一種人參種子無(wú)菌播種方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于人參組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種人參種子無(wú)菌播種方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 人參是被子植物門(mén)雙子葉植物綱離瓣花亞綱五加科，多年生草本植物，生長(zhǎng)于密 林，多分布于黑龍江、吉林、遼寧和河北北部深山中，含有10多種人參皂甙，以及人參快醇、 多種氨基酸和維生素，是名貴的中草藥材。
[0003] 然而人參種子成熟后會(huì)積累大量抑制萌發(fā)的物質(zhì)，阻止人參種子萌發(fā)，使人參種 子進(jìn)入深度休眠，常規(guī)無(wú)菌播種方法萌發(fā)困難，萌發(fā)率低。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 基于現(xiàn)有技術(shù)存在上述問(wèn)題，本發(fā)明提供一種人參種子無(wú)菌播種方法，該方法包 括種子表面消毒、接種前處理和接種等步驟，利用冷水浸泡模擬春化作用，再通過(guò)超聲波處 理和Κ0Η溶液浸泡處理，打破人參種子休眠，誘導(dǎo)人參種子萌發(fā)，本發(fā)明提供的人參種子無(wú) 菌播種方法具有成本低、萌發(fā)率高的優(yōu)點(diǎn)。
[0005] -種人參種子無(wú)菌播種方法，其特戰(zhàn)在于，其包括以下步驟： 步驟S10 :取顆粒飽滿的成熟人參種子，對(duì)種子進(jìn)行冷水浸泡處理，然后于無(wú)菌環(huán)境中 對(duì)人參種子進(jìn)行表面消毒； 步驟S20:對(duì)消毒完畢的人參種子進(jìn)行超聲波處理和Κ0Η溶液浸泡處理； 步驟S30:將步驟S20處理完畢的人參種子接種到人參種子誘導(dǎo)培養(yǎng)基，并放入人工氣 候箱中培養(yǎng)。
[0006] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S10中包括 S11，使用8-12°C的冷水對(duì)人參種子進(jìn)行浸泡18-24小時(shí)，使用冷水浸泡可以模擬自然春化， 打破人參種子休眠。
[0007] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S10中包括 S12表面消毒，條件是用質(zhì)量濃度為70-75%的酒精浸泡25-30秒，用無(wú)菌水沖洗3-5次，再用 質(zhì)量濃度為0.10-0.12%的氯化汞溶液消毒6-8分鐘，再用無(wú)菌水沖洗3-5次。
[0008] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S20包括步 驟S21，使用濃度為0.05-0. lmol/L的Κ0Η溶液浸泡處理8-10分鐘，用無(wú)菌水清洗沖洗3-5次， 使用低濃度的Κ0Η可以腐蝕種子種皮，釋放出種子內(nèi)抑制萌發(fā)的的物質(zhì)。
[0009] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S20包括步 驟S22,使用頻率為50-60KHZ、功率為80-90W的超聲波對(duì)人參種子處理25-30分鐘，超神波處 理可以調(diào)節(jié)人參種子的生理狀態(tài)，促進(jìn)種子萌發(fā)。
[0010] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S30中的培 養(yǎng)基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加1.0-1.2mg/L的萘乙酸、1.5-2. Omg/L的6-芐氨 基腺嘌呤、8-12g/L的瓊脂粉和28-32g/L的白砂糖，高溫滅菌制成。
[0011] 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S30中的培 養(yǎng)條件是:光暗周期為14h光照/12h黑暗、光照強(qiáng)度為2000-23001UX的條件下培養(yǎng)至長(zhǎng)成小 苗。
【具體實(shí)施方式】
[0012] 下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步描述。
[0013] 用天平根據(jù)表1所示的1/2MS培養(yǎng)基配方分別稱(chēng)取1/2MS培養(yǎng)基中的各成分以及 1. 〇mg的萘乙酸、1.5mg的6-芐氨基腺嘌呤、10的瓊脂粉和30g的白砂糖，置于三角瓶中，加入 適量純化水，攪拌溶解，定容至l〇〇〇mL，并調(diào)節(jié)pH值至6.2。將三角瓶封口，置于高壓滅菌鍋 中，于121°C滅菌21min，然后于超凈工作臺(tái)中，將培養(yǎng)基分裝至組織培養(yǎng)瓶中，自然冷卻，待 其凝固后將組織培養(yǎng)瓶封口，備用。
[0014] 表1 1/2MS培養(yǎng)基的成分及其用量。
