專利名稱：一種重組3型副流感病毒核衣殼蛋白及其抗體的制備方法
技術領域：
本發(fā)明涉及基因工程技術領域，具體涉及一種重組3型副流感病毒(parainfluenza virus)核衣殼(Nuclear capsidprotein，NP)蛋白及其抗體，以及它們的制備方法技術領域。
背景技術：
副流感病毒是人類尤其是兒童呼吸道感染的重要病原，可以引起咽炎、喉炎、氣管炎以及支氣管炎，嚴重者還會因喉阻塞而導致死亡。副流感病毒是RNA病毒，傳統(tǒng)的病毒分離培養(yǎng)難度較大，耗時較長；病毒抗體的診斷時機不容易掌握；聚合酶鏈式反應敏感性強，但不利于在基層醫(yī)院的普及；對副流感病毒感染的抗原診斷要求有特異性強敏感性高的病毒抗體。在國內，目前尚沒有一個簡便、高效的檢測體系來對臨床呼吸道感染的患兒進行副流感病毒的篩檢；進口檢測試劑盒費用很高。這一現(xiàn)狀嚴重影響了臨床上副流感病毒感染的早診斷、早預防、早治療，不能有效控制抗生素濫用，限制了人副流感病毒感染的流行病學調查研究。NP蛋白是副流感病毒的主要抗原性蛋白，其在不同型別的副流感病毒間具有一定的同源性。3型副流感病毒NP蛋白基因為1548bp。

發(fā)明內容
本發(fā)明通過抗原預測分析，并在原核表達系統(tǒng)中重組表達核衣殼蛋白抗原性片段，并經(jīng)動物免疫制備出特異性抗體。
本發(fā)明的目的在于公開了編碼重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的基因的核苷酸序列。
本發(fā)明的第二個目的在于公開了重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的氨基酸序列。
本發(fā)明的第三個目的在于公開了制備重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的方法。
本發(fā)明的第四個目的在于公開了制備抗重組3型副流感病毒核衣殼蛋白抗體的方法。
為達到上述目的，本發(fā)明采用了下述的技術方案1、核衣殼蛋白的抗原性分析用ClustalX(國家生物技術信息中心)、Antheprot軟件(法國蛋白質生物學和化學研究所研發(fā))、DNAsis(日本日立軟件公司研發(fā))等分子生物學軟件，對3型人類副流感病毒核衣殼蛋白基因序列進行分析，發(fā)現(xiàn)在副流感病毒NP蛋白的N端，145-158、181-247、341-385氨基酸殘基片段為抗原波峰集中區(qū)，即該部分為高抗原區(qū)域；2、核衣殼蛋白NP3-2抗原性基因的獲得(1)引物的設計與合成對Genbank號為NC_001796的核苷酸序列進行分析后，選取436-1176bp區(qū)間的核苷酸序列作為研究對象，用PrimerPremier軟件(加拿大Premier生物軟件國際公司)設計并合成包含了BamH I、Xho I限制性內切酶切位點的如下引物上游引物，5’cgg gat cca gaa ggg cag aaa ca 3’下游引物，5’tcc gct cga ggc ttt ctt tgg ctt c 3’(2)從3型副流感病毒標準株感染的Vero細胞中，通過反轉錄聚合酶鏈式反應(RT-PCR)擴增得到核苷酸序列如SEQ ID NO.1所示的NP3-2號目的基因片段，具體步驟如下用Trizol從3型副流感病毒標準株感染的Vero細胞中提取病毒RNA，并逆轉錄為cDNA，以cDNA為模板，通過PCR擴增，獲得目的基因片段。
其中逆轉錄反應體系向9μL RNA加入1μL Oligo dT(40μg/μL)，70℃，5分鐘；冷卻至室溫，追加5×MLV buffer，5μL；10mmol/L dNTP，2.5μL；25mmol/L MgCl2，3.75μL；RNasin，0.5μL；MMLV(200U/μL)，1μL；DEPC-H2O，2.25μL。37℃，水浴，1小時。
PCR反應體系10×buffer，5μL；10mmol/L dNTPmix，1μL；上游引物，1μL；下游引物，1μL；Taq聚合酶，1μL；25mmol/LMgCl2，3μL；DDW，40μL；模板，1μL。95℃預變性5分鐘；94℃，1分鐘，42℃，1分鐘，72℃，1分鐘，以上反應30個循環(huán)后72℃延伸5分鐘。取50μL PCR反應產(chǎn)物加上10μL 10×上樣緩沖液，在1％瓊脂糖凝膠上進行電泳，檢測PCR擴增結果，結果顯示分離片段大小為743bp。
