專利名稱：煙草病毒病砂紙摩擦接種法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及煙草病害的接種方法，具體涉及煙草病毒病的機(jī)械摩擦傳播接種方法。
背景技術(shù)：
接種試驗(yàn)是植物病害研究最重要的工作，在研究植物對(duì)病原物抗性、病害循環(huán)、病害流行、病害控制、侵染過程和病原物致病性的分化等各個(gè)方面接種試驗(yàn)是前提。煙草普通花葉病(Tobacco Mosaic Virus，TMV)、煙草黃瓜花葉病(Cucumber Mosaic Virus，CMV)和煙草馬鈴薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)是煙草主要病毒病，這些煙草病毒病具有機(jī)械摩擦傳染途徑，現(xiàn)在機(jī)械摩擦傳染的煙草病毒病接種方法主要有病株汁液摩擦接種法、噴槍接種法、病組織直接接種法等，就目前的煙草病毒病接種方法而言，在接種材料非常多的情況下，每種接種方法的問題就暴露出來，如植株間接種病毒量誤差大、費(fèi)時(shí)費(fèi)力和操作難度較大等。病株汁液摩擦接種法是最常用的接種方法，其步驟是取病葉組織在研缽中研碎，加少量的水，用紗布過濾并擠出汁液，最后用稀磷酸緩沖溶液稀釋一定的比例備用。接種時(shí)，將少量細(xì)金剛砂加在汁液中或撒在接種的葉面上作為磨料，然后用手指、紗布、毛筆或小的扁刷等，蘸取汁液在葉片上來回輕輕摩擦，再用清水將葉面多余的汁液和磨料輕輕洗去。其缺點(diǎn)是程序繁瑣，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，植株間接種病毒量誤差大，特別是在大面積接種和材料多的時(shí)候尤為明顯。噴槍接種法是在病株汁液中加金剛砂，在相同的時(shí)間內(nèi)，用相同的噴射壓力，將含有少量金剛砂的病株汁液打在被接種的植株上進(jìn)行接種，其缺點(diǎn)是操作難度較大，控制在相同時(shí)間和相同壓力缺乏一定的可操作性；噴槍設(shè)備較昂貴，使試驗(yàn)成本較高。病組織直接在葉面上接種，又稱“干接法”，適用于少量接種或病組織材料很少和病毒不穩(wěn)定的情況，其缺點(diǎn)是無法進(jìn)行大量接種試驗(yàn)、傳染率較低和植株間接種病毒量誤差大。
經(jīng)過檢索，還沒有采用砂紙進(jìn)行接種的方法問世，也還沒有新的接種方法申請(qǐng)專利。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種煙草病毒病砂紙摩擦接種法，使之能夠減小植株間接種病毒量的誤差、降低實(shí)驗(yàn)成本，實(shí)現(xiàn)操作簡(jiǎn)單、快速，提高傳染率，從而克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷。
發(fā)明人長(zhǎng)期從事煙草普通花葉病(Tobacco Mosaic Virus，TMV)、煙草黃瓜花葉病(Cucumber Mosaic Virus，CMV)和煙草馬鈴薯Y病毒病(Potato Virus Y，PVY)在煙草品種抗性篩選和鑒定及其防治等方面的研究，這些煙草病毒病(如TMV、CMV、PVY和TEV等)具有汁液機(jī)械摩擦傳染途徑。發(fā)明人結(jié)合在基層單位和接種大量材料的實(shí)際，基于上述接種方法的缺陷加以改進(jìn)為煙草病毒病砂紙摩擦接種法。
發(fā)明人所提供的煙草病毒病砂紙摩擦接種法包括以下步驟1.取典型煙草病毒病癥狀的葉片，在研缽中研碎，加水，用紗布過濾并擠出汁液，然后用蒸餾水定容，得到接種液，現(xiàn)配現(xiàn)用；2.取市售的砂紙，直接使用或分成小塊，對(duì)折形成棱；3.用砂紙的棱蘸取接種液在接種植株葉片上輕輕從棱的一端劃到另一端，即完成接種。
在上述接種過程的第一步中，加水的量到達(dá)便于組織研磨即可；所述的定容是在剔出病葉的葉脈后稱重，然后按質(zhì)量體積比(W∶V)用蒸餾水稀釋至一定比例，典型病毒病葉片組織研磨汁液稀釋比例如下煙草普通花葉病(TMV) 1∶50～100(W/V)煙草馬鈴薯Y病毒病(PVY) 1∶10～50(W/V)煙草黃瓜花葉病(CMV) 1∶5～10(W/V)在上述接種過程的第二步中，通常將市售的砂紙分成4塊等面積的小塊，對(duì)折形成棱，逐塊使用。
在上述接種過程的第三步中，用砂紙棱蘸取接種液輕劃的次數(shù)依據(jù)具體接種試驗(yàn)和病毒種類而定，但每個(gè)接種植株劃的次數(shù)要相同。
