溶液。
[0045](一)、TP的試驗(yàn)步驟是:
[0046](1)、把插有秋茄胚軸的栽培容器放入人工氣候箱，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:15°C (晝)/10°C (夜)、相對(duì)濕度控制在50% -70%、光照強(qiáng)度等于600 μ mol ?m 2s 1，每天晝光照12h，培育2天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30°C (晝)/25°C (夜)、光照時(shí)間、強(qiáng)度和相對(duì)濕度均不變；
[0047](2)、當(dāng)秋茄胚軸長(zhǎng)出兩葉一心時(shí)，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度20°C (晝)/15°C (夜)，培育2天，光照和相對(duì)濕度均不變，
[0048]然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30°C (晝)/25°C (夜)，光照和相對(duì)濕度仍均不變；
[0049](3)、當(dāng)秋茄胚軸長(zhǎng)到四葉一心時(shí)，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度20 °C (晝)/15°C (夜)，光照和相對(duì)濕度均不變，培育3天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度15°C (晝)/10°C (夜)，光照和相對(duì)濕度均不變，培育3天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30°C (晝)/25°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變；
[0050](4)、當(dāng)秋茄胚軸長(zhǎng)到六葉一心時(shí)，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度20 °C (晝)/15°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度15°C (晝)/10°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30°C (晝)/25°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變；
[0051](5)、當(dāng)秋茄胚軸長(zhǎng)到八葉一心時(shí)，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度20 °C (晝)/15°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度15°C (晝)/10°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度10°C (晝)/5°C (夜)，期間光照強(qiáng)度和相對(duì)濕度均不變，培育4天，
[0052]其中(1)到(5)每個(gè)步驟的管理流程均是:及時(shí)補(bǔ)充不含NaCl的營(yíng)養(yǎng)液，保持水層l-2cm，即營(yíng)養(yǎng)液形成的水層始終高出土壤l-2cm，但是(1)到(5)的每個(gè)步驟整體期間需要保證栽培容器晾干2?3天，即是每個(gè)步驟的培育期間，除了保持營(yíng)養(yǎng)液水層l-2cm的日期之外，需要額外使栽培容器晾干2?3天，以3天為佳，防止太長(zhǎng)時(shí)間淹沒于營(yíng)養(yǎng)液對(duì)秋茄產(chǎn)生傷害。
[0053](二)、TY的試驗(yàn)步驟是:
[0054](1)、把插有秋茄胚軸的栽培容器放入人工氣候箱，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30°C (晝)/25°C (夜)，相對(duì)濕度控制在50% -70%、光照強(qiáng)度為600 μ mol -m 2s \每天晝光照12h。期間，澆灌NaCl濃度為10%。的營(yíng)養(yǎng)液，保持桶內(nèi)水層l-2cm，其余時(shí)間補(bǔ)充不含NaCl的營(yíng)養(yǎng)液，并保證每長(zhǎng)出一對(duì)葉片期間栽培容器瞭干2?3天。
[0055](2)當(dāng)秋茄胚軸長(zhǎng)到八葉一心時(shí)，采取與TP的步驟(5)相同的措施，即調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度20°C (晝)/15°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度15°C (晝)/10°C (夜)，光照和相對(duì)濕度不變，培育4天，然后調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度10°C (晝)/5°C (夜)，期間光照強(qiáng)度和相對(duì)濕度均不變，培育4天。
[0056](三)、WY的試驗(yàn)步驟是:
[0057]把插有秋茄胚軸的栽培容器放入人工氣候箱，調(diào)整人工氣候箱的參數(shù)為:溫度30 °C (晝)/25°C (夜)、相對(duì)濕度控制在50% -70%、光照強(qiáng)度等于750 μ mol *m2s \每天晝光照12h，直到生長(zhǎng)到八葉一心。期間，澆灌NaCl濃度為10%。的營(yíng)養(yǎng)液，保持桶內(nèi)水層l-2cm，其余時(shí)間補(bǔ)充不含NaCl的營(yíng)養(yǎng)液，并保證每長(zhǎng)出一對(duì)葉片期間栽培容器晾干2?3天。
