用HPLC分析花色素甙的含量。降解用4種主要花色素甙(Dp-3-0-Glc,Dp-3-0-Rut，Cn-3-0-Glc，Cn-3-0-Rut)的峰面積之和的減小來表示，以4小時(shí)后剩余％計(jì)算。根據(jù)下表,確定了花色素甙實(shí)質(zhì)上是以劑量依賴方式，受二氫硫辛酸，谷胱甘肽或者L-半胱氨酸保護(hù)的。表，在37t:培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙的峰面積<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>如下所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例5樣品a)60mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0037聽1花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)被添加到一個(gè)100mL燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)至刻度線并攪拌至完全溶解。立即取1mL樣品用蟻酸酸化至pll值=1.0,并用H:PLC分析花色素甙的含量。剩余溶液在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存，并且每15分鐘取樣lmL(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解。樣品對(duì)選定的花色素甙通過HPLC進(jìn)行分析。樣品b)20mg還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.065,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，p:H值=7.0)的l()(ML燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加6()mg紅醋栗提取物[35%花色素甙](0.037,1，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)，并向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線,在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存。每15分鐘進(jìn)行采樣并對(duì)選定的花色素甙，通過HPLC分析樣品。根據(jù)下表,確定了當(dāng)和空白樣品對(duì)比時(shí)，在pH值=7.0,37°C下，花色素甙實(shí)質(zhì)上在谷胱甘肽存在的情況下，是更穩(wěn)定的。如花色素甙相對(duì)時(shí)間的比較衰退表明，保護(hù)作用在溶解之后立即開始,并持續(xù)至少4小時(shí)。與翠雀素-葡萄糖甙對(duì)比，花青素_葡萄糖甙的保護(hù)的改善，例證了該保護(hù)作用可能取決于花色素甙-骨架有關(guān)。然而，當(dāng)空白樣與受保護(hù)的樣品比較時(shí),翠雀素-葡萄糖甙實(shí)質(zhì)上比花青素-葡萄糖甙受到了更好的保護(hù)。對(duì)于每個(gè)受試的個(gè)體花色素甙，觀測保護(hù)效應(yīng)，例如，當(dāng)和空白試樣對(duì)比時(shí)，更多花色素甙殘留被觀測到。表，37"C培養(yǎng)后的花色素甙的峰面積(空白樣品)<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>表，37"C培養(yǎng)后的花色素甙的峰面積(GSH保護(hù)樣<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>如'————F所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例6樣品a)5mg翠雀素氯化物(0.015,1)被轉(zhuǎn)移進(jìn)入100ml燒瓶，溶解于lmL甲醇并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線。樣品在37t:帶有攪拌條件下保存。在溶解之后,培養(yǎng)15分鐘，1，2和3小時(shí)后,立即取樣。樣品用蟻酸酸化至pH值二1.0,并用H:PLC分析。樣品b)5mg二甲翠雀素氯化物(0.014,1)被轉(zhuǎn)移進(jìn)入100ml燒瓶，溶解于lmL甲醇并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線。樣品在37t:帶有攪拌條件下保存。在溶解之后，培養(yǎng)1，2和3小時(shí)后,立即取樣。樣品用蟻酸酸化至pH值二1.0，并用H:PLC分析。樣品c)5mg翠雀素氯化物(0.015聽1)與10mg谷胱甘肽(0.032,1)被轉(zhuǎn)移進(jìn)入100ml燒瓶，溶解于lmL甲醇并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線。樣品在37E帶有攪拌條件下保存。在溶解之后15分鐘,培養(yǎng)1，2和3小時(shí)后取樣。樣品用蟻酸酸化至pH值=1.()，并用HPLC分析。