一種獻王棗的組培快繁方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種獻王棗的組培快繁方法，包括外植體的建立、啟動培養(yǎng)、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)、煉苗和移栽等步驟，本發(fā)明針對獻王棗這一品種進行研究，于不同階段采用了最適合的培養(yǎng)基組成，繁殖系數(shù)高，生根率高，該方法操作簡便，成本低，能有效、方便的在短時間內(nèi)獲得大量獻王棗組培苗，而且所獲得的組培苗成活率高，苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性狀，采用本發(fā)明的獻王棗的組培快繁方法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩(wěn)定的再生植株，試驗結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性良好，可應(yīng)用于大規(guī)模商品化育苗，適合廣西北部山區(qū)大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
【專利說明】
一種獻王棗的組培快繁方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明屬于植物組培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種獻王棗的組培快繁方法。
【背景技術(shù)】
[0002] "獻王棗"是河北獻縣林業(yè)局從金絲小棗中選出的優(yōu)良品系，2005年通過河北省 林木審定委員會審定。因主要分布在河北獻縣河街針獻王陵一帶，故定名為"獻王率"。獻王 棗構(gòu)勢強健，發(fā)枝力強，樹冠自然半圓形，樹姿開張。棗頭棕紅色，棗吊中長。葉卵圓形或?qū)?披針形，葉緣鋸齒細?；恐卸?，每花序著花5-8朵，花徑6毫米左右。果實長圓形，平均果重 9克，最大果重12克。果皮深紅色，果面平整，果梗細而短，梗洼深，果頂略凸。果肉黃白色，肉 質(zhì)脆而致密，味甜，汁液較多，鮮棗可食率93.4%，含可溶性固形32%左右，干棗含糖76. 5%，品質(zhì)優(yōu)良，適宜鮮食和制干。"獻王棗"耐干旱、耐鹽堿，早果性強，嫁接苗當年掛果，根 蘗苗翌年掛果。獻王棗果個大(平均單果重9g)，大小整齊，產(chǎn)量是普通金絲小棗的1~2倍， 果實成熟期一致，品質(zhì)好，具有產(chǎn)量高、品質(zhì)好、抗鹽堿、抗裂果、適應(yīng)性強等特點，從而深受 廣大棗農(nóng)和市場歡迎。
[0003] 在實際栽培中，獻王棗大多采用嫁接和扦插的方法進行繁育，但是采取嫁接苗的 方式會受到受砧木資源的限制，采用嫁接和扦插的方法繁育繁殖率很低，生長速度慢，弱病 苗比例高，費工費時，成苗率較低，且易侵染各種植物病毒，難以大規(guī)模的發(fā)展苗木，也不能 進行周年生產(chǎn)，遠遠不能滿足市場的大量需求。因而影響了其大面積的推廣。在此形勢下， 采用棗樹組織培養(yǎng)技術(shù)則成了快速培育良種苗木的有效途徑。組織培養(yǎng)(Tissue Culture) 是在無菌條件下，分離并在培養(yǎng)基中培養(yǎng)離體植物組織的技術(shù)，用組織培養(yǎng)方法快速繁殖， 具有整株的遺傳一致性，生長健壯，根系發(fā)達、移栽成活率高，果品品質(zhì)好，產(chǎn)量高等優(yōu)點。
[0004] 棗樹的組織培養(yǎng)研究始于20世紀70年代末，迄今為止，已有20多個品種以不 同類型外植體建立了無菌離體繁殖體系。對于棗樹的組培方法也有相關(guān)文獻報道，如：1、 【題名】毛葉棗組培快繁技術(shù)研究【作者】續(xù)九如，李春立，孫建設(shè)【出處】北京林業(yè)大學(xué)學(xué) 報，2003,25(3)【摘要】利用組織培養(yǎng)技術(shù)對毛葉棗的組培快繁技術(shù)進行了研究。證明3、4月 是1年內(nèi)采集外植體的最佳時期，在此階段對外植體進行培養(yǎng)時，有效萌芽率最高。以MS為 基本培養(yǎng)基篩選出適合毛葉棗組培各階段的適宜激素濃度和配比，分別為：啟動培養(yǎng)基 MS+6-BA 0.8 mg/L+IBA 0.4mg/L;增殖培養(yǎng)基MS+ 6-BA 1.2 mg/L+IBA 0.5mg/L;生根培養(yǎng) 基1/2MS+IBA 3.0mg/L并闡明了繼代次數(shù)與增殖系數(shù)和生根率的關(guān)系，提出毛葉棗繼代次 數(shù)以8代左右為宜，8代之后應(yīng)進行生根培養(yǎng)。2、【題名】酸棗組培快繁研究【作者】代麗，劉 孟軍，王玖瑞，周俊義【出處】河北農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005,28(2)【摘要】：以休眠芽為試材，建 立了酸棗的組培快繁體系。最適啟動培養(yǎng)基為MS+ BAU+ IBAo.iS MS+BA2.Q+NAAU，增殖培 養(yǎng)基為MS+BA2.0-3.〇，萌芽率和壯芽率均超過了70%。增殖培養(yǎng)時，下部莖段的出芽率高于上 部莖段，但萌發(fā)壯芽的比率則以上部莖段相對較高。1/2 MS+IBAon.o是酸棗快繁生根培 養(yǎng)的適宜培養(yǎng)基，生根率最高可達92%。迄今為止，人們在棗樹的組培研究方面已取得了一 些成就，運用組培繁殖棗樹優(yōu)良品種的技術(shù)已逐步應(yīng)用到生產(chǎn)中，但是，棗的組織培養(yǎng)較困 難，成本較高，不同品種間的繁殖條件差異較大，不同品種的棗樹的組培方法也不一樣。
