專利名稱：水稻葉片特異表達序列標簽及構(gòu)成的基因芯片的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物技術(shù)領(lǐng)域，尤其涉及水稻葉片特異表達序列標簽及構(gòu)成的基因芯片。
背景技術(shù)：
生物基因組中可轉(zhuǎn)錄表達的序列(即基因)僅占總序列的3-5％，對這部分序列進行測定，將直接導致新基因的發(fā)現(xiàn)，并獲取基因組中與產(chǎn)業(yè)化關(guān)系最為密切的信息。20世紀80年代，高通量的自動測序的出現(xiàn)，使從質(zhì)?；パa脫氧核糖核酸(Complementary DNA，簡稱cDNA)文庫隨機選取許多cDNA克隆和決定來自非載體兩端的幾百個堿基的DNA序列成為可能。這些短的DNA序列叫作“表達序列標簽”(Expressed Sequence Tags，簡稱ESTs)。表達序列標簽的概念最早是由Adams等在1992年提出來的(Nature，355，642-644)。1992年Sikela和Matsubara(Sikela，et al.Nucleic Acids Res.19，1837-1843；Matsubara，et al.Nature Genetics，2，173-179)針對獲得大量信使核糖核酸(mRNA)序列的迫切需要，提出大規(guī)?；パa脫氧核糖核酸(cDNA)測序的研究戰(zhàn)略。隨后Venter創(chuàng)立了大規(guī)模表達序列標簽技術(shù)。其基本特征就是從以質(zhì)粒為載體，構(gòu)建完成的目的組織互補脫氧核糖核酸(Complementary DNA，簡稱cDNA)文庫中，隨機選擇許多cDNA克隆，利用質(zhì)粒上攜帶的通用引物對cDNA兩端進行一輪脫氧核糖核酸序列測定，所獲得的來自3′端或5′端的幾百個堿基的非載體短脫氧核糖核酸(DNA)序列。簡而言之，表達序列標簽是來自表達基因片段3′端或5′端的短脫氧核糖核酸序列，代表一個表達基因的部分轉(zhuǎn)錄片段。
隨著生物技術(shù)的發(fā)展和生命科學發(fā)展的需要以及表達序列標簽固有的特點，近幾年，人們發(fā)明了基因芯片?；蛐酒?Biochips)的實質(zhì)就是在面積不大的基片上有序地點陣排列了一系列固定于一定位置地可尋址的生物識別分子(R.J.Lipshutz et al.，Bio Techniques 19(1995)，442-447；S.P.Fodor et al.，Nature364(1993)，555-556；S.P.Fodor et al.，Science 251(1991)，767-773；A.C.Pease et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91(1994)，5022-5026)。最初的基因芯片主要是用于DNA序列測定，基因表達譜鑒定(D.J.Lockhart et al.，Nature Biotechnol.14(1996)，1675-1680)和基因突變體的檢測和分析(Feriotto G，et al.，Hum Mutat 1999；13390-400；Hacia J.G.et al.，Nat Genet 1999；21(suppl 1)42-7；Hacia JG，etal.，Nat Genet 1999；22164-7；Nilsson P，et al.，Biotechniques 1999；26308-16)。目前，這一技術(shù)以擴展至免疫反應、受體結(jié)合等非核酸領(lǐng)域，因此基因芯片已超出了原來的范圍。1995年10月Patrick Brown和他的同事(BioTechniques，19(1995)，442-447)提出了cDNA微陣列技術(shù)，M.Schena(Science 1995；270(5235)，467-470)和D.Shalon(Genome Research 1996；6(7)，639-645)等首次制造了cDNA陣列，隨后這項技術(shù)得到了飛速的發(fā)展。運用基因芯片技術(shù)，將獲得的芯片運用雜交技術(shù)和掃描技術(shù)對基因芯片進行芯片處理、有效數(shù)據(jù)提取、分析和報告，可獲得相應的基因表達譜(Gene expression profiling)。目前DNA芯片因具有強有力性、靈活性、敏感性和相對簡單等特點而被應用在許多領(lǐng)域，如DNA序列測定、基因多態(tài)性檢測、新基因的發(fā)現(xiàn)、疫苗和藥物研究(M.J.Cunningham et al.，J.Pharmacol.and Toxicol.Methods 2000；44，291-300)、植物的抗逆性研究(P.M.Schenk，et al.，PNAS2000；9711655-11660)、有機體的發(fā)育、調(diào)節(jié)細胞功能的基因的協(xié)調(diào)性研究、檢測不同發(fā)育時期不同組織中基因的波動性活動等。分析基因組規(guī)?；幕虮磉_數(shù)據(jù)，將最終導致對細胞分化的整體性觀察，涉及細胞增殖、細胞死亡、能量代謝、胞間和胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導、細胞遷移的基因組分子圖譜等(Charlie C.Xiang，et al.，Vaccine，2001，22(2002)，22-30)。
通過對表達序列標簽及其構(gòu)成的基因芯片進行基因表達譜分析，有助于發(fā)現(xiàn)并克隆基因家族新成員、基因定位克隆、作為序列標簽位點(Sequence-TaggedSites，簡稱STSs)染色體的基因定位和基因圖譜制作、導致遺傳病的突變位點的鑒定、分析基因在不同組織中的表達特異性和建立DNA物理圖譜、新藥的發(fā)明和對細胞和有機體的整體研究等。正因為表達序列標簽具有如此的優(yōu)越性，因此表達序列標簽測序已經(jīng)成為許多基因組研究機構(gòu)的工作重點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供水稻葉片特異表達序列標簽及構(gòu)成的基因芯片。
本發(fā)明分離出的水稻胚乳cDNA表達序列標簽的序列具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列。
所說的cDNA序列具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中的一條或數(shù)條的組合。cDNA序列包括SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每條序列的互補序列或同源序列。cDNA序列包括SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的每條序列中的8～100個連續(xù)核苷酸為探針的序列或其互補序列。
上述序列標簽所組成的基因芯片是在載體上結(jié)合有SEQ ID No.1～SEQ IDNo.50所示的序列、同源序列或其互補序列的核酸分子。載體為固相載體或液相載體。固相載體為玻片、硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜、凝膠。所說的核酸分子是脫氧核糖核酸、核糖核酸和多聚寡核苷酸。
一種表達序列標簽的基因芯片是用于生物功能的研究和檢測。所說的生物包括動物、植物以及它們的細胞、組織器官及其系統(tǒng)；所說的生物功能的研究包括藥物、植物的抗逆性、植物育種和植物新品種的產(chǎn)生、雜種優(yōu)勢的早期預測、新型除草劑和新型農(nóng)藥的篩選、動植物生長和發(fā)育的機理和藥物的毒理學；所說的生物功能的檢測包括轉(zhuǎn)基因植物的安全性檢測、食物成分的功能性評估、病原體的檢測和診斷、生物物種的鑒定，包括動植物和微生物。
本發(fā)明的優(yōu)點是1.用獲得的新的表達序列標簽制成表達序列標簽芯片具有許多商用價值和科研價值(1)應用該表達序列標簽芯片可用于克隆植物的重要農(nóng)藝性狀的基因，如抗干旱、抗鹽堿、抗蟲害和抗低溫等基因的克隆。(2)應用該基因芯片也可用于對農(nóng)作物的雜種優(yōu)勢進行早期預測，篩選出最佳的優(yōu)勢雜交種。(3)應用該基因芯片也能用于對轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品進行商品檢驗，以檢驗可食轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的安全性。(4)應用該基因芯片還可用于查找藥物的毒性和副作用，進行毒理學研究，利于對新型除草劑和新型農(nóng)藥的篩選。(5)該基因芯片可用于動植物的育種和植物新品種的產(chǎn)生。(6)該基因芯片還可用于從整體上研究整個信使核糖核酸(mRNA)的表達，這對生物體基因調(diào)節(jié)的整體性研究具有重要的科研和實踐指導價值。(7)應用該基因芯片還可以運用突變體研究植物中胞間和胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導，為發(fā)現(xiàn)植物中的基因功能和生理代謝途徑提供重要的理論依據(jù)。(8)該基因芯片能夠作為一種商品，廣泛應用于臨床，醫(yī)藥行業(yè)以及實際生產(chǎn)中。2.可以利用這些新的表達序列標簽繪制基因圖譜。如果一個表達序列標簽在基因組中只出現(xiàn)一次，那么它可以做為序列標簽位點(STS)。由表達序列標簽構(gòu)建的物理圖譜叫表達圖或轉(zhuǎn)錄圖(expression or transcript maps)。利用表達序列標簽進行基因圖制作，可以加快序列標簽位點的制作和新基因的染色體定位。3.表達序列標簽序列可以作為基因特異性探針，對組織特異性基因表達的研究具有重要的作用。4.這些新的表達序列標簽豐富了表達序列標簽數(shù)據(jù)庫，并可以最大限度地利用公開的表達序列標簽數(shù)據(jù)庫信息，大大縮短克隆新的全長互補脫氧核糖核酸的周期并可減少克隆的成本，加快水稻的生物信息積累較薄弱的基因克隆進度。5.表達序列標簽還可進行新基因的遺傳進化關(guān)系分析。表達序列標簽可以對所有動植物的基因作為一種標簽庫，通過不同的序列比較可以獲得保守序列片段，從而獲得基因的遺傳進化圖譜。
具體實施例方式
實施例1cDNA文庫的構(gòu)建根據(jù)Gubler和Hoffman(1983)的流程并且用Dorssers和Postmes(1987)描述的定向克隆策略進行的。
一、總RNA的提取采用了Chomezynski和Sacchi(1988)的方法準備總RNA和為poly(A)+RNA進行寡聚dT纖維素層析(Sambrook et al.，1989)。
取水稻胚乳，-20℃保存?zhèn)溆谩Ｈ〕?00mg組織，加1ml溶液D(含4M異硫氰酸胍，25mM檸檬酸鈉(pH7.0)，5％十二烷基肌氨酸鈉(Sarcosyl)，0.1Mβ-巰基乙醇)，將組織充分勻漿，將勻漿液轉(zhuǎn)入10ml離心管中，再加入0.1ml 2M的乙酸鈉(pH4.0)，1ml的水飽和酚和0.2ml的氯仿/異戊醇(49∶1)混合物，充分震蕩混勻后，再冰上靜置15分鐘。樣品4℃離心(10000g)20分鐘，吸取上層水相，與等體積異丙醇混勻，置-20℃冷凍至少1小時。4℃離心(10000g)20分鐘收集沉淀并溶于0.3ml溶液D中，加入0.03ml 2M乙酸鈉和0.3ml異丙醇，混勻，置-20℃冷凍1小時，4℃離心(10000g)20分鐘收集沉淀并溶于0.3ml焦炭酸二乙酯(DEPC)處理過的水中，加入0.03ml乙酸鈉和0.75ml乙醇，混勻，置-20℃冷凍1小時，4℃離心(10000g)20分鐘收集沉淀，用75％乙醇洗滌RNA沉淀，自然干燥后將RNA溶于DEPC處理過的水中，分裝置于-70℃保存?zhèn)溆谩?br> 二、帶poly(A)+的RNA的分離(1)用3倍柱床體積的滅菌水沖洗柱床體積為0.5～1.0ml的一次性oligo(dT)-纖維素層析柱柱床。