樣品d)5mg二甲翠雀素氯化物(0.014聽1)與10mg谷胱甘肽(0.032,1)被轉(zhuǎn)移進(jìn)入100ml燒瓶，溶解于lmL甲醇并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線。樣品在37。C帶有攪拌條件下保存。在溶解之后15分鐘,培養(yǎng)1,2和3小時(shí)后取樣。樣品用蟻酸酸化至pH值=1.()，并用HPLC分析。根據(jù)下表斷定谷胱甘肽沒有充分保護(hù)游離的花色素甙骨架。谷胱甘肽與翠雀39素或二甲翠雀素之間的摩爾比率高于2:l，其表明缺乏活性不是與谷胱甘肽的低濃度有關(guān)系。游離花色素甙的衰退幾乎不受谷胱甘肽存在的影響，其與用帶有相同骨架的花色素葡萄糖甙的觀察結(jié)果相反。表，翠雀素與二甲翠雀素在37E培養(yǎng)后的峰面積<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>BLD...低于檢測極限，NA...不適用如下所述IIPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例7樣品a)60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmol花色素甙，以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)被添加到一個(gè)lOOmL燒瓶中，添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH:值被調(diào)至如下值)至刻度線并攪拌至完全溶解。該溶液在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。其后取樣(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解，并用蟻酸酸化至pH值二1.0。樣品b)20mg還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.065,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值被調(diào)節(jié)至如下值)的l(X)mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。60rag歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmol，以花青素_3_0-葡萄糖甙表示)被添加至該燒瓶，并向燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣品并立即用蟻酸酸化至pH值=1.()，并用HPLC分析花色素甙的含量。降解用4個(gè)花色素甙的峰面積之和的減小來表示，以4小時(shí)后剩余％計(jì)算。根據(jù)F表確定了谷胱甘肽保護(hù)花色素甙，特別是在花色素甙對(duì)降解(pH值大于5)敏感的plls值-范圍內(nèi)。并非意外的是,在較低的pH值下,在這樣的pH值下花色素甙本身是穩(wěn)定的，保護(hù)作用被減弱。表，在37'C培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙殘留％<table>tableseeoriginaldocumentpage40</column></row><table>如下所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。保護(hù)效應(yīng)是一參數(shù)，其通過受保護(hù)樣品的殘留比例除以空白試樣(在選定的p:H值下，沒有還原態(tài)谷胱甘肽存在的歐洲越桔提取物)的殘留比例,計(jì)算得到。從而該差異表明了，在大約3-ll之間的pH值范圍內(nèi)，還原態(tài)L-谷胱甘肽(GSH)對(duì)歐洲越桔提取物中的花色素甙的穩(wěn)定性的作用。被注意到的是，到當(dāng)pll值上升，提取物的降解增加。在全部測試pH值中，L-谷胱甘肽(GSH)保護(hù)了花色素甙。另外，保護(hù)效應(yīng)與pH值一起提高。如上表和圖19與2()所示，在堿性環(huán)境中，谷胱甘肽具有更大的穩(wěn)定作用。實(shí)施例8樣品a)60mg谷胱甘肽(0.192,1)被轉(zhuǎn)移進(jìn)入100ml燒瓶，溶解并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線。樣品在37'C帶有攪拌條件下保存。在溶解之后，培養(yǎng)1,2，3和4小時(shí)后，立即取樣。樣品用HPLC分析GSH與GSSG(代表GSH的氧化形式)。樣品b)60mg還原態(tài)L-谷胱甘肽(0.192,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份],p:H值=7.0)的l()OraL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。添加6()mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048rnrno1，以花青素-3_0-蕓香糖甙表示)，向該燒瓶添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值二7.0)至刻度線，在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存。