發(fā)明人指出砂紙材料易得、成本低，砂面相當(dāng)于金剛砂，起到磨料的作用，可增加病毒侵入傷口和侵入點(diǎn)，提高侵染率和接種率；由于砂紙面積相等，只有棱接觸要接種的植株，這樣能夠保證接種病毒量在最小的誤差范圍內(nèi)；而現(xiàn)配現(xiàn)用接種液，對(duì)不穩(wěn)定的病毒效果明顯，還可減少緩沖溶液配制步驟。
采用本發(fā)明的煙草病毒病砂紙摩擦接種法，取材容易，操作簡(jiǎn)單、快速、誤差小，操作步驟只有三步，接種成功率為100％。適用于煙草普通花葉病(TMV)、煙草黃瓜花葉病(CMV)、煙草馬鈴薯Y病毒病(PVY)、煙草馬鈴薯X病毒病(PVX)和煙草蝕紋病毒病(TEV)等通過機(jī)械摩擦傳播的病毒病。本方法在基層單位開展病毒病田間試驗(yàn)效果非常明顯，特別適用于煙草品種抗性篩選和鑒定及其煙草病毒病防治藥劑的試驗(yàn)。


圖1為砂紙平面示意圖，圖2為砂紙折疊后示意圖。圖中1為砂面，2為砂紙對(duì)角線，3為紙面，4為棱。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例2004～2006年，每年都在貴州省大方縣進(jìn)行煙草普通花葉病病田間藥效試驗(yàn)，3畝多地的烤煙約有3500株烤煙；2004～2006年，每年都在貴州省金沙縣中國煙草良種繁殖基地進(jìn)行花葉病品種篩選和鑒定，試驗(yàn)材料有5畝地左右，約5000～6000株烤煙。
1.取典型煙草普通花葉病癥狀的葉片(剔出葉脈)20g，加少量水在研缽中研碎，用紗布過濾并擠出汁液，然后用1～5L蒸餾水定容，得到接種液；2.取市售的砂紙2張，分成等面積的8小塊，對(duì)折形成棱；3.用砂紙的棱蘸取接種液在接種植株葉片上輕輕從棱的一端劃到另一端，即完成接種。
采用煙草病毒病砂紙摩擦接種法，一個(gè)人將TMV接種到1000株烤煙上，完成接種的操作時(shí)間近1個(gè)小時(shí)左右；而用原來的病株汁液摩擦法接種，接種1000株烤煙，4個(gè)人操作要近1個(gè)小時(shí)左右完成。煙草病毒病砂紙摩擦接種法與病株汁液摩擦接種法在用工效率上節(jié)省了3倍用工；煙草病毒病砂紙接種法基本沒有技術(shù)要求，操作簡(jiǎn)單、快速，人與人之間的接種誤差也不顯著，接種成功率為100％。
權(quán)利要求
1煙草病毒病砂紙摩擦接種法，其特征在于該法包括以下步驟①取典型花葉病癥狀的病葉組織在研缽中研碎，加水，用紗布過濾并擠出汁液，然后用蒸餾水定容，得到接種液，現(xiàn)配現(xiàn)用；②取市售的砂紙，直接使用或分成小塊，對(duì)折形成棱；③用砂紙的棱蘸取接種液在接種植株葉片上輕輕從棱的一端劃到另一端，即完成接種。
2按照權(quán)利要求1所述的煙草病毒病砂紙摩擦接種法，其特征在于在上述接種過程的第一步中，加水量到達(dá)便于組織研磨即可；所述的定容是在剔出病葉的葉脈后稱重，然后按質(zhì)量體積比用蒸餾水稀釋至一定比例，典型病毒病葉片組織研磨汁液稀釋比例如下煙草普通花葉病1∶50～100煙草馬鈴薯Y病毒病 1∶10～50煙草黃瓜花葉病1∶5～10。
3按照權(quán)利要求1所述的煙草病毒病砂紙摩擦接種法，其特征在于在上述接種過程的第二步中，將市售的砂紙分成等份的小塊，對(duì)折形成棱，逐塊使用。
4按照權(quán)利要求1所述的煙草病毒病砂紙摩擦接種法，其特征在于在上述接種過程的第三步中，用砂紙的棱蘸取接種液劃的次數(shù)依據(jù)具體接種試驗(yàn)和病毒種類而定，但每個(gè)接種植株劃的次數(shù)要相同。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種煙草病毒病砂紙摩擦接種法，該法包括以下步驟①取典型煙草病毒病癥狀的病葉組織在研缽中研碎，加水，用紗布過濾并擠出汁液，然后用蒸餾水定容，得到接種液，現(xiàn)配現(xiàn)用；②取市售的砂紙，分成等份小塊，對(duì)折形成棱；③用砂紙的棱蘸取接種液在接種植株葉片上輕輕從棱的一端劃到另一端，即完成接種。該方法取材容易，操作簡(jiǎn)單、快速、誤差小，操作只需三步，接種成功率100％。本方法適用煙草普通花葉病(TMV)、煙草黃瓜花葉病(CMV)、煙草馬鈴薯Y病毒病(PVY)、煙草馬鈴薯X病毒病(PVX)和煙草蝕紋病毒病(TEV)等通過機(jī)械汁液傳染的煙草病毒病，特別適用于煙草品種抗性篩選和鑒定及煙草病毒病防治藥劑的試驗(yàn)。
文檔編號(hào)C12N7/00GK101037673SQ20071007766
公開日2007年9月19日 申請(qǐng)日期2007年2月15日 優(yōu)先權(quán)日2007年2月15日
發(fā)明者陳慶園, 郭華, 李繼新, 商勝華 申請(qǐng)人:貴州省煙草科學(xué)研究所