(2)用滅菌的1×層析柱加樣緩沖液(20mmol/L Tris·HCl(pH7.6)，0.5mol/LNaCl，1mmol/L EDTA(pH8.0)，0.1％十二烷基肌氨酸鈉)沖洗柱床直至流出的液體的pH值小于8.0。
(3)用滅菌水溶解RNA，于65℃溫育5分鐘后使其迅速冷卻至室溫，加等體積的2×層析柱加樣緩沖液，上樣，立即用滅菌的試管收集洗出液，再用1倍柱床體積的1×層析柱加樣緩沖液，繼續(xù)收集洗出液。
(4)將收集的全部溶液置于65℃溫育5分鐘，重新上樣，并收集流出液。
(5)用5～10倍柱床體積的1×層析柱加樣緩沖液洗柱，分部收集洗出液，每份1ml，并測定OD值。
(6)用2～3倍柱床體積的滅菌的無RNA酶的洗脫緩沖液(10mmol/LTris·HCl(pH7.6)，1mmol/L EDTA(pH8.0，0.05％SDS))洗脫poly(A)+RNA，以1/3～1/2柱床體積分部收集洗脫液。
(7)測定收集液的OD值。
(8)在poly(A)+RNA溶液中加入3mol/L乙酸鈉(pH5.2)至終濃度為0.3mol/L并混勻。加2.5倍體積的冰乙醇，混勻冰浴至少30分鐘。
(9)4℃10000g離心15分鐘回收poly(A)+RNA，小心棄去上清液，用70％乙醇沉淀，離心片刻，空氣中晾干。
(10)用少量水重溶RNA，測定OD值。
(11)將poly(A)+RNA溶液置于聚丙烯離心管中，加3倍體積乙醇，混勻于-70℃保存?zhèn)溆谩?br> 三、載體DNA的準備Charon BS噬菌體DNA用HindIII和EcoR I限制性內(nèi)切酶消化幾個小時，隨后用小牛小腸堿性磷酸酶(CIP)處理。用1/10體積的0.5M EDTA在65℃溫育45分鐘使磷酸酶失活。用苯酚抽提純化DNA，然后用乙醇沉淀。用背景噬菌斑的生長來檢驗噬菌體的質(zhì)量(Sambrook et al.，1989)。
四、cDNA的制備(1)第一鏈的合成將2.5～5.0μg poly(A)+RNA和2.5μg oligo(dT)(12～18)放入0.5mleppendorf管中。加無菌水至終體積為20μl。將試管放入90℃2～3分鐘，并快速放在冰上冷卻。按照下列順序加入試劑11μl第一鏈buffer(5×)(0.25MTris-Cl(pH8.3，室溫)，375mM KCl，15mM MgCl2，50mM二硫蘇糖醇(DTT)，0.5mg/ml BSA(無核酸酶))、2.75μl dNTP混合物(每種10mM)、1.5μl水和2.5μl MMLV反轉(zhuǎn)錄酶(200U/μl)。取出5μl放入另一個eppendorf管中(管中含有1～2μCi[α-32P]dCTP)，用作測試反應。第一鏈和測試反應管在37℃溫育2小時，然后往測試管里加入1μl 0.5M EDTA和44μl TE(pH8.0)(10mMTris-Cl(pH8.0)，1mM EDTA)，儲藏在-20℃以備分析用。將第一鏈合成反應管放在冰上。
(2)第二鏈的合成接著加入50μl第一鏈反應混合物80μl第二鏈buffer(5×)(0.125MTris-Cl(pH7.5)，0.5M KCl2，25mM MgCl2，25mM DTT，0.5mg/ml BSA)、7.5μl dNTP混合物(每種10mM)、250μl水、10μl Escherichia coli DNA聚合酶(10U/μl)和1.75μl E.coli RNA酶H(2U/μl)。取出40μl放入另一個eppendorf管中(管中含有5μCi[α-32P]dCTP)，用作第二鏈合成的測試反應。兩個試管15℃溫育4～5小時，然后往測試管加入2μl 0.5M EDTA和8μl TE(pH8.0)，儲藏在-20℃以備進一步分析用。加10μl 0.5M EDTA至第二鏈反應管中并用苯酚/氯仿(1∶1)和氯仿/異戊醇(24∶1)抽提，加0.1體積醋酸銨(終濃度為3M，(pH5.2))和2.5體積的乙醇沉淀DNA。-20℃儲存過夜。
(3)產(chǎn)生平末端cDNA雙鏈cDNA離心，用70％的乙醇洗滌并干燥。沉淀用42.5μl水和5μl T4DNA聚合酶buffer(10×)(0.67MTris-Cl(pH8.7，室溫)，67mMMgCl2，100mM巰基乙醇，166mM(NH4)2SO4，67μM EDTA)、1μl dNTP混合液(每種10mM)、0.5μl BSA(20μg/μl)和1μl T4 DNA聚合酶。反應在37℃進行30分鐘，然后加入150ml TE(pH8.0)，反應混合物用苯酚/氯仿(1∶1)和氯仿/異戊醇(24∶1)各抽提一次。cDNA用0.1體積醋酸銨(終濃度為3M(pH5.2))和2.5體積的乙醇沉淀cDNA，然后在干冰上放置30分鐘或-70℃放置1～2小時，再離心。
(4)甲基化cDNA微離心收集，用70％的乙醇洗一次，真空干燥，用20μl的水溶解。加入2.5μl的Alu I甲基化酶buffer(10×)(0.5M Tris-Cl(pH7.5)，0.1M EDTA，50mM巰基乙醇。)、1μl S-腺苷甲硫氨酸(2.5mM，新鮮配制)和1.2μl Alu I甲基化酶(5U/μl)。37℃溫育60分鐘。加入60μl水、8.75μl 1M Tris-Cl(pH8.0)、2μl 5MNaCl、2.5μl 2.5mM S-腺苷甲硫氨酸和1.5μl EcoR I甲基化酶(40U/μl)繼續(xù)溫育1～2小時。然后cDNA用苯酚/氯仿(1∶1)和氯仿/異戊醇(24∶1)各抽提一次，加0.1體積醋酸銨(終濃度為3M(pH5.2))和2.5體積的乙醇沉淀。
(5)連接體連接和HindIII和EcoR I消化將cDNA沉淀溶解在6μl水中。加入0.5～2μg激活的寡核苷酸pGCTTGAATTCAAGC和無菌水調(diào)節(jié)終體積至10μl。加入1.2μl連接buffer(10×)和0.8μl T4 DNA連接酶15℃溫育過夜。65℃加熱15分鐘使連接酶失活，然后用限制性內(nèi)切酶HindIII和EcoR I消化cDNA，用乙醇沉淀，溶解在20μl的TE(pH8.0)中。
(6)清除未連接的連接體和cDNAs餾分用1％低熔點的瓊脂糖凝膠電泳使未連接的連接體和cDNAs餾分從cDNAs中清除。用干凈鋒利的刀片將＞0.8kb的片斷切下并用苯酚抽提(Sambrook et al.，1989)回收。
(7)cDNA與載體臂的連接將回收的cDNA溶解在20μl的水中，并從第二鏈反應的測試管中取出1μl用來確定每分鐘總數(shù)(c.p.m.)，并計算cDNA的量。經(jīng)檢測文庫滴度為3.5×106cfu。
五、噬菌體cDNA文庫的擴增要擴增的cDNA文庫培養(yǎng)在多個培養(yǎng)皿以獲得完全裂解，分別收集所有的噬菌體。-20℃儲藏，作為文庫的儲備。
六、Charon BS噬菌體文庫(或克隆)轉(zhuǎn)化pBluescript質(zhì)粒在總體積為200μl的反應體系中加入Not I限制性酶消化10～20μg噬菌體文庫(或克隆)DNA 2～6小時，65℃溫育30～60分鐘以滅活Not I。加入連接buffer(10×)100μl并用水補充至總體積為1ml。加2μl T4 DNA連接酶并在12℃溫育幾個小時過夜。用0.1體積醋酸銨(終濃度為3M(pH5.2))和2.5體積的乙醇沉淀DNA。70％的乙醇沉淀DNA，干燥并溶解在10～50μl水。用5μl作為轉(zhuǎn)化合適的宿主E.coli細胞，然后電穿孔轉(zhuǎn)入細菌中并在適當?shù)目股剡x擇下繁殖以產(chǎn)生平均大小在1.5kb的插入片斷的cDNA文庫。文庫不含有小于500kb的插入片斷和非重組克隆。
實施例2cDNA測序(主要試劑均購自Amersham Pharmacia公司)根據(jù)《使用MultiScreen 96孔板制備質(zhì)粒DNA》說明書操作(1)將獲得的cDNA文庫稀釋，進行梯度試驗，選出最佳稀釋濃度。
(2)在LB固體培養(yǎng)基(1L蛋白胨10g，酵母5g，NaCl 10g，瓊脂糖15g，pH7.5)上涂板。
(3)37℃培養(yǎng)16小時左右，直至長出菌落。
(4)將菌落接種在96孔板，每孔加入1ml 2YZ(Amp+)(1L蛋白胨16g，酵母10g，NaCl 5g，Amp終濃度為100μg/ml)接種單細菌克隆。37℃培養(yǎng)18小時左右。
(5)1500g離心5分鐘，棄去上清液，收集細胞。
(6)加入200μl Solution I(50mM Tris-Cl，pH8.0，10mM EDTA，0.1mg/mlRNA酶A，4℃)，用Tape封口，振蕩混勻。
(7)加入200μl SolutionII(0.2N NaOH，1％SDS，室溫)，用新Tape封口，翻轉(zhuǎn)混合10次。此時裂解液應該透明、粘稠，不含細菌碎片。
(8)加入200μl SolutionIII(3M乙酸銨，pH5.5，室溫或4℃)，用新Tape封口，翻轉(zhuǎn)混合10次。
(9)沸水浴5分鐘。
(10)冰水浴10分鐘。
(11)將一塊MultiScreen 96孔板置于一塊新的深孔板上。
(12)從第10步中，取出底部清液300μl加入MultiScreen孔中。
(13)2500g離心5分鐘，使裂解液全部轉(zhuǎn)入下面的深孔板中。
(14)取下深孔板，加入200μl異丙醇溶液，用Tape封口，立即翻轉(zhuǎn)混合3次。
(15)離心15分鐘(3990r.p.m.)，沉淀DNA。
(16)用水重新溶解DNA，-20℃保存?zhèn)溆谩?br> (17)用水稀釋通用引物M13(M13正向引物為5’CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG3’，M13反向引物5’AGCGGATAATTTCACACAGG3’)。
注意加到每個反應的DNA和引物的體積要依賴于他們的濃度。調(diào)整加入的無菌水的量，以至于DNA、引物和水的總體積是12μl。反應混合物的終體積是20μl。
(18)在96孔板上，將要測序的每個模板加入下列試劑。
DYEnamic ET終止子試劑預先混合物8μl引物(5μM) 1μlDNA模板1 1μl總體積20μl(19)將混合物輕輕震蕩充分混合。
(20)將96孔板封口并放到預先設(shè)計好程序的PCR熱循環(huán)儀上。
(2 1)按照下列條件進行聚合酶鏈式反應。
95℃，20s15℃，15s60℃，1min20-30循環(huán)(22)循環(huán)完成后，簡單離心收集管子底部的沉淀。
(23)每個反應管中加2μl 7.5 M乙酸銨，-20℃放置至少30分鐘。
(24)離心30分鐘(3500r.p.m.)。
(25)除掉上清夜。
(26)每個反應管中加2.5體積(約55μl)的100％的乙醇或95％的乙醇，并混合好。使乙醇的終濃度為70％。
(27)離心20分鐘(3500r.p.m.)。
(28)除去上清夜，真空干燥或空氣干燥沉淀。不要過分干燥。
(29)將沉淀重新懸浮在10μl的水中，用力震蕩10-20s，確保完全懸浮。簡單離心收集樣品。
(30)將樣品放入Megabace1000中進行測序。
(31)獲得的序列剔除載體序列和冗余序列。