在溶解之后，培養(yǎng)1,2,3和4小時(shí)后，立即取樣。樣品用HPLC分析GSH與GSSG(代表GSH:的氧化形式)。根據(jù)下表確定了谷胱甘肽在37t:的含水的緩沖溶液(pH值二7.0)中，被氧化為氧化型谷胱甘肽。歐洲越桔提取物的添加對(duì)谷胱甘肽至氧化型谷胱甘肽的氧化加速了大約2-3倍，表明歐洲越桔提取物對(duì)于氧化還原反應(yīng)擔(dān)當(dāng)了伙伴的角色。根據(jù)這個(gè)結(jié)果，電偶谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽顯然具有一個(gè)相當(dāng)?shù)偷难趸€原電勢，其產(chǎn)生氧化態(tài)谷胱甘肽和還原態(tài)花色素甙。表，谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的峰面積，以及在37°C，pH值二7.0的緩沖液中培養(yǎng)后的峰面積比值。培養(yǎng)時(shí)間(小時(shí))GSH羊品峰面積GSH百分比％峰面積GSSG百分比％0476092.3394.97.71474492.0511.59.92422081.9763.214.83405378.6105120.44377773.3120923.5表，谷胱甘肽和氧化型谷胱甘肽的峰面積，以及在37°C，pH值=7.O，歐洲越桔提取物存在下的緩沖液中培養(yǎng)后的峰面積比值。培養(yǎng)時(shí)間(小時(shí))GSH+歐洲越桔樣品峰面積GSH百分比％峰面積GSSG百分比％0476092.3394.97.71407179.0126024.42337865.5172233.43304559.1203339.44246147.7244747.5如——F所述HPLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。41紅醋栗提取物的穩(wěn)定性120mg紅醋栗提取物/100mL的溶液30mg谷胱甘肽(GSH)/100mL一起，在作為培養(yǎng)基的緩沖溶液(PH值=7.0)中培養(yǎng),被用于CaCo-2吸收試驗(yàn)。這些研究提供了在谷胱甘肽存在下，用于CaCo-2測試的，在分析方法和培養(yǎng)基方面的選定的紅醋栗的主要_花色素甙的穩(wěn)定/降解的信息。翠雀素-3-0-葡萄糖甙(Dp-Glc)，翠雀素-3-0-蕓香糖甙(Dp-Rut)以及花青素-3-0-蕓香糖甙(Cn-Rut)被選擇用于分析。這些研究顯示，接受研究的兩種翠雀素-葡萄糖甙，比花青素-蕓香糖甙對(duì)降解更加敏感。Dp-glc在規(guī)定條件下比Dp-rut更敏感。接受研究的全部花色素甙在類似腸液的培養(yǎng)基中，比在緩沖溶液中略加穩(wěn)定(見圖13和14)。該穩(wěn)定性的提高很可能由復(fù)合介質(zhì)(最終再循環(huán)谷胱甘肽)中推定的促穩(wěn)定組分的存在所導(dǎo)致。CaCo-2細(xì)胞與120rag紅醋栗提取物和3()rag谷胱甘肽/1()OraL介質(zhì)一起，在37。C培養(yǎng)2小時(shí)。在30,60和120分鐘時(shí),處置3個(gè)點(diǎn)板試樣，通過收集培養(yǎng)基并提取被吸收進(jìn)入細(xì)胞的花色素甙，進(jìn)行分析。如圖15所示，接受研究的3個(gè)花色素甙全部被吸收進(jìn)入CaCo-2細(xì)胞。對(duì)于Cn-Rut，在培養(yǎng)60分鐘之后，觀察到最大吸收。在這個(gè)時(shí)間點(diǎn)，CaCo-2細(xì)胞中的花色素甙的回收率接近于培養(yǎng)基上層清液中測定濃度的2.5%。最有趣的是,該吸收％類似于緩沖介質(zhì)和培養(yǎng)基(無細(xì)胞)中的花色素甙的穩(wěn)定性。進(jìn)一歩觀測到，對(duì)于所有花色素甙，最大吸收在培養(yǎng)60分鐘后出現(xiàn)。6()mg歐洲越桔提取物±3()nig谷胱甘肽/1(X)mL細(xì)胞-游離培養(yǎng)基在37°C保存1小時(shí)。在培養(yǎng)期之前或之后，針對(duì)歐洲越桔提取物中的15種花色素甙進(jìn)行樣品分析。這個(gè)研究提供了，在CaCo-2測試期間適用的條件下，有關(guān)在培養(yǎng)基(pH值二7.0)中花色素甙的基本穩(wěn)定性的信息。其次，闡明了谷胱甘肽對(duì)穩(wěn)定性的作用。如圖16所示，所有花色素甙通過谷胱甘肽趨于穩(wěn)定。對(duì)于翠雀素-葡萄糖甙，觀測到了最顯著的穩(wěn)定化作用。這具有重要性，因?yàn)榫蚿H值=7.0時(shí)的降解而言,翠雀素_葡萄糖甙是最敏感的歐洲越桔葡萄糖甙。根據(jù)這個(gè)分析研究，根據(jù)PH值二7.0時(shí)的降解，確定了谷胱甘肽保護(hù)花色素甙。此外,人們注意到谷胱甘肽保護(hù)了存在于歐洲越桔中的所有花色素-結(jié)構(gòu)。保護(hù)作用的詳細(xì)分析顯示，在保護(hù)效力和花色素的化學(xué)結(jié)構(gòu)之間存在一種趨勢。翠雀素，最敏感的結(jié)構(gòu)，在最大程度上趨于穩(wěn)定，而對(duì)于最穩(wěn)定的結(jié)構(gòu)(花青素)，該保護(hù)作用相對(duì)較低?？傊?