專利名稱：一種不含桔霉素的功能性紅曲菌生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種不含桔霉素的功能性紅曲菌生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
紅曲米是我國的傳統(tǒng)發(fā)酵產(chǎn)品，分為庫曲，輕曲和色曲三大類，長期用于食品著色或釀酒。紅曲在古代稱為丹曲，較早的記載可追溯至唐朝后期陶谷撰寫的《清異錄》“以紅曲煮肉”；至元、明代以后，有關(guān)紅曲制備及應(yīng)用的記載日漸增多，《本草綱目》、《本草從新》認(rèn)為，紅曲“甘溫?zé)o毒”，“性溫、味甘，具有活血化瘀、健脾消食之功效，主治淤滯腹痛、食積飽脹、跌打損傷等癥”。值得一提的是，歷代對于紅曲酒，則記載有“釀酒者，則辛熱，有小毒”，如清代文獻(xiàn)中，認(rèn)為紅曲酒“性熱，不宜多飲”。至于紅曲所釀成的酒性熱，有小毒的說法，多年來一直是不解之謎。
1979年，日本遠(yuǎn)藤章從紅色紅曲菌(Monascus ruber)的培養(yǎng)液中發(fā)現(xiàn)為人體膽固醇合成關(guān)鍵酶抑制劑的活性物質(zhì)，命名為Monacolin K(莫納可林K，也作Lovastatin，Mevinolin)；1981年香港WangHin-Chung等人發(fā)現(xiàn)粗萃取的紅曲色素具有抗菌活性，當(dāng)時(shí)將其命名為MonascidinA，但在1995年法國Blanc等人的研究發(fā)現(xiàn)其和Penicillium Citrinum所產(chǎn)生Citrinin(真菌毒素桔霉素)在吸收光譜、NMR、MS等分析方面具有相同的特征，被認(rèn)定與Citrinin為同一物質(zhì)，是一種具有神經(jīng)毒性的次級(jí)代謝產(chǎn)物，它是一種腎毒素物質(zhì)。此后，紅曲菌功能性代謝產(chǎn)物的研究十分活躍，法國、日本、美國、荷蘭及中國先后開展了研究，肯定了紅曲及其相關(guān)產(chǎn)品中桔霉素的存在，并探討了桔霉素的測定方法及部分影響因子。近年紅曲產(chǎn)品在日本、法國等國家受到嚴(yán)格檢驗(yàn)，明確從中國進(jìn)口紅曲，必須有安全生產(chǎn)菌種及產(chǎn)品不含桔霉素。因此，如何使紅曲菌在產(chǎn)生色素和功能性代謝產(chǎn)物Monacolin K的同時(shí)抑制Monascidin A(Citrinin)的形成已成為一項(xiàng)重要課題，篩選不產(chǎn)生桔霉素的菌株，以及提高紅曲色價(jià)和功能性代謝產(chǎn)物含量的菌株和相關(guān)工藝，成為國內(nèi)外學(xué)者的研究熱點(diǎn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種不含桔霉素的功能性紅曲菌生產(chǎn)方法，紅曲菌在產(chǎn)生色素和功能性代謝產(chǎn)物Monacolin K的同時(shí)，有效抑制Monascidin A(Citrinin)的形成，產(chǎn)品不含桔霉素。
本發(fā)明工藝是建立一種變溫、調(diào)濕及調(diào)控淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料含水量的紅曲菌生產(chǎn)方法，在菌種培養(yǎng)袋或玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料中插入小通氣管，通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)室或塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量或敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，在菌絲體生長對數(shù)期以低濃度醋酸霧狀物的刺激以及加大對菌種袋或瓶的通氣量，使菌絲體培養(yǎng)階段晝夜間變溫、調(diào)濕及調(diào)控培養(yǎng)基料含水量，抑制菌絲體生長對數(shù)期分泌淀粉酶的能力，降低對淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料液化糖化速率，保持培養(yǎng)基料疏松，加速菌絲體生長速率及代謝產(chǎn)物Monacolin K的合成和積累。所獲得的功能性紅曲未檢測出桔霉素。
本發(fā)明方法的具體步驟如下
1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅曲菌菌株，包括紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem、紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went；2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料主要采用稻谷(包括稻米、糙米)、麥粒(包括小麥、大麥)、玉米、高梁等谷物，培養(yǎng)基料組成為稻谷10-96％、或麥粒10-96％、或玉米10-96％、或高梁10-96％；亦可添加麥麩4-30％，豆餅粉或大豆0.1-2％，無機(jī)鹽0.01-0.5％，醋酸或醋酸鹽0.01-0.8％，可以選用一種或一種以上；培養(yǎng)基料控制水分含量25-95％，通常35-50％；3、稻谷、麥粒、玉米、高梁可先用水浸泡或直接加水煮熟或蒸熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽、醋酸或醋酸鹽(溶于水后加入)，攪拌均勻；采用耐高溫菌種袋或玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管1至10條，輔助及加強(qiáng)菌絲體生長期間培養(yǎng)基料通氣；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min或128℃滅菌20min，冷卻至45℃以下；4、小通氣管采用可回收多次使用的竹管或不銹鋼管或耐高溫塑料管或陶瓷管；小通氣管直徑為4-12mm，通常為6-8mm；長度為100-350mm，通常為150-250mm；管壁排列有序或無序地鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.5-2mm，通常為1-1.2mm；5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用40％以上熟石灰水或飽和熟石灰水浸泡、干燥處理備用；6、接種固體菌種或液體菌種，可采用散播法接種，促使接種后菌種多點(diǎn)萌發(fā)，使培養(yǎng)基料在極短時(shí)間布滿紅曲菌菌絲體，形成生長優(yōu)勢。接種量為1-15％，通常為2-6％；菌絲體培養(yǎng)溫度16-34℃，通常為19-28℃；7、在紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸；通過晝夜間調(diào)控培養(yǎng)室或塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量及敞開式通風(fēng)系統(tǒng)拉大晝夜間溫差，調(diào)控晝間菌絲體培養(yǎng)溫度為20-34℃，通常為24-27℃；相對濕度65-95％，通常為75-90％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度為14-26℃，通常為16-23℃；相對濕度40-70％，通常為45-60％；實(shí)現(xiàn)晝夜之間培養(yǎng)環(huán)境溫差變溫及調(diào)濕的適應(yīng)紅曲菌菌絲體快速生長和功能性代謝產(chǎn)物合成和積累的良好培養(yǎng)環(huán)境。
