專利名稱：無毛小白鼠的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及無毛小白鼠，更詳細(xì)地說，是涉及幼毛生長(zhǎng)但缺少一般毛生長(zhǎng)功能的新的無毛小白鼠。
背景技術(shù)：
以往，作為用于研究皮炎治療藥等的動(dòng)物，可舉出例如小白鼠、大白鼠、兔子等，但為了將這些動(dòng)物用于研究，就必須預(yù)先實(shí)施各種處理。例如對(duì)于抗過敏性藥物的篩選，已知可使用引起PCA(passive cutaneousanaphylaxis)反應(yīng)的動(dòng)物，但為了引起動(dòng)物的PCA反應(yīng)，必須對(duì)于剪毛的皮膚給予含同種或異種的組織感染抗體的抗血清，為了測(cè)定該反應(yīng)，在一定時(shí)間后(用同種PCA的IgE抗體是48～168小時(shí))，必須從靜脈注射用抗原和色素或放射性同位素標(biāo)記了的白蛋白(永井博式2-1皮炎(1)PCA反應(yīng)、生物藥科學(xué)實(shí)驗(yàn)講座12卷炎癥和過敏性(Ⅰ-1)(大內(nèi)和雄編)，廣川書店，東京，1993,p.96-109)。這不僅是必要的處理操作，但也意味著這些抗血清等對(duì)于實(shí)驗(yàn)者具有危險(xiǎn)性，所以希望開發(fā)出不進(jìn)行這樣的處理，且能用于研究皮炎治療藥等的病態(tài)模型動(dòng)物。
因此，本發(fā)明的目的在于提供符合上述希望的病態(tài)模型動(dòng)物。
本發(fā)明者們?cè)趯?duì)于上述目的反復(fù)銳意研究的過程中，通過將突然變異得到的貧毛小白鼠進(jìn)行兄妹交配，成功地培育出符合上述目的的，皮膚病變的自然發(fā)病率非常高的無毛小白鼠，從而完成了本發(fā)明。
發(fā)明的公開本發(fā)明涉及無毛小白鼠，其特征是幼毛生長(zhǎng)但缺少一般毛的生長(zhǎng)功能，更詳細(xì)地說，是涉及濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變的自然發(fā)病率，在24周齡以后，是70％以上的無毛小白鼠，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約是50個(gè)/mm以上的無毛小白鼠，及血中IgE抗體值，在24周齡時(shí)，是約3500ng/ml以上的無毛小白鼠。
本發(fā)明的無毛小白鼠，如上所述，其特征是幼毛生長(zhǎng)，但缺少一般毛的生長(zhǎng)功能，從來還沒有研究出這種缺少一般毛的生長(zhǎng)功能的小白鼠，另外，也沒有被披露的先例。
而且，本發(fā)明無毛小白鼠具有如下特征，即濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變的自然發(fā)病率，在24周齡后，是70％以上；皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)，在24周齡時(shí)為約50個(gè)/mm以上；及血中IgE抗體值在24周齡時(shí)，是約3500ng/ml以上。
然而，一般的有毛小白鼠不會(huì)自然發(fā)生濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變，通過本發(fā)明者們的計(jì)算，其肥大細(xì)胞數(shù)通常是10個(gè)/mm左右，對(duì)于血中IgE抗體值，其定量的測(cè)定報(bào)告很少，且正常值也尚未確認(rèn)，但通常是非常微量的。因此，根據(jù)本發(fā)明者們的測(cè)定(使用下述測(cè)定試劑盒)，如下述表3及4所示，ICR小白鼠16周齡時(shí)是0.0-137.5ng/ml,ddY小自鼠16周齡時(shí)是0.0-5.0ng/ml。另外，文獻(xiàn)中報(bào)道，對(duì)于正常動(dòng)物，BALB/c小白鼠時(shí)＜20-608ng/ml,C3H小白鼠時(shí)，全例＜20ng/ml，對(duì)于實(shí)驗(yàn)的寄生蟲(Nippostrongylus brasiliensis)感染動(dòng)物，BALB/c小白鼠時(shí)，是2240-7168ng/ml,C3H小白鼠時(shí)，是1365-3068ng/ml(平野隆雄、宮島宏明，產(chǎn)生抗小白鼠IE單克隆雜交瘤抗體的概率及其應(yīng)用，Medical Immunology,15(2),211-216(1988))。