，接受研究的所有花色素甙,在PH值二7.0,37。C，谷胱甘肽存在1小時(shí)的條件下，其降解小于25%。CaCo-2細(xì)胞與60mg歐洲越桔提取物一起，在有Z無30mg谷胱甘肽/100mL介質(zhì)的情況下，在37。C培養(yǎng)1小時(shí)。其后處置3個(gè)點(diǎn)板試樣，通過收集培養(yǎng)基并提取被吸收進(jìn)入細(xì)胞的花色素甙，進(jìn)行分析。如圖17所示，接受研究的所有歐洲越桔花色素甙在谷胱甘肽的存在下，有更好的吸收。這表明了--種增強(qiáng)的的吸收和花色素甙與谷胱甘肽的穩(wěn)定化作用之間的相互關(guān)系。最有可能的解釋是，花色素甙的吸收程度取決于培養(yǎng)媒介中有效花色素甙的濃度。換句話說，該花色素甙的吸收可能依賴于細(xì)胞外部與內(nèi)部之間的濃度梯度(外部濃度越高，吸收越多)。因?yàn)轱@示出谷胱甘肽提高了細(xì)胞外部的花色素甙的穩(wěn)定性，所以進(jìn)入細(xì)胞的吸收遵循了被推薦的理論。實(shí)施例9樣品a)6()mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.()48鵬o:[花色素甙，以花青素-3-0-蕓香糖甙表示)與60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)被添加到-個(gè)lOOmL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。立即取lmL樣品用蟻酸酸化至pH值二1.O，并用HPLC分析花色素甙(新樣品)的含量。剩余溶液在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。其后另外的樣品(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解，取樣并被酸化。樣品b)20mg還原態(tài)L-半胱氨酸(0.065,1)與60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)被添加到一個(gè)100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。然后添加60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmo1，以花青素-3-0葡萄糖甙表示)進(jìn)入該燒瓶，并攪拌至完全溶解，然后在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣并立即用蟻酸酸化至pH值=1.0，并通過HPLC分析花色素甙的含量。降解被表示為單獨(dú)峰的峰面積的減小(以4小時(shí)后的剩余％計(jì)算)。根據(jù)下表推斷，當(dāng)和空白(不受保護(hù)的)樣品對(duì)比時(shí)，花色素甙實(shí)質(zhì)上在pH值二7.()，37()C，L-半胱氨酸存在下更穩(wěn)定。在4小時(shí)后，該空白試樣顯示大約25%的花色素甙殘留被觀測到，而受保護(hù)的樣品產(chǎn)生了超過65%的花色素甙殘留。表，在37t:培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙的峰面積<table>tableseeoriginaldocumentpage43</column></row><table>Dp...翠雀素，Cn...花青素，Glc...葡萄糖甙，Gal...半乳糖甙如上所述H:PLC分析法準(zhǔn)備樣品。測試穩(wěn)定性的樣品被立即酸化(阻止降解)并在未稀釋的情況下進(jìn)樣，以下提供了詳細(xì)說明。實(shí)施例10樣品a)6()mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.()48鵬o:[花色素甙，以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)被添加到一個(gè)100mL燒瓶中，并添加磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)，攪拌至完全溶解。立即取lmL樣品用蟻酸酸化至pH值=1.0，并用HPLC分析花色素甙(新樣品)的含量。剩余溶液在37t:(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。其后另外的樣品(空白試樣)，代表不受保護(hù)的降解，取樣并酸化。樣品b-e)5，10,20或60mgL-半胱氨酸(0.041-0.492,1)被添加到一個(gè)含有60mL磷酸鈉緩沖液(5%[重量份]，pH值=7.0)的100mL燒瓶中，并攪拌至完全溶解。向每個(gè)燒瓶添加60mg歐洲越桔提取物[37%花色素甙](0.048mmo1花色素甙，以花青素-3-0-葡萄糖甙表示)。然后攪拌至歐洲越桔提取物溶解,并在37。C(水浴)和帶有攪拌條件下保存4小時(shí)。4小時(shí)后，取樣品并立即用蟻酸酸化至pH值=1.0，并用HPLC分析花色素甙的含量。降解用所有花色素甙的峰面積之和的減小來表示，以4小時(shí)后剩余％計(jì)算。根據(jù)下表，確定了花色素甙實(shí)質(zhì)上是以劑量依賴方式，受L-半胱氨酸保護(hù)。表，在37。