8、從紅曲菌菌絲體生產(chǎn)旺盛的生長對數(shù)期開始，晝間或夜間采用0.01-0.05％醋酸稀釋液在培養(yǎng)室或塑膜溫室向上空輕微噴霧1-2次，使培養(yǎng)室上空彌漫醋酸稀釋液稀薄霧狀物。
本發(fā)明涉及的無機(jī)鹽為硫酸鎂、碳酸鈣、磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀的一種或一種以上。
研究表明，菌種的篩選是提高功能性紅曲色價(jià)、代謝產(chǎn)物Monacolin K含量及降低桔霉素產(chǎn)量的首要因素。紅曲菌代謝產(chǎn)物Monacolin K的積累一般在菌絲體培養(yǎng)后期達(dá)到最高峰，由于傳統(tǒng)工藝中紅曲菌培養(yǎng)后期淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料被紅曲菌分泌旺盛的淀粉酶液化出現(xiàn)培養(yǎng)基料通氣環(huán)境惡化，雜菌伴隨而生，紅曲菌在惡劣的生長環(huán)境下次級(jí)代謝產(chǎn)物桔霉素的形成在所難免。實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，紅曲菌在生長對數(shù)期菌絲體細(xì)胞壁被液化糖化的高濃度、高滲透壓的葡萄糖溶液浸潤，菌絲體的生長代謝出現(xiàn)變態(tài)反應(yīng)，代謝產(chǎn)物Monacolin K含量降低，次級(jí)代謝產(chǎn)物桔霉素產(chǎn)量顯著增高。通過調(diào)節(jié)菌絲體生長對數(shù)期以低濃度醋酸霧狀物的刺激以及加大對菌絲體生產(chǎn)環(huán)境的通氣量，使菌絲體培養(yǎng)階段晝夜間變溫、調(diào)濕，調(diào)控培養(yǎng)基料含水量，保持培養(yǎng)基料疏松，加速菌絲體生長速率及功能性代謝產(chǎn)物Monacolin K的合成和積累。整個(gè)菌絲體培養(yǎng)周期未出現(xiàn)雜菌污染，所獲得的功能性紅曲未檢測出桔霉素。
具體實(shí)施例方式
下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實(shí)施例一1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方稻谷96％，麥麩3.8％，豆餅粉0.1％，硫酸鎂0.01％，碳酸鈣0.07％，醋酸0.02％；培養(yǎng)基料控制水分含量為38-39％。
3、稻谷先用水浸泡1h，然后煮熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管10條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用竹管；小通氣管直徑為10mm，長度為100mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.5mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用40％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為4％。菌絲體培養(yǎng)溫度25℃。
7、在第2.5天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度26℃，相對濕度90％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度20℃，相對濕度48％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為32-34％。
8、從第3天晝間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.01％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在14d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例二1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方玉米80％，稻谷19％，豆餅粉1％，碳酸鈣0.03％，磷酸二氫鉀0.1％，醋酸0.08％；培養(yǎng)基料控制水分含量為43-46％。
3、稻谷、玉米先用水浸泡1h，然后煮熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管6條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于128℃滅菌20min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用不銹鋼管；小通氣管直徑為5mm，長度為150mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為1mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用飽和熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為2％，菌絲體培養(yǎng)溫度為27℃。
7、在第2天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控培養(yǎng)室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度26℃，相對濕度90％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度18℃，相對濕度48％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為38-40％。
8、從第3天夜間開始，每日向培養(yǎng)室上空輕微噴霧0.02％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在21d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例三1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方小麥50％，玉米50％，磷酸二氫鉀0.05％，磷酸氫二鉀0.057％，培養(yǎng)基料控制水分含量為42-43％。