[0015] 取顆粒飽滿的成熟人參種子，使用10°C的冷水對(duì)人參種子進(jìn)行浸泡20小時(shí)，取出 種子，并于超凈工作臺(tái)中將種子用質(zhì)量濃度為75%的酒精浸泡30秒，用無(wú)菌水沖洗4次，再用 質(zhì)量濃度為0.12%的氯化汞溶液消毒6分鐘，再用無(wú)菌水沖洗4次。
[0016] 將上述清洗干凈的人參使用濃度為0.07m〇l/L的KOH溶液浸泡處理9分鐘，再用無(wú) 菌水清洗沖洗5次，取出種子并使用頻率為55KHz、功率為85W的超聲波對(duì)人參種子處理30分 鐘，取出種子，備用。
[0017]將處理完畢的人參種子接種到上述配制好的人參種子誘導(dǎo)培養(yǎng)基，并放入人工氣 候箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光暗周期為14h光照/12h黑暗、光照強(qiáng)度為2000-23001UX的條件下 培養(yǎng)，培養(yǎng)到第15天時(shí)開(kāi)始有第一顆種子萌發(fā)，長(zhǎng)成人參無(wú)菌苗，培養(yǎng)22天后，超過(guò)90%的人 參種子萌發(fā)，誘導(dǎo)成無(wú)菌苗，種子萌發(fā)率高達(dá)90%，比常規(guī)誘導(dǎo)方法的萌發(fā)率高，常規(guī)誘導(dǎo)方 法平均萌發(fā)時(shí)間在25天以后，使用本發(fā)明提供的無(wú)菌播種方法可以縮短誘導(dǎo)時(shí)間。另外本 發(fā)明提供的無(wú)菌播種方法所選用的試劑和設(shè)備如Κ0Η溶液和超聲波設(shè)備等都屬于常規(guī)實(shí)驗(yàn) 室設(shè)備，使用簡(jiǎn)單方便且成本低，可以大大降低誘導(dǎo)成本。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特戰(zhàn)在于，其包括以下步驟： 步驟S10:取顆粒飽滿的成熟人參種子，對(duì)種子進(jìn)行冷水浸泡處理，然后于無(wú)菌環(huán)境中 對(duì)人參種子進(jìn)行表面消毒； 步驟S20:對(duì)消毒完畢的人參種子進(jìn)行超聲波處理和KOH溶液浸泡處理； 步驟S30:將步驟S20處理完畢的人參種子接種到人參種子誘導(dǎo)培養(yǎng)基，并放入人工氣 候箱中培養(yǎng)。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S10中包括 S11， 使用8-12°C的冷水對(duì)人參種子進(jìn)行浸泡18-24小時(shí)。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S10中包括S12 表面消毒，條件是用質(zhì)量濃度為70-75%的酒精浸泡25-30秒，用無(wú)菌水沖洗3-5次，再用質(zhì)量 濃度為〇. 10-0.12%的氯化汞溶液消毒6-8分鐘，再用無(wú)菌水沖洗3-5次。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S20包括步驟 S21，使用濃度為0.05-0. lmol/L的KOH溶液浸泡處理8-10分鐘，用無(wú)菌水清洗沖洗3-5次。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S20包括步驟 S22，使用頻率為50-60KHZ、功率為80-90W的超聲波對(duì)人參種子處理25-30分鐘。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S30中的培養(yǎng) 基是以1/2MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，并添加1.0-1.2mg/L的萘乙酸、1.5-2. Omg/L的6-芐氨基 腺嘌呤、8-12g/L的瓊脂粉和28-32g/L的白砂糖，高溫滅菌制成。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種人參種子無(wú)菌播種方法，其特征在于，步驟S30中的培養(yǎng) 條件是：光暗周期為14h光照/12h黑暗、光照強(qiáng)度為2000-23001UX的條件下培養(yǎng)至長(zhǎng)成小 苗。
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供一種人參種子無(wú)菌播種方法，屬于人參組織培養(yǎng)技術(shù)領(lǐng)域，該方法包括種子表面消毒、接種前處理和接種等步驟，利用冷水浸泡模擬春化作用，再通過(guò)超聲波處理和KOH溶液浸泡處理，打破人參種子休眠，誘導(dǎo)人參種子萌發(fā)，本發(fā)明提供的人參種子無(wú)菌播種方法具有成本低、萌發(fā)率高的優(yōu)點(diǎn)。
【IPC分類(lèi)】A01C1/08, A01C1/00, A01C1/02
【公開(kāi)號(hào)】CN105532121
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201610010774
【發(fā)明人】何志鏗
【申請(qǐng)人】黃慶梅
【公開(kāi)日】2016年5月4日
【申請(qǐng)日】2016年1月9日