(32)用非冗余序列對公共表達序列標簽數(shù)據(jù)庫進行檢索，將其分類。
實施例3數(shù)據(jù)庫的構(gòu)建水稻cDNA質(zhì)?？寺∮烧憬髮W生物技術(shù)研究所測序，使用M13正向引物由3’端測序，去除序列中的載體序列并修正3’端測出序列中的模糊堿基后，將片段長度小于100bp的序列視為無效，所有的序列利用DNATOOLs 5.1(1995-1999，S.W.Rasmussen)進行比對去除冗余序列后得到50條具3’端Poly(A)的ESTs，將這些ESTs與下載的GenBank水稻數(shù)據(jù)庫(截至2000年10月)用Blastn進行搜索，得到的Blast最高分值，概率以及同源序列長度和功能識別描述編輯成ESTs數(shù)據(jù)庫。
實施例4基因芯片的制備一、對新的表達序列標簽進行重新擴增水稻cDNA質(zhì)粒插入片段PCR擴增(MBS 0.2S PCR儀-HYBAID公司)，引物為通用引物M13(正向引物為5’-CCCAGTCACGACGTTGTAAAACG-3’，反向引物為5’-AGCGGATAATTTCACACAGG-3’)，每100μl的反應體系包括10×PCR buffer 10μl；25mmol/L MgCl27μl；100ng/μl的正反向引物各1μl，20mmol/L dNTP 1μl，3U的Tag DNA Polymerase(Promega，USA)和約10ng的質(zhì)粒模板。PCR擴增流程94℃預變性4min，每個循環(huán)于94℃變性30s，58℃退火60s，72℃延伸120 s；36-40個循環(huán)后，72℃延伸10min。
二、PCR產(chǎn)物處理加入100μl異丙醇和10μl的醋酸鈉(3mol/L，pH5.2)于-20℃沉淀8h，3950rpm 4℃離心35min，棄上清，沉淀用70％的乙醇(W/V)洗滌，干燥后溶解于20μl DNA變性液(0.4mol/L NaOH，10mmol/L EDTA)。
三、芯片制備變性液溶解后的cDNA用于cDNA芯片的點制，cDNA芯片由arrayer(Genomic Solution，USA)使用直徑為0.2mm的384針點制，microarry載體為尼龍膜(Millipore Nylon N+)，所有的點點制為36×24的一級陣，每一個點在8個基因構(gòu)成的4×4的二級陣中平行兩次以驗證試驗的重復性。
序列表(1)SEQ ID No.1的信息(a)序列特征長度236類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.1ATGTACAGCGCCCTGCACGACTACTCCGATATTTTCTGATGATACCAGTATTTGGGAAGACCACCACGGATGTTGCATAAATTCCGTGTTAAAACTGAGTCAAGTGCAGCATCATGTAGGATGCACTTAAAAGTAATCATAAAAAAGAATATACCCTCTTATTCGGGGAAATGAGGAATATACCCTCACCGTTTTTAAACACCCCCTCCTCCACTTATATATGAGTTGGTTAAAAA(2)SEQ ID No.2的信息(a)序列特征長度499類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.2ATGTCCCGTGTATCTGTTTACTCCAATCTGCCCGGCACTCGCTATCATTTAGACCTGTCATCCTTCCTGATTCTGCTCGGTCTTGAATTGAAGATTCCAGATGATGCAAGAAGTAACGCCTGGGTATCATTTGATGGCACAAAGGAGGCAGCAATTATCAAGGGGAGACTCTGTTCAAATATCCATGAGTCAGCACCCGCTCCCAACAGTTAATAAATCTGACCAACTGGTGACTGGTTCCGCAGCTTGATCAGGTGCCTGAACTGGAACGAGCGACTGGACCAGAAGGCATTATAGGCATTAGAGGCTAGTTTTCCCTTGTACATACATACATAGCCCTACACATATAGATACACTTTTTAACAGGTGCAATGGCTAATCAATATCGATAGTATATAGTTCCAATCCGTCTCATGTCCAACCCGACCACCAACCAACTACGTGTTCCATGGATTTAATTGTTTATACATTGTTTCTTGTGCCAAAAAAAAAAAAAAAA(3)SEQ ID No.3的信息(a)序列特征長度181類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.3GCAATATAATGTTGGGTGCTCTGGTGATGGTAAAGTTAAATGTTGTTAATGACCTCACATCAGATCACTCTATTTAAGGATAAGGATATAATTTTTGAAGTACTCAGCTTTTACTTAATTAATCTTGAACACTCAGATGTATACAACAATGAACAAGTTAAATTAAAAAAAAAAAAAAAAA(4)SEQ ID No.4的信息(a)序列特征長度303
類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.4TCGCCGAGGAGACCGGTGCTCTCCGAGAGCGTCGCCGGCGCCGACACTCGCCAGGAGTCGGAGACTGACGACAGGTGACACGGCAGGCAGACGCCATTGAAAGCGGTGAAACAAGACAAGGGCTTTGTACATACATCAACATGTACATAGGTTTCACAGGGTTTCCCCTGTGCAGATGTTGATGTGAAGAGTAGGCAGAAGCAGCTTTAGCTTAGAAATTACTCTTCTTCTTTGCATCACATTCACTGTGGTTTAATCTTGATTTTTGTTATTACTTGTTTAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(5)SEQ ID No.5的信息(a)序列特征長度533類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.5AAAGGTGCTGCTCATGGCATGTGCCTGCTGCTATCGTCGTCCCAATAGTGATCCTTCTGTTATCGTGTGGCTTCTTATCAAGTATATGTAAAATGGATCCACTGACGTTTGTTCAACGCATCACTTCTGCGCTACTCATCCAAATGTGCAGCCTTTTAAAGATGTACCACTGGTTTTCATCTCGGCTTTGTTCTCCTGGGTGGAATGGTTTTATCAGTGTGTGTACGTCATATGAGGCCCTGGCATATATGCCCAACAATATGTCTGAGACTACCACTCACGTGGAATTTGTTGGATTGCAATGAGAAGTATATATATGTTTTTGTGTGTGGAGATGTAACTGCTGTAGCATTGTCAATCCTTGGCATGTGCATTCAGAAAGTGTGTGCGTTCAGATAGGATTTTATTTTTCTGTGATCGGTTGCTGTCGATATGTACAAGCTCAATGTCAGCCACTCGCACCAAAATATGTGAAAAATTATAGATATGGCGATGGTTTGGGATTTTGCTTATTTGACAAAAAAAAAAAAAAA(6)SEQ ID No.6的信息(a)序列特征長度457類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.6AACTCACAAATTGGCCAGGTAACCTTGCAATTTTTGTTGTAAAACAGGTGGAGCCACATTTGTTTCAGAAATGGCATGTCCACGGGGAGTTGCTGGGATTGCGTGCATGCTAGACCAAATCCATAATGGATTGTGGTGATTAATTCCCAACCAGATCTCTTGTTCCACCAACAGGCATTCAGATTATTGTTGATTGGTCTTTTTGATGAAAAAGCATAGAAGACCTTTTTTTTTTCTTTCAAGTGATACGTCTAATGATTGGATCGAAGAACGGCTTCCTTGTAACGGCGCCATATTTGATTTGTGACTTGAAGCCTTGTTGGACTACTAGACGTTAAGTGCTTATGTAGAATTTTATTTAGTGCATAAGTTAGTATATTGTTGTGTGTTATGTGAAGTAAAGACCTGGATGTTCCATGGTATATTATGCTTTTGTGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(7)SEQ ID No.7的信息(a)序列特征長度407類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.7AAGAGAAAGGAAACGGCTTCTGCCGTGAAGCCAGGCATAAAGCTGACACAGAAAGAAGAGAGAGGGAGGAGTTGGATAGGATGCTTGAGGAGAATCGGCGAAAAGTAGAGGAAGCTCAAAGAAAAGAAGCACTGGAACACAGCAGAAAGAGCTAGACGATTTTTAGATTGGAAAGAATTCCAAAGCAAAGGGAAGACGCGATACGTAGAAAGAAGATAGAGGAGGAGGAAGATAGAGCTAATCAGATGAAATTACTTGGGAAGAATAACCGTTGATTTGGTTTCAGTATTATGATCTGTTTCATCTGACAAGATTAGGCATACTCGCTCTGTCTCAAGATATTTTGGTGGATGTGTTATATTTTATTATAATGTATCTATCACTTGCTGACGAAAAAAAAAAAAAAA(8)SEQ ID No.8的信息(a)序列特征長度539類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.8TATCACCAATGTTTGCCACCACCAGCACAGTCCAAGCTTAGCTCATCCAACAACCAGGACCATCAATGCAGCAGCAGGCTCAAGCTCCTCCTCAGCACAGACTACCCAGAACTGAAAGCCTTAATCTTAATAGAGGAGTAGATATACGCCTGCTAATGTGCTCATCAGATGCTAAATAATGCCAATGCACCTGTGATGTACAGCTAGCTGGAAACAAGTGATGGTATTTATTGACGCAGCGAACAGGCCTGAAGACTGAATGAAGTTGCTTTCAGTTTCAGGCTTTCAGCAACTTGGGCTGGTATAGATGCTCTCTCTGTATCTGATGTTCCACTTGCGTGATAGGCAGCAGGAGAAGAGGATAGCCGAAAGGCTTTTGATGCGCAATGTGTACTGCCGCAAAGCAACGTGCATTTGGTTGCAGAGCCGAACTCTTGGCACCCTGTGGTCACTTGCTTGATAAGGTGTATCAACACTGTTGCTATTATATAATTTCAAGTCTGCGTTTTCTATATTTGTTATAAAAAAAAAAAAAAAAA(9)SEQ ID No.9的信息(a)序列特征長度494類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.9TCACCTGGGACTGAGCCACCAGATGCTGCTCCACTCTAACATGGGGATGAACTGATAGCTCGTTCTTCGTACATAATACCACAGCCTGATTAAACCTGAACATAATTGCACATGGCGAATTGATGATTTGAACAGTGAGGTCTATTTCGAAAGCACAATAGGTCCCAAACGATAGATTTAAATAGTAAATATATTGGGAAAGAAATTGTACTTAATTTGTACTTGTGTGGACTAGCTAGGTCGTCCGATCATGCATAGCTATATAGTTTGTGGTGTGTATACACTTTTTTCTCATGGTACTATACTACTGTGTACTCAAGCTAGCTCAGTACTAAAGATTAATTAAGCTAGATAGGGGTTAGACTTTGAGATAGACCCACTAGAAGTCTGGAACATGAGATCAAGGAGAATGATGTTCATAAAGTCGGATTTATTGCTCATATTCATGTAAATCAATCATAAGTGATTCTTGGCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(10)SEQ ID No.10的信息(a)序列特征