進(jìn)而，對(duì)于現(xiàn)有的無毛小白鼠也不自然發(fā)生濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變，通過本發(fā)明者們計(jì)算其肥大細(xì)胞數(shù)通常是20個(gè)/mm左右，對(duì)于血中IgE抗體值，根據(jù)本發(fā)明者們的測(cè)定(使用下述測(cè)定試劑盒)，如下述表2所示，HRS/J小白鼠20周齡時(shí)，是102.0-253.0ng/ml。
與此相反，本發(fā)明的無毛小白鼠如上所述，其特征是在24周齡(或以后)，顯示非常高的皮膚病變自然發(fā)病率，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)及血中IgE抗體值，與一般有毛的小白鼠及現(xiàn)有的無毛小白鼠具有充分明顯區(qū)別的新穎性。
基于本發(fā)明無毛小白鼠具有上述特征，作為皮炎的預(yù)防及治療的篩選及藥效試驗(yàn)等的病態(tài)模型動(dòng)物是非常有用的。
另外，本發(fā)明無毛小白鼠即使在24周齡以前，與現(xiàn)存的無毛小白鼠或進(jìn)行除毛等小白鼠比較，顯示了顯著穩(wěn)定的無毛狀態(tài)，因此，將非發(fā)生皮膚病變動(dòng)物(特別是低周齡)，作為醫(yī)藥品、化妝品等經(jīng)皮給藥的藥劑的皮膚刺激性試驗(yàn)等試驗(yàn)動(dòng)物時(shí)，具有不需除毛等的麻煩工序就可利用的優(yōu)點(diǎn)。
因此，本發(fā)明也提供使用這樣的本發(fā)明無毛小白鼠，進(jìn)行醫(yī)藥品、化妝品等經(jīng)皮使用的藥劑、代表性的皮炎的預(yù)防及治療劑的藥效和/或皮膚刺激性的試驗(yàn)方法。
本發(fā)明的上述試驗(yàn)，是利用本發(fā)明無毛小白鼠作為必要條件，除此之外與其他通常進(jìn)行的該種試驗(yàn)相同地進(jìn)行。例如代表性的，是將適量的被檢物質(zhì)賦形在軟膏劑、貼附劑等經(jīng)皮給藥形態(tài)物質(zhì)上按照常法涂敷、貼附在本發(fā)明無毛小白鼠的皮膚上，用一般的方法觀察、評(píng)價(jià)其經(jīng)時(shí)作用及效果。
本發(fā)明的無毛小白鼠是本發(fā)明者們?cè)趯⒋菩缘腃3H/He小白鼠和雄性的ddY小白鼠雜交成兄妹交配小白鼠的過程中，偶然確認(rèn)其發(fā)生的突然變異而培育的貧毛個(gè)體(雄性)作為起源的。上述雄性貧毛個(gè)體與同腹生的雌性進(jìn)行兄妹交配后，在其第2代時(shí)只得到雄性貧毛個(gè)體，但到第3代時(shí)可得到雌、雄貧毛個(gè)體，將該雌、雄貧毛個(gè)體進(jìn)行兄妹交配，可得到雌性的本發(fā)明無毛個(gè)體，將該雌性無毛個(gè)體與同腹生的雄性貧毛個(gè)體進(jìn)行兄妹交配，可成功地得到雌、雄無毛個(gè)體。將該雌雄無毛個(gè)體作為無毛0代，將它們進(jìn)行兄妹交配，其所有的子孫都是無毛個(gè)體，這樣就成功地培育了本發(fā)明無毛小白鼠。以下，將本發(fā)明無毛小白鼠稱為“NOA小白鼠”。
上述各代小白鼠的飼養(yǎng)方法，與通常的小白鼠飼養(yǎng)沒有特別的不同，例如在適當(dāng)?shù)幕\中，給予適當(dāng)?shù)娘暳希稍诟綦x系統(tǒng)環(huán)境下，溫度為23±2℃、濕度為55±5％、從上午7點(diǎn)到下午7點(diǎn)，進(jìn)行12小時(shí)照明(例如，參照新實(shí)驗(yàn)動(dòng)物學(xué)，朝倉書店，104頁，1986年)。作為上述飼料，可使用固形飼料(代表性的，CRF-1、Oriental Yeast IndustryCo.,Ltd.)，及可自由喝到自來水即可。
在上述飼養(yǎng)期間，可目視觀察毛的發(fā)育狀況及皮膚病變發(fā)生癥，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)及血中IgE抗體值，可按照常法，例如組織標(biāo)本的甲苯胺蘭染色法及使用市售的小白鼠IgE測(cè)定試劑盒的夾層ELISA法進(jìn)行測(cè)定。