3、重組表達質粒pGEX-5X-3/NP3-2的構建將雙限制內切酶BamH I、Xho I切割后的NP3-2號目的基因片段與內切酶BamH I、Xho I切割后的載體pGEX-5X-3靜置在反應體系中反應12-16小時，制備含有NP3-2號目的基因的重組質粒pGEX-5X-3/NP3-2。具體步驟如下3.1NP3-2號目的基因的酶切步驟將NP3-2號目的基因片段放入2μL Xho I，2μL Buf-2，37℃的反應體系中，靜置反應12-16小時后，在反應體系中加入2μL BamH I，在37℃的溫度條件下繼續(xù)酶切2小時；3.2 pGEX-5X-3質粒載體的酶切步驟將pGEX-5X-3質粒放入2μL BamH I、2μL Xho I、4μLBuf-3、26μL dH2O、37℃的反應體系中，靜置反應2小時；3.3 pGEX-5X-3/NP3-2重組表達質粒的制備取3μL酶切后的pGEX-5X-3質粒載體、5μL酶切后NP3-2號目的基因片段置于1μL T4DNA連接酶、1μL 10×buffer、13℃的反應體系中反應12-16小時，得到pGEX-5X-3/NP3-2重組表達質粒；3.4 pGEX-5X-3/NP3-2重組表達質粒的鑒定將pGEX-5X-3/NP3-2重組表達質粒轉化大腸桿菌DH5-α，篩選具有氨芐青霉素抗性的陽性轉化體，從具有氨芐青霉素抗性的菌株中提取重組質粒，經(jīng)BamH I和Xho I限制性內切酶切割后，走1％瓊脂糖凝膠顯示，所獲得的酶切片段為743bp，與預期大小一致；4、重組NP3-2蛋白的表達4.1制備感受態(tài)細胞制備SolA和SolB溶液，SolA溶液75mmol/L CaCl2、10mmol/L Tris-Cl(PH＝6.5)；SolB溶液75mmol/L CaCl2、10mmol/L Tris-Cl(PH＝6.5)、10mmol/L RbCl。
向25mL LB培養(yǎng)基中加入300μL BL21細胞，37℃、160r/m、培養(yǎng)2小時，冰浴5分鐘。4℃，5000r/m，離心5分鐘。棄去上清液，加入10mL SolA、4℃、5000r/m、離心5分鐘。再加入10mL SolB，冰浴30分鐘。4℃，5000r/m，離心5分鐘。棄去上清，加800μL SolB，4℃保存。
4.2轉化感受態(tài)細胞，篩選陽性細胞取2μL重組質粒pGEX-5X-3/NP3-2加入到200μL BL21感受態(tài)細胞中，混勻，冰浴30分鐘，42℃水浴，熱休克90秒。冰浴2分鐘，加入50μL 37℃預熱的含氨芐青霉素LB培養(yǎng)基，150r/m培養(yǎng)50分鐘。取轉化細胞100μL涂布于含有氨芐青霉素的LB瓊脂平板，37℃，培養(yǎng)過夜。
依據(jù)重組質粒載體含有氨芐青霉素抗性基因，并且只有重組質粒轉化成功的BL21細胞才能夠在含有氨芐青霉素的LB瓊脂平板上能夠生存這一特性進行陽性克隆篩選。
4.3重組NP3-2蛋白的誘導表達
從含有氨芐青霉素的LB瓊脂平板挑選2-3個陽性克隆單菌落，在含有50μg/mL氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃，200r/m培養(yǎng)2-4小時，至OD600值達0.6-0.8時，加入終濃度為1mmol/L的IPTG誘導4-6小時，4000g，離心10分鐘收集菌體。
4.4用變性SDS-PAGE凝膠檢測目的蛋白的表達情況加入1/10～1/20表達培養(yǎng)基體積的50mmol/L Tris·Cl，pH8.0；加入溶菌酶達到終濃度為50μg/ml；加入1％ Triton-1004ml，37℃水浴30分鐘；超聲破碎10秒，間歇40秒，共10-20次。4℃，12000r/min離心20分鐘。分別收集離心后的沉淀和上清，用變性SDS-PAGE凝膠檢測目的蛋白的表達情況。在上清部分，相對分子質量為53500位置有目的蛋白表達，含載體內含的相對分子質量為26000的GST。