[0005] 目前，在獻王棗的繁育上，由于采用傳統(tǒng)的扦插和嫁接等方法進行繁育，存在著繁 育繁殖率很低，生長速度慢，遠遠不能滿足市場的大量需求等問題；因此，開發(fā)一種針對獻 王棗的組培快繁方法進行培養(yǎng)繁殖，能夠促進優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實現(xiàn)獻王棗樹苗 的大量繁殖和快速推廣，是解決市場需求等問題的有效方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的是提供一種操作簡便，繁殖速度，可應(yīng)用于大規(guī)模商品化育苗的獻 王棗的組培快繁方法，采用該方法能有效、方便的在短時間內(nèi)獲得大量獻王棗組培苗，而且 所獲得的組培苗成活率高，從而實現(xiàn)獻王棗樹苗的大量繁殖和快速推廣，經(jīng)過廣西北部山 區(qū)的平樂縣、恭城縣，荔浦縣種植，能夠獲得生長狀態(tài)好、果實甜的品質(zhì)，證明其適合廣西北 部山區(qū)大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
[0007] 為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 一種獻王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于春季萌芽前，剪取1年生棗頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留 半木質(zhì)化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡8-12分鐘，再 用自來水沖洗干凈，然后用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，用 質(zhì)量濃度為1. 〇%次氯酸鈉溶液消毒10-12分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗 好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段 作為外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將滅菌后的外植體接種到經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)， 培養(yǎng)條件為溫度25~27°C，光照強度為2400-25001x，光照時間15-16h/d，在培養(yǎng)室 中無菌培養(yǎng)23-25天后，將沒有染菌的材料切成帶1~2個芽的莖段接種 于分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙 酸(祖4)0.411^/1+維生素(：1.6-1.81^/1+精氨酸1.7~1.81^/1+4%糖蜜+瓊脂78/1，培養(yǎng) 基pH值為6.0;在光照強度為2300-24001X，光照時間14-15h/d，溫度為26-27°C的條件下， 培養(yǎng)30-35天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為25-26 °C，光強2000~25001x，光照時間為17h/d的條件下培養(yǎng)33-35d ; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基 中進行生根培養(yǎng);培養(yǎng)溫度26~28°C，光強2000~22001x，光照時間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.0~2.0 cm時，將組培苗進行室內(nèi)煉 苗，煉苗溫度為:27-28°C，光照強度為5000-65001x，室內(nèi)瓶煉5-6天后，敞口煉苗4天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+蛭石+細河沙+草炭按照2-3:5:1:0.5的比例做基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣 濕度為85%-90%，溫度25~26°C，避免陽光直射，35-38天后，移出溫室進行全光照煉苗 6-7d，及時澆水，然后移栽大田。
