一種瓊脂基質(zhì)育苗快捷誘發(fā)稻瘟病的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物病理學(xué)技術(shù)和微生物學(xué)技術(shù)。具體是一種瓊脂基質(zhì)育苗快捷誘發(fā)稻瘟病的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]稻瘟病是我國水稻生產(chǎn)的重大病害，大流行年曾給我國造成稻糧損失150億公斤。盡管目前對稻瘟病的認(rèn)識已相當(dāng)深入，但要實現(xiàn)持續(xù)安全高效地控防稻瘟病的危害，仍需要大量的研究投入。而稻瘟病的許多研究均離不開人工誘發(fā)病害這基本手段，即使是分子領(lǐng)域的研究，如病菌致病相關(guān)基因問題，或寄主抗病相關(guān)基因問題，往往都需要人工誘發(fā)病害的結(jié)果來解答。至今，有關(guān)稻瘟病人工誘發(fā)病害的技術(shù)已經(jīng)相當(dāng)成熟，這些誘發(fā)病害技術(shù)歸結(jié)起來，主要有水稻成株期接種發(fā)病和苗期接種發(fā)病方法兩大類。通常成株期誘發(fā)病害能獲得較為切合生產(chǎn)實際的結(jié)果，因而在水稻抗病性評比和某些生產(chǎn)試驗中應(yīng)用較多，但在成株期誘發(fā)病害的方法體系中，存在耗時費力；頗占空間場地；環(huán)境條件容易影響試驗結(jié)果等突出弊病；因而限制了其在許多試驗工作中的應(yīng)用。一般地，苗期誘發(fā)病害的方法，使用的稻苗比成株期的相對地小，試驗占用時間和空間方面，與成株期誘發(fā)病害相比，已大有改觀。不過，目前廣為應(yīng)用的苗期誘發(fā)病害方法均是在稻苗的3?5葉期后，利用完全展開的幼苗葉片進行接種，這種方法體系中，育苗耗時2周以上，接種觀察耗時I周以上，試驗周期通常要跨越3周多的時長，這對某些要求短期內(nèi)獲得結(jié)果的研究工作，如分子植病研究的致病突變體鑒定，抗病基因表達(dá)，以及侵染過程的病菌-寄主互作信息傳遞等，仍有耗時過長之嫌；而且，為獲得健壯的稻苗，需要提供充分的陽光和補充營養(yǎng)，整個方法體系仍需使用溫室等較大的空間場地；試驗期間的濕度、溫度、肥水等局部條件控制，也存在較大的技術(shù)難度，或者頗受裝備條件的限制等。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明的目的是提供一種瓊脂基質(zhì)育苗快捷誘發(fā)稻瘟病的方法。
[0004]本發(fā)明解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案如下:
[0005]—種瓊脂基質(zhì)育苗快捷誘發(fā)稻瘟病的方法，是利用瓊脂作育苗基質(zhì)，在微小水稻幼芽階段，接種稻瘟病菌，因而能在短期內(nèi)獲得接種發(fā)病結(jié)果，快捷誘發(fā)稻瘟病方法的步驟如下:
[0006]1.準(zhǔn)備配套營養(yǎng)液
[0007]按比例配備配套營養(yǎng)液，該營養(yǎng)液組分為:硝酸鉀0.5g、磷酸二氫鉀0.5g、尿素0.5g、水 1000.0ml0
[0008]2.配備育苗瓊脂基質(zhì)
[0009]用瓊脂與步驟I配備的營養(yǎng)液組配成育苗基質(zhì)，組配比例為:瓊脂4g、營養(yǎng)液100ml ;加熱至瓊脂充分熔化后，分別倒入潔凈的培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后凝固形成平板，即為育苗瓊脂基質(zhì)。
[0010]3.播種
[0011]按常規(guī)條件將水稻種子浸種和催芽，獲得露白萌發(fā)種子，用小鑷子夾取已露白萌發(fā)的水稻種子，分別播埋在步驟2備好的培養(yǎng)皿育苗瓊脂基質(zhì)內(nèi)。
[0012]4.在封閉的小生境內(nèi)培育水稻幼芽
[0013]步驟3播種完畢后，將培養(yǎng)皿及其盛載的材料一起置于小方盤內(nèi)，取保濕罩將培養(yǎng)皿全部罩在小方盤內(nèi)，往小方盤內(nèi)注入薄層清水，使保濕罩內(nèi)處于封閉狀態(tài)，然后將該全套育苗器具轉(zhuǎn)到普通實驗室內(nèi)近窗口的桌面上，在室溫為28°C條件下培育水稻，直至第一完全葉生長露出，形成針狀幼芽。
[0014]5.準(zhǔn)備接種體孢子液
[0015]按常規(guī)方法培養(yǎng)制備稻瘟病菌的分生孢子，用清水將孢子洗脫懸浮，配成孢子濃度為I X 16個/ml的孢子液，作為接種體孢子液。
[0016]6.接種病菌