3、小麥、玉米直接煮熟，添加無機(jī)鹽(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管7條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用陶瓷管；小通氣管直徑為12mm，長度為200mm，管壁排列無序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為1.2mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用50％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種液體菌種，接種量為3％，菌絲體培養(yǎng)溫度為20℃。
7、在第2.5天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度29℃，相對濕度95％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度19℃，相對濕度51％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為38-42％。
8、從第3天夜間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.01％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在28d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例四1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方大麥91％，麥麩8.8％，豆餅粉0.1％，硫酸鎂0.05％，碳酸鈣0.02％，醋酸0.2％，培養(yǎng)基料控制水分含量為38-41％。
3、大麥先直接煮熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管8條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于128℃滅菌20min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用竹管；小通氣管直徑為8mm，長度為200mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為1.5mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用50％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為7％，菌絲體培養(yǎng)溫度為25℃。
7、在第2.5天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控培養(yǎng)室送風(fēng)量及排風(fēng)量通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度28℃，相對濕度94％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度17℃，相對濕度51％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為37-38％。
8、從第3天晝間開始，每日向培養(yǎng)室上空輕微噴霧0.03％醋酸稀釋液2次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在21d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例五1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方高梁97％，麥麩3％，豆餅粉0.1％，硫酸鎂0.1％，醋酸0.08％；培養(yǎng)基料控制水分含量為41-44％。
3、高梁直接煮熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管5條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用陶瓷管；小通氣管直徑為12mm，長度為230mm，管壁排列無序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.8mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用60％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為1％，菌絲體培養(yǎng)溫度為24℃。
7、在第3天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度30℃，相對濕度93％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度21℃，相對濕度55％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為29-31％。
8、從第3天夜間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.05％醋酸稀釋液2次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在28d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例六1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方糙米44％，大麥48％，麥麩8％，醋酸0.02％；培養(yǎng)基料控制水分含量為42-48％。
3、糙米、大麥先用水浸泡3h，然后蒸熟，添加麥麩、醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管9條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用竹管；小通氣管直徑為10mm，長度為100mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.5mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用60％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為12％，菌絲體培養(yǎng)溫度為27℃。
7、在第2.5天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度27℃，相對濕度92％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度20℃，相對濕度51％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為39-41％。