本申請(qǐng)人將這樣的固定了的本發(fā)明無毛小白鼠(NOA小白鼠)經(jīng)常維持在可分讓的狀態(tài)，另外，其受精卵在1997年5月15日以寄存號(hào)第72022號(hào)寄存在美國(guó)型培養(yǎng)收集中心(ATCC),Park Lawn Drive 12301,Rockville,Maryland,USA 20852中。
附圖簡(jiǎn)述


圖1是表示NOA小白鼠(5周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖2是表示NOA小白鼠(10周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖3是表示作為比較的HRS/J小白鼠(7周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖4是表示作為比較的HRS/J小白鼠(28周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖5是表示作為比較的BALB/cA-hr小白鼠(7周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖6是表示作為比較的BALB/cA-hr小白鼠(28周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖7是表示濕潤(rùn)性皮膚病變發(fā)生癥NOA小白鼠(20周齡、雄性)的外貌特征的代用圖紙的照片。
圖8是表示圖7所示的NOA小白鼠4周后的外貌特征的代用圖紙照片。
圖9是表示圖7所示的NOA小白鼠12周后的外貌特征的代用圖紙照片。
圖10是表示圖7所示的NOA小白鼠16周后的外貌特征的代用圖照片。
圖11是表示研究在各周齡下，調(diào)查NOA小白鼠(雄性及雌性)，包括干燥性和濕潤(rùn)性的全皮膚病變發(fā)病癥，求出其發(fā)病率的圖。
圖12是表示與
圖11相同地只求出濕潤(rùn)性皮膚病變發(fā)病率的圖。
圖13是研究NOA小白鼠以及比較動(dòng)物和對(duì)照動(dòng)物，隨著年令增加，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖14是研究NOA小白鼠(雄性及雌性)隨著年令增加，皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖15是研究NOA小白鼠(雄性)的背部皮膚的濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變部位以及正常部位隨著年令增加，肥大細(xì)胞數(shù)變化的圖。
圖16是表示NOA小白鼠(48周齡、雄性)的皮膚(背部干燥性皮膚病變部位)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖17是表示NOA小白鼠(48周齡、雄性)體食淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖18是表示NOA小白鼠體表淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))臚胞部(32周齡、雄性)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖19是表示作為比較動(dòng)物的BALB/cA-hr小白鼠(20周齡、雄性)的皮膚(背部)的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
圖20是作為比較動(dòng)物的BALB/cA-hr小白鼠(28周齡、雄性)的體表淋巴節(jié)(顎下淋巴節(jié))的IgE抗體染色試驗(yàn)圖的代用照片。
實(shí)施本發(fā)明的最佳方案以下，用實(shí)施例進(jìn)一步詳細(xì)地說明本發(fā)明。實(shí)施例1將C3H/He雌性小白鼠和ddY雄性小白鼠交配得到的由于突然變異培育的雄性貧毛個(gè)體作為祖先，將該雄性貧毛個(gè)體和同腹生的雌性貧毛個(gè)體交配得到的第3代雌雄貧毛個(gè)體，作為兄妹交配，得到雌性無毛個(gè)體。將該雌性無毛個(gè)體在同腹生的雄性貪毛個(gè)體進(jìn)行兄妹交配，得到雌雄無毛個(gè)體，將該雌雄無毛個(gè)體作為無毛0代，將其進(jìn)行兄妹交配，固定了本發(fā)明無毛小白鼠(NOA小白鼠)系列。