5、重組NP3-2蛋白表達后純化重組質粒pGEX-5X-3/NP3-2在BL21中的表達產(chǎn)物為可溶性，將超聲后上清用GST親和層析進行純化取4℃保存的GST凝膠10ml，搖勻，灌柱；20ml平衡液(50mM Tris·Cl，2mM乙二胺四乙酸，pH8.0)沖洗2遍，加上待純化的可溶性表達蛋白上清20ml，10ml平衡液沖洗2遍。4ml 10mM還原型谷胱苷肽洗脫液洗脫2次，收集洗脫產(chǎn)物。變性SDS-PAGE凝膠檢測收集的液體。用比色法(Bradford)進行蛋白定量，可溶性重組蛋白NP3-2的濃度可以達到0.8～1.5mg/ml，蛋白表達量為15mg/L；6、融合蛋白的抗體制備
將所表達的融合蛋白按每只家兔500μg的劑量與弗氏佐劑充分乳化后，背部皮下多點注射免疫家兔，并設有正常對照組；免疫間隔為3周，第4次免疫7天后，耳緣靜脈取血進行試血。再次加強免疫7天后，頸動脈放血，2000r/min離心15分鐘后取血清，-20℃保存，得到抗原血清；7、制備抗體免疫活性檢測采取間接免疫熒光方法，用所制備的抗重組蛋白抗血清與3型副流感病毒感染的Vero細胞反應。取3型副流感病毒感染的Vero細胞制備的細胞涂片，1×PBS浸泡5分鐘，滴加按由低到高的濃度稀釋的家兔抗血清，37℃濕盒孵育45分鐘，含0.05％Tween-20的PBS洗兩次，每次5分鐘。滴加FITC(異硫氰酸熒光黃)標記山羊抗兔IgG抗體，37℃濕盒孵育30分鐘。含0.05％Tween-20的PBS洗兩次，每次5分鐘。滴加90％甘油，用蓋玻片封存。在感染細胞核內有特異性熒光染色反應。而用1型副流感病毒感染的Vero、甲1型和甲3型流感病毒感染的MDCK細胞及腺病毒感染的Hep-2細胞制備的細胞涂片，分別進行檢測，沒有免疫熒光染色反應。
由于采用了以上技術方案，本發(fā)明具有以下效果本研究發(fā)明基于體外在原核系統(tǒng)中大量制備3型副流感病毒核衣殼蛋白片段。原核表達體系，可以在體外表達目的片段，并經(jīng)純化獲得大量抗原。免疫動物制備高效價多克隆抗體，所制備的抗體針對副流感病毒核衣殼蛋白具有良好的免疫原性的特點而設計，本抗體為早期感染者的病毒檢測提供了基礎，并為進一步的產(chǎn)業(yè)化批量制備臨床檢測試劑盒提供了可能，與相應型3型副流感病毒核衣殼蛋白感染的Vero細胞具有較好的反應特異性。


圖1為用Antheprot軟件對3型副流感病毒NP3蛋白抗原性的預測分析結果圖。
圖2為重組pGEX-5X-3/NP3-2質粒酶切鑒定結果圖。
圖3A為重組NP3-2蛋白表達產(chǎn)物的SDS-PAGE電泳結果圖。
圖3B為重組NP3-2蛋白純化產(chǎn)物的SDS-PAGE電泳結果圖。
圖4A為間接免疫熒光反應結果陰性對照圖。
圖4B為間接免疫熒光反應結果陽性對照圖。

1、目的基因片段； 2、酶切前片斷；3、含26KDa GST的目的蛋白片段；4、未感染3型副流感病毒的Vero細胞；5、熒光著色的感染了3型副流感病毒的Vero細胞。
具體實施例方式
實施例1 M1抗原性片段基因的獲得
1、引物的設計和合成根據(jù)Antheprot軟件對NP蛋白抗原性的分析，結果如圖1所示，在副流感病毒NP蛋白的N端，145-158、181-247、341-385氨基酸殘基片段為高抗原區(qū)域，選取436-1176bp區(qū)間的核苷酸序列作為研究對象，用Primer Premier軟件設計并合成如下含BamH I、Xho I限制性內切酶切位點的引物上游引物，5’cgg gat cca gaa ggg cag aaa ca 3’下游引物，5’tcc gct cga ggc ttt ctt tgg ctt c 3’2、RT-PCR反應獲得目的基因片段用Trizol從3型副流感病毒標準株感染的Vero細胞中提取病毒RNA，向9μL RNA中加入1μL濃度為40μg/μL的Oligo dT在70℃下反應5分鐘后冷卻至室溫，追加5μL 5×MLV buffer、2.5μL 10mmol/L dNTP、3.75μL 25mmol/LMgCl2、0.5μL Rnasin、1μL濃度為200U/μL的MMLV、2.25μL DEPC-H2O、37℃下水浴1小時進行逆轉錄為cDNA；以cDNA為模板進行PCR反應，PCR反應體系為10×buffer，5μL；10mmol/L dNTPmix，1μL；上游引物，1μL；下游引物，1μL；Taq聚合酶，1μL；25mmol/L MgCl2，3μL；DDW，40μL；模板，1μL。95℃預變性5分鐘；94℃，1分鐘，42℃，1分鐘，72℃，1分鐘，以上反應30個循環(huán)后，72℃繼續(xù)反應5分鐘。