C培養(yǎng)4小時(shí)后的花色素甙的峰面積<table>tableseeoriginaldocumentpage44</column></row><table>實(shí)施例11原料歐洲越桔膠囊，由0mnicaGmbH提供，樣品編號(hào)20070601和20070602。樣品編號(hào)20070601只含有歐洲越桔提取物，作為空白試樣。樣品編號(hào)20070602含有歐洲越桔提取物和10%半胱氨酸。5%磷酸鈉緩沖液分析方法安捷倫1100HPLC，在530nm進(jìn)行UV-VIS檢測。實(shí)驗(yàn)向100mL燒瓶中添加60.Og的5%磷酸鈉緩沖液(pH值二7.0)和來自膠囊的60.0mg歐洲越桔提取物粉末。該溶液被超聲處理至所有固體完全溶解。立即取樣，然后該燒瓶被放置于370C水浴并保持4小時(shí)，以測定花色素甙的殘留比例。結(jié)果和結(jié)論HPLC數(shù)據(jù)HPLC面積被用作化合物含量的計(jì)量標(biāo)準(zhǔn)該含量不包括非取代的花色素基兩個(gè)膠囊(2()()7()6()1和2()07()6()2)的比較下表和圖2卜26提供了通過利用半胱氨酸幫助穩(wěn)定歐洲越桔提取物的佐證。批號(hào)初始含量0時(shí)亥ij終點(diǎn)含量4小時(shí)殘留百分比％200706015327138225.9200706025008351070.144<table>tableseeoriginaldocumentpage45</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage46</column></row><table>方法CaCo-2細(xì)胞的培養(yǎng)CaCo-2細(xì)胞在Dulbeccos'sModifiedEagle培養(yǎng)基中培養(yǎng)，該培養(yǎng)基含有20%胎兒牛血清，1.2%非必需氨基酸,0.83mML-谷酰胺，1.2%青霉素-鏈霉素和().1%巰基乙醇，該培養(yǎng)是在5%二氧化碳和95%空氣的環(huán)境中進(jìn)行，環(huán)境溫度37。C。細(xì)胞在75cm2的培養(yǎng)瓶(T75)里生長，一星期后再次培養(yǎng)(每隔一天用PBS緩沖液沖洗,用胰蛋白酶洗除并轉(zhuǎn)移到一新的培養(yǎng)瓶中)。CaCo-2實(shí)驗(yàn)對(duì)于實(shí)驗(yàn)，細(xì)胞以每一點(diǎn)板3X105細(xì)胞的密度被種入6個(gè)點(diǎn)板中，并在5%二氧化碳和95X空氣的環(huán)境中，37。C下生長7到8天，直至融合。細(xì)胞用PBS緩沖液沖洗，用4mL含有歐洲越桔(30-60mg/100mL培養(yǎng)基)或紅醋栗提取物(30-60mg/100mL培養(yǎng)基)的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)30，60或120分鐘。對(duì)于穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)，使用含有30mg谷胱甘肽/100mL的培養(yǎng)基。在相應(yīng)的培養(yǎng)時(shí)間之后，從每個(gè)點(diǎn)板取900uL培養(yǎng)基并與100uL蟻酸混合。用PBS緩沖液沖洗細(xì)胞并用lmL10%蟻酸洗除細(xì)胞。細(xì)胞被超聲處理3次，每次30秒，離心10分鐘并擯棄小球。上層清液用作HPLC測試樣品。用于比較，花色素甙的穩(wěn)定性被測試，在無細(xì)胞的培養(yǎng)基中，37°C,0-120分鐘之間。如上所述，培養(yǎng)基用蟻酸穩(wěn)定。HPLC分析法(原料，儀器和方法)乙腈，甲醇(HPLC級(jí))，蟻酸(AR)，蒸餾水。對(duì)照標(biāo)準(zhǔn)花青素-3-0-葡萄糖甙(Clsalt,I:teml2()1,PolyphenolsLaboratoriesAS，擁I5威)泵MerckQuaternaryGradientpump6200自動(dòng)進(jìn)樣器MerckAS2000，檢測器IIP-MVD1050設(shè)置于520nm柱:Bischoff,Hypersil()DS，250X4.6咖流動(dòng)相:A:蟻酸/水=10/90B:甲醇/乙月青/蟻酸/水=20/20/10/50梯度分布(參見圖18)流速l.5mL/min注射體積20iiL溫度45。C檢測波長:520nm校正用花青素-3-0-葡萄糖甙5點(diǎn)校正定量根據(jù)線性回歸分析外部標(biāo)準(zhǔn)化。相對(duì)花青素-3-0-葡萄糖甙確定所有單獨(dú)的花色素甙的響應(yīng)因子。標(biāo)準(zhǔn)品制備(花青素-3-0-葡萄糖甙)轉(zhuǎn)移適當(dāng)數(shù)量的標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)入一個(gè)l(ML燒瓶并溶于1mL甲醇。燒瓶用1()%磷酸添至刻度線。在10%磷酸中制備稀釋液。樣品制備在用蟻酸穩(wěn)定花色素甙之后，分析來自培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)的測試溶液(有/無細(xì)胞和有/無穩(wěn)定劑)。樣品在注射進(jìn)入HPLC-系統(tǒng)之前，被過濾至澄清。例如，O.500g歐洲越桔提取物被溶解于有2XHCl的10mL甲醇中，并超聲處理2分鐘。