另外，各小白鼠的飼養(yǎng)是用飼養(yǎng)籠(底部170×280mm×H130mm、聚碳酸酯制、日本可樂麗社制，以最多5只/籠的組飼養(yǎng)進(jìn)行的。另外，飼養(yǎng)是在隔離系統(tǒng)環(huán)境下(溫度23±2℃、濕度55±5％、照明時(shí)間從上午7點(diǎn)到下午7點(diǎn)，12小時(shí))進(jìn)行的，在飼養(yǎng)期間，對(duì)于每個(gè)小白鼠都可自由吃到固形飼料(CRF-1、Oriental Yeast Industry Co.,Ltd.)，自由地喝到自來水。
對(duì)于由上述得到的NOA小白鼠，觀察如下各項(xiàng)目。
項(xiàng)目1脫毛方式……通過目視觀察。但是對(duì)于Rhino小白鼠，可通過文獻(xiàn)[A.Howard,“Rhino”,an allele of hairless in house mouse,J.Hered.,31,467-470(1940)；Stanley,J.Mann,Hair loss and cyst formationin Hairless and Rhino mutant mice.,ANAT.REC.,170,485-500(1971):Kawaji,H.,Tsukuda,R.and Nakaguchi,T.,Immunopathology of Rhinomouse,An autosomal recessive mutant with murine lupuslike disease.,ActaPathol.Jpn.,30(4),515-530(1980)]進(jìn)行確認(rèn)。
項(xiàng)目2皮膚病變的自然發(fā)病……通過目視觀察。
項(xiàng)目3皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)……通過組織標(biāo)本的甲苯胺染色法測(cè)定。
項(xiàng)目4產(chǎn)生IgE抗體能1．用酶抗體法(ABC法)測(cè)定IgE抗體染色。
2．用夾層ELISA法測(cè)定血中IgE抗體值。
得到的結(jié)果如下所示。
項(xiàng)目1脫毛形式用目視觀察本發(fā)明的NOA小白鼠及比較用HRS/J及BALB/cA-hr的無毛小白鼠。但是，對(duì)于Rhino小白鼠；要通過上述文獻(xiàn)調(diào)查、確認(rèn)。
(1)NOA小白鼠幼毛生長(zhǎng)，但缺少一般毛的生長(zhǎng)功能、直到幼毛脫落的10周齡止，體毛消失。進(jìn)而，吻鼻部及眼瞼部的剛毛變短呈不規(guī)則狀(5周齡、參照
圖1)。然后，到12周齡時(shí)，吻鼻部及眼瞼部的剛毛也脫落，完全看不到體毛，成為非常光滑的無毛皮膚狀態(tài)(10周齡，參照?qǐng)D2)。
(2)HRS/J小白鼠除了幼毛生長(zhǎng)，還殘存一般毛的生長(zhǎng)功能，雖然很少，但可看到一般毛(7周齡、參照?qǐng)D3)。伴隨生長(zhǎng)，該一般毛脫落，成為無毛皮膚(28周齡、參照?qǐng)D4)，但對(duì)于滯后的，也有直到20周齡以后能看到體毛的個(gè)體，個(gè)體差異顯著。脫毛后的皮膚，與NOA小白鼠比較，看到深的皺紋?？烧５乜吹轿潜遣考把鄄€部的剛毛(28周齡、參照?qǐng)D4)。
(3)BALB/cA-hr小白鼠與HRS/J小白鼠大致相同。即，除了幼毛生長(zhǎng)，也殘存一般毛的生長(zhǎng)功能、雖然很少可看到一般毛(7周齡、參照?qǐng)D5)。伴隨成長(zhǎng)，該一般毛脫落，成為無毛皮膚(28周齡、參照?qǐng)D6)，但滯后的，到20周齡以后也有看到體毛的個(gè)體，個(gè)體差異顯著。脫毛后的皮膚，與NOA小白鼠比較皺紋多、且有粗糙感。
通?？烧５乜吹轿潜遣考把鄄€部的剛毛(28周齡、參照?qǐng)D6)。
(4)Rhino小白鼠到13～14日令為止，外觀上屬于正常，但以后，從眼部開始脫毛，到3～4周齡繼續(xù)脫毛，只是腳、尾、耳有毛。到5周齡，在背部留有散在性的毛，對(duì)于后肢，到7周齡殘留有毛[參照A.Howard,“Rhino”,an allele of hairless in house mouse,J.Hered.,31,467-470(1940)]。
