專利名稱：春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及一種借助于基本培養(yǎng)基附加不同成份對(duì)春蘭進(jìn)行種子育苗的方法。
背景技術(shù)：
春蘭是地生蘭的一種，原產(chǎn)中國(guó)，栽培歷史悠久，不僅花姿優(yōu)美，花香幽雅，被譽(yù)為“花中君子”；而且葉色翠綠，有“看葉勝看花”之贊，另外它還有很高的藥用價(jià)值，可治療多種疾病，隨著世界經(jīng)濟(jì)的增長(zhǎng)，中國(guó)地生蘭特別是春蘭的稀有珍貴品種的需求也在隨之增大。
蘭屬(Cymbidium)植物種子的萌發(fā)，已積累了許多材料，但是蘭屬植物中的一些地生蘭的種子不易人工使之萌發(fā)，一般將這類種子稱為難萌發(fā)種子。春蘭品種雖多，但都是從野生的自然變異中選擇出來的，春蘭的雜交育種工作還沒有完全展開，主要原因是在有性繁殖中存在一些問題，如播種后胚不活動(dòng)?？茖W(xué)家研究發(fā)現(xiàn)，春蘭種子非常小，有一層極薄的膜質(zhì)種皮，種皮內(nèi)通常有一個(gè)發(fā)育很差的胚，沒有胚乳和子葉，沒有養(yǎng)分貯藏器官，只是一團(tuán)沒有分化的細(xì)胞。由于沒有解決大量繁殖的問題，導(dǎo)致農(nóng)民上山大量采挖野生春蘭，自然資源受到嚴(yán)重破壞，在交通稍為方便的地區(qū)，已難以找到野生春蘭植株。
自古至今，春蘭的優(yōu)良品種只是從自然變異中選擇，費(fèi)時(shí)費(fèi)事效率低，品種改良慢，園藝事業(yè)發(fā)展到今天，現(xiàn)代育種手段幾乎已經(jīng)把所有的花卉改變了面貌，唯獨(dú)在春蘭中尚未廣泛應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于克服上述不足，提供一種采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法，以改變上述完全靠大量野生資源，并從中選擇少量的自然變異植株的落后狀態(tài)。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的一種采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于它包括以下工藝步驟a)外植體的選取取春蘭未裂開的蒴果，為外植體；b)種子處理用70～75％酒精浸泡20～30秒或用藥棉蘸70～75％酒精揩試春蘭蒴果表面，切開春蘭蒴果，取出春蘭粉沫狀種子，裝入細(xì)布袋內(nèi)，用70～75％酒精浸泡30～45秒，無菌水沖洗多次，瀝干水，再放入0.08～0.12mol/LNaoH溶液中處理8～10分鐘，無菌水沖洗多次，瀝干水，最后放入10.5±2％次氯酸鈉溶液中6～8分種，無菌水沖洗多次，瀝干水待用；c)種子萌發(fā)把經(jīng)處理的春蘭種子均勻地播種在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，每天光照14～16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000～1500lux，溫度23±2℃，培養(yǎng)160～180天，即可生長(zhǎng)為原球莖，所述的種子萌發(fā)培養(yǎng)基為美國(guó)花寶1號(hào)2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激動(dòng)素4～6mg/L+瓊脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培養(yǎng)基PH值5.0～6.0；
d)繼代培養(yǎng)將原球莖轉(zhuǎn)接到上述同樣的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)50～60天，長(zhǎng)成新芽或原球莖，以后不斷切割原球莖繼代，即可幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)。
本發(fā)明采用春蘭種子組織培育方法，所述的1/2MS有機(jī)成份為肌醇50mg/L+煙酸0.25mg/L+鹽酸吡哆醇0.25mg/L+鹽酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
本發(fā)明采用春蘭種子組織培育方法，既可繁殖優(yōu)良品種，又可從種子實(shí)生苗中選擇優(yōu)異蘭株，避免花費(fèi)大量獎(jiǎng)金，每年派人到山區(qū)采集或收購(gòu)蘭苗，減少對(duì)野生資源的破壞，保護(hù)生態(tài)環(huán)境。本發(fā)明方法可行，操作簡(jiǎn)便，為人們進(jìn)行雜交育種，選擇新的蘭花品種，提供了一種有效堂途徑。
