專利名稱：一種用于動(dòng)物細(xì)胞擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器間擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器。
背景技術(shù)：
用于重組蛋白、基因治療用重組病毒和病毒疫苗生產(chǎn)的動(dòng)物細(xì)胞大多具有貼壁依賴的特性，這類細(xì)胞必須生長(zhǎng)在載體的表面上。在工業(yè)化動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中，在達(dá)到最終生產(chǎn)規(guī)模前，需要應(yīng)用一系列逐級(jí)擴(kuò)大的反應(yīng)器培養(yǎng)種子細(xì)胞。反應(yīng)器間的接種是貼壁細(xì)胞擴(kuò)大培養(yǎng)過(guò)程中的關(guān)鍵。
目前文獻(xiàn)報(bào)道的接種方法主要有三種1.消化接種，其主要過(guò)程為利用大量的方瓶或滾瓶培養(yǎng)種子細(xì)胞，當(dāng)細(xì)胞長(zhǎng)滿生長(zhǎng)表面時(shí)，對(duì)這些方瓶或滾瓶依次消化，然后將細(xì)胞混于一處接入反應(yīng)器中，完成接種過(guò)程。(Wentz D.and Schugerl K.Enzyme Microb.Technol.，1992，14∶68-75)。
2.原位消化接種，其主要過(guò)程為當(dāng)種子反應(yīng)器中細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束后，停止攪拌，待微載體沉降后小心地將培養(yǎng)上清排出，再用緩沖液洗滌，同樣小心地排出緩沖液，接著加入胰蛋白酶消化液，消化完成后加入含高濃度血清的培養(yǎng)基，使胰蛋白酶失活。最后經(jīng)過(guò)旋轉(zhuǎn)的振動(dòng)篩板獲得單分散的細(xì)胞接入下一級(jí)反應(yīng)器，完成接種過(guò)程。(Wilktor，T.J.，Bernard J.，F(xiàn)anget L.V.，et al.USP 4664912，1987.)。
3.直接接種，其主要方法是將上一級(jí)的培養(yǎng)物，直接接入下一級(jí)的培養(yǎng)反應(yīng)器中，旨在通過(guò)細(xì)胞在新舊載體間的轉(zhuǎn)移完成接種過(guò)程。(Hu X.，Xiao C.，Huang Z.，et al.Cytotechnology，2000，3313-19；Cong C.，Chang Y.，Deng J.，et al.，Biotechnol.Lett.2001，23881-885)。
但以上這些方法存在以下不足1.第一種方法僅適用小規(guī)模的培養(yǎng)(一般培養(yǎng)體積不能超過(guò)3升)，勞動(dòng)強(qiáng)度大，容易染菌，難以適用于工業(yè)化培養(yǎng)過(guò)程。
2.第二種方法操作煩瑣，每一步操作均需等待微載體充分沉降，這需要耗費(fèi)相當(dāng)長(zhǎng)的時(shí)間，并且不可避免地導(dǎo)致細(xì)胞的損失。由于每步操作都很難將液體排除干凈，使操作效率降低。胰蛋白酶在培養(yǎng)基中的殘留不僅會(huì)作用于血清蛋白，從而降低血清的作用，而且也可直接作用于細(xì)胞，影響細(xì)胞的生長(zhǎng)。
3.第三種方法由于細(xì)胞在新舊載體間的轉(zhuǎn)移速率和效率很低，大多數(shù)細(xì)胞仍生長(zhǎng)于舊載體上，由于接觸抑制，細(xì)胞的生長(zhǎng)速率很慢，新的微載體上細(xì)胞數(shù)很少，細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，甚至有的微載體上沒(méi)有細(xì)胞貼附。這樣造成在各微載體間生長(zhǎng)差異很大，有的正處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，有的已發(fā)生衰亡，難以控制細(xì)胞生長(zhǎng)的單層匯合時(shí)間，最終所能達(dá)到的細(xì)胞密度不高，更重要的是將影響產(chǎn)物的產(chǎn)率。
綜上所述，以上方法都不適合工業(yè)化應(yīng)用推廣。

發(fā)明內(nèi)容