另外，如下表示即，到生后12日的被毛成長(zhǎng)是正常的，但以后繼續(xù)脫毛，到25日令，被毛脫落。但有文獻(xiàn)記載到60日令之前可看到微小的散在性被毛的個(gè)體，該被毛往往是異常的毛(stanley,J.Mann,Hairloss and cyst formation in Hairless and Rhino mutant mice.,ANAT.REC.,170,485-500(1971))。從這些記載可推測(cè)也殘存一般毛的生長(zhǎng)功能。
進(jìn)而，在A.Howard文獻(xiàn)上記載著剛毛雖然殘留一生，但老化時(shí)變短、彎曲、很多還可以脫落的現(xiàn)象，另一方面，在以下的文獻(xiàn)中還記載著吻鼻部及眼瞼部的剛毛是正常的(Kawaji,H.,Tsukoda,R.andNakaguchi,T.,Immunopathology of Rhino mouse,An autosomal recessivemutant with murine lupuslike disease.,Acta Pathol.Jpn.,30(4),515-530(1980))。
項(xiàng)目2皮膚病變的自然發(fā)病通過5周齡～48周齡前的目視，觀察本發(fā)明的NOA小白鼠及比較用的HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠。
(1)NOA小白鼠從10周齡左右可以看到皮膚病變的自然發(fā)病?？梢源_認(rèn)該皮膚病變是干燥性(干皮膚)的病變和濕潤(rùn)性(潰瘍性)的病變，這些不是相異的病變，可認(rèn)為是表皮是否殘存的區(qū)別。
皮膚病變最初看到發(fā)紅時(shí)，這時(shí)向干燥性或者濕潤(rùn)性轉(zhuǎn)移。向濕潤(rùn)性的轉(zhuǎn)移，其表皮處于易于脫落的狀態(tài)，這可認(rèn)為是由于自然或物理的原因而引起的脫落。此時(shí)，表皮若不脫落而殘存著，可認(rèn)為是干燥性的，但是大多數(shù)為干燥性病變，可以推測(cè)以后向濕潤(rùn)性轉(zhuǎn)移。
濕潤(rùn)性皮膚病變，在低周齡下幾乎都是很微小的，大范圍地可確認(rèn)時(shí)是從16周齡左右開始，更大范圍地可以被確認(rèn)是24周齡以后。
濕潤(rùn)性皮膚病變隨著加令而慢慢擴(kuò)張的樣子，如圖7～
圖10所示。圖7表示了20周齡的NOA小白鼠、圖8表示了其4周后(24周齡)、圖9表示其12周后(36周齡)、另外
圖10表示其16周后(40周齡)。
對(duì)各圖詳細(xì)地?cái)⑹?，圖7(20周齡)中，在上眼瞼至吻鼻部、肩部至背側(cè)部至腰部上看到濕潤(rùn)性皮膚病變。可看到背部至腰部上顯示了少量的脫鱗和粗糙感的干燥性皮膚病變。
圖8(24周齡)中，可看到濕潤(rùn)性皮膚病變部的擴(kuò)張(上眼瞼部和吻鼻部的一部分有改善的傾向)。在干燥性皮膚病變部可以看到皮膚的薄層化。
圖9(36周齡)中，可看到在濕潤(rùn)性皮膚病變進(jìn)而有病變的擴(kuò)張(上眼瞼部和吻鼻部的一部分改善)。在干燥性皮膚病變部可以看到皮膚的薄層化正在進(jìn)行。
圖10(40周齡)中，在干燥性皮膚病變部，進(jìn)一步看到皮膚的薄層化正在進(jìn)行。
上述的皮膚病變，對(duì)于嚴(yán)重的，可看到占體表面積20％以上的病例。濕潤(rùn)性皮膚病變部分地被改善，但大范圍的病變消失的例子目前還沒有。
干燥性皮膚病變，在低周齡的小白鼠上大致地可以看出，而對(duì)于高周齡的可以看到高度地形成脫鱗、表皮顯著地薄層化。
調(diào)查上述皮膚病變的發(fā)病率，其結(jié)果如
圖11所示。
圖11中，是調(diào)查NOA小白鼠的各周齡雌雄各10只的包括干燥性和濕潤(rùn)性的全皮膚病變發(fā)作情況，并求出其發(fā)病率的圖。
此外，皮膚病的發(fā)作有無判斷，一般是通過目視觀察，明顯地觀察到皮膚病變的，則作為發(fā)病動(dòng)物。
圖中，平均的定義是表示雌雄的平均，n的數(shù)是各周齡雌雄分別是10只，檢查周齡是12階段，檢查動(dòng)物的合計(jì)是雌雄各120只(合計(jì)240只)。
從
圖11可明顯看出包括干燥性和濕潤(rùn)性皮膚病變發(fā)作率，對(duì)于16周齡的雌雄平均，可以達(dá)到90％。
從
圖12同樣地只求出濕潤(rùn)性皮膚病的發(fā)作率。
從該圖可明顯地看出濕潤(rùn)性皮膚病變的雌雄平均下的發(fā)病率對(duì)于16周齡是30％、24周齡是80％。
