一種羅非魚耐寒性能的測定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種羅非魚耐寒性能的測定方法，屬于羅非魚耐寒品種選育技術(shù)領(lǐng) 域。
【背景技術(shù)】
[0002] 羅非魚原產(chǎn)于非洲，屬暖水性魚類，具有生長快，適應(yīng)性強，肉質(zhì)鮮嫩的特點，是我 國主導(dǎo)養(yǎng)殖淡水品種，對我國出口創(chuàng)匯具有重要意義。但羅非魚耐寒能力較差，其致死溫度 為7~12°C。近年來，由于環(huán)境的不斷惡化，極端天氣增多，低水溫持續(xù)時間較長，羅非魚在 越冬期間被凍死的事件時有發(fā)生，給羅非魚養(yǎng)殖業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟損失，嚴重阻礙了羅 非魚產(chǎn)業(yè)持續(xù)健康的發(fā)展。因此，加快培育耐寒型羅非魚品種至關(guān)重要。其中，選育耐寒良 種，利用羅非魚自身的遺傳因素來抵御低溫脅迫是最根本的途徑。而耐寒型羅非魚品種選 育的關(guān)鍵則是羅非魚品種耐寒性能的測定。
[0003]目前，測定羅非魚不同品種耐寒性能強弱的方法是應(yīng)用低溫脅迫試驗，以羅非魚 的低溫半致死溫度和死亡率為指標來評價其耐寒性能。但不同研究報道的低溫脅迫試驗沒 有一個固定的降溫和升溫的模式，不同試驗設(shè)計的暫養(yǎng)時間、起始溫度、降溫速度和最低溫 度等參數(shù)不同，時間較長，獲得羅非魚耐寒能力的研究結(jié)果差異較大，試驗可重復(fù)性差，得 到的羅非魚耐寒性能指標進行耐寒能力的比較，準確性較差。因此，如何對不同品種羅非魚 耐寒性能準確、快速的測定和評價，成為生產(chǎn)中亟待解決的技術(shù)問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是解決現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種羅非魚耐寒性能的測定方法。本 發(fā)明的測定方法簡便易行，準確可靠，能夠有效測定與評價羅非魚的耐寒性能。
[0005] 本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下：一種羅非魚耐寒性能的測定方法，包 括如下步驟：
[0006] (1)羅非魚的選擇：
[0007] 選擇年齡一致、體質(zhì)量為5~100g的羅非魚，先暫養(yǎng)5~10d，即得試驗用羅非魚；
[0008] (2)低溫脅迫致死處理：
[0009] 將試驗水域的起始水溫設(shè)為20~25°C，以0. 1~0. 3°C/3h的降溫速度，降溫至 步驟（1)所有試驗用羅非魚死亡，并且控制最終水溫為7~9°C;
[0010] (3)計算低溫半致死溫度：
[0011] 統(tǒng)計步驟（2)試驗用羅非魚死亡的溫度和數(shù)量，計算得到存活率，其計算公式為： 存活率=(試驗魚總數(shù)-低溫死亡數(shù)）/試驗魚總數(shù)X100 %，然后以溫度為自變量X，存活 率為應(yīng)變量Y，表達式為Y=AAl+BeTkx)，做溫度與存活率的Logistic曲線，曲線拐點所 對應(yīng)的溫度即為低溫半致死溫度；
[0012] (4)回溫處理：
[0013] 將步驟⑵降溫后能將試驗用羅非魚致死的試驗水域，以0. 2~0. 4°C/3h的升溫 速度，回溫至20~25°C，將回溫后能夠存活的羅非魚再養(yǎng)殖5~lOd;
[0014] (5)計算低溫死亡率：
[0015] 統(tǒng)計步驟（2)低溫脅迫致死處理和步驟（4)回溫處理過程中，試驗羅非魚死亡數(shù) 的總和，計算低溫死亡率，其計算公式為：