發(fā)明目的本發(fā)明的目的在于通過(guò)提供一種用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器間擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器，并克服現(xiàn)有技術(shù)中的前述缺陷。
技術(shù)方案為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，達(dá)到本發(fā)明的有益效果，本發(fā)明提供了一種用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器間擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器，它包括(1)由一筒體構(gòu)成的消化區(qū)，該消化區(qū)包括與筒體上端密封連接的蓋板，安裝于蓋板中央，與之可轉(zhuǎn)動(dòng)且密封連接的攪拌裝置，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)料口，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個(gè)出/入氣口；(2)由一底封頭構(gòu)成的與消化區(qū)下端周緣密封銜接的分離區(qū)，該分離區(qū)包括固定于底封頭上端面的篩網(wǎng)，所述篩網(wǎng)的孔徑大于所述動(dòng)物細(xì)胞直徑且小于動(dòng)物細(xì)胞所附著的載體直徑，與底封頭密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)/出料口，至少一個(gè)洗滌液/消化液入口和至少一個(gè)洗滌液/消化液出口。
具體地說(shuō)，構(gòu)成本發(fā)明上段消化區(qū)的主體為一筒體。該筒體的形狀一般為圓柱形，其容積與種子培養(yǎng)反應(yīng)器的體積相當(dāng)，高徑比可為0.5～1.5。該筒體的材料可選用不銹鋼或玻璃。
筒體的上端是與之密封連接的蓋板。所述蓋板的材料選用不銹鋼。蓋板的中央有一讓攪拌裝置軸通過(guò)的孔。蓋板的遠(yuǎn)離中心的周?chē)兄辽僖粋€(gè)進(jìn)料口，用于向筒體內(nèi)引入來(lái)自上級(jí)種子罐的培養(yǎng)物，至少一個(gè)出/入氣口，用于向其中引入用于筒體內(nèi)壓力調(diào)節(jié)或氣氛調(diào)節(jié)的恒壓無(wú)菌氣體。該氣體導(dǎo)管在筒體內(nèi)的出口位置必須高于液面。所述進(jìn)料口和出/入氣口與按常規(guī)密封銜接且流體相通。本發(fā)明實(shí)施方式中，實(shí)現(xiàn)所述蓋板與筒體的密封的方式為在蓋板法蘭內(nèi)安置密封圈，確保筒體上緣位于密封圈槽內(nèi)。在蓋板和底封頭之間對(duì)稱安裝若干緊固螺栓，從而均勻地將蓋板，筒體和底封頭壓緊密封。
本發(fā)明攪拌裝置的攪拌槳可為直葉槳、箭葉槳、彎葉槳、螺旋槳等槳型，其直徑為反應(yīng)器直徑的30-95％，單層或多層組合。其中，底層攪拌槳槳葉下緣距離篩網(wǎng)高度0.3-5厘米。攪拌裝置與蓋板之間的密封性可轉(zhuǎn)動(dòng)軸封采用機(jī)械軸封或磁力傳動(dòng)密封。
構(gòu)成本發(fā)明分離區(qū)主體的是與上述筒體密封銜接的底封頭。底封頭采用常規(guī)生物反應(yīng)器封頭，也可改裝成錐型封頭。其材料選用不銹鋼，利用已知方法與筒體的下端周緣實(shí)現(xiàn)嚴(yán)格的密封銜接。本發(fā)明實(shí)施方式中，實(shí)現(xiàn)所述蓋板與筒體的密封的方式為在底封頭法蘭內(nèi)安置密封圈，確保筒體下緣位于密封圈槽內(nèi)。在蓋板和底封頭之間對(duì)稱安裝若干緊固螺栓，從而均勻地將蓋板，筒體和底封頭壓緊密封。