(2)HRS/J小鼠及BALB/cA-hr小鼠通過飼養(yǎng)期間(5周齡～48周齡)，可以看到數(shù)倒由于小白鼠爭(zhēng)斗引起的微小的濕潤(rùn)性病變(外傷)，但對(duì)于這些動(dòng)物也都未看到病變的擴(kuò)張，2周左右就得到改善、消失。
項(xiàng)目3皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在NOA小白鼠的病理組織學(xué)的檢索中，在皮膚病變部上可以看到多數(shù)的肥大細(xì)胞聚集。從這可以推論，對(duì)于NOA小白鼠的皮膚，肥大細(xì)胞在增殖著，為進(jìn)一步確認(rèn)，可用下述方法算出皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)。
即，從背部、腰部、胸部及腹部的各皮膚采取約1cm長(zhǎng)的皮膚，施以甲苯胺蘭染色，分別對(duì)三個(gè)地方(左右兩端及中央部)，用顯微鏡計(jì)數(shù)每1mm長(zhǎng)的肥大細(xì)胞數(shù)，將這些值平均后，作為背部、腰部、胸部及腹部的肥大細(xì)胞數(shù)。
作為比較，對(duì)于HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠及對(duì)照用的ICR及ddY的一般有毛小白鼠進(jìn)行同樣的試驗(yàn)。
其結(jié)果，表示在
圖13中(縱軸肥大細(xì)胞數(shù)、個(gè)/mm及橫軸小白鼠周齡)。
此外，各小白鼠的個(gè)數(shù)(n、全是雄性)，對(duì)于NOA小白鼠各周齡10個(gè)(檢查周齡12階段、檢查動(dòng)物合計(jì)120只)、對(duì)于比較動(dòng)物及對(duì)照動(dòng)物組各周齡5個(gè)(檢查階段8階段，檢查動(dòng)物合計(jì)，各系統(tǒng)30頭)。另外，對(duì)于NOA小白鼠，不管有無皮膚病變發(fā)作，是隨機(jī)地選擇。進(jìn)而，HRS/J小鼠的結(jié)果以HRS/J表示、BALB/cA-hr小白鼠的結(jié)果以BALB/c-h表示、ICR小白鼠的結(jié)果以ICR表示，而對(duì)于ddY小白鼠的結(jié)果以ddY表示。
從
圖13可看出，本發(fā)明的NOA小鼠皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)，12周齡是28個(gè)/mm、40周齡是57個(gè)/mm，此值與比較動(dòng)物及對(duì)照動(dòng)物對(duì)比后，是明顯的高值。事實(shí)上，HRS/J小白鼠，對(duì)于12周齡是15個(gè)/mm、40周齡是13個(gè)/mm、BALB/cA-hr小鼠，對(duì)于12周齡是21個(gè)/mm、40周齡是24個(gè)/mm、ICR小白鼠，對(duì)于12周齡是10個(gè)/mm、40周齡是10個(gè)/mm，另外，ddY小鼠，對(duì)于12周齡是11個(gè)/mm,40周齡是11個(gè)/mm。
進(jìn)而，對(duì)于NOA小白鼠，由于其雌雄的差別上述的肥大細(xì)胞數(shù)有若干的差別。這些也表示在用同樣方法求出的
圖14中(與
圖11相同的個(gè)體數(shù)，同樣地進(jìn)行了表示)。
另外，對(duì)于NOA小白鼠，從皮膚的狀態(tài)可以看出肥大細(xì)胞數(shù)上的差，與正常部位比較，在皮膚病變發(fā)病部位顯示高值(參照
圖15、平均的定義是不管有無皮膚病發(fā)作而放出的平均值、濕潤(rùn)性表示濕潤(rùn)性皮膚病變部、干燥性表示干燥性皮膚病變部、正常是表示正常皮膚部)。在皮膚病變發(fā)病部位及其周邊部也可看到顯著的高值，局部地也可看到表示300個(gè)/mm以上的值。
上述
圖15中，被檢查的個(gè)數(shù)(n)各周齡是10只、檢查周齡12階段、檢查動(dòng)物合計(jì)120只，各項(xiàng)目(狀態(tài))的n數(shù)如下。