PCR反應后取6μL反應產(chǎn)物，走1％瓊脂糖凝膠電泳，獲得743bp的序列如SEQ ID NO.1所示的NP3-2目的基因片段。
實施例2 構建重組pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒實施例2-1 構建重組pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒1、將15μLNP3-2目的基因片段放入2μL Xho I、2μL Buf-2、37℃的反應體系中酶切12小時后，加入2μL BamH I，在37℃下繼續(xù)酶切2小時；2、將6μL pGEX-5X-3放入2μL BamH I、2μL Xho I、4μLBuf-3、26μL dH2O、37℃反應體系中進行酶切，靜置反應2小時；3、取5μL酶切后的NP3-2目的基因片段和3μL酶切后的pGEX-5X-3在1μL T4DNA連接酶、1μL 10×buffer、13℃的反應體系中進行連接反應12小時，得到重組的pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒；從氨芐青霉素抗性的轉化菌株中提取重組質粒，在經(jīng)過BamH I和Xho I限制性內切酶切割重組質粒，用1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定。結果如圖2所示，圖中M為λDNA/HindIII marker、Lane1和Lane3為BamH I/Xho I酶切產(chǎn)物、Lane2為酶切前片段Lane4為100bp ladder Marker，從圖中可以看出所獲得的酶切片段與預期743bp大小一致，重組的pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒構建成功。
實施例2-2 構建重組pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒按照實施例2-1的步驟，只是將步驟1中的Xho I酶切NP3-2目的基因片段的時間延到為14小時。
實施例2-3 構建重組pGEX-5X-3/NP3-2原核表達質粒按照實施例2-1的步驟，只是將步驟1中的Xho I酶切NP3-2目的基因片段的時間延到為16小時。
實施例3 用pGEX-5X-3/NP3-2質粒轉化大腸桿菌BL21細胞1、制備感受態(tài)細胞制備SolA和SolB溶液，SolA溶液75mmol/L CaCl2、10mmol/L Tris-Cl(PH＝6.5)；SolB溶液75mmol/L CaCl2、10mmol/L Tris-Cl(PH＝6.5)、10mmol/L RbCl。
向25mL LB中加入300μL BL21細胞，37℃，160r/m，培養(yǎng)2小時，冰浴5分鐘；4℃，5000r/m，離心5分鐘；棄去上清液，加入10mL SolB，冰浴30分鐘；4℃，5000r/m，離心5分鐘；棄去上清，加800μL SolB，4℃保存。
2、轉化感受態(tài)細胞，篩選陽性細胞取2μL重組質粒pGEX-5X-3/NP3-2加入到200μL BL21感受態(tài)細胞中，混勻，冰浴30分鐘，42℃水浴，熱休克90秒。冰浴2分鐘，加入50μL 37℃預熱的含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基，150r/m培養(yǎng)50分鐘。取轉化細胞100μL涂布于含有氨芐青霉素的LB瓊脂平板，37℃，培養(yǎng)過夜。
實施例4 重組NP3-2蛋白片段的誘導表達實施例4-1 重組NP3-2蛋白片段的誘導表達從含氨芐青霉素LB瓊脂平板挑選3個陽性克隆單菌落，在含有50μg/mL卡那霉素的LB培養(yǎng)基中，37℃，200r/m培養(yǎng)2小時，至OD600值達0.6-0.8時，加入終濃度為1mmol/L的IPTG誘導4小時，4000r/m，離心10分鐘收集菌體。
實施例4-2 重組NP3-2蛋白片段的誘導表達步驟如實施例4-l所述，只是將在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時間延長到3小時；IPTG誘導時間延長到5小時。
實施例4-3 重組NP3-2蛋白片段的誘導表達步驟如實施例4-1所述，只是將在LB培養(yǎng)基中培養(yǎng)時間延長到4小時；IPTG誘導時間延長到6小時。
實施例5 用變性SDS-PAGE凝膠檢測重組NP3-2蛋白的表達情況加入1/10～1/20表達培養(yǎng)基體積的50mmol/L Tris·Cl，pH8.0；加入溶菌酶達到終濃度為50μg/ml；加入1％ Triton-1004ml，37℃水浴30分鐘；超聲破碎10秒，間歇40秒，共10-20次。4℃，12000r/min離心20分鐘。分別收集離心后的沉淀和上清，用變性SDS-PAGE凝膠檢測目的蛋白的表達情況，結果如圖3A所示，其中1為蛋白Ladder樣品、2為NP3-2上清液樣品、3為NP3-2沉淀樣品。在上清部分，相對分子質量為53500位置有目的蛋白表達，含載體內含的相對分子質量為26000的GST。
實施例6 表達后蛋白的純化將超聲波破碎后上清液用GST親和層析進行純化取4℃保存的GST凝膠10ml，搖勻，灌柱；20ml平衡液(50mM Tris·Cl，2mM乙二胺四乙酸，pH8.0)沖洗2遍，加上待純化的可溶性表達蛋白上清20ml，10ml平衡液沖洗2遍。4ml 10mM還原型谷胱苷肽洗脫液洗脫2次，收集洗脫產(chǎn)物。
變性SDS-PAGE凝膠檢測收集的液體，結果如圖3B所示，其中1為蛋白Ladder樣品、2為NP3-2純化前的樣品、3為NP3-2純化后的樣品。
用比色法(Bradford)進行蛋白定量，可溶性重組蛋白NP3-2的濃度可以達到0.8～1.5mg/ml，蛋白表達量為15mg/L；實施例7 抗重組NP3-2蛋白的抗體的制備用純化重組M蛋白免疫家兔，具體步驟如下第一天，每只家兔取500μg重組蛋白，與弗氏完全佐劑(1∶1＝V∶V)充分乳化，背部皮下多點注射(1.0ml/只家兔)；第21天，每只家兔取500μg重組蛋白，與弗氏不完全佐劑(1∶1＝V∶V)充分乳化，背部皮下多點注射(1.0ml/只家兔)，以上步驟再重復3次。第4次免疫7天后，耳緣靜脈取血進行試血。再次加強免疫，免疫成分、劑量、途徑同第二次免疫，7天后，頸動脈放血，1500r/m，15分鐘，離心制備抗血清，將得到的抗原血清置-20℃凍存?zhèn)溆谩?br> 實施例8 抗血清免疫活性鑒定用間接免疫熒光方法，將所制備的抗血清與3型副流感病毒感染的Vero細胞進行反應，同時設立陰性對照，將抗血清與正常Vero細胞進行反應。取所制備的抗重組蛋白NP3-2的抗血清與細胞涂片反應，并經(jīng)FITC標記的山羊抗兔IgG(稀釋度為1∶1000)放大反應，熒光顯微鏡下觀察。結果如圖4所示在所制備的抗血清滴度為1∶800時，在3型副流感病毒感染細胞核內點狀熒光著色。其中A圖為陰性對照圖抗重組NP3-2蛋白抗體與正常Vero細胞的間接免疫熒光反應結果。B圖為陽性對照圖抗重組NP3-2蛋白抗體(稀釋度1∶800)與3型副流感病毒感染的Vero細胞的間接免疫熒光反應結果。
序列表<110>首都兒科研究所<120>一種重組3型副流感病毒核衣殼蛋白及其抗體的制備方法<130>
<160>2<170>PatentIn version 3.1<210>1<211>741<212>DNA<213>Human parainfluenza virus 3<220>
<221>CDS<222>(1)..(741)<223>