8、從第3天晝間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.02％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在7d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例七1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方玉米61％，高梁39％，豆餅粉0.1％，碳酸鈣0.1％，培養(yǎng)基料控制水分含量為55-60％。
3、玉米、高梁直接煮熟，添加豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸鹽(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水含量，攪拌均勻。采用玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管2條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用耐高溫塑料管；小通氣管直徑為6mm，長度為180mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.6mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用40％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為9％，菌絲體培養(yǎng)溫度為26℃。
7、在第3天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度30℃，相對溫度91％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度23℃，相對濕度60％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為60-70％。
8、從第3天夜間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.01％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在14d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例八1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方小麥96％，豆餅粉4％，碳酸鈣0.07％，磷酸二氫鉀0.15％，醋酸0.02％；培養(yǎng)基料控制水分含量為27-29％。
3、小麥先用水浸泡1h，然后蒸熟，添加豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管6條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用陶瓷管；小通氣管直徑為12mm，長度為250mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為1.6mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用45％熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為3％，菌絲體培養(yǎng)溫度為27℃。
7、在第3天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉開晝夜間溫差，晝間菌絲體培養(yǎng)溫度25℃，相對濕度95％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度16℃，相對濕度48％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為38-40％。
8、從第3天夜間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.01％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在21d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例九1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方稻谷98％，大豆2％，硫酸鎂0.35％，醋酸鈉0.01％，培養(yǎng)基料控制水分含量為44-46％。
3、稻谷、大豆直接煮熟，添加無機(jī)鹽及醋酸鈉(溶于水后加入)，調(diào)節(jié)水分含量，攪拌均勻。采用玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管6條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用不銹鋼管；小通氣管直徑為8mm，長度為180mm，管壁排列無序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.8mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用飽和熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種液體菌種，接種量為5％，菌絲體培養(yǎng)溫度為26℃。
7、在第2.5天紅曲菌菌絲體生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控培養(yǎng)室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間培菌絲體培養(yǎng)溫度28℃，相對溫度95％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度19℃，相對溫度60％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為40-50％。
8、從第3天晝間開始，每日向培養(yǎng)室上空輕微噴霧0.03％醋酸稀釋液2次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在21d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
實(shí)施例十1、篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅色紅曲菌Monascus rubber van Tieghem菌株。
2、淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料原料配方稻米80％，高梁10％，麥麩8.8％，豆餅粉1.2％，磷酸二氫鉀0.07％，醋酸0.01％，培養(yǎng)基料控制水分含量為80-88％。