5周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=0、干燥性皮膚病變部=0、正常部=107周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=0、干燥性皮膚病變部=0、正常部=1010周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=1、正常部=612周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=2、干燥性皮膚病變部=2、正常部=616周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=1、正常部=620周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=4、干燥性皮膚病變部=5、正常部=124周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=4、干燥性皮膚病變部=4、正常部=228周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=5、干燥性皮膚病變部=5、正常部=032周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=3、正常部=436周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=5、干燥性皮膚病變部=3、正常部=240周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=3、干燥性皮膚病變部=5、正常部=248周齡濕潤(rùn)性皮膚病變部=6、干燥性皮膚病變部=4、正常部=0
從以上的結(jié)果可明顯地看出，對(duì)于NOA小白鼠皮膚的肥大細(xì)胞顯著地增殖著，這就暗示了是與皮膚病的發(fā)病率相關(guān)。
項(xiàng)目4IgE抗體產(chǎn)生能(1)IgE抗體染色觀察對(duì)于NOA小白鼠及為比較用的HRS/J及BALB/cA-hr的各無毛小白鼠及作為對(duì)照的ICR及ddY的一般有毛小鼠分別采取皮膚、體表淋巴節(jié)、胸腺及脾臟，用酶抗體法(ABC法)染色I(xiàn)gE抗體，顯微鏡下觀察。
對(duì)5周齡～48周齡的各供試小白鼠進(jìn)行上述觀察。
其結(jié)果，對(duì)于NOA小白鼠，從12周齡左右在皮膚的肥大細(xì)胞周圍可以看到很強(qiáng)的陽性反應(yīng)，可認(rèn)為體表的淋巴節(jié)上陽性細(xì)胞(認(rèn)為IgE抗體產(chǎn)生形質(zhì)細(xì)胞)增多。該反應(yīng)在皮膚病變的發(fā)病動(dòng)物上更強(qiáng)，在該動(dòng)物上可以看到更多的陽性細(xì)胞。進(jìn)而，對(duì)于皮膚病變發(fā)作動(dòng)物，在淋巴節(jié)細(xì)胞部拗網(wǎng)樹枝狀細(xì)胞上出現(xiàn)陽性反應(yīng)(認(rèn)為是IgE抗體絡(luò)合物的沉淀)。這些如
圖16(NOA小白鼠48周齡、背部干燥性皮膚病變部)、
圖17(NOA小鼠24周齡、濕潤(rùn)性皮膚病變發(fā)作動(dòng)物的顎下淋巴節(jié))、
圖18(NOA小白鼠、32周齡、濕潤(rùn)性皮膚病變發(fā)作動(dòng)物的顎下淋巴節(jié)、細(xì)胞部)所示。再者，各圖中，表示了各部位的顯微鏡攝影照像(倍率×150倍)，以下的
圖19(背部皮膚)及圖20(顎下淋巴節(jié))也是同樣。
在
圖16中，被染色(黑色)成環(huán)狀或點(diǎn)狀，是IgE抗體陽性細(xì)胞，這里全部是肥大細(xì)胞。
按照
圖17，被染色(黑色)成點(diǎn)狀，是IgE抗體陽性細(xì)胞，可認(rèn)為這里全都是產(chǎn)生抗體的形質(zhì)細(xì)胞。
按照
圖18，被染色成中央部的網(wǎng)孔狀(黑色)，是陽性反應(yīng)，可認(rèn)為這是在臚胞部的細(xì)網(wǎng)樹肢狀細(xì)胞上沉積著IgE抗體絡(luò)合物。
與此相反，對(duì)于比較動(dòng)物及對(duì)照動(dòng)物，如
圖19及圖20所示，都是較弱的反應(yīng)可少數(shù)的陽性細(xì)胞。即，
圖19是BALB/cA-hr小白鼠的20周齡的背部皮膚顯微鏡照片、圖20是BALB/cA-hr小鼠、28周齡的顎下淋巴節(jié)的顯微鏡照片。
在
圖19中，被染色成環(huán)狀(黑色)的數(shù)個(gè)細(xì)胞是IgE抗體陽性細(xì)胞，這是肥大細(xì)胞。