lmL溶液被轉(zhuǎn)移進(jìn)入一個(gè)10mL燒瓶中，并用10%磷酸稀釋至刻度線。樣品注入HPLC-系統(tǒng)。數(shù)據(jù)評(píng)估降解％以得到的初始數(shù)值的％表示進(jìn)入細(xì)胞的吸收％指的是在相應(yīng)時(shí)間內(nèi)，培養(yǎng)基中得到的數(shù)量與細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)的數(shù)量的比值。不同pH值條件下的穩(wěn)定的花色素甙原材料歐洲越桔提取物，20070602，OmnicaGmbH還原態(tài)-谷胱甘肽，Bio-Chemicalreagent磷酸鈉緩沖液，pH值從3.()至11.()20mg還原態(tài)L-谷胱甘肽被添加到-個(gè)含有60mL5%磷酸鈉緩沖液(適當(dāng)pH值)的100mL燒瓶中。在固體完全溶解后，帶著攪拌添加60mg歐洲越桔提取物并放入37nC水浴。來自不同pH值緩沖溶液的樣品被取出并按照如上所述的方法用HPLC分析。實(shí)施例12產(chǎn)品(歐洲越桔提取物，OmnicaGmbH(漢堡))被調(diào)節(jié)至37%(m/m)花色素甙。根據(jù)新鮮歐洲越桔中花色素甙的平均含量0.3-0.4%(m/m)，該提取物代表一種100:1的濃縮物。提取物中剩余的63X大部分以存在于新鮮漿果中的蛋白質(zhì)和碳水化合物表示。500mg歐洲越桔提取物和帶有50mgL-半胱氨酸的50()mg歐洲越桔被合并用來制造以下使用的歐洲越桔Z半胱氨酸組合。以下記錄的歐洲越桔提取物是上述沒有添加半胱氨酸的產(chǎn)品。12名志愿者連續(xù)7天接受歐洲越桔提取物。為期1周的清洗期后，相同志愿者連續(xù)7天接受歐洲越桔/半胱氨酸組合。該設(shè)計(jì)是一隨機(jī)交叉觀測。在相應(yīng)處理的第l天(處理之前和處理后O.5，1.5，2.5和4小時(shí))，第4天(處理前和處理后0.5小時(shí))和第7天(處理之前和處理后0.5，1.5，2.5和4小時(shí))進(jìn)行血漿樣品取樣。該研究的主要目標(biāo)是測定存在于兩種組成中的花色素甙的血漿水平。在首輪分析中，存在于血漿中的全部花色素甙通過固態(tài)提取方式被提取，并在收集之后水解產(chǎn)生花色素。這個(gè)程序被選用來提供有關(guān)來自兩種組成的歐洲越桔花色素甙的有效吸收的信息，并用來避免由于被吸收的化合物的新陳代謝引發(fā)的錯(cuò)誤結(jié)論。每個(gè)代謝物(也就是葡糖苷酸)不會(huì)被視為來自該組成的吸收，雖然其效能歸于花色素骨架而不在于具體的甙化方式。該分析包含540nm的UV-檢測的IIPLC。定量評(píng)價(jià)以帶有可信的花色素標(biāo)準(zhǔn)品的外部標(biāo)準(zhǔn)化為基準(zhǔn)。該方法的回收率用翠雀素-3-0-葡萄糖甙和花青素-3-0-葡萄糖甙評(píng)價(jià)。在空白血漿加入這兩種歐洲越桔花色素甙，以和該研究樣品相同的方式被提取和水解?；厥章曙@示為>95%。該研究樣品的穩(wěn)定性被外標(biāo)的空白血漿樣品所證實(shí)，其被與該研究樣品完全相同的方式處理和儲(chǔ)存。應(yīng)用標(biāo)準(zhǔn)品非分割方法計(jì)算藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)?？s寫詞列表AN()VA............方差的分析Ara..................阿拉伯糖AUC...............曲線下面積AUC(?！猧nf)...........0點(diǎn)至無窮大區(qū)間的AUCAUC(?！猼).............0點(diǎn)至最后測試點(diǎn)區(qū)間的AUCAUC(?！?h)..........0點(diǎn)至8小時(shí)區(qū)間的曲線下面積e.....................消除速度常數(shù)C^...............獲得的最大血藥濃度Cn....................花青素CV...................變異系數(shù)Dp...................翠雀素Gal..................半乳糖Glc...................葡萄糖HPLC...............高效液相色譜MS..................質(zhì)譜Mv...................二甲翠雀素Pe..................甲基花青素Pt..................3'-甲花翠素t1/2...................終點(diǎn)血藥濃度半衰期T^................最大血藥濃度時(shí)間點(diǎn)(C隨)UV..................紫外研究結(jié)果圖27-40表明，當(dāng)和來自沒有添加半胱氨酸的歐洲越桔樣品對(duì)比，歐洲越桔/半胱氨酸組合在血漿中的花色素濃度的數(shù)量增加了至少兩倍。在總花色素含量以及單獨(dú)花色素含量上可以看到這一點(diǎn)。下表提供了對(duì)存在于歐洲越桔中的5種花色素(也就是花青素[Cn]，翠雀素[Dp],3'-甲花翠素[:Pt]，甲基花青素[Pe]和二甲翠雀素[Mv])進(jìn)行測量的血藥濃度的平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差(s.d.)