[0017]將步驟5準(zhǔn)備的孢子液裝入噴霧器，取出步驟4準(zhǔn)備的水稻幼芽材料，打開罩在幼芽外面的保濕罩，把接種體孢子液對著幼芽均勻噴霧，直至針狀幼芽表面布滿一層霧滴為止，然后重新罩回保濕罩。
[0018]7.接種后培育管理
[0019]將步驟6接種后的幼芽，重新轉(zhuǎn)回原來育苗之處，保持原來育苗的溫度條件繼續(xù)培育。接種5天后，在幼小的植株上呈現(xiàn)清晰的稻瘟病壞死病斑。
[0020]本發(fā)明的優(yōu)點是:
[0021]I)整套方法全程時間短，從播種到典型發(fā)病一般只需要8天。
[0022]2)溫度、濕度、水肥和小生境微生物等重要發(fā)病條件均能高度一致，而且容易控制。
[0023]3)容易創(chuàng)造無菌的育苗環(huán)境。
[0024]4)實施操作簡易，總體技術(shù)簡單，容易實現(xiàn)技術(shù)方法的標(biāo)準(zhǔn)化。
【附圖說明】
[0025]圖1是本發(fā)明水稻種子播種后示意圖。
[0026]圖中，水稻種子播種在培養(yǎng)皿內(nèi)的瓊脂基質(zhì)內(nèi)，培養(yǎng)皿置于小方盤內(nèi)。
[0027]圖2是本發(fā)明水稻種子播種后罩上保濕罩的示意圖。
[0028]圖中，水稻種子播種在培養(yǎng)皿內(nèi)的瓊脂基質(zhì)內(nèi)，培養(yǎng)皿置于小方盤內(nèi)，保濕罩將培養(yǎng)皿及其皿內(nèi)材料罩封在小方盤內(nèi)。
[0029]圖3是本發(fā)明播種3天后水稻種子生長形成的針狀幼芽。
[0030]圖4是本發(fā)明水稻幼芽接種病菌5天后的稻苗外觀。
[0031]圖中，A是未接種病菌對照，B是接種病菌出現(xiàn)壞死病斑。
【具體實施方式】
[0032]下面結(jié)合附圖與實施例對本發(fā)明作進一步描述。
[0033]—種瓊脂基質(zhì)育苗快捷誘發(fā)稻瘟病的方法，是利用瓊脂作育苗基質(zhì)，在微小水稻幼芽階段，接種稻瘟病菌，因而能在短期內(nèi)獲得接種發(fā)病結(jié)果，快捷誘發(fā)稻瘟病方法的步驟如下:
[0034]1.準(zhǔn)備配套營養(yǎng)液
[0035]按比例配備配套營養(yǎng)液，該營養(yǎng)液組分為:硝酸鉀0.5g、磷酸二氫鉀0.5g、尿素
0.5g、水 1000.0ml0
[0036]2.配備育苗瓊脂基質(zhì)
[0037]用瓊脂與步驟I配備的營養(yǎng)液組配成育苗基質(zhì)，組配比例為:瓊脂4g、營養(yǎng)液100ml ;加熱至瓊脂充分熔化后，分別倒入潔凈的培養(yǎng)皿內(nèi)，冷卻后凝固形成平板，即為育苗瓊脂基質(zhì)。
[0038]3.播種
[0039]按常規(guī)條件將水稻種子浸種和催芽，獲得露白萌發(fā)種子，用小鑷子夾取已露白萌發(fā)的水稻種子，分別播埋在步驟2備好的培養(yǎng)皿育苗瓊脂基質(zhì)內(nèi)。
[0040]4.在封閉的小生境內(nèi)培育水稻幼芽
[0041]步驟3播種完畢后，將培養(yǎng)皿及其盛載的材料一起置于小方盤內(nèi)，取保濕罩將培養(yǎng)皿全部罩在小方盤內(nèi)，往小方盤內(nèi)注入薄層清水，使保濕罩內(nèi)處于封閉狀態(tài)，然后將該全套育苗器具轉(zhuǎn)到普通實驗室內(nèi)近窗口的桌面上，在室溫為28°C條件下培育水稻，直至第一完全葉生長露出，形成針狀幼芽。
[0042]5.準(zhǔn)備接種體孢子液
[0043]按常規(guī)方法培養(yǎng)制備稻瘟病菌的分生孢子，用清水將孢子洗脫懸浮，配成孢子濃度為I X 16個/ml的孢子液，作為接種體孢子液。
[0044]6.接種病菌
[0045]將步驟5準(zhǔn)備的孢子液裝入噴霧器，取出步驟4準(zhǔn)備的水稻幼芽材料，打開罩在幼芽外面的保濕罩，把接種體孢子液對著幼芽均勻噴霧，直至針狀幼芽表面布滿一層霧滴為止，然后重新罩回保濕罩。
[0046]7.接種后培育管理
[0047]將步驟6接種后的幼芽，重新轉(zhuǎn)回原來育苗之處，保持原來育苗的溫度條件繼續(xù)培育。接種5天后，在幼小的植株上呈現(xiàn)清晰的稻瘟病壞死病斑。
[0048]發(fā)明采用如下技術(shù)解決常規(guī)苗期誘發(fā)稻瘟病的技術(shù)弊病:1)在稻苗的針狀幼芽期接種稻瘟病菌，因而能大幅度縮短誘發(fā)稻瘟病的試驗周期；2)將水稻育苗和接種發(fā)病技術(shù)體系，設(shè)計在一個相對獨立且封閉的微小生長空間內(nèi)，因而能較大限度地簡化技術(shù)裝備和條件。
[0049]本發(fā)明使用的小方盤、培養(yǎng)皿屬實驗室常規(guī)使用的器具，保濕罩為有機保濕罩。育苗基質(zhì)用的瓊脂屬實驗室常用試劑，瓊脂所含水稻生長所需的養(yǎng)分極為貧乏，因而育苗基質(zhì)的背景養(yǎng)分簡單易控；也由于瓊脂