本發(fā)明所述的篩網(wǎng)緊壓、粘接或焊接在固定環(huán)上；固定環(huán)放置于底封頭內(nèi)，篩網(wǎng)與底封頭法蘭位于同一平面，如圖2所示。篩網(wǎng)可由市售的不銹鋼篩網(wǎng)、尼龍篩網(wǎng)中選用。在選擇篩網(wǎng)時(shí)必需確保其孔徑大于種子細(xì)胞直徑且小于載體直徑，從而確保讓消化后從載體上分離的動(dòng)物細(xì)胞能通過(guò)篩網(wǎng)，而將空載體和帶有細(xì)胞的載體截留在篩網(wǎng)上。這樣，在消化后細(xì)胞從載體表面分離前，可以確保在將帶有細(xì)胞的載體截留在消化區(qū)內(nèi)的同時(shí)將消化液徹底排出消化區(qū)，從而避免殘留消化液對(duì)細(xì)胞的傷害。而且，在分離后，上述網(wǎng)孔徑可確保將空載體截留在消化區(qū)，而讓分離下來(lái)的單細(xì)胞通過(guò)篩網(wǎng)進(jìn)入底封頭，繼而流向下級(jí)反應(yīng)器。對(duì)于給定的動(dòng)物細(xì)胞和載體，本領(lǐng)域技術(shù)人員很容易獲知有關(guān)細(xì)胞直徑和載體大小的信息，從而可方便地確定所述篩網(wǎng)孔徑。在本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式中，為了避免細(xì)胞培養(yǎng)載體粘附在篩網(wǎng)上，堵塞網(wǎng)孔，降低過(guò)濾效率，本發(fā)明還對(duì)篩網(wǎng)表面進(jìn)行了硅化處理，從而有效避免載體的粘附。篩網(wǎng)的硅化可采用一氯三甲基硅烷或二氯二甲基硅烷(《精編分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指南》，科學(xué)出版社，1998年)，也可采用六甲基乙硅氧烷(《組織培養(yǎng)和分子細(xì)胞學(xué)技術(shù)》，北京出版社，1995年)該底封頭上還有與之密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)/出料口，至少一個(gè)洗滌液/消化液入口和至少一個(gè)洗滌液/消化液出口。所述進(jìn)出料口用于在消化后向本發(fā)明反應(yīng)器內(nèi)引入培養(yǎng)基，形成單細(xì)胞懸液，以便放料。同時(shí)，該出口也是所得單細(xì)胞懸液的出口，用于將其引出本發(fā)明消化反應(yīng)器，然后進(jìn)入下一級(jí)反應(yīng)器。
所述洗滌液/消化液入口和洗滌液/消化液出口分別根據(jù)需要，由相連管線上的閥門(mén)控制，將洗滌液或消化液從下往上引入本發(fā)明反應(yīng)器，在完成各自反應(yīng)后再?gòu)谋景l(fā)明反應(yīng)器底部出口引出反應(yīng)器。
在本發(fā)明反應(yīng)器的一般運(yùn)作過(guò)程中，在上級(jí)反應(yīng)器中的培養(yǎng)結(jié)束后，含有種子動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)料液通過(guò)所述蓋板上的進(jìn)料口引入消化反應(yīng)器消化區(qū)，向本發(fā)明反應(yīng)器的空氣口中通入適當(dāng)壓力(0.01-0.15MPa恒壓)的無(wú)菌氣體，提高反應(yīng)器內(nèi)壓力，將培養(yǎng)上清經(jīng)底封頭底部的進(jìn)/出料口壓出消化反應(yīng)器?；蛘咭部捎萌鋭?dòng)泵將培養(yǎng)上清從消化反應(yīng)器的底部排出。上述即其他引流方法可單用也可聯(lián)用。經(jīng)洗滌液/消化液入口，從反應(yīng)器底部引入洗滌液。洗滌后，洗滌液仍經(jīng)洗滌液/消化液出口從底部排出。經(jīng)洗滌液/消化液入口，從消化反應(yīng)器底部引入消化液。消化期間，攪拌器低速運(yùn)轉(zhuǎn)，使消化區(qū)內(nèi)的相互反應(yīng)均勻進(jìn)行，但仍可保持細(xì)胞貼附于載體上。消化反應(yīng)完成后，消化液仍經(jīng)洗滌液/消化液出口從底部排出。然后，經(jīng)底封頭底部的進(jìn)/出料口從底部引入培養(yǎng)基。此時(shí)，攪拌器高速運(yùn)轉(zhuǎn)，使得細(xì)胞從載體上完全分離，得到均勻的單分散細(xì)胞懸浮液。然后，所得單細(xì)胞懸液經(jīng)底封頭底部的進(jìn)/出料口排出，繼而引入下一級(jí)細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器中。
有益效果本消化反應(yīng)器的應(yīng)用可有效改變工業(yè)化動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)過(guò)程中的接種方式，可大大地提高細(xì)胞大規(guī)模培養(yǎng)效率，也為貼壁細(xì)胞培養(yǎng)規(guī)模的擴(kuò)大創(chuàng)造了條件。本消化反應(yīng)器應(yīng)用范圍廣泛，可用于CHO、BHK等細(xì)胞的工業(yè)化培養(yǎng)生產(chǎn)重組蛋白、Vero細(xì)胞工業(yè)化培養(yǎng)生產(chǎn)病毒疫苗和293細(xì)胞工業(yè)化培養(yǎng)生產(chǎn)基因治療用重組腺病毒等各種動(dòng)物細(xì)胞貼壁培養(yǎng)過(guò)程，而且操作方便。


圖1顯示了本發(fā)明消化反應(yīng)器的一種實(shí)施方式。
圖2顯示了本發(fā)明消化反應(yīng)器的篩網(wǎng)固定、安裝方式。
圖3顯示了本發(fā)明消化反應(yīng)器一般性運(yùn)作過(guò)程中的物流走向。
圖4顯示利用本發(fā)明消化反應(yīng)器在5升反應(yīng)器接種培養(yǎng)Vero細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
具體實(shí)施例方式
以下將結(jié)合附圖舉例說(shuō)明本發(fā)明的實(shí)施方式。但是需要指出的是，以下具體描述僅以說(shuō)明為目的，不應(yīng)將其理解成是對(duì)本發(fā)明范圍的限定。因?yàn)?，根?jù)以下描述，本領(lǐng)域一般技術(shù)人員不難根據(jù)本發(fā)明構(gòu)思，推導(dǎo)得出許多等效的改換方式，而這些理應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的范圍之內(nèi)。
實(shí)施例1在CHO細(xì)胞的培養(yǎng)中，用本發(fā)明的消化反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)從1升反應(yīng)器到5升反應(yīng)器間的接種。1升反應(yīng)器內(nèi)為微載體培養(yǎng)，工作體積為0.7升，5升反應(yīng)器內(nèi)為固定床培養(yǎng)，工作體積為3.5升。消化反應(yīng)器結(jié)構(gòu)如圖1所示，流程如圖3所示。其中，反應(yīng)器的容積是3.5升。筒體(7)的材料是玻璃，高為186mm，直徑為143mm，蓋板(8)的材料為不銹鋼，通過(guò)其中央通孔(未顯示)安裝攪拌裝置(5)，攪拌裝置與蓋板采用機(jī)械軸封。在蓋板內(nèi)安裝密封圈(未顯示)。法蘭外圍均勻分布4個(gè)緊固螺栓通孔。蓋板與筒體，如前所述，通過(guò)法蘭，密封圈和緊固螺栓(6)實(shí)現(xiàn)密封。本實(shí)施例選用彎葉型攪拌器(5)，單層槳葉，槳葉直徑為筒體直徑的95％。攪拌槳槳葉下緣距篩網(wǎng)的高度為5厘米。該攪拌槳通過(guò)固定螺釘與驅(qū)動(dòng)電機(jī)軸連接。本實(shí)施例的底封頭(4)的材料為不銹鋼，形狀為錐型，封頭密封圈槽內(nèi)放入密封圈(13)，封頭法蘭(14)外圍均勻分布4個(gè)緊固螺栓通孔。蓋板與筒體，如前所述，通過(guò)法蘭，密封圈和緊固螺栓(6)實(shí)現(xiàn)密封。在底封頭內(nèi)放入安裝了篩網(wǎng)的篩網(wǎng)固定環(huán)(12)。所述篩網(wǎng)(11)為200目316L不銹鋼篩網(wǎng)。CHO細(xì)胞的平均直徑為15μm，所用載體Cytodex-1的平均直徑為180μm，所以本實(shí)施例選擇孔徑約為60微米的篩網(wǎng)。用2％的三甲基氯硅烷的氯仿溶液對(duì)篩網(wǎng)進(jìn)行硅化處理。
運(yùn)行時(shí)，首先在消化反應(yīng)器中裝磷酸緩沖液，121℃消毒后分別通過(guò)進(jìn)料口(10)與1升的種子反應(yīng)器，通過(guò)進(jìn)/出料口(3)與5升反應(yīng)器無(wú)菌連接。當(dāng)1升反應(yīng)器中的細(xì)胞密度到每毫升1.0×106細(xì)胞數(shù)時(shí)，用無(wú)菌空氣將1升反應(yīng)器中的培養(yǎng)料液經(jīng)進(jìn)料口(10)壓入消化反應(yīng)器，然后通過(guò)出/入氣口(9)引入0.1MPa恒壓無(wú)菌空氣，升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，使培養(yǎng)上清經(jīng)消化反應(yīng)器的底部的進(jìn)/出料口(3)排凈，同時(shí)將吸附有細(xì)胞的載體截留在篩網(wǎng)上。經(jīng)底部洗滌液/消化液入口(1)引入預(yù)熱到37℃的洗滌液。