長度483類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.10ATTTTCAAGAGGTCATCAACCTAATGAACACAAGCCATGGGCTCGCTTCATCCACACAAGAATCAGGTTTTAGGGCCCCTTTAAAGAAAAACTCCATATAAAGACGGACTTTCCGTGTATGAGGCACGGAGGACGGGAACACACCTATGCGGCTACTACGTGTGTGAGTTCATGTACGAGTTTGTACGACCGAATGCCCCATGACTGTAGAGGAATTCGAGAATGGAAGAATGCCTCATGCCTAGTAAAAGAATCAGGGTGGTACAAGAACAACTTTGCGGATTTCTGATGGACGAGGCCGTCATCCCCAAGGAGAATTCTACGACGATGGATCCTGGTACCAACCGCGTCCAGACGGTCCACCAGAAGATCAAGCATGGCCGTATGATCATTGAATTGCATGGTGCAGGTGGAACCCTTGGAAAAACGGGAATATTTTGAAATATATATATGTGTTATATGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(11)SEQ ID No.11的信息(a)序列特征長度475類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.11TCACAGGATCTACACTTATTGATCATCTCACTACGGTCCCGATCACAACTTCTGATCGAGTTCGCCACCCCTGTGGACTTTGCATATGTTGATGGATGGTGCGTATGAATCCAGGGGGCAGAGCCCTGCCCTGCGACCTTGGGGCTTGTCAACGAGCATACAGTATAATATTTTGCTGTTCTTTCAGTGATTAAAAACGAAAATTTTAAAGAAAACCTTGAATGCCAATTAGATCTGCCCAGGTTCTCAAATTTCTTTAGCTCCGCCCCTGCTTGAATCGATGTCATATGCTGCAAATTAAGTGGATTGGAGATGTGCATATGCTCGAATGTTCTCGGTTATATTGTAATTGTGGGGTAGCAACTTTATCTTGGGTACACCATGGAACAGGGTGAAATTGTACTAATTCTTATTTGTGTACCATTGATATATCTCATTACTTCTTGCATTCTGTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(12)SEQ ID No.12的信息(a)序列特征長度477類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.12TCAAGCACACATACACTTGATAATGCACTGCACAAGTGTTGTTGGACACACAGAGAAAGGTGCATGATCTAACACCCAAGGAGAATATAAGACGTGAAGATACACATTCTAGGGCACAAGAAGATTGGGAAGGCCAGACCCGATTCTCCATATGCTAACTTCACCATAGCCAACTGTTAACAACTTCCCGGTTCTAGCTCAAGTCCAAATGCATGGACAGGTTTTGGTGTAATCCATTCTCAGGTTGTGTTTTTCCTCATTGCAAATACATGCGAGCCTCACAGGATGACAGGGGCAAGCCACTCAGTAGATCAATGATGTTTATTGTCTTGTAAATCATAAATATACCTTGATTGTGATAGCATATCTTACAACTTAATTACCTTGAGATGATTTGTGAACCACTTAATGTGCGATTGAATTGGAATTGGGAATTATTTGTTCTATATTGTTTTTGGAGATAAAAAAAAAAAAAAA(13)SEQ ID No.13的信息(a)序列特征長度475類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.13ATCGGTCCATGTATAGGAGGTTACAGAAGACACTGACTTCTGATGAGTTGTTTCCTTCACTGTGGGACAAGTGCAAGAAAGAGTTTTTGGACAAGTACGAGAGCTTCGTTCAGATGGTGACGCGGATCTATGGAAATGAGCCCATCATGTCGGTTGCTGATATGAAAGATGTCCTTGCTAACTTCTAGATATAAGTACAGCGCCATGTATCATTTCACAGTCAGTAGCTATCTATATTCATTCATTTGATTGAATTTTACACATCCACTTTTGCTAGCCTTATTAGAGTATATATATATATATATGTTCCCTGGTTAAGTTTATCTGTGTGGCCTCTGTATAGCCGTGGATATGATCTGCTTCCGTAAACCATACATGCTGAGCAGTTGCATCAGGCTCAGAACTGTAAAACAATTAAATTTATCTGTCTCAATGTAACAACACCCTGTTTGGATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(14)SEQ ID No.14的信息(a)序列特征長度444類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.14TCATCAGCAGCGCCATGTACCACCAGTTCAACTCACTAGCACACATCACTGCATTTCTGACGCCTGCATCTGCATCTATTGGATCCATCTCATGAATGAAGAACCATGTGTGTACTCTCTTCTCCTGTGCTGCTTTTTCACCTTAGGGATTATATACACAGTGCTTTCTTCCTCCCGTCCTCTGTTGTTGTTCCATCCTGGAATGGGCATCTATTGATGCACATCCTGTTCTAGTGTGTCTTTAAGCCAAAATAACAGAAGATCTTTAACTCAATGCGTGGCTTGGATTATCTATCTGTATATATCGAGTCTGTAAGCAAGGTTGTCGTGTTTGGTTTGGTTTGGTTTTCGACGTTCTGTAACTGTACCATGCTGCTCGACTCTTACTCAAGAAATACTACTACCCAAATCATCCTCTTTTTCTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(15)SEQ ID No.15的信息(a)序列特征長度491類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.15AAGCCCCCAGGTACCCAGAAGCCCGAGAAGAAGCTGGTGGCTGGTAATTGGTGATACTCTACACACATCAAGTTGCTTGCAATCAAGAGGGTTGCACTTCAGAAGAGGGCTCGAGTGAAGCTTGAGTTCACCCCTGCTTCAGAACTGGGAGAAAGGAGTACATGATCTACCTGATGTCCGATTCTTATCTGGGCTGCGATCAGGAGTACGAGTTCACCGTCGATGTCATGGATGCTGGAGGGGATTGATCCCAAGGCCAGAAAGAGGATGAAAGCTTTGCCCAGCCCCCAGGTGTGTATGGAGCTGGGTGGTTGCTTGTACGCTCGTAGCAATTCCTAATGTCCTATCCACACTTGTATGTGTTTGTACTCGTTTTTATCTTTAGCCATTTTCTTAGTGTAACTGATGCTCACCTCTGCTCCTGTGGTCATCTTTGGGGATCTTTATTAGCTAGCCTATGGCTGTGCTTCTTGTGAAAAAAAAAAAAAAAA(16)SEQ ID No.16的信息(a)序列特征長度527類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.16TGGGGAAAACGATCCAACCCAAGACCATCGTTCTCCCAGCTCTTTGTCACCGCTGAAGCACATTACACGGTTATTGTTCCAGAAAACTGCTGACATCCCTTCCTGAGAAAAAAAAAAGTCTCAGGTCACAACAAAAAATACAAGTATGTAAGCTCTACTACTACAGAGGCCAAGTTTTTCATGTTGAAGCTTTGTGGAGATGTATTCCAGTCTCTGCATGCAGGATGGATGTGCATGGACGAAGGTTCTACGCATCCTGTTGTGAAAAAAAAAAATGTGACAAACTCTCTCTGAAGCCGTGCAAGGCGCTGCTGGAGAAAGCATAGTGTGTTAGTCCCAAGTGAAGAAATGTGGTGCACACGAAGTGCTCTGTGCCATCGTAAATAATTTGTTCAGTTCTGGAATTTGGAACGGTGATTCTGAGAATCAGAATTTAACCACAAGATAGGATCTTGGTTTTCGTTCTTTTTTGTCTTGCTTCATAATTGGAAAAAGGAGAAAAGGTCCAGGTTAAAAAAAAAAAAAAA(17)SEQ ID No.17的信息(a)序列特征長度314類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.17CGCTGCTGCTAGTGATCTGCCAGTGTCCTCCATGGAACATCTTAGGCTCCACTTAGACACTTTGGAAACTGTGTCCCTGGTGAAATGCTGAGAAATTTTACACAGCGAAAAAGCCTGAAAATGGAGACTTGAGAGGTGTGGCACGGAAGAGCAAACCCCTCACAAATTCCCTTTTTTTTTTTTACACCTGAGGAGCAAGGTGCTCTCTCCAGCCCCAGGATTGCATCTTGGCTATGAGCGATTTCTGTTGCTTGTGATGTGTATATGGAACTCCTACCGTATGAAGTGATGATTTGTCAAAAAAAAAAAAAAAA(18)SEQ ID