[0008] 所述的獻王棗的組培快繁方法，步驟(2 )中的啟動培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺 嘌呤(6-BA) 1.3mg/L + 萘乙酸(NAA)0.3mg/L + 維生素 C 1.0mg/L +3% 糖蜜+瓊脂 6-7g/L，培 養(yǎng)基pH值為6.2。
[0009] 所述的獻王棗的組培快繁方法，步驟(3)中所述步驟(3)中繼代培養(yǎng)基的成分為： 13+爐芐基腺嘌呤(6-84)2.111^/1+萘乙酸(祖4)0.45-0.5511^/1+維生素(：0.81^/1+維生 素 B6 1 · 4-1 · 6mg/L+精氨酸1 · 8~2 · lmg/L +4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6 · 1。
[0010] 所述的獻王棗的組培快繁方法，步驟（4)中生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.7~0.9 mg/L+4.5%糖蜜+瓊脂8g/L, ρΗ=6·0-6·2。
[0011] 本發(fā)明的有益效果為： 1、本發(fā)明是一種針對獻王棗的組培快繁方法，針對獻王棗品種進行的研究，經(jīng)過不斷 試驗，得到了最適合該棗樹組培快繁所用的各種培養(yǎng)基，本發(fā)明的培養(yǎng)基所采用的碳源為 糖蜜(糖廠蔗糖生產(chǎn)分離出來的不結(jié)晶的含糖液體），代替了常用的蔗糖，不僅降低了培養(yǎng) 基的成本，而且糖蜜富含營養(yǎng)成分，含有各種單糖、粗蛋白質(zhì)和礦物質(zhì)，更容易被植物利用。 本發(fā)明分生培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基中都加入了精氨酸，精氨酸不僅能提供有機氮源，同時也 對植物體的生長及不定芽，不定胚的分化起促進作用，而且能夠被植物細胞很快吸收;在培 養(yǎng)基中加入的維生素 C和維生素 Β6,能增強培養(yǎng)基的營養(yǎng)，利于外植體的生長發(fā)育。
[0012] 2、本發(fā)明的獻王棗的組培快繁方法可以解決采用傳統(tǒng)繁育方法存在的繁殖率很 低，生長速度慢等問題，采用本發(fā)明的獻王棗的組培快繁方法能夠極大地提高獻王棗的繁 殖速度，降低弱苗、病苗的發(fā)生比例，加速了新品種的快速推廣和開發(fā)利用;采用該方法對 獻王棗進行進行培養(yǎng)繁殖，能夠促進優(yōu)良遺傳材料的快速繁殖，實現(xiàn)獻王棗樹的大量繁殖 和快速推廣，解決市場的需求。
[0013] 3、本發(fā)明的獻王棗的組培快繁方法操作難度低、生產(chǎn)成本低，生根率高達87%以 上，生產(chǎn)的組培苗成活率高，易于在大范圍內(nèi)推廣使用，采用本發(fā)明的獻王棗的組培快繁方 法可以獲得大量整齊一致，遺傳性狀穩(wěn)定的再生植株，試驗結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性良好，可應(yīng)用 于大規(guī)模商品化育苗，苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性狀，適合大面積區(qū)域種植，特別適合 廣西北部山區(qū)大面積區(qū)域種植，特別是喀斯特地貌山區(qū)種植。
【具體實施方式】
[0014] 實施例1 一種獻王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于春季萌芽前，剪取1年生棗頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留 半木質(zhì)化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡8分鐘，再用 自來水沖洗干凈，然后用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3次，瀝干水分，用質(zhì)量 濃度為1.0%次氯酸鈉溶液消毒10分鐘，然后用無菌水沖洗7次，用鑷子夾取清洗好的莖段， 在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段作為外植 體； (2) 啟動培養(yǎng):將滅菌后的外植體接種到經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的 成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.3mg/L +萘乙酸(NAA)0.3mg/L +維生素 C 1.0mg/L + 3%糖蜜+瓊脂68/1，培養(yǎng)基?!1值為6.2;培養(yǎng)條件為溫度25~27°(：，光照強度為24001^ 光照時間16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)23天后，將沒有染菌的材料切成帶1~2個芽的莖段 接種于分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙 酸(NAA)0.4mg/L +維生素 C 