，該時期的棉苗對溫度最為敏感，能真 實反映棉花的耐低溫水平，結果更客觀和可靠。
[0021] (2)該方法根據(jù)棉花葉片受害情況進行評分，計算耐低溫指數(shù)，然后根據(jù)指數(shù)大小 進行客觀分級。為棉花耐低溫鑒定提供了系統(tǒng)客觀的評價標準，對葉片受害情況進行量化， 極大降低了人為主觀因素造成的誤差。本發(fā)明首次提出了苗期鑒定方法的評價分級標準， 該標準在陸地棉上同樣適用?，F(xiàn)有報道的大田直接鑒定法，受環(huán)境因素的影響很大，而且沒 有評價標準，材料之間的抗性結果重復性較差。
[0022] (3)與大田直接鑒定法相比，該方法采用室內(nèi)人工氣候培養(yǎng)箱培養(yǎng)，溫度、濕度和 光照等環(huán)境因素均可控，減少了環(huán)境因素導致的誤差，使結果更加可靠。
[0023] (4)該方法不受季節(jié)限制，隨時隨地均可進行，節(jié)約時間；并且操作簡單，人力物力 成本低，占用空間少，可進行大批量材料的鑒定;易于推廣和利用。
【附圖說明】
[0024]圖1，棉花低溫脅迫前后對比：l_a，野生棉（克勞茨基棉）常溫條件生長正常，1-b， 野生棉(克勞茨基棉）5°C低溫脅迫48h后，葉片稍微低垂，沒有明顯的受害特征，生長良好， 耐低溫水平為高抗。1-c，野生棉（雷蒙德氏棉）常溫條件生長正常，Ι-d，野生棉（雷蒙德氏 棉）5°C低溫脅迫48h后，植株開始萎蔫，部分葉片明顯受害，耐低溫水平為耐。Ι-e，栽培棉 (中50)常溫條件生長正常；Ι-f，栽培棉（中50)5°C低溫脅迫48h后，整個植株完全萎蔫至死 亡，移到常溫條件不能恢復生長，耐低溫水平為高感;黃色箭頭所指為受害葉片。
【具體實施方式】
[0025]實施例1采用野生棉苗期耐低溫鑒定方法對野生棉（瑟伯氏棉、克勞茨基棉、擬似 棉、三裂棉、雷蒙德氏棉）以及栽培棉（中50)的耐低溫水平進行鑒定和評價。
[0026] 1、棉花材料：
[0027]野生棉（瑟伯氏棉、克勞茨基棉、擬似棉、三裂棉、雷蒙德氏棉），陸地棉（中50)為栽 培棉對照材料。已報道這些野生棉具有良好的低溫抗性。
[0028] 2、種子的前處理：
[0029] 將所有帶短絨的種子進行硫酸脫絨，挑選大小一致，烏黑飽滿、無蟲害的完整的成 熟種子。用單面刀片將野生棉的種子合點端(鈍端)切小口，露出種仁即可。
[0030] 3、催芽：
[0031] 采用砂床培養(yǎng)法，將洗凈煮沸滅菌后的濕砂鋪在發(fā)芽盒中，將切口后的野生棉種 子，播種在準備好的沙床上，然后加蓋一層松散砂，置于恒溫光照培養(yǎng)箱中，常溫培養(yǎng)2~3 天。
[0032] 4、移苗和育苗：
[0033]準備好大小合適的營養(yǎng)缽，裝入等量的混合土(營養(yǎng)土和蛭石比例為I: I)，擺放在 配套的托盤中，直接在托盤中加入適量的水至營養(yǎng)缽最上層的土壤濕潤為止。在營養(yǎng)缽中 間扎Icm深的小穴，然后胚根朝下輕輕放入萌發(fā)的種子，然后覆蓋上一層混合土。噴灑適量 的水保持濕度。放置在人工氣候培養(yǎng)室中，常規(guī)管理，培育幼苗生長至3-5葉期。
[0034] 5、低溫脅迫處理：