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘20轉(zhuǎn)，邊攪拌邊洗滌1分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，令洗滌液通過(guò)洗滌液/消化液出口(2)排凈。經(jīng)底部洗滌液/消化液入口(1)引入預(yù)熱到37℃的消化液。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘20轉(zhuǎn)，邊攪拌邊消化6分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，令洗滌液通過(guò)洗滌液/消化液出口(2)排凈。經(jīng)底封頭底部中央的進(jìn)/出料口(3)向消化反應(yīng)器內(nèi)引入預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘120轉(zhuǎn)，攪拌6分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，使所得的均勻單細(xì)胞懸液經(jīng)進(jìn)/出料口(3)從本發(fā)明消化反應(yīng)器排出，然后泵送到下一級(jí)5升反應(yīng)器中灌注培養(yǎng)，接種密度為每毫升2×105細(xì)胞數(shù)。培養(yǎng)11天后細(xì)胞密度達(dá)到每毫升1.2×107細(xì)胞數(shù)。
實(shí)施例2在Vero細(xì)胞的培養(yǎng)中，用本發(fā)明的消化反應(yīng)器實(shí)現(xiàn)從1升反應(yīng)器到5升反應(yīng)器間的接種。1升反應(yīng)器為微載體培養(yǎng)，工作體積為0.7升，5升反應(yīng)器為固定床培養(yǎng)，工作體積為3.5升。消化反應(yīng)器結(jié)構(gòu)如圖1所示，流程如圖3所示。其中，反應(yīng)器的容積是3.5升。筒體(7)的材料是玻璃，高為186mm，直徑為143mm，蓋板(8)的材料為不銹鋼，通過(guò)其中央通孔(未顯示)安裝攪拌裝置(5)，攪拌裝置與蓋板采用機(jī)械軸封。在蓋板內(nèi)安裝密封圈(未顯示)。法蘭外圍均勻分布4個(gè)緊固螺栓通孔。蓋板與筒體，如前所述，通過(guò)法蘭，密封圈和緊固螺栓(6)實(shí)現(xiàn)密封。本實(shí)施例選用彎葉型攪拌器(5)，單層槳葉，槳葉直徑為筒體直徑的30％。攪拌槳槳葉下緣距離篩網(wǎng)的高度為0.3厘米。該攪拌槳通過(guò)固定螺釘與驅(qū)動(dòng)電機(jī)軸連接。本實(shí)施例的封頭(4)的材料為不銹鋼，形狀為錐型，封頭密封圈槽內(nèi)放入密封圈(13)，封頭法蘭(14)外圍均勻分布4個(gè)緊固螺栓通孔。蓋板與筒體，如前所述，通過(guò)法蘭，密封圈和緊固螺栓(6)實(shí)現(xiàn)密封。在底封頭內(nèi)放入安裝了篩網(wǎng)的篩網(wǎng)固定環(huán)(12)。所述篩網(wǎng)(11)為200目316L不銹鋼篩網(wǎng)。Vero細(xì)胞的平均直徑為15μm，所用載體Cytodex-1的平均直徑為180μm，所以本實(shí)施例選擇孔徑約為60μm的篩網(wǎng)。用10％的三甲基氯硅烷的氯仿溶液對(duì)篩網(wǎng)進(jìn)行硅化處理。
運(yùn)行時(shí)，首先在消化反應(yīng)器中裝磷酸緩沖液，121℃消毒后分別通過(guò)進(jìn)料口(10)與1升的種子反應(yīng)器，通過(guò)進(jìn)/出料口(3)與5升反應(yīng)器無(wú)菌連接。當(dāng)1升反應(yīng)器中的細(xì)胞密度到每毫升1.3×106細(xì)胞數(shù)時(shí)，用無(wú)菌空氣將1升反應(yīng)器中的培養(yǎng)料液經(jīng)進(jìn)料口(10)壓入消化反應(yīng)器，然后通過(guò)出/入氣口(9)引入0.1MPa恒壓無(wú)菌空氣，升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，使培養(yǎng)上清經(jīng)消化反應(yīng)器的底部的進(jìn)/出料口(3)排凈，同時(shí)將吸附有細(xì)胞的載體截留在篩網(wǎng)上。經(jīng)底部洗滌液/消化液入口(1)引入預(yù)熱到37℃的洗滌液。