3、稻米、高梁先用水浸泡2h，然后煮熟，添加麥麩、豆餅粉、無機(jī)鹽及醋酸(溶于水后加入)，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管8條；培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min，冷卻至45℃以下。
4、小通氣管采用竹管；小通氣管直徑為8mm，長度為200mm，管壁排列有序鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為1mm。
5、特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用飽和熟石灰水浸泡、干燥處理備用。
6、接種固體菌種，采用散播法接種，將菌種粒用接種棒分散于培養(yǎng)基料中，接種量為5％，菌絲體培養(yǎng)溫度為23℃。
7、在第4天紅曲菌菌絲生長旺盛的生長對數(shù)期，除去特制通氣棉塞的上層棉塞，并扎緊留下的三層紗布罩于瓶頸。通過調(diào)控塑膜溫室敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，拉大晝夜間溫差，晝間菌菌絲體培養(yǎng)溫度27℃，相對濕度94％；夜間菌絲體培養(yǎng)溫度19℃，相對濕度50％。調(diào)控培養(yǎng)基料水分含量為58-60％8、從第3天晝間開始，每日向塑膜溫室上空輕微噴霧0.035％醋酸稀釋液1次，形成稀薄霧狀物。
9、紅曲菌菌絲體培養(yǎng)周期在14d時(shí)，所獲得的功能性紅曲菌未檢測出桔霉素，未出現(xiàn)雜菌污染，功能性成分Monacolin K含量豐富。
權(quán)利要求
1.一種不含桔霉素的功能性紅曲菌生產(chǎn)方法，其特征是建立一種變溫、調(diào)濕及調(diào)控培養(yǎng)基料含水量的紅曲菌菌絲體生產(chǎn)方法，在菌種培養(yǎng)袋或玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料中插入小通氣管，通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)室或塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量或敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，在菌絲體生長對數(shù)期以低濃度醋酸霧狀物的刺激以及加大對菌絲體生產(chǎn)環(huán)境的通氣量，使菌絲體培養(yǎng)階段晝夜間變溫、調(diào)濕，調(diào)控培養(yǎng)基料含水量，保持淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料疏松，加速菌絲體生長速率及功能性代謝產(chǎn)物Monacolin K的合成和積累。
2.如權(quán)利要求1所述的生產(chǎn)方法，其特征是具體步驟為(1)篩選不產(chǎn)生桔霉素的紅曲菌菌株，包括紅色紅曲菌Monascus rubbervan Tieghem、紫色紅曲菌Monascus Purpureus Went；(2)淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料主要采用稻谷、麥粒、玉米、高梁等谷物，培養(yǎng)基料組成為稻谷10-96％、或麥粒10-96％、或玉米10-96％、或高梁10-96％，亦可添加麥麩4-30％，豆餅粉或大豆0.1-2％，無機(jī)鹽0.01-0.5％，醋酸或醋酸鹽0.01-0.8％，可以添加一種或一種以上；培養(yǎng)基料控制水分含量為25-95％；(3)稻谷、麥粒、玉米、高梁可先用水浸泡或直接加水煮熟或蒸熟，添加麥麩、豆餅粉、大豆、無機(jī)鹽、醋酸或醋酸鹽，攪拌均勻。采用耐高溫菌種袋或玻璃瓶裝填培養(yǎng)基料，在裝填培養(yǎng)基料后插入小通氣管1至10條，培養(yǎng)基料裝填后套塞特制雙層通氣棉塞，然后置于121℃滅菌30min或128℃滅菌20min，冷卻至45℃以下；(4)小通氣管采用可回收多次使用的竹管或不銹鋼管或耐高溫塑料管或陶瓷管；小通氣管直徑為4-12mm，長度為100-350mm，管壁排列有序或無序地鉆有無數(shù)小孔，孔的大小為0.5-2mm；(5)特制通氣棉塞由三層紗布罩及棉塞組成，紗布用40％以上熟石灰水或飽和熟石灰水浸泡、干燥處理備用；(6)接種固體菌種或液體菌種，可采用散播法接種，接種量為1-15％，菌絲體培養(yǎng)溫度19-34℃；(7)通過晝夜間調(diào)控培養(yǎng)室或塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量及敞開式通風(fēng)系統(tǒng)拉大晝夜之間溫差，調(diào)控晝間菌絲體培養(yǎng)溫度為20-34℃；相對濕度65-95％，夜間菌絲體培養(yǎng)溫度為14-26℃；相對濕度40-70％；(8)從第3天晝間或夜間開始，每日向培養(yǎng)室或塑膜溫室上空噴霧0.01-0.05醋酸稀釋液1-2次，形成稀薄霧狀物。
3.如權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是所說的無機(jī)鹽為硫酸鎂、碳酸鈣、磷酸二氫鉀或磷酸氫二鉀的一種或一種以上。
4.如權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是具體步驟(2)中培養(yǎng)基料控制水分含量為35-50％。
5.如權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是具體步驟(4)中小通氣管直徑為6-8mm，長度為150-250mm，管壁排列小孔的大小為1-1.2mm。
6.如權(quán)利要求2所述的生產(chǎn)方法，其特征是具體步驟(6)中接種固體菌種或液體菌種的接種量為2-6％，菌絲體培養(yǎng)溫度為19-28℃。
7.如權(quán)利要求2所述的方法，其特征是具體步驟(7)中調(diào)控晝間菌絲體培養(yǎng)溫度為24-27℃，相對濕度75-90％，夜間菌絲體培養(yǎng)溫度為16-23℃，相對濕度45-60％。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種不含桔霉素的功能性紅曲菌生產(chǎn)方法。通過調(diào)節(jié)培養(yǎng)室或塑膜溫室送風(fēng)量排風(fēng)量或敞開式通風(fēng)系統(tǒng)，在菌絲體生長對數(shù)期以低濃度醋酸霧狀物的刺激以及加大通氣量，使菌絲體培養(yǎng)階段晝夜間變溫、調(diào)濕，調(diào)控培養(yǎng)基料含水量，保持淀粉質(zhì)培養(yǎng)基料疏松，加速菌絲體生長速率及功能性代謝產(chǎn)物Monacolin K的合成和積累。整個(gè)菌絲體培養(yǎng)周期未出現(xiàn)雜菌污染，所獲得的功能性紅曲未檢測出桔霉素。
文檔編號(hào)C12N1/14GK1480526SQ0313977
公開日2004年3月10日 申請日期2003年7月10日 優(yōu)先權(quán)日2003年7月10日
發(fā)明者劉昕, 吳佳揚(yáng), 劉 昕 申請人:中山大學(xué), 吳佳揚(yáng)