[0016] 低溫死亡率=(低溫死亡數(shù)+回溫后死亡數(shù)）/試驗魚總數(shù)X100% ;
[0017] (6)耐寒性能評價：
[0018] 根據(jù)步驟（3)所得低溫半致死溫度和存活率，以及步驟（5)所得低溫死亡率，來評 價耐寒性能，即低溫半致死溫度越低，低溫死亡率越低，存活率越高，則耐寒性能越強。
[0019] 在上述技術(shù)方案的基礎(chǔ)上，本發(fā)明還可以做如下改進。
[0020] 進一步，步驟（1)所述羅非魚選自國家級羅非魚良種場，所述羅非魚的品種或家 系已知。
[0021] 進一步，步驟（2)所述的低溫脅迫降溫模式采用室內(nèi)人工垂直降溫。
[0022] 進一步，步驟（3)所述的回溫模式采用室內(nèi)人工垂直升溫。
[0023] 本發(fā)明的有益效果是：
[0024] (1)本發(fā)明確定了羅非魚耐寒性能測定的相關(guān)技術(shù)參數(shù)，如試驗用羅非魚的規(guī)格 和暫養(yǎng)時間，試驗水域的起始溫度、垂直降溫速度和最終溫度，回溫時的垂直升溫速度和最 終溫度等，為今后開展羅非魚耐寒性能的研究奠定了基礎(chǔ)。
[0025] (2)本發(fā)明實現(xiàn)了羅非魚耐寒性能測定設(shè)施條件標準化，避免了實驗魚的應(yīng)激反 應(yīng)，而且實驗時間較短。
[0026] (3)本發(fā)明的測定方法簡便易行，準確可靠，能夠有效測定與評價羅非魚的耐寒性 能。
【附圖說明】
[0027] 圖1為本發(fā)明的實施例1的3個品種的羅非魚低溫脅迫存活率與水溫的關(guān)系曲 線。
[0028] 附圖中，各標號所代表的部件列表如下：
[0029]A、美國品系奧利亞羅非魚，B、埃及品系尼羅羅非魚，C、雜交尼奧羅非魚。
【具體實施方式】
[0030] 以下結(jié)合具體實施例對本發(fā)明的原理和特征進行描述，所舉實例只用于解釋本發(fā) 明，并非用于限定本發(fā)明的范圍。
[0031] 實施例1
[0032] (1)羅非魚的選擇：
[0033] 從國家級廣西南寧羅非魚良種場分別選擇30日齡、體質(zhì)量為5.5±0.40g的美國 品系奧利亞羅非魚（以下簡稱"美國奧利亞"）、埃及品系尼羅羅非魚（以下簡稱"埃及尼 羅"）以及二者雜交尼奧羅非魚（以下簡稱"雜交尼奧"）各180尾，先在lmXlmXlm大缸 暫養(yǎng)7d后，采用單因子試驗隨機分為3個試驗組，每個試驗組180尾，每組設(shè)3個重復(fù)，每 個重復(fù)60尾，分別放入9個規(guī)格為50cmX60cmX80cm的制冷水族箱，經(jīng)24h環(huán)境適應(yīng)后， 即得試驗用羅非魚。
[0034] (2)低溫脅迫致死處理：
[0035] 將制冷水族箱的起始水溫設(shè)為20°C，采用室內(nèi)人工垂直降溫，以0.2°C/3h的降溫 速度，降溫至最終水溫8°C，直到步驟（1)所有試驗用羅非魚死亡。
[0036] (3)計算低溫半致死溫度：
[0037] 統(tǒng)計步驟（2)試驗用羅非魚死亡的溫度和數(shù)量，計算得到存活率，其計算公式為： 存活率=(試驗魚總數(shù)-低溫死亡數(shù)）/試驗魚總數(shù)X100 %，然后以溫度為自變量X，存 活率為應(yīng)變量Y，表達式為Y=AAl+BeTkx)，做溫度與存活率的Logistic曲線，曲線拐點 所對應(yīng)的溫度即為低溫半致死溫度；存活率一溫度的散點圖和擬合曲線繪制的繪制使用 Matlab7. 0. 1 ;
[0038] 美國奧利亞羅非魚、埃及尼羅羅非魚和雜交尼奧羅非魚的模型參數(shù)和半致死溫度 如表1所示，低溫脅迫存活率與水溫的關(guān)系模型曲線如圖1所示。
[0039] 表1 3個羅非魚品種的低溫脅迫致死曲線參數(shù)和半致死溫度
[0040]
[0041] (4)回溫處理：