[0058]然后將長(zhǎng)到八葉一心的TP、TY和WY分別進(jìn)行低溫脅迫，具體來說是放置在溫度為5°C (晝)/_2°C (夜)的條件下48h，而三個(gè)處理的光照強(qiáng)度參數(shù)維持原有不變。然后在適宜溫度(30°C (晝)/25°C (夜)條件下恢復(fù)72h進(jìn)行光合參數(shù)測(cè)定，并采集樣品測(cè)定光合相關(guān)指標(biāo)。
[0059]1測(cè)定項(xiàng)目和方法
[0060]1.1、葉片顏色的觀察
[0061]記錄低溫48h各處理葉片顏色的變化。
[0062]1.2、光合參數(shù)的測(cè)定
[0063]將秋茄在自然光照條件下恢復(fù)30min，測(cè)定光合參數(shù)。使用Li_6400型便攜式光合儀于10:00-11:30測(cè)定選擇從頂端向下數(shù)的第三對(duì)葉片的凈光合速率(Pn)、氣孔導(dǎo)度(Gs)、蒸騰速率(Tr)。
[0064]1.3、光合色素含量的測(cè)定
[0065]稱取0.lg葉片并將其剪成碎片，置于25ml容量瓶中，加入提取液(1:1的無水乙醇和丙酮)定容，放在黑暗條件下24小時(shí)，而后將提取液分離出，分別測(cè)定其在470nm、649nm和665nm波長(zhǎng)下的吸光值，葉綠素的含量按照公式計(jì)算。
[0066]1.4、丙二醛(MDA)含量的測(cè)定方法
[0067]稱取剪碎的試材lg，加入2mll0% TCA和少量石英砂，研磨至勻漿，再加8mlTCA研磨，勻漿在4000r.min-1離心lOmin，上清液為樣品提取液。吸取離心的上清液2ml (對(duì)照加2ml蒸餾水)，加入2ml 0.6% TBA溶液，混勻物于沸水浴上反應(yīng)15min，迅速冷卻后再離心。取上清液測(cè)定532、600和450nm波長(zhǎng)下的消光度。按照下面公式計(jì)算:
[0068]MDA含量(μ mol/g) = [MDA濃度(μ mol/L) X提取液體積(mL) ] / [樣品重量(g) X1000]ο
[0069]1.5、數(shù)據(jù)處理
[0070]采用SPSS 21軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行方差分析和LSD顯著性測(cè)驗(yàn)，并使用EXCEL2013制作直方圖。
[0071]經(jīng)過上述測(cè)定后獲得的結(jié)果如下:
【附圖說明】
[0072]圖1是不同處理方式對(duì)秋茄葉片凈光合速率的影響。
[0073]圖2是不同處理方式對(duì)秋茄葉片氣孔導(dǎo)度的影響。
[0074]圖3是不同處理方式對(duì)秋茄葉片蒸騰速率的影響。
[0075]圖4是不同處理方式對(duì)秋茄葉片葉綠素含量的影響。
[0076]圖5是不同處理方式對(duì)秋茄葉片MDA含量的影響。
[0077]2、結(jié)果與分析
[0078]2.1葉片顏色變化
[0079]在低溫脅迫下，從胚軸開始進(jìn)行鍛煉的幼苗(TP)葉片呈綠色，從幼苗開始進(jìn)行鍛煉幼苗(TY)葉片呈淺綠色，無任何鍛煉幼苗(WY)葉片呈微褐色。表明三種處理耐寒能力依次為:TP>TY>WY。
[0080]2.2、對(duì)秋茄葉片凈光合速率的影響
[0081]參考圖1，在低溫脅迫48h時(shí)，從胚軸開始進(jìn)行處理的幼苗(TP)和從幼苗開始處理(TY)葉片凈光合速率分別是未經(jīng)過處理的(WY)的2.0倍和1.54倍，三個(gè)處理間比較，均存在顯著差異(P〈0.05) ο在適宜溫度下恢復(fù)72h后，TP和TY處理仍顯著高于WY(P〈0.05)，且TP處理顯著高于TY處理(P〈0.05)。
[0082]2.3、對(duì)秋茄葉片氣孔導(dǎo)度的影響
[0083]參考圖2，與無任何處理植株相比，低溫脅迫48h下TP和TY處理提高了幼苗葉片氣孔導(dǎo)度，且分別增加87.8%和35.7%，均存在顯著差異(P〈0.05)。適宜溫度恢復(fù)72h后，三種處理?xiàng)l件下葉片氣孔導(dǎo)度均增加，但TP和TY處理仍顯著高于無任何處理植株(WY, Ρ〈0.05)，且ΤΡ處理顯著高于ΤΥ處理(Ρ〈0.05)。
[0084]2.4、對(duì)秋茄葉片蒸騰速率的影響
[0085]參考圖3，低溫脅迫48h時(shí)，TP和TY處理下幼苗葉片蒸騰速率被提高，分別是無任何處理植株(WY)的1.85倍和1.33倍，均達(dá)到顯著差異(P〈0.05)。適宜溫度恢復(fù)72h后，幼苗葉片蒸騰速率均增加，但TP和TY處理仍顯著高于無任何處理植株(P〈0.05)，且TP處理顯著高于TY處理(P〈0.05)。
[0086]2.5、對(duì)秋茄葉片葉綠素含量的影響
[0087]參考圖4，低溫脅迫48h時(shí)，TP和TY處理提高了幼苗葉片葉綠素含量，分別是無任何處理植株(WY)的1.68倍和1.28倍，均達(dá)到顯著差異(P〈0.05)。適宜溫度恢復(fù)72h后，幼苗葉片葉綠素含量均增加，但TP和TY處理仍顯著高于無任何處理植株(P〈0.05)，且TP處理顯著高于TY處理(P〈0.05)。
[0088]2.6、對(duì)秋茄葉片MDA含量的影響
[0089]參考圖5，低溫脅迫48h時(shí)，TP和TY處理降低了幼苗葉片MDA含量，分別比無任何處理植株(WY)減少了 33.91%和21.78%，均達(dá)到顯著差異(P〈0.05)。適宜溫度恢復(fù)72h后，幼苗葉片MDA含量均減少，但TP和TY處理仍顯著低于無任何處理植株(P〈0.05)，且TP處理顯著低于TY處理(P〈0.05)。
[0090]3、結(jié)論
[0091]凈光合速率、氣孔導(dǎo)度、蒸騰速率和葉綠素含量是光合作用的主要參數(shù)，其數(shù)值越大光合能力就越強(qiáng)。丙二醛