專利名稱：7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法。
背景技術(shù)：
7-氨基頭孢烷酸(簡(jiǎn)稱為7-ACA)是生產(chǎn)半合成頭孢菌素類抗生素的關(guān)鍵原料。生產(chǎn)7-氨基頭孢烷酸的方法有化學(xué)方法和生物轉(zhuǎn)化方法。其中化學(xué)方法生產(chǎn)有四大步驟，過程比較復(fù)雜，所用試劑昂貴，污染嚴(yán)重，且收率較低，質(zhì)量較差。而生物轉(zhuǎn)化方法是一種較好的方法，但是在水相中結(jié)晶存在晶形小、過濾困難的問題。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的旨在提供一種頭孢菌素C的酶法轉(zhuǎn)化中獲得較大7-ACA結(jié)晶顆粒的方法。這種結(jié)晶方法克服了現(xiàn)有酶法轉(zhuǎn)化中7-ACA結(jié)晶顆粒小、過濾困難的問題。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明的結(jié)晶方法為將頭孢菌素C溶液經(jīng)過D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA?；皋D(zhuǎn)化后，加入1～15％(W/V)醋酸銨，降低溫度至0～10℃，調(diào)節(jié)PH5.7～6.0，攪拌30分鐘后，加入30～60％的冰丙酮，調(diào)PH至3.8～4.3，養(yǎng)晶3～6小時(shí)，抽濾，冰水洗滌一遍，丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥3～4小時(shí)。
本發(fā)明的另一結(jié)晶方法為將頭孢菌素C溶液經(jīng)過D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA?；皋D(zhuǎn)化后，加入1～15％(W/V)醋酸銨，加入30～60％的冰丙酮，降低溫度至0～10℃，調(diào)節(jié)PH5.7～6.0，攪拌30分鐘后，調(diào)PH至3.8～4.3，養(yǎng)晶3～6小時(shí)，抽濾，冰水洗滌一遍，丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥3～4小時(shí)。
采用上述方法，頭孢菌素C的酶法轉(zhuǎn)化中可獲得較大的7-ACA結(jié)晶顆粒，且收率高達(dá)81.8％，7-ACA含量(HPLC分析)98.1％，同時(shí)透光率≥90％，吸收度≤0.05，雜質(zhì)總含量≤3.0％。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明中使用的D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA?；笧楸竟旧a(chǎn)。D-氨基酸氧化酶為黃色或淺黃色球狀顆粒，粒徑100um≤1％，含水量≤70％，酶活力為50～65(u/g)(25℃)。GL-7-ACA?；笧榘咨蝾惏咨驙铑w粒，粒徑100um≤1％，含水量≤70％，酶活力為50～65(u/g)(25℃)。
7-ACA轉(zhuǎn)化液的制備稱取40克頭孢菌素C鈉鹽，加入1000ml 20℃去離子水，溶解后，加入到裝有2500U的固定化D-氨基酸氧化酶的酶反應(yīng)器(預(yù)熱至20℃)中，通入氧氣調(diào)壓至0.1MPa，氧氣流量0.5L/min，滴加1N氨水調(diào)PH7.2，恒溫20℃反應(yīng)，反應(yīng)過程中PH下降時(shí)滴加氨水保持PH7.2，當(dāng)反應(yīng)至PH上升時(shí)記錄反彈PH值，PH上升0.35時(shí)結(jié)束反應(yīng)；氧化反應(yīng)濾液在中轉(zhuǎn)罐中攪拌30～40分鐘，至過氧化氫濃度降至1ppm以下后，將氧化液加入到裝有5000U的固定化GL-7-ACA?；傅拿阜磻?yīng)器(預(yù)熱至25℃)中，用3N氨水調(diào)節(jié)PH至8.0，恒溫25℃反應(yīng)，當(dāng)PH下降0.01需要2分鐘以上時(shí)結(jié)束反應(yīng)，過濾，得到轉(zhuǎn)化液。
實(shí)施例1取上述所得7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為1％加入醋酸銨晶體10克，溶解后置于冰箱中降溫至0℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，按丙酮反應(yīng)液體積為60％慢慢加入冰丙酮600ml，攪拌30分鐘后，再調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉18.7克，HPLC分析含量98.3％。
實(shí)施例2取7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為1％加入醋酸銨晶體10克，溶解后按丙酮反應(yīng)液體積為60％加入丙酮600ml，置于冰箱中降溫至10℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，有少量晶體析出時(shí)停止加酸攪拌30分鐘，繼續(xù)調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉19.0克，HPLC分析含量97.4％。