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘20轉(zhuǎn)，邊攪拌邊洗滌1分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，使洗滌液通過(guò)洗滌液/消化液出口(2)排凈。經(jīng)底部洗滌液/消化液入口(1)引入預(yù)熱到37℃的消化液。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘20轉(zhuǎn)，邊攪拌邊消化6分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，令洗滌液通過(guò)洗滌液/消化液出口(2)排凈。經(jīng)底封頭底部中央的進(jìn)/出料口(3)向消化反應(yīng)器內(nèi)引入預(yù)熱到37℃的培養(yǎng)基。啟動(dòng)攪拌器，每分鐘120轉(zhuǎn)，攪拌6分鐘。如前所述升高反應(yīng)器內(nèi)壓力，使所得的均勻單細(xì)胞懸液經(jīng)進(jìn)/出料口(3)從本發(fā)明消化反應(yīng)器排出，然后泵送到下一級(jí)5升反應(yīng)器中灌注培養(yǎng)，接種密度為每毫升2.6×105細(xì)胞數(shù)。培養(yǎng)4天后細(xì)胞密度達(dá)到每毫升1.6×106細(xì)胞數(shù)。圖4是利用本實(shí)施例消化反應(yīng)器在5升反應(yīng)器接種培養(yǎng)Vero細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線。
權(quán)利要求
1.一種用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器間擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器，它包括(1)由一筒體構(gòu)成的消化區(qū)，該消化區(qū)包括與筒體(7)上端密封連接的蓋板(8)，安裝于蓋板中央，與之可轉(zhuǎn)動(dòng)且密封連接的攪拌裝置(5)，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)料口(10)，與蓋板密封銜接且流體相通的至少一個(gè)出/入氣口(9)；(2)由一底封頭(4)構(gòu)成的與消化區(qū)下端周緣密封銜接的分離區(qū)，該分離區(qū)包括固定于底封頭上端面的篩網(wǎng)(11)，所述篩網(wǎng)的孔徑大于所述動(dòng)物細(xì)胞直徑且小于動(dòng)物細(xì)胞所附著的載體直徑，與底封頭密封銜接且流體相通的至少一個(gè)進(jìn)/出料口(3)，至少一個(gè)洗滌液/消化液入口(1)和至少一個(gè)洗滌液/消化液出口(2)。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消化反應(yīng)器，所述篩網(wǎng)是硅化處理過(guò)的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消化反應(yīng)器，所述攪拌裝置的攪拌槳直徑為所述筒體直徑的30-95％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消化反應(yīng)器，所述攪拌裝置具有彎葉槳。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的消化反應(yīng)器，所述攪拌裝置具有單層槳葉，槳葉下緣距離所述篩網(wǎng)的高度為0.3-5厘米。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種用于動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)反應(yīng)器間擴(kuò)大接種的消化反應(yīng)器，它具有消化區(qū)和分離區(qū)兩段式結(jié)構(gòu)，兩區(qū)間由篩網(wǎng)間隔。
文檔編號(hào)C12M1/26GK1483805SQ02137069
公開(kāi)日2004年3月24日 申請(qǐng)日期2002年9月20日 優(yōu)先權(quán)日2002年9月20日
發(fā)明者張?jiān)d, 孫祥明, 范衛(wèi)民, 陸健 申請(qǐng)人:華東理工大學(xué)