No.18的信息(a)序列特征長度445類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.18CCCAAAGTTCTGGATTCACACTTCTTGAGCCACAGAGGCTATCATCACATTCCCGAGGATTCAGAGAGATATATTTAGAGGGTTTCCATTATGCCTGTTGCAACTACATACATACACGGAGGATGGCGGCGACGCACATGTAATTGTGAGGACATAAGAAGAGATGTCACAGGAGCTTTTGCTTGGAGCTTTTGTATCCCCAAAATGACTCCCCTTGGCATAAAGGGGCCATCTTGTGGTGCGGCTGGTATATTTCTTCGTTCTTCTTTTTCCCTCTTTTTCTAGGATGCAGCTTTTTTGCTTGTAGATTTTGTTCCAGATTTATATGTGCCACCTAATTATTTTGAGCAGCATCTTTTCCATGTACTCGTTTGTAAAGTGGCTCCCTTGGCCCTGAAGTTAAGCTTGCTTGTATGATTCTTGCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(19)SEQ ID No.19的信息(a)序列特征長度312類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.19CAGGCCGATCAATGTCCAATTTCGCGCATGCTTGTGGGGTGGGGATTAATTGGGGGGGAGTTAGCTAGCTAGCTCTAGCTAGGTTGATGTGATTGACGGGGACGCGCCACCGGCAAAGCTCTCGCTCTCGCAGCGCGGGCGCGCAGGGCAGACACCGGCATTGGCGCGGCGAGAGAGGGGGGTGCGCGTTGTGTCCCTCTCCTGTACAAGTACGTATACGCTGCTTTGGATTTATTTTTGTAGTAGCGATTAGACATCTCGTCGCTCGATGGAATTAATTAATTTTCTTGGCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(20)SEQ ID No.20的信息(a)序列特征長度445個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.20ATTCTGATGATGACATAACTTGCATGTTTACAGTACCATTTTCTGTATGCTATTTCCAGGTGATTGTTCAGAAGTGGCATGCACAGGAGAGATTAATAAACTGCCAGAAGAGGAGATGACATATATCTGATTGATAGAATTGTCTTTAGTGTACCATAATTATACTTTGTCTTTAGAATGTTGCTCCGCCTATGTGGCCGTTCGTCCCCATAGGGTCATGCCATTGCCAAATTGATGTTGGGCGTTCGTTTTAGGCTCATGTTGTTAGTGTAAATGTGGTACACCTGATAGAGATGCAGAAAGGGTTATTCTGTAAAAATGGGAGTATGGGTTGGTCCTGTTGGACAGGGTTAGTACCATGAGGATTCTGGCAGTATGTCATGTAGGCATCATTCAGTTATTCTGCTTTTGAAAGACCACCTGTCAGGGAAAAAAAAAAAAAAAA(21)SEQ ID No.21的信息(a)序列特征長度495個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.21CAGCACGGTTAACATGGAGCACATAAGAAAGCACTACTATGGAACCATCCGTCCATAAATCCCTACGGGATCATCCCTGCAGGCCCTAACATCGATTACAACACTCCACACGACAGAGAGAGGTTTAGTGCCTAGGAGAAGATAAGTAGTACTCCCTCCGTTTCACAATGTAAGTCATTCTAGCATTTCCCACATGCTAGAATGACTTACATCATGAATGTGGGAAATGCTAGAATGACCTGTAAAACGGAGGAAGTATCTCTTGTGGTACTTTCTGTATTGAGTCACTATGCTTCGTTGCTATGGTATCGAGGCTGTGGCTAATAATGCTTGGAGGGTTGGTTTGTGTTTTGGTTGTTGTATTGTAATACAGGGATTGGAAAAAAAAAAGTTACCGATAGAGAATAAGAAGTATCACTCGACCAACAGAGACAGCAAAGTTATGTGGTAATAAATAACAAAAGTTTTTGGTTCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(22)SEQ ID No.22的信息(a)序列特征
長度446個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.22AAGCACCCCCCGCTACTTCTTCACGCCCTGTACGGATTCTTTGCCAGGCAGCTTCGCCTCAGCCTCCCCAATCTTCTCACAGAAGAAACCATGCAGCGCAACGCACAGAAGGGTCGAAAAAAAGGGCTACCCGACCACGTTGACACCTTGACCGTTGCTAAAAAAGAATCGATAAATCGATACTTGGTGAATGGTGATAGTTACACACTCTTGTAAATACTGCGAAGCGCTTACTGATACCTACTGTGATAGTTGCCCTCTGTTGTAATTTGTATTTGTAGTGCTTGCTCTGAAACTTAGATCACGTTTGACTATAGTTTTCCACTTCCAGTCCTTTTACGGATATATGTTGCCATATTACAGAGTTGTTTACCCGGAAGAGAGAAAAATTATCCCATTCGATACCAGTGTTAACTGATGATAATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(23)SEQ ID No.23的信息(a)序列特征長度497個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.23AGGATCTATCTGTTCAGACCTCTTCATGGTTTCATATCTTGTAATCAAAAAAATTTAACCACCTGTGTCTAGAAGCATCGCACATGGACGGTCTCAGATCCATATTCTTTCATTTATACCTTTTGCTTAGAGGTGCGTTTAATAAGTTATTAGTCTAGAGTCAGTTATAGGGAGCCCATATGTTTTCCTTTTTTCTTTTTCTCCCCCTTTTCCTGGGTAATAATTGAGTTATTTGGGAGTCAATCGGTCGGTCGGTCTGAATGTAAACTGATGTTGAAGGGTAATTAAGCTTGGTTGGTCTTTTGCAAGTCTTGGAACACAGAGTGAGGTCCTTGCTTGTAATAAGATGTCTGTTTTTCTTTTTTGTGGTATGTGAGATATACCGATTTGTTAAGTACTCTTGTAACAGTCACAAGTCATCATGTATGATGTGTTGCAGTTTTGCTGAAGATAGTTATAAGACTATTGTTGCAGAGATTTAAAAAAAAAAAAAAAAA(24)SEQ ID No.24的信息(a)序列特征長度474個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.24TCAGTTAGTCTTCATACTAATTACTATCCATCAATCCATTTTGTTTCTTTGATTGAGTCCATTGCCTTGTTACCATTTGTCTACTCAGTCAAAGAGATTTTTCACAAGTGGACTTGACCAGTTAATCTGTTCATACTGCCTACAGCCCTTTTGTCTTTTGAAGCATATTTTGGAGGTGTGCAAATGTTCAGAATTGGCGAGCTGCTCATACATATCTTGGCAAGGGCTCTGTGGAGAAGCCCATAGATATTGTTTTACAACCAAACAACATGTTCACCTTAGTACTACATATTTTTTGATTATTATGTCTCCAGTCTCCACCCCTAAATTTTGAGTGATGGGGGTGTATACTGTAACGTGCCTTAGGTCCATTTAAAAGTGGTAATTACATACTTTTACCTCTGTCATCTGGGATGGAAAAAAATGCTCCTTTTATTGAGAATTTTTCTGTTTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(25)SEQ ID No.25的信息(a)序列特征長度478個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.25TGATTGCGATGGATTCTTTGATCATGGCAATTCATTTCTGAAAGGAGACGTCACGAAGTTGGAGATGAGGAAGAGCTGGTTTTTTGTTTCGCACAATATGCTGGTAATGCAAGACCATCTAGAGGAAACTTGAACCCAGTCTATGGTTTCCTTTCGCACGCGAGAAGGAACAAGTTTTCTTGTTTGACGTAGTTTATTTACGTCTAGTCTTGTGGATCCTGATCATTTGTTTCCTTTCCTATCCCCTGCAAGATGCATCTATGAGTTCCGATCAGTTAGGGAACCCTGGTTTCTGAGTTTTTCATGTCAACTGATGAACTGCTAGTGTATATGGGGAACCATAGTCGCAAATTGCCCTTGGGATTTCACTGACAAACAACCTGGAGTTGATCTCATACCAGGTTAATCGACAAACTGGCACTGCTTATTAACCTGTTAATGATACGACGGTGGTTTCTGTAAAAAAAAAAAAAAAAAA(26)SEQ ID No.26的信息(a)序列特征長度489個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型 cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.26ACTTATGATAGGAACTGAGTGGATTCAAAAGTACTGTCATAACATCACCGATACAAGTGAAATATATAGAACACATGGGCTACTGTGGTATCTTGTTTGGACACAGAAGATCAGCATTTCACTAAATTTTCTGCACCTTCACCCTTGAAAGAATTTAGTTTCCTCTTTCGAAACAGAGTATAGACTCCAGATGCACTGGAAGGTCCCTGATCCAAGCTCCGTATTGAGCTGAGACAACTGTCTGTGACTATGTTCTGCCAGCCTATTGTGAATTCATGGAGAAGCATCCAATTTAGAGAAATCAGGGGACATCTTGAAGATATCAGGAACAAATTAAATGAACTGTTTGAAGGATGAGTTGATACTTTTATGATTACAAAAAGAAATTCTTACTTGTTCTCTTGTTCCTTCATTCATGCAGGAAAATTGTAACACATACTAATTCATGATTGTTAAATTAACTTTTCATTATGCAAAAAAAAAAAAAAA(27)SEQ ID No.27的信息(a)序列特征長度445個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.27TGGTGAACCCGGGCTTACGTTTGCACCGTGCCAGATTCACCCAAGGCCATTTGCTGAAAAGCCTGGATGGGATTATGTGGTTAGGAAACCGCCATACCACCTCTTTTGAAGCGCCCAATCTTATCCCGAGAACTTCAATGGAGGGGTCCCCCGAAGGCAGAGCAAGCCTGAGCCCTAATCTTGCATGCTACCTTGCTAGCAGGACATGCACCAGATGGTGTTTACCCCCATATGTGTTGTTTTTGGTTTCTCCCATCTGTTGTGCGAGTGTGGGCTTAGACCGTTCCTCAACCCACTCTCAATTATAATAAGCGTGCACTGTGATCCAATAGAATGATTTCCTGTGTACTAAAATTGTTTACCCTTATCCTTCCACATCATTTCATAAAGATCCTTTACCTTTTTGTCTTAGGTTTTTATAACCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(28)SEQ ID No.28的信息(a)序列特征長度361個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.28CCCCGCGCAATCCAAGAAGGCAAGGTTAATCAATCCCCATGTTCTTCTTCTCCAAGCTCCACCTACTCCTCTTCCAATTCCTCCTCGTGTGTGATTAATCCCCCTCTTCTTCTGCCTGCGTACGTACTCCTTAATTAATTAGCTCTTAGGGACGTTAATTAATCTCAGTTCTTGCCTCCTCTCCTCTCCTCTCATCTCACTTGTATGTTAATGTTAGTACTCCTTGTAATCGATCAATCAGTCCTCTTTTTTTGCATCCTTTTTTGTCTTCTTTTTCATTTTCCGTCGATTTCTTGGCTTCTCTCTTCATTTTACCTTTCATGTTTGCCTCTGCTCTGTATAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(29)SEQ ID No.29的信息(a)序列特征長度482個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.29TGCCACTGGCTCAATGCCTGGAGGCTTGGCTAATCGGATTCCACAAGGTGTTTGAGGTGCGCTTTTAGGAAGGTAGGAAAACTGAGAGGTGCCACTGGATTCGACTTGGGAATCTGCATCGAACTGTTGAGGAGATGAGAGCTCTTTGAGATGCATAGCAAGAAAGGCTGCTCGATGATGGCAAGCTTGGGTTTATGTATGTTTGTGTATATTTGTTCGATCTACTTAATTACTTGGGATTATATTTATTTATTCGGGGGACTAGTGTAAGGTGGTTATGAGAGACTGCGGTATCCATATAGTATTTCGGGCCGCACTTATCATTAAGAATTGAGATGGCCATGGATGCCAATCTTGGCCAATATAATATAGAACCATGAGCTGCGAGACTGGATTATTGTATTTATAGACCACCAGAATATATTGTTTATATGTTGTTAATTAGTACAGTGTCAGTATTATAGCTAAAAAAAAAAAAAAAA(30)SEQ ID No.30的信息(a)序列特征長度472個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.30GTCCTTGGTGAGAAGACTGGGAGACAATAACAACGGCAAAATTTTGAGGACTTCGACACTGTGTTGGTTGCAGACTTGCCTCCTGTCAGTTGACGAATACAGTTGAAATCCTCGCTGGTGCAAGCTGTCATGTGCTTGTGGGGGAGGTGCATTGCATCTTTTCTAGCGCTGATGCTCTGCTTGCGAAAACCCTTTCTGAGGTTCTTACAAGCTGTGGTCAGGTAGTGCCTGAATTTCTCAGGAAACTGGCATCCTCATAGCAGGAGCGGTTTTCTCATGGCAATCATCATATAGTATACGCTACCATATTCATGGTTCTTCCAGTGACTAAACATTTTTGTCAGTTTACTGTTCCTTATCATGTAATTCTCACAGCATAACGAGGATCTTCAGCCTTGTTGTATCTCTGCAACTTTGTATTTTTTGAATGCGATCAAGTCCTAGTCTGTGAGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(31)SEQ ID No.31的信息(a)序列特征長度567個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.31GAGCTGGTGCTACTATCCTCGGCACATAAACGTAGCGAAGGTGCCATGATTGCTGCTGGTTCCCTTGTTTTAAAGGATGTACCTCCCCACACGTATGGCACGTAGGAAACCCTGCACAAGGTAGTTGGGTATAAAGATAAGGAAGACCCTTCTTTAACTATGAAACATGATGCCAGAAGAGATTATTTTGAGCATGTTGCCGTTAGTTTTTCAGATGACAAGCTAATGGAAGTGTTGTGAAGTAAAAAAAGGTTCGATGATGTTTGGCTGGCAGTTCAAAGGAATAGCATATGTTTCGACATTTCTTCCCAGAGGACAGCACTGGGTATCTGATTATGCAAGGGTGCTTCTCTTTTTTGCCCAGGTACCCATGGTCCTGAAGCTCCCCAGTTATATTTTCTCGTGGCCTTTGGACCGCTGTAATAATGTGATGTTTATTTTTCTGGTTACTTTGTAAGGACTATGTACTGGTAGTGGAGACCAGTACATAGTTGCTACTGGTAGTAGAGACCAGCAGCACTATGTACTTCAGAATACAAGCTTTCTTTTTTGAAAAAAAAAAAAAAA(32)SEQ ID No.32的信息(a)序列特征長度519個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.32GGCTCTGACACATGGCACGTACAAGAGCGTGTGGCACCTCGTGGTTAACCGGTGCAAGAGCGCATTCGGTGGCATCTTTCATGTGTCCGTGCAACAGCCGGTGATCAGCCCGGCGAGGAAGCTCGTCCGGACGGGGACGCGCCCGTGTACCGGAGCTTCACCTACGACGAGTACTACAAGAAGTTCTGGAGCAGGAACCTGGACCAGGAGCACTGCCTAGAGCTCTTCAAAGGCCAGTAGTAACGACTAATGAACTCGATCGTGTGCAGAAACTTCAGACTTGCGCTTCACTACCCAAGTTAAAATTGCTTGCCGCTCGTTGCTGCAGTGCAGATATCCTCGTCGTTTGACGGTTGTGTGTGGTTGTCTGGTGCACTTAATTTATCGGTTCAGTACTTAATTATGTCGGGCAATGCTTTACTTATTTTATCGATGTTATGTATCACATAATGCTTTGGTTATTCCTAAAACTTCCATAAAATTGGTATGCCTAATTACCCTCAAAAAAAAAAAAAAAAA(33)SEQ ID No.33的信息(a)序列特征長度483個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.33GGTATAATGAATCCTGTTTGGTGGAGATGGTTCTATTGGGCCAACCCGGTCTCCTGGACCATCTATGGAGTGATTGCATCGCAGTTTCGGACAGCGACCGTGTTGTCACCGTTCCTGGCCAAGCTACCAACCATGGTGTGAAGGATTTCTTGGAGAAGAACATGGGCTTTAAGCACGACTTCCTCGGCTACGTTGTGCTGGCCCATTTCGGCTACGTCATCATCTTCTTCTTCCTCTTTGGATACGGCATCAAGTGCTTGAACTTCCAGAAACGGTAGGAGGCCGGTGTCCAGCAGGATGTCATCCGATGTCACGTTTTTGGAGTGTAAAGCCAATGGAGCACTTAATACCGATGCTTTTTTTTTTTGTGTAGATATATAGTCTGTTCGATATCTGCTAGCTTGTATTGGCACTTAATGTACAACATTATTTACTCAATGTTCTGAGTTTATGGTATATTCTTTTTCTAAAAAAAAAAAAAAA(34)SEQ ID No.34的信息(a)序列特征長度315個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.34CTTTAGTATTCTAACTATCCAACGCTCCTGGATGTAGTTCCCTCTTTGTAGCGTTTGCACCATTTCTCCAGGTGATACCAAAGGATATCGTCCTCCTGGTCTTGTGCGCATTGATGAATTTTCTGGGATCACATCTTGTTGTGCCATCCTTGTAAAAGGGTGCGCTTCTTTTTTTTCTTTTTGACCCTTAGCGCAACTGTGGACATGCTCACATACATGTATAAGGCCCTCCCGGAGATGCACCTTGTATTTGCAGTTGGGATGTCAAATAGGTGTCCTACATGCTTTGGTGACCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(35)SEQ ID No.35的信息(a)序列特征長度485個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.35CCAATCCTGGTCTCTCGCCCTCCTCTTCCCCACCAACCTGTTCCCCGACAAACATCAAATTGTCCATGGTGAACATGATGATCCTCACATGATACGATATATTTGGTACCTTAGCACGAGCGCAGGATTTCGGTGGGGCTCTGGCCAGTGTTCTGCACCTTCTTGTTCAAGAAAGCATGGAGGATCGCCTACTTTCAGCTTAATGATCAGATATATGACAAGATCTATGTGCAAATGGCTATCAGTAAGGCTGCTTTGATAAGAAAATTCTGATGAGGAACCCTGGAGTTTTTTTTCCCACCTGCACTTCCTTTCATACTCTTTGTGCTGTTTGTGAAGTTTTAATAAATGTGCCCCTCTGGGTGGCATAACAGTGTGTAACAGACTAATTACAGTAAACTAAAGAGAGATCGATATTGTAAACAGGCTAGTCGTTTAATATTACCTTTGCCACTCATGTACTTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(36)SEQ ID No.36的信息(a)序列特征長度483個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.36TGCATCATGTTCATAGTATTTCTCCTTCAACAGCCTCTTTTGCTAGGTCTCCCGTTCGGTTCTCTCCAACACAATTCTGGTCACACTCCAAGAAGTCAAGCGACTTTCTCGACAGCAAGTCCGTCCCGCTTTTCAAGCTACTGGAAATCAAGGACATCCTATTGCCATCCCTCAATATCATTGCCAGGAATTAACTTTGTAGCCTCTTCGCCTTCCCCCGCTGCCTCCGCGGTTCTTCCTCCGTGTTCAGGGATTATCGCCCACCCAATTCAACATAACATCCATGGGCTAATCAGGACTGTACATATTCTGGAGGACAACTCCGTTATTAAGTTTTTTTTTCTCTTTTTTCTTGAGAAGGGGGGGGGGGGATTAATGTTATTTTGTGTTATTATGCTGTATTAAGGGAAACACTACCGAAATATTATTCCATGACTCGTCCAAATTATCCATATGTGTAAAGTTTAAAAAAAAAAAAAAAAA(37)SEQ ID No.37的信息(a)序列特征長度484個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.37GTGACACAATTGTAGTGTGAACCGATCTGTTTATTGCCGTCACTTTCAGAATTGGTTCAATGTAAAGATTGTCCATTCTGTCGTGATGAACCCATGTGGTTATTGAAGATGGTTGTCACATCCACAGGTTCTGTGATATCGCCATAATGTGCCACTTCAAGAACGTGCTGTTTTGAAAGATTGTCACGGTTGGTGCTGGTTATATTGTAACTGCTACCAGTGAACACCAAGCAGAATCTCTCAGCCAGAAAGTAGAGCGATTTTGATAGTGTGGTTGACCTTGAACCATTTTGTTTGCTAAGTCAGATACAGCCGTACCCAGGAGTTAAGAAGGGAGGGGGTAACATGTATTTCGAAAAAATGATTTCACCCGTGATACCCCCAAAAATAGTGTGCTCTTGTCTATTCTAACAGATTGAGCTTGGACTTGACCCGTTGAAGCGCTTTCTAGCGAGATTGATCCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(38)SEQ ID No.38的信息(a)序列特征長度282個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.38AGACATAATTTCCATTTAGTTTTGTTCTCTCATAATTAATTTCATGTGCATAAGGGCCCTGATGGTCTGATAAAGGTTAGGCTAGAGAAATCATGCCACTCCCATATAAAGTTGGAGATGGTCCCTTATAGGAACACCTTTCTCTGAGCCAATGAGCCATCATGTATAGAAACCCCCATTCCTGAACTGTGTATATCTTTACCCCCAATTTCTCTACATGTAACTAGATTACACATTTAATAAAGAATTTATTTTTCCTTTCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(39)SEQ ID No.39的信息(a)序列特征長度441個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.39GGCAGATCAAGCGGTTTGAGAAGGAAGCAATTGGATCTGCTCATACATAGGCACATAGCAACTGAACTACTGAAGACTGCCGGTACATAACTACAGTCTACATATATACCTGATGATATTGTTTAGGATCCCTGGTTGAGAGTTGAGACGGGCTCACGCTTCTGCTGTTGCAAGCCACCGTGTCTGGCTGGTAAGCAGAGGGAAGAGCTTGCAAGTGGGTTGGTCCAGGTGGTGTAAAGTTTTGGTTCTTTTTATTGACATGCCATTCTCTACAGGAGCACTGCTGTTTTTGCTCCATTTTCTTCTTTCTCTTTTCTCCTTACCCCCACATCTGTTATTATAGATCTGTGTAAACTGTAAACTTATGGCCCTGCCTTTTTACAGTAGATTCTTTGATAGATCTCCCTCCGGGGTTACATGCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(40)SEQ ID No.40的信息(a)序列特征長度377個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.40ATACCGATCGTTGTGCTACATGCGCCCTCTTGCCATATGGCCATACAGTGGGCACTATCAACCCAACTCCACAAGCAGACTGCAGATATCCCACAGGACTCTTTCCCAAGAACCAGTTCTCGTATGCTCGGATTGCGAAGTTGCTGCATTTACCTGAAGACGAATCGCCGAAGAGTTTCCTTCGAGTGATTTATGAGATTGTTCGTAACAGGTATAGGTCCTGATGGAAGGGCAAATATGCTCCTTATTGTTGGGTGTCCATTGGCCGTATTTTCATTGTTGGTTGAGAACATTTGTTGCTGTTGATCAGCACACTTCAGTATATAGTTTATGATAATAAAACTTTATTAATCGTGGATAAAAAAAAAAAAAAAAAA(41)SEQ ID No.41的信息(a)序列特征長度371個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.41TTAGCTTAGAAATTACTATTCTTCTTCTTTGCATCCTTCCTGTGGTTTAATCTTGATTTTTGTTATTACTTGTTTACAGCAGCTTGATCATCTCTTTGTAGTACTAGTTCGGTTCCATTTCTTCTTGTAGAATCAAATCAGCCAATGGATGATGATGATGATGAAATTGGGTAGGCAGGCAAGAACACAAGATGTGGGTGTTCTTCTGCTCCTGTAGATCCCTCATCAACTACTCTCCTAGTCTCCTAGATAGATAGACTATTATCTTAGAGTATGATGTTAGTACCAAAGATATTCAGTAACCTGCTCGGTGTATGCTATGAATTTCAAATCCAAGTGTTTGTTTAGTTTGTTCAAAAAAAAAAAAAAAA(42)SEQ ID No.42的信息(a)序列特征長度418個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.42GTTCATCCGAAATTGACGAGCACATCCTCCACTGGAACACCAGCTGACTTGCTTCCTCTGCCGTCACGATTAGCCACAAGGAATTTCCAGATCACAGCGCAACATCAGAAACCTTTCTCTTGAGTAATCCATGATTGACCTTCCTTTCTCGTGGATCAATTTTTGCGTACCATCAAGCAAGGGCAAGAGAAAAATCTTAGAAACCACCCAGAAAATAGTTCAGCTTGATAAAATATGTAAAGAGTTTCTTTGTTTACAGGAAATTTATATATCATACGTAGACACTCGTGTGCATCAGATTGCACAACGCATATCAGGATATAGAATATTCAGCTGCTTTTGCAGATGAATTTGTCTTCCATCTTGTAACTGGTGCCAGATCACTTTGAAAATAAGAATAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(43)SEQ ID No.43的信息(a)序列特征長度506個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.43GCCTACCGCGCCACTCCGCGAGCGACGCCGCCTGCTCGTCTACAGAATCGACGTCGAAGCTGTAAGGCTAAAGGGAGGCCAAACGCCCAAGTCCCTGAAGCAGCAGTTCGCCGTATGACACTCGCTGCCTGGCCGTTGCAGTCGGACACACAACTGAATGCCACGGCATGGCAGGGCCCTGCAATGTTCGTTCCTCCGGTCTCAATTTTTGGTTCGAGTAGATGTGTACACACGACCGTTCACTGTACCTCAAGTGAAAAATAGTGTAAAGAAGATGTAAATACGAAACATTTGTGCTTCGGCCTCCTGCAGTCAGTGCAAAAATAGGATGACCGTTCGGCAGATGCATGCTTGTCATTTTTGGTGGGTTTCCCATTTGTGAGCTGTGAGACGGAGGGGGTGGTTTCGTCGTGTGAATTTCCACAGGTGCGCATCGGTGACGATGCACATGATTGGATCAATTCGAATCATCTGGCTATCAGGTCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(44)SEQ ID No.44的信息(a)序列特征長度414個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.44ACGGCAAAATGACGGACGGCGTCTCGCTGCTCGTCCACGCTAGCGCGGCTCCATGTCCGTAGACGAGGCCAAACCGAAGTGATGAAGCGCATCGACGCCTCACGGAGGAAGCTGCTGAGCTTGGTCGTCGGCGAGCAGGAAGGCCCTATCCCGAGGCCGTGCAAGCACTGTTCTGGAAGATGTGCAAGATTCTTCACCTGTTCTACTACCAGACCGACGGATTCAGTTCTCCCAAAGAGATGGTCAGCGCGGTGGATGCGGTCATCAAGGAGCCACTTCAACTCAGATCATTGTAGATTCATCTCTGTCACTTTTTCTTTTCTTTTTTTTGGATACTGAAGTACTACCAGTGTTGCATTTAAAAGCCTGAGGTAATCAGAATGTGGAGTTTGATCAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(45)SEQ ID