[0035] 選擇生長旺盛健壯、長勢一致的3葉期幼苗，移入溫度為5°C的人工氣候培養(yǎng)箱內(nèi)， 對照處理的溫度為30°C，其他光照與濕度培養(yǎng)條件二者完全相同。每個材料每個處理為30 棵，處理48h后，首次調(diào)查幼苗的受害情況。將低溫脅迫的幼苗轉移到常溫條件下恢復培養(yǎng)2 周，再次調(diào)查棉花幼苗生長情況。
[0036] 6、耐低溫水平分級:按照本發(fā)明的評分標準，對每個材料進行評分，依據(jù)公式計算 耐低溫指數(shù)，對材料的耐低溫水平進行分級，結果見表1:
[0037]表1棉花耐低溫水平的評價結果
【主權項】
1. 野生棉苗期耐低溫鑒定方法，其特征在于，所述方法包括以下步驟： 1) 對野生棉種子進行硫酸脫絨和切口處理； 2) 催芽:選擇直徑為0.05mm~0.80mm的沙子，洗滌，滅菌，烘干，加入無菌水，拌勾，將濕 砂鋪入發(fā)芽盒中，將切口的野生棉種子，播種在準備好的沙床上，然后加蓋10_20mm厚度的 松散砂，砂床含水量為12 % -15 %，置于溫度28°C，濕度85 %，光照12h，黑暗12h，培養(yǎng)2~3 天； 3) 移苗和育苗:將營養(yǎng)土與蛭石混勻，裝入營養(yǎng)缽內(nèi)，把萌發(fā)的幼苗，胚根朝下，子葉朝 上放入小穴內(nèi)，然后覆蓋上一層混合土，噴灑水分，保持培養(yǎng)基濕潤，移入人工氣候室內(nèi)，30 °C，12h光照培養(yǎng)至3-5葉期； 4) 低溫脅迫處理：挑選3-5葉期棉花幼苗，在脅迫溫度為5°C的條件下，低溫脅迫處理 48h，第一次調(diào)查幼苗的長勢，然后將處理后的幼苗轉移到與對照一樣的正常條件中恢復兩 周，然后第二次調(diào)查幼苗長勢； 5) 抗性分級:根據(jù)棉花葉片受害情況，進行評分，評價棉花野生資源的抗性水平。2. 根據(jù)權利要求1所述的野生棉苗期耐低溫鑒定方法，其特征在于，根據(jù)兩次幼苗長勢 調(diào)查結果，按照以下標準對棉花受害情況調(diào)查和評分： (1) 0分-整株萎蔫死亡； (2) 1分-有1片綠色的葉子(至少2/3的葉子為綠色）； (3) 2分-有2片綠色的葉子； (4) 3分-有2片綠色的葉子，并且有新的葉子出現(xiàn)。 耐低溫指數(shù)計算公式為:耐低溫指數(shù)=(2&)/(11\3)\100 4為該級別的株數(shù)^為相 應級別的指(0-3)，n為調(diào)查總株數(shù)。
【專利摘要】本發(fā)明屬于植物生理學，具體地，涉及野生棉苗期耐低溫鑒定方法。所述方法包括步驟1)種子硫酸脫絨和切口處理；2)催芽處理；3)培養(yǎng)幼苗，選擇3-5葉期長勢一致的棉花幼苗；4)選擇更接近自然條件的低溫脅迫處理，5)根據(jù)棉花幼苗的受害情況進行評分，對野生棉的抗性水平進行分級。該方法選擇在對低溫最敏感的幼苗期進行嚴苛的低溫脅迫處理，以期篩選到真正具有較高抗性水平的耐低溫棉花材料；而且根據(jù)棉花葉片受害情況進行評分，客觀分級，極大降低了人為因素造成的誤差。該方法不受季節(jié)限制，隨可進行大批量材料的鑒定，易于推廣和利用。
【IPC分類】A01G7/00
【公開號】CN105519367
【申請?zhí)枴緾N201610063497
【發(fā)明人】蔡小彥, 劉方, 高巧麗, 周忠麗, 王星星, 王春英, 王玉紅, 張振梅, 王坤波
【申請人】中國農(nóng)業(yè)科學院棉花研究所
【公開日】2016年4月27日
【申請日】2016年1月28日