實(shí)施例3取上述所得7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為8％加入醋酸銨晶體80克，溶解后置于冰箱中降溫至0℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，按丙酮反應(yīng)液體積為50％慢慢加入冰丙酮500ml，攪拌30分鐘后，再調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉18.9克，HPLC分析含量98.1％。
實(shí)施例4取7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為8％加入醋酸銨晶體80克，溶解后按丙酮反應(yīng)液體積為50％加入丙酮500ml，置于冰箱中降溫至10℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，有少量晶體析出時(shí)停止加酸攪拌30分鐘，繼續(xù)調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉19.2克，HPLC分析含量97.2％。
實(shí)施例5取上述所得7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為15％加入醋酸銨晶體150克，溶解后置于冰箱中降溫至0℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，按丙酮反應(yīng)液體積為30％慢慢加入冰丙酮300ml，攪拌30分鐘后，再調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉19.2克，HPLC分析含量97.9％。
實(shí)施例6取7-ACA轉(zhuǎn)化液1000ml，按重量體積為15％加入醋酸銨晶體150克，溶解后按丙酮反應(yīng)液體積為30％加入丙酮300ml，置于冰箱中降溫至10℃，用6N鹽酸調(diào)節(jié)PH至6.0，有少量晶體析出時(shí)停止加酸攪拌30分鐘，繼續(xù)調(diào)節(jié)PH至4.3，冰浴養(yǎng)晶6小時(shí)，抽濾，用冰去離子水洗滌一遍，用冰丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥4小時(shí)。得到7-ACA結(jié)晶粉19.5克，HPLC分析含量97.0％。
本發(fā)明7-ACA收率高，質(zhì)量好，過濾較快，適宜工業(yè)應(yīng)用。
權(quán)利要求
1.一種7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于包括以下步驟將頭孢菌素C溶液經(jīng)過D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA?；皋D(zhuǎn)化后，加入1～15％醋酸銨，降低溫度至0～10℃，調(diào)節(jié)PH5.7～6.0，攪拌3 0分鐘后，加入30～60％的冰丙酮，調(diào)PH至3.8～4.3，養(yǎng)晶3～6小時(shí)，抽濾，冰水洗滌一遍，丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥3～4小時(shí)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為1％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為15％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為8％。
5.一種7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于包括以下步驟將頭孢菌素C溶液經(jīng)過D-氨基酸氧化酶和GL-7-ACA?；皋D(zhuǎn)化后，加入1～15％醋酸銨，加入30～60％的冰丙酮，降低溫度至0～10℃，調(diào)節(jié)PH5.7～6.0，攪拌30分鐘后，調(diào)PH至3.8～4.3，養(yǎng)晶3～6小時(shí)，抽濾，冰水洗滌一遍，丙酮洗滌三遍，40℃、700mmHg真空干燥3～4小時(shí)。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為1％。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為15％。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的7-氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法，其特征在于加入的醋酸銨為8％。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種7－氨基頭孢烷酸的結(jié)晶方法。即將頭孢菌素C溶液通過兩步酶法轉(zhuǎn)化為7－ACA溶液后，加入醋酸銨，加入冰丙酮，冰浴，調(diào)pH結(jié)晶，抽濾，洗滌，真空干燥。本發(fā)明方法可使兩步酶法生產(chǎn)7－ACA的結(jié)晶顆粒較大，有利于加快結(jié)晶過濾，同時(shí)又有較高的收率和較好的成品質(zhì)量。
文檔編號(hào)C12P35/00GK1511956SQ0213988
公開日2004年7月14日 申請(qǐng)日期2002年12月30日 優(yōu)先權(quán)日2002年12月30日
發(fā)明者許崗, 朱敏, 莫章華, 曾紅宇, 柳杏輝, 唐衛(wèi)紅, 胡愛紅, 許 崗 申請(qǐng)人:湖南福來格生物技術(shù)有限公司