?？偦ㄇ嗨匮帩舛?ngZmL)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>BLD...低于檢測極限(<IngZmL)，n.a....不適用總翠雀素血藥濃度(ng/mL)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差<table>tableseeoriginaldocumentpage49</column></row><table>總3'-甲花翠素血藥濃度(ng/mL)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差總3'-甲花翠素(ng/mL)歐洲越桔歐洲越桔/半胱氨酸組合時(shí)間(h)平均值s.d.平均值s.d0BLDn.a.BLDn.a.0.510.24.519.87.1第l天1.55.83.78.94.52.53.12.35.22.341.21.6L91.6第4天00.5BLD9.2n.a.4.2BLD16.8n.a.7.60BLDn.a.BLDn.a.0.514.46.729.812.6第7天1.58.14.814.36.42.53.71.96.23.741.61.52.91.5總二甲翠雀素血藥濃度(ng/mL)，平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差總二甲翠雀素(ng/mL)歐洲越桔歐洲越桔/半胱氨酸組合時(shí)間(h)平均值s.d平均值s.d0BLDn.a..BI.'Dii.a.0.510.95.421.19.6第i天1.55.23.111.25.82.52.11.55.82.641.212.31.4第4天0BLDii.a.BLDn.a.0.512.56.321.711.40BLDn.a.BLDn.a.0.514.36.834.516.4第7天1.56.43.218.57.92.53.81.89.64.441.61.23.11.9總甲基花青素血藥濃度(ng/mL),平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>實(shí)施例13樣品制備樣品A與實(shí)施例1中的空白樣相同。樣品B:48mg(9.5%按重量計(jì)的還原態(tài)谷胱甘肽)啤酒酵母提取物被添加到一個(gè)含有60mL5%磷酸鈉緩沖液(pH值二7.0)的100mL燒瓶中。該溶液被攪拌均勻，然后添加60mg(0.049mmo1花色素甙)歐洲越桔提取物并攪拌均勻。樣品被放置進(jìn)入在37匸水浴，在攪拌下保存4小時(shí)。通過HPLC監(jiān)測降解比率分析。樣品C:除啤酒酵母提取物的數(shù)量是120mg夕卜,其制備與樣品B相同。結(jié)<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>本實(shí)施例說明了啤酒酵母提取物在減少樣品中花色素甙成分的降解過程中的積極保護(hù)作用。雖然本發(fā)明己經(jīng)描述了優(yōu)選實(shí)施例,但是本領(lǐng)技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到產(chǎn)生于形式和細(xì)節(jié)上的變化并不離開本發(fā)明的主旨和范圍。本說明書自始至終引用的所有參考資料，包括
背景技術(shù)：
中的那些參考資料，均以其完整形式合并于此。通過只是運(yùn)用常規(guī)試驗(yàn)方法，那些本領(lǐng)域技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，或能夠探知很多等同于本發(fā)明于此明確描述的具體的實(shí)施例的內(nèi)容。這些等同方案被規(guī)定包含于下述權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。權(quán)利要求一種穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，其含有花色素甙提取物和含有-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其促穩(wěn)定化合物是酵母提取物、二氫硫辛酸、二氫硫辛酸衍生物、半胱氨酸、半胱氨酸衍生物、谷胱甘肽、谷胱甘肽衍生物、巰基蛋白酶、巰基金屬蛋白酶、含有半胱氨酸的縮氨酸、含有谷胱甘肽的縮氨酸、發(fā)酵的牡蠣提取物、含巰基殼聚糖、含巰基凝膠或者其混合物。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物,其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，所述的組合物在P:H為2-12之間的含水環(huán)境中是穩(wěn)定的。8.—種使花色素甙提取組合物穩(wěn)定的方法，包括將花色素甙提取物和足量的，含有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物混合的步驟，以使花色素甙穩(wěn)定。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，所述的促穩(wěn)定化合物是酵母提取物、二氫硫辛酸、二氫硫辛酸衍生物、半胱氨酸、半胱氨酸衍生物、谷胱甘肽、谷胱甘肽衍生物、巰基蛋白酶、巰基金屬蛋白酶、含有半胱氨酸的縮氨酸、含有谷胱甘肽的縮氨酸、發(fā)酵的牡蠣提取物、含巰基殼聚糖、含巰基凝膠或者其混合物。