<400>1aac ggc aga aac aat tca acg att gaa gat ctt gtt cac aca ttt ggg 48Asn Gly Arg Asn Asn Ser Thr Ile Glu Asp Leu Val His Thr Phe Gly1 5 10 15tat cca tca tgt tta gga gct ctt ata ata cag atc tgg ata gtt ttg 96Tyr Pro Ser Cys Leu Gly Ala Leu Ile Ile Gln Ile Trp Ile Val Leu20 25 30gtc aaa gcc atc act agc atc tca ggg tta aga aaa ggc ttt ttc act144Val Lys Ala Ile Thr Ser Ile Ser Gly Leu Arg Lys Gly Phe Phe Thr35 40 45cga tta gag gct ttc aga caa gat gga aca gtg caa gca ggg ctg gta192Arg Leu Glu Ala Phe Arg Gln Asp Gly Thr Val Gln Ala Gly Leu Val
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1.一種編碼重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的基因，其序列如SEQ ID NO.1所述。
2.權利要求1所述的基因編碼表達的重組3型副流感病毒核衣殼蛋白，其氨基酸序列如SEQ ID NO.2所述。
3.權利要求2所述的重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的制備方法，包括以下步驟(1)將權利要求1所述的基因插入質粒載體中；(2)將含有目的基因的質粒載體轉化入大腸桿菌中；(3)用含氨芐青霉素的LB培養(yǎng)基對步驟(2)中獲得的含目的基因的大腸桿菌進行選擇；(4)用含卡那霉素的培養(yǎng)基培養(yǎng)步驟(3)中選擇出的含有目的基因的大腸桿菌，收集菌體；(5)用超聲波對步驟(4)中的菌體進行破碎，并用GST凝膠進行親和層析純化，得到重組3型副流感病毒抗原蛋白。
4.權利要求3所述的重組3型副流感病毒抗原蛋白的制備方法，其中所述的載體為pGEX-5X-3質粒。
5.權利要求3或4所述的重組3型副流感病毒抗原蛋白的制備方法，其中所述的大腸桿菌為BL21大腸桿菌。
6.包含有權利要求1所述的編碼重組3型副流感病毒抗原蛋白的基因的重組載體pGEX-5X-3/NP3-2。
7.權利要求2所述的重組3型副流感病毒核衣殼蛋白的抗體的制備方法，其特征在于該抗體是用權利要求2中的重組3型副流感病毒核衣殼蛋白對家兔進行免疫獲得的，具體步驟如下(1)第1天，取重組3型副流感病毒核衣殼蛋白與弗氏完全佐劑充分乳化，背部皮下多點注射；(2)3周后，取重組3型副流感病毒核衣殼蛋白與弗氏不完全佐劑充分乳化，背部皮下多點注射；(3)將上述步驟(1)和(2)重復進行3次；(4)第4次免疫7天后，耳緣靜脈取血進行試血，再次加強免疫，步驟同(2)；(5)再次加強免疫7天后，對家兔采取耳中動脈采血或頸動脈采血中的一種進行血液提取，2000r/m，15分鐘，離心制備抗血清，于-20℃凍存?zhèn)溆谩?br> 8.權利要求2所述的重組3型副流感病毒核衣殼蛋白在制備抗體中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及生物工程產(chǎn)品的生產(chǎn)及應用技術領域，具體涉及一種重組3型副流感病毒核衣殼蛋白、編碼該蛋白的基因以及該蛋白的生產(chǎn)方法及作為制備抗體的應用領域。本發(fā)明通過對3型副流感病毒核衣殼蛋白抗原性的分析，選取抗原性較高的區(qū)域運用分子生物學方法進行抗原基因片段的體外重組并制備抗原基因片段對應的抗原蛋白，從而制備相應的抗體，解決了目前尚沒有一個簡便、高效的檢測體系來對臨床呼吸道感染的患兒進行副流感病毒的篩檢和進口檢測試劑盒費用很高的缺點。
文檔編號C12N1/21GK1793369SQ200510123600
公開日2006年6月28日 申請日期2005年11月23日 優(yōu)先權日2005年11月23日
發(fā)明者辛若雷, 徐婧瑤, 張勤, 錢淵, 王芳, 張霆 申請人:首都兒科研究所