具體實(shí)施例方式下面為本發(fā)明采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法的最佳方式a)、外植體10～11月份取春蘭未裂開由黃轉(zhuǎn)褐的春蘭蒴果，為外植體；b)、種子處理用70～75％酒精浸泡20～30秒或用藥棉蘸70～75％酒精揩試春蘭蒴果表面，尤其注意蒴果縱溝處揩試干凈，帶進(jìn)操作室備用，在超凈工作臺(tái)內(nèi)，用無菌紙墊著，用解剖手術(shù)刀縱向切開春蘭蒴果，取出春蘭粉沫狀種子，裝入已消毒的細(xì)布袋內(nèi)，用70～75％酒精浸泡消毒30～45秒，無菌水沖洗3～4次，瀝干水，再放入已滅菌的0.08～0.12mol/LNaoH溶液中處理8～10分鐘，無菌水沖洗3～4次，瀝干水，最后放入10.5±2％次氯酸鈉溶液中6～8分種，無菌水沖洗3～4次，瀝干水待用；c)、種子萌發(fā)將消毒好的黃豆粒大的春蘭種子塊接種到改良美國(guó)花寶1號(hào)2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激動(dòng)素4～6mg/L+瓊脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培養(yǎng)基PH值5.0～6.0的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中，擰好瓶蓋，利用培養(yǎng)基表面的冷凝水，搖蕩培養(yǎng)瓶，使種子在瓶?jī)?nèi)分布均勻，放入培養(yǎng)基培養(yǎng)，每天光照14～16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000～1500lux，溫度23±2℃，培養(yǎng)160～180天，即可生長(zhǎng)為青綠色原球莖。所述的1/2MS有機(jī)成份為肌醇50mg/L+煙酸0.25mg/L+鹽酸吡哆醇0.25mg/L+鹽酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
d)、繼代培養(yǎng)將原球莖轉(zhuǎn)接到種子萌發(fā)的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)50～60天，長(zhǎng)成新芽或原球莖，以后不斷切割原球莖繼代，即可幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)。
本發(fā)明所述的美國(guó)花寶1號(hào)，其英文名稱Hyponex，由美國(guó)制造，其保證成份氮為7％，水溶性磷酐為6％，水溶性氧化鉀為19，含有多種微量元素。
權(quán)利要求
1.一種采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于它包括以下工藝步驟a)外植體的選取 取春蘭未裂開的蒴果，為外植體；b)種子處理 用70～75％酒精浸泡20～30秒或用藥棉蘸70～75％酒精揩試春蘭蒴果表面，切開春蘭蒴果，取出春蘭粉沫狀種子，裝入細(xì)布袋內(nèi)，用70～75％酒精浸泡30～45秒，無菌水沖洗多次，瀝干水，再放入0.08～0.12mol/LNaoH溶液中處理8～10分鐘，無菌水沖洗多次，瀝干水，最后放入10.5±2％次氯酸鈉溶液中6～8分種，無菌水沖洗多次，瀝干水待用；c)種子萌發(fā) 把經(jīng)處理的春蘭種子均勻地播種在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，每天光照14～16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000～15001ux，溫度23±2℃，培養(yǎng)160～180天，即可生長(zhǎng)為原球莖，種子萌發(fā)培養(yǎng)基為美國(guó)花寶1號(hào)2～4g/L+蛋白胨3～4g/L+1/2MS+吲哚乙酸0.5～1mg/L+激動(dòng)素4～6mg/L+瓊脂6～8g/L+蔗糖20～30g/L，培養(yǎng)基PH值5.0～6.0；d)繼代培養(yǎng) 將原球莖轉(zhuǎn)接到上述同樣的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)50～60天，長(zhǎng)成新芽或原球莖，以后不斷切割原球莖繼代，即可幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法，其特征在于所述的1/2MS有機(jī)成份為肌醇50mg/L+煙酸0.25mg/L+鹽酸吡哆醇0.25mg/L+鹽酸硫胺素0.05mg/L+甘氨酸1mg/L。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種采用春蘭種子組織培養(yǎng)育苗方法，它包括以下工藝步驟取春蘭未裂開的蒴果，為外植體；用酒精浸泡或用藥棉蘸酒精揩試春蘭蒴果表面，切開春蘭蒴果，取出春蘭粉沫狀種子，裝入細(xì)布袋內(nèi)，用酒精浸泡，再放入0.08～0.12mol/L NaoH溶液中處理8～10分鐘，最后放入10.5±2％次氯酸鈉溶液中6～8分種；把經(jīng)處理的春蘭種子均勻地播種在種子萌發(fā)培養(yǎng)基上，每天光照14～16小時(shí)，光照強(qiáng)度1000～1500lux，溫度23±2℃，培養(yǎng)160～180天，即可生長(zhǎng)為原球莖；將原球莖轉(zhuǎn)接到上述同樣的種子萌發(fā)培養(yǎng)基中繼代培養(yǎng)，50～60天，長(zhǎng)成新芽或原球莖，以后不斷切割原球莖繼代，即可幾何級(jí)數(shù)增長(zhǎng)。本發(fā)明采用春蘭種子組織培育方法，既可繁殖優(yōu)良品種，又可從種子實(shí)生苗中選擇優(yōu)異蘭株。
文檔編號(hào)C12N5/04GK1799336SQ200510022588
公開日2006年7月12日 申請(qǐng)日期2005年12月16日 優(yōu)先權(quán)日2005年12月16日
發(fā)明者吳有光, 顧海燕, 曹亮 申請(qǐng)人:江蘇陽光生態(tài)農(nóng)林開發(fā)股份有限公司