10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，所述的花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。11.根據(jù)權(quán)利要求9所述的方法，所述的花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。12.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。13.根據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。14.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，所述的穩(wěn)定化花色素甙提取組合物在環(huán)境條件下至少l天是穩(wěn)定的。15.—種pH穩(wěn)定化的花色素甙提取組合物，其含有花色素甙提取物和含有-SH基團(tuán)的促穩(wěn)定化合物。16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的p:H穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其促穩(wěn)定化合物是酵母提取物、二氫硫辛酸、二氫硫辛酸衍生物、半胱氨酸、半胱氨酸衍生物、谷胱甘肽、谷胱甘肽衍生物、巰基蛋白酶、巰基金屬蛋白酶、含有半胱氨酸的縮氨酸、含有谷胱甘肽的縮氨酸、發(fā)酵的牡蠣提取物、含巰基殼聚糖、含巰基凝膠或者其混合物。17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的pH穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。18.根據(jù)權(quán)利要求16所述的pH穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。19.根據(jù)權(quán)利要求15所述的pH:穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，所述的穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.卜10。20.根據(jù)權(quán)利要求18所述的pH穩(wěn)定化花色素甙提取組合物，所述的穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。21.—種提高花色素甙生物利用度的方法，包括給受試者提供一種含有花色素甙和含有至少-個(gè)-SH基團(tuán)化合物的花色素甙組合物的步驟，相對(duì)于缺乏含有至少--個(gè)-SH基團(tuán)的化合物的花色素甙組合物的樣本，其受試者體內(nèi)花色素甙的數(shù)量增加至少2倍。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其促穩(wěn)定化合物是酵母提取物、二氫硫辛酸、二氫硫辛酸衍生物、半胱氨酸、半胱氨酸衍生物、谷胱甘肽、谷胱甘肽衍生物、巰基蛋白酶、巰基金屬蛋白酶、含有半胱氨酸的縮氨酸、含有谷胱甘肽的縮氨酸、發(fā)酵的牡蠣提取物、含巰基殼聚糖、含巰基凝膠或者其混合物。23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法,其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。24.根據(jù)權(quán)利要求22所述的方法，其花色素甙提取物是歐洲越橘提取物、黑醋栗提取物、蔓越桔提取物、黑大豆提取物、越桔提取物、藍(lán)莓提取物或其兩種或多種混合物。25.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法,所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。26.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，所述的促穩(wěn)定化合物與花色素甙提取物的摩爾比為0.1-10。27.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，所述的花色素甙在含有至少一個(gè)-SH基團(tuán)的化合物存在下，給藥4小時(shí)之后，花色素甙的血藥濃度是在沒有含有至少一個(gè)SH基團(tuán)的化合物存在情況下的花色素甙的血藥濃度的至少2倍。全文摘要本發(fā)明描述了穩(wěn)定化的花色素甙組合物，制備該組合物的方法以及使用該組合物治療不同痛苦的方法。本發(fā)明描述了含有花色素甙和促穩(wěn)定化合物的獨(dú)特的組合物，以使所述雙組分的組合保證了所述的花色素甙不輕易地遭受降解，諸如氧化，pH值不穩(wěn)定等等。文檔編號(hào)A23L1/305GK101778576SQ200880012087公開日2010年7月14日申請日期2008年3月14日優(yōu)先權(quán)日2007年3月15日發(fā)明者托馬斯·愛丁伯格申請人:歐博康有限公司