No.45的信息(a)序列特征長度430個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.45GCCGGTCGTGCTGTCCGGCTCCGTCGCGCTCCCCACATGCTCATCATGCCCAAGTTCCAAGGACCCGAGGTCAGCGCCAAACACAGACTGAATTTTACTCCTGGTTTACAGACGATCCAAGTCAAACTGTTTTAAATTTTGATCAAAGTTTTATAGGAAAAAAATAATAATAACATTTTCAACTAAGACCAATTTGTTATAAATATATATTCAATTATTGGTTTGATGAAACTTATTTAGTATTATAAATATTATCATATTTGTGTATGAATTTAGTCAACTTAAAGCAGTTTAACTTTGATTAAAGTCAAGCGTCTTATAATCTGAAACAGAGTAAGTATTTGTTTATTAATTTACTTATTATTTTCCAACTACATTCCTGGATCACATGCAAGTAAATGTTGTTCTAAGATCAAAAAAAAAAAAAAAA(46)SEQ ID No.46的信息(a)序列特征長度413個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.46CCAGGGATCACAGATAAGCGTTGTCTAATTCCCGCCACCACGCAAATAGGCGATTCCACTCTTAAACTCTATCTACATATGTAGCGCGTGAGGAACGGTACGCATGGAAGTGATCATCAGACAGATGCGGTATCAGACAGATATATTACAATAAATGTATTAATCCAACCGTACATAATGTGTGGCGCAGCGATCTCAGATTGCATATGTATAGCGTACGTACTTAGGTACGTGCGAGCGTATAAATACATATATACAAGCACATGGCTGCTGTTGCGGGTGCGCTAGAATAAATATACATATCCATGCATGCGTTATCTGTATACATATACATATTCATGTATGCGTTACTATCGTATACATATCGATCTGTTCTATATACATATTATCTGTATAAAAAAAAAAAAAAAAAA(47)SEQ ID No.47的信息(a)序列特征長度469個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.47GATGCTAGTAGCATCATCACCCACAGCCCAGATACCCTCGTGGCGTTATCAGCCCCCGGTGAGAAAGGCTGGTAGACCGTAGAAGATTATGGTTCATTTGTTACTCACGGTGTTTGTCGCTCCCCTGTAAATAAGTGGAGGAATCCACTCTTTTCCTCCCTTTGGCACGCGCCAATGTTCCCCTTGTTAACTTCCATGGTTATTCTCCCGTGGTTAAGTACCTGTTGCCACGTGTTGCTTCTATACTAACCTGGCTGGTTACTCACCCGAGATTGTACCTTTTGTACCCTTGGTCATGCTTTTTCACCACTGTGTATATACCCTTGACTGGCATATTTTAGTAGTACCACTAAACCCTGAAAGTTGCTGAATGTTCCAGAGCCCACAGCCCACAGCTTCAGTTTGTCAGGTTAACCCAGGCTGTATCTAACACTGTTGTCCTTGTGCTTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(48)SEQ ID No.48的信息(a)序列特征長度504個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.48TTTCGCCTCATTTACGTCGCCCCCGGAAACCTCTCCAGAGGTATTCCCAAGAAGTCCAGCTACTGGTTCCTGACTTCCTCAACGATGATGAAAAAGAAGAAGAAATCAACTAGCTCACTTCACTACCTGATCTCCTGAATAAAATGATCTCCTGAATAAAAAAGTTCCTGAATAATCTTTTGGCCTCCAATGATTCGACTGGCTGCATGTGCCCTTGTACTTGTTAGCTCTGAGAAATAAAAGTCAGTCTTGACTCTCGACGAATATAACCAATTTAACTTGTGTACTACTACTGCTGACAAATACTGGGGAATATAACCAGTAATTCAGAGTTTCAGAGACACTGAATGATCCATTGTAACAGTATTTCACCGTAGTTTAGAGACATGTAATTCAGAGTTTGCTTGTACACAACTCAGTAATTCAGAGTTTCAGAGACACTGAATGATCCATTGTAAGGAGAAATGGGGCTTTTGTCGTCTCCAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA(49)SEQ ID No.49的信息(a)序列特征長度526個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.49ATACCTGTTTGTATCCACAAGATCCTAGAACCCTCCAAGGAACTTGCGATGCAACTCATGGAATTAGGTCGACACACTCTCCGACAAGGAAGTCTGGGCGTGGACATGCTGAGAGACGGGGCTTGCACCATGACTACGTCACTGCGTTACTGCAAGACGGATACCACCTGGAGGCTCTTCGCTACGCTAGAAAATACAAGGTAATAACTGTGCAGCCTGTCCTGTTCTTGGAGAAAGCTGTGGCCATAAACAGCGCGCAGAACCTCGCCGCCATGCTGAGCTTCTTCTCCGAGTTCACGCCGACCTTCAAGACGACGTCGGACTACGGCAGATACCGGCATATCTTGTCTGAGATGATCTGAACAATTTCAGTAGACAGGGTGAACTGCCTGAAACGATTTGGCACGTTTTATGCAATCCCGTACAGAAGAAACTTGATACGAGGAATGGTGTAAAGTTCAGACATTTAAGTATAATTGAACCAATGGAACGAGGTTGCTCAGTGAGACCAAAAAAAAAAAAAAAA(50)SEQ ID No.50的信息(a)序列特征長度463個堿基類型核酸鏈型單鏈拓撲結(jié)構(gòu)線型(b)分子類型cDNA(c)最初來源水稻(d)序列描述SEQ ID No.50CGCCGCCGGCGCCGCCGCCCAGATCATGCTCGACTTCCCGGCTACGGCGTCGTGCCTACCTTCTAGTGTTCTAGCTCATCGATCTGAACGTTTTTTGAGCTGCAAATTGATCAAGCTGGCGTTGCATACGTACAACGTAGTACTTCAATTCACCATGCATAGGATTAGCCACAAGTTCTAGTTGATCCACAATTCACCAACTTGAAAGTTTTTTTTAGCTAGCCTGATTGAGTTTTAGGCTAGTTTCTGCAATCGTGTTTGCTAGAACGGCTATAACTAGTTGTAGTTAATCTGGATTTTCTGTATGTATGGTGTTTTGTAGTACCGATCTGATGATGATGATGAAGAAAAATATTTGGGCAAATCGATCGATCTCATCCCAGTTTCTAATTAACATGCATGCGATCGATCGATTGCGCGCGAGATCTGGATTGAGATTAATTAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA
權(quán)利要求
1.分離出的水稻胚乳cDNA表達序列標簽的序列，其特征在于cDNA序列具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離出的水稻胚乳cDNA表達序列標簽的序列，其特征在于cDNA序列具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中的一條或數(shù)條的組合。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離出的水稻胚乳cDNA表達序列標簽的序列，其特征在于所說的cDNA序列包括SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列中每條序列的互補序列或同源序列。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述分離出的水稻胚乳cDNA表達序列標簽的序列，其特征在于所說的cDNA序列包括SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的每條序列中的8～100個連續(xù)核苷酸為探針的序列或其互補序列。
5.一種由權(quán)利要求1或2或3或4所述序列標簽所組成的基因芯片，其特征在于在載體上結(jié)合有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的序列、同源序列或其互補序列的核酸分子。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種表達序列標簽的基因芯片，其特征在于所說的載體為固相載體或液相載體。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種表達序列標簽的基因芯片，其特征在于所說的固相載體為玻片、硅片、尼龍膜、硝酸纖維膜、凝膠。
8.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種表達序列標簽的基因芯片，其特征在于所說的核酸分子是脫氧核糖核酸、核糖核酸和多聚寡核苷酸。
9.根據(jù)權(quán)利要求5所述的一種表達序列標簽的基因芯片，其特征在于用于生物功能的研究和檢測。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種表達序列標簽的基因芯片，其特征在于所說的生物包括動物、植物以及它們的細胞、組織器官及其系統(tǒng)；所說的生物功能的研究包括藥物、植物的抗逆性、植物育種和植物新品種的產(chǎn)生、雜種優(yōu)勢的早期預測、新型除草劑和新型農(nóng)藥的篩選、動植物生長和發(fā)育的機理和藥物的毒理學；所說的生物功能的檢測包括轉(zhuǎn)基因植物的安全性檢測、食物成分的功能性評估、病原體的檢測和診斷、生物物種的鑒定，包括動植物和微生物。
全文摘要
本發(fā)明公開了水稻葉片特異表達序列標簽及構(gòu)成的基因芯片。cDNA序列具有SEQ ID No.1～SEQ ID No.50所示的DNA序列。運用表達序列標簽技術(shù)對構(gòu)建的水稻胚乳cDNA文庫進行脫氧核糖核酸序列測序,獲得的表達序列標簽通過剔除冗余序列、互聯(lián)網(wǎng)數(shù)據(jù)庫進行檢索、分類,富積非冗余序列,獲得了50條新的表達序列標簽,這些新的表達序列標簽應用微陣列技術(shù)制成表達序列標簽組合基因芯片;該芯片能用于對農(nóng)作物的重要農(nóng)藝性狀的基因克隆、雜種優(yōu)勢的早期預測、轉(zhuǎn)基因農(nóng)產(chǎn)品的安全性檢測、新型除草劑的篩選和新型農(nóng)藥的篩選、新藥物的發(fā)現(xiàn)和毒理學研究、疾病診斷、動植物育種和植物新品種的產(chǎn)生、植物抗逆性的研究和動植物品種的鑒定等。
文檔編號C12Q1/68GK1367261SQ0113249
公開日2002年9月4日 申請日期2001年10月31日 優(yōu)先權(quán)日2001年10月31日
發(fā)明者李德葆, 董海濤 申請人:浙江大學