1.6mg/L+精氨酸1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為 6.0;在光照強度為23001x，光照時間15h/d，溫度為26-27°C的條件下，培養(yǎng)30天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸(NAA)0.45mg/L +維生素 C 0.8mg/L+維生素 B6 1.4mg/L+精氨酸2.1mg/L +4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6.1;在培養(yǎng)溫度為25-26 °C，光強20001x，光照時間為17h/d的條件下培養(yǎng)35d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基 中進行生根培養(yǎng);生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.7mg/ L+4.5%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6.0-6.2;培養(yǎng)溫度26~28°C，光強20001x，光照時間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.0~2.0 cm時，將組培苗進行室內(nèi)煉 苗，煉苗溫度為:27-28°C，光照強度為50001x，室內(nèi)瓶煉6天后，敞口煉苗4天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+蛭石+細河沙+草炭按照2:5:1:0.5的比例做基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕 度為85%-90%，溫度25~26°C，避免陽光直射，35天后，移出溫室進行全光照煉苗7d，及時 澆水，然后移栽大田。
[0015] 實施例2 一種獻王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于春季萌芽前，剪取1年生棗頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留 半木質(zhì)化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為〇. 4%洗衣粉溶液中浸泡10分鐘，再用 自來水沖洗干凈，然后用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗4次，瀝干水分，用質(zhì)量 濃度為1.0%次氯酸鈉溶液消毒11分鐘，然后用無菌水沖洗8次，用鑷子夾取清洗好的莖段， 在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段作為外植 體； (2) 啟動培養(yǎng):將滅菌后的外植體接種到經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的 成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.3mg/L +萘乙酸(NAA)0.3mg/L +維生素 C l.Omg/L + 3%糖蜜+瓊脂78/1，培養(yǎng)基?!1值為6.2;培養(yǎng)條件為溫度25~27°(：，光照強度為250011， 光照時間15h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)24天后，將沒有染菌的材料切成帶1~2個芽的莖段 接種于分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙 酸(NAA)0.4mg/L +維生素 C 1.7mg/L+精氨酸1.7mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為 6.0;在光照強度為24001x，光照時間14h/d，溫度為26-27°C的條件下，培養(yǎng)33天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸(NAA)0.50mg/L +維生素 C 0.8mg/L+維生素 B6 1.5mg/L+精氨酸2.0mg/L +4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6.1;在培養(yǎng)溫度為25-26 °C，光強23001x，光照時間為17h/d的條件下培養(yǎng)34d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基 中進行生根培養(yǎng);生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.8mg/ L+4.5%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6.0-6.2;培養(yǎng)溫度26~28°C，光強21001x，光照時間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.0~2.0 cm時，將組培苗進行室內(nèi)煉 苗，煉苗溫度為:27-28°C，光照強度為61001x，室內(nèi)瓶煉6天后，敞口煉苗4天； (6)移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+蛭石+細河沙+草炭按照3:5:1:0.5的比例做基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣濕 度為85%-90%，溫度25~26°C，避免陽光直射，37天后，移出溫室進行全光照煉苗7d，及時 澆水，然后移栽大田。