[0042] 采用室內(nèi)人工垂直升溫，將步驟（2)降溫后能將試驗用羅非魚致死的試驗水域， 以0. 4°C/3h的升溫速度，回溫至20°C，將回溫后能夠存活的羅非魚再養(yǎng)殖7d。
[0043] (5)計算低溫死亡率：
[0044] 統(tǒng)計步驟（2)低溫脅迫致死處理和步驟（3)回溫處理過程中，試驗羅非魚死亡數(shù) 的總和，計算低溫死亡率，其計算公式為：
[0045] 低溫死亡率=(低溫死亡數(shù)+回溫后死亡數(shù)）/試驗魚總數(shù)X100 %，
[0046] 美國奧利亞羅非魚、埃及尼羅羅非魚和雜交尼奧羅非魚的低溫死亡率如表2所 不。
[0047] 表2 3個羅非魚品種的低溫脅迫死亡率
[0048]
[0049] (6)耐寒性能評價：
[0050] 根據(jù)步驟（3)所得低溫半致死溫度和存活率，以及步驟（5)所得低溫死亡率，來評 價耐寒性能，即低溫半致死溫度越低，低溫死亡率越低，存活率越高，則耐寒性能越強。
[0051] 美國奧利亞羅非魚、埃及尼羅羅非魚和雜交尼奧羅非魚的半數(shù)死亡溫度分別為 7. 8°C、8. 8°C和8. 2°C，低溫死亡率分別為53. 76%、58. 23%和56. 01%，耐寒性能強弱順序 為美國奧利亞羅非魚>雜交尼奧羅非魚>埃及尼羅羅非魚。
[0052] 對3個品種的半致死溫度和死亡率進行相關(guān)分析，結(jié)果顯示各品種的半致死溫度 和死亡率相關(guān)性極顯著。雜交尼奧羅非魚的低溫半致死溫度與奧利亞羅非魚的低溫半致 死溫度、尼羅羅非魚的低溫半致死溫度和低溫死亡率有顯著的正相關(guān)性，而與奧利亞羅非 魚的低溫死亡率相關(guān)性不顯著；雜交尼奧羅非魚的低溫死亡率跟母本低溫半致死溫度和低 溫死亡率均呈極顯著正相關(guān)，與父本低溫半致死溫度和低溫死亡率均呈顯著正相關(guān)，如表3 所示。由此可見，尼奧羅非魚耐寒性能與親本高度相關(guān)，其耐寒性能很大程度上取決于親本 耐寒性能的強弱，為此可以通過對親本的篩選來提高子代的耐寒性能，而母本與子代的相 關(guān)性較父本要高，羅非魚耐寒能力可能還通過細胞質(zhì)遺傳，加強對母本的篩選可獲得更快 的遺傳進展。
[0053] 表3 3個羅非魚品種耐寒性能相關(guān)分析
[0054]
[0055] 注：①LT50為低溫半數(shù)死亡溫度，MR為相關(guān)系數(shù)；
[0056] ②*表示差異顯著（Ρ〈0· 05)，μ表示差異極顯著（Ρ〈0· 01)。
[0057] 實施例2
[0058] (1)羅非魚的選擇：
[0059] 從國家級廣西南寧羅非魚良種場分別選擇年齡一致、體質(zhì)量為100±1. 60g的零 世代（P。）、一世代（PJ和二世代（P2)的美國奧利亞羅非魚（以下簡稱"美國奧利亞"）各 45尾，先在lmXlmXlm大缸暫養(yǎng)5d后，采用單因子試驗隨機分為3個試驗組，每個試驗組 45尾，每組設(shè)3個重復(fù)，每個重復(fù)15尾，分別放入9個規(guī)格為50cmX60cmX80cm的制冷水 族箱，經(jīng)24h環(huán)境適應(yīng)后，即得試驗用羅非魚。
[0060] (2)低溫脅迫致死處理：
[0061] 將制冷水族箱的起始水溫設(shè)為22°C，采用室內(nèi)人工垂直降溫，以0.3°C/3h的降溫 速度，降溫至最終水溫7°C，直至步驟（1)所有試驗用羅非魚死亡。
[0062] (3)計算低溫半致死溫度：
[0063] 統(tǒng)計步驟（2)試驗用羅非魚死亡的溫度和數(shù)量，計算得到存活率，其計算公式為： 存活率=(試驗魚總數(shù)-低溫死亡數(shù)）/試驗魚總數(shù)X100 %，然后以溫度為自變量X，存 活率為應(yīng)變量Y，表達式為Y=AAl+BeTkx)，做溫度與存活率的Logistic曲線，曲線拐點 所對應(yīng)的溫