[0016] 實施例3 一種獻王棗的組培快繁方法，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于春季萌芽前，剪取1年生棗頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留 半木質(zhì)化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為〇. 4%洗衣粉溶液中浸泡12分鐘，再用 自來水沖洗干凈，然后用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗4次，瀝干水分，用質(zhì)量 濃度為1.0%次氯酸鈉溶液消毒12分鐘，然后用無菌水沖洗8次，用鑷子夾取清洗好的莖段， 在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段作為外植 體； (2) 啟動培養(yǎng):將滅菌后的外植體接種到經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，啟動培養(yǎng)基的 成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤（6-BA) 1.3mg/L +萘乙酸(NAA)0.3mg/L +維生素 C l.Omg/L + 3%糖蜜+瓊脂68/1，培養(yǎng)基?!1值為6.2;培養(yǎng)條件為溫度25~27°(：，光照強度為24001^ 光照時間16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)25天后，將沒有染菌的材料切成帶1~2個芽的莖段 接種于分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙 酸(NAA)0.4mg/L +維生素 C 1.8mg/L+精氨酸1.7mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為 6.0;在光照強度為24001x，光照時間14h/d，溫度為26-27°C的條件下，培養(yǎng)35天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，繼代培養(yǎng)基的成分 為:MS+ N6芐基腺嘌呤(6-BA) 2.1mg/L+萘乙酸(NAA)0.55mg/L +維生素 C 0.8mg/L+維生素 B6 1.6mg/L+精氨酸1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6.1;在培養(yǎng)溫度為25-26 °C，光強25001X，光照時間為17h/d的條件下培養(yǎng)33d; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基 中進行生根培養(yǎng);生根培養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.9mg/ L+4.5%糖蜜+瓊脂8g/L，pH=6.0-6.2;培養(yǎng)溫度26~28°C，光強22001x，光照時間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.0~2.0 cm時，將組培苗進行室內(nèi)煉 苗，煉苗溫度為:27-28°C，光照強度為65001x，室內(nèi)瓶煉5天后，敞口煉苗4天； (6) 移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+蛭石+細河沙+草炭按照2.5:5:1:0.5的比例做基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣 濕度為85%-90%，溫度25~26°C，避免陽光直射，38天后，移出溫室進行全光照煉苗6d，及 時澆水，然后移栽大田。
[0017] 以下為本發(fā)明獻王棗的組培快繁方法得到的獻王棗組培苗的繁育結(jié)果： 種植地點：廣西桂林市恭城縣(恭城縣位于廣西北部，氣候冬天最低零下5度，夏天32 度，丘陵山坡較多，適宜棗樹生長）。
[0018]
由上表可以看出，本發(fā)明獻王棗的組培快繁方法，繁殖系數(shù)高，生根率達87%以上，營養(yǎng) 杯移栽成活率在88%以上，大田移栽成活率在90%以上，組培苗移栽后能迅速適應(yīng)露天環(huán)境， 生長迅速，抗外界不良環(huán)境能力強。采用本發(fā)明的方法對獻王棗進行繁育，能有效、方便的 在短時間內(nèi)獲得大量獻王棗組培苗，滿足市場需求，而且苗木能夠保持優(yōu)樹的優(yōu)良遺傳性 狀，適合大面積區(qū)域種植。
【主權(quán)項】
1. 一種獻王棗的組培快繁方法，其特征在于，包括以下步驟： (1) 外植體的建立:于春季萌芽前，剪取1年生棗頭枝，剪去嫩梢段和基部老化部分，留 半木質(zhì)化莖段，用自來水沖洗10分鐘后，于質(zhì)量濃度為0.4%洗衣粉溶液中浸泡8-12分鐘，再 用自來水沖洗干凈，然后用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡35s，無菌水沖洗3-4次，瀝干水分，用 質(zhì)量濃度為1. 〇%次氯酸鈉溶液消毒10-12分鐘，然后用無菌水沖洗7-8次，用鑷子夾取清洗 好的莖段，在無菌操作臺上，用滅菌過的濾紙吸干表面水分，剪取1.5-2.5cm的帶芽莖段 作為外植體； (2) 啟動培養(yǎng):將滅菌后的外植體接種到經(jīng)滅菌后的啟動培養(yǎng)基中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫 度25~27°C，光照強度為2400-25001X，光照時間15-16h/d，在培養(yǎng)室中無菌培養(yǎng)23-25天 后，將沒有染菌的材料切成帶1~2個芽的莖段接種于分生培養(yǎng)基中培養(yǎng)，分生培養(yǎng)基的 成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤2 · lmg/L+萘乙酸0 · 4mg/L+維生素 C1 · 6-1 · 8mg/L+精氨酸1 · 7~ 1.8mg/L +4%糖蜜+瓊脂7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.0;在光照強度為2300-24001X，光照時間14-15h/d，溫度為26-27 °C的條件下，培養(yǎng)30-35天； (3) 繼代培養(yǎng):將植株莖段轉(zhuǎn)接入經(jīng)消毒后的繼代培養(yǎng)基中培養(yǎng)，在培養(yǎng)溫度為25-26 °C，光強2000~25001x，光照時間為17h/d的條件下培養(yǎng)33-35d ; (4) 生根培養(yǎng):在無菌條件下，剪取長2-3cm繼代培養(yǎng)得到的帶葉莖段，插入生根培養(yǎng)基 中進行生根培養(yǎng);培養(yǎng)溫度26~28°C，光強2000~22001x，光照時間15h/d; (5) 煉苗：當經(jīng)過生根培養(yǎng)后的生根試管苗根長1.0~2.0 cm時，將組培苗進行室內(nèi)煉 苗，煉苗溫度為:27-28°C，光照強度為5000-65001x，室內(nèi)瓶煉5-6天后，敞口煉苗4天； (6 )移栽:取出試管苗，洗凈根上的培養(yǎng)基，移栽到用質(zhì)量濃度為0.2%KMn〇4溶液消毒過 的椰糠+蛭石+細河沙+草炭按照2-3:5:1:0.5的比例做基質(zhì)的營養(yǎng)杯中，澆足水，保持空氣 濕度為85%-90%，溫度25~26°C，避免陽光直射，35-38天后，移出溫室進行全光照煉苗 6-7d，及時澆水，然后移栽大田。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獻王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(2)中的啟動 培養(yǎng)基的成分為:MS+ N6芐基腺嘌呤1.3mg/L +萘乙酸0.3mg/L +維生素 C 1.0mg/L +3%糖 蜜+瓊脂6_7g/L，培養(yǎng)基pH值為6.2。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獻王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(3)中繼代培 養(yǎng)基的成分為13+#芐基腺嘌呤2.111^/1+萘乙酸0.45-0.5511^/1+維生素(：0.811^/1+維 生素 B6 1 · 4-1 · 6mg/L+精氨酸1 · 8~2 · lmg/L +4%糖蜜+瓊脂8g/L，培養(yǎng)基pH值為6 · 1。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的獻王棗的組培快繁方法，其特征在于，所述步驟(4)中生根培 養(yǎng)基的成分為：1/2MS+ NAA 0.02mg/L+ IAA0.2 mg/L+IBA 0.7~0.9 mg/L+4.5%糖蜜+瓊脂 8g/L, pH=6.〇-6.2〇
【文檔編號】A01H4/00GK105993946SQ201610348308
【公開日】2016年10月12日
【申請日】2016年5月24日
【發(fā)明人】雷軍強, 韋穎婷, 覃穩(wěn)梅, 李玉秋, 莫曉君, 韋倩梅
【申請人】象州縣科學(xué)技術(shù)局