在圖20中，被染色成點(diǎn)狀(黑色)的數(shù)個(gè)細(xì)胞是陽性細(xì)胞，可認(rèn)為這里是產(chǎn)生IgE抗體的形質(zhì)細(xì)胞。
從以上的結(jié)果，可以看出對(duì)于NOA小白鼠產(chǎn)生IgE抗體是亢進(jìn)的，這說明了是與皮膚病的病變發(fā)作癥是有關(guān)系的。
(2)血中IgE抗體值的測(cè)定由上述(1)的染色觀察，對(duì)于NOA小白鼠，產(chǎn)生IgE抗體的亢進(jìn)是明顯的，所以用以下血中IgE抗體值的測(cè)定試驗(yàn)可確認(rèn)此事實(shí)。
即，按照使用市售的測(cè)定試劑盒(商品名小白鼠IgE測(cè)定試劑盒“YAMASA”、EIA、YAMASA醬油株式會(huì)社制)的夾層ELISA法，測(cè)定血中IgE抗體值。
對(duì)于NOA小白鼠(雄性，5周齡～32周齡)得到的結(jié)果如下述表1所述。此外，表中，病變重度的表示用以下的符號(hào)。即“-”表示皮膚病變非發(fā)作動(dòng)物、“+”～“+++”分別表示發(fā)作濕潤(rùn)性皮膚病變動(dòng)物，“+”號(hào)越多，表示病變的廣度越大?！癢”表示干燥性皮膚病變發(fā)作動(dòng)物。
另外，作為對(duì)照使用的HRS/J小鼠(雄性、5、20及28周齡)、ICR小鼠(雄性、5、16及32周齡)及ddY小白鼠(雄性、5、16及32周齡同樣地求出中IgE抗體值分別表示在下述表2、表3及表4中。)
表1(NOA小白鼠

表2(HRS/J小白鼠)<

表3(ICR小白鼠)<

>
表4(ddY小白鼠)

從上述表1至表4的對(duì)比明顯地看出，NOA小白鼠與HRS/J小白鼠、ICR小白鼠及ddY小白鼠比較，顯示了相當(dāng)高的血中IgE抗體值、從這些事中也暗示了對(duì)于NOA小白鼠，IgE抗體的產(chǎn)生其亢進(jìn)是明顯的，這是與皮膚病的發(fā)病率是有關(guān)系的。
權(quán)利要求
1．無毛小白鼠，其特征在于生長(zhǎng)幼毛，但缺少生長(zhǎng)一般毛的能力。
2．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中濕潤(rùn)性及干燥性的皮膚病變的自然發(fā)病率在24周齡以后是70％以上。
3．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約為50個(gè)/mm以上。
4．權(quán)利要求1所述的無毛小白鼠，其中血中IgE抗體值在24周齡時(shí)約為3500ng/ml以上。
5．權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的無毛小白鼠，其中是通過C3H/He雌雄小白鼠和ddY雄性小白鼠交配得到的突然變異的貧毛個(gè)體作為起源。
6．權(quán)利要求5所述的無毛小白鼠，其中通過貧毛個(gè)體的兄妹交配得到的無毛個(gè)體至少是通過1代兄妹交配而得到的。
7．對(duì)于權(quán)利要求1-6的任何一項(xiàng)所述的無毛小白鼠的皮膚進(jìn)行適用藥劑、藥劑的藥效和/皮膚刺激性的試驗(yàn)方法。
8．權(quán)利要求7所述的方法，其中的藥劑是個(gè)防皮炎及治療劑。
9．權(quán)利要求7所述的方法，其中的藥劑是化妝品。
10．為了試驗(yàn)藥劑的藥效和/或皮膚刺激性的如權(quán)利要求1-6中任何一項(xiàng)所述的無毛小鼠的利用。
11．權(quán)利要求10所述的無毛小白鼠的利用，其中的藥劑是預(yù)防皮炎及治療劑。
全文摘要
本發(fā)明涉及幼毛生長(zhǎng)、但一般毛生長(zhǎng)功能缺少的無毛小白鼠，更詳細(xì)地說提供了濕潤(rùn)性及干燥性皮膚病變的發(fā)病率，在24周齡以后是70%以上、皮膚的肥大細(xì)胞數(shù)在24周齡時(shí)約為50個(gè)/mm以上，血中IgE抗體在24周齡時(shí)約3500ng/ml以上的無毛小白鼠。本發(fā)明無毛小白鼠作為皮炎治療藥等的研究、開發(fā)用病態(tài)模型動(dòng)物等是有用的。
文檔編號(hào)A01K67/027GK1227464SQ97197093
公開日1999年9月1日 申請(qǐng)日期1997年7月30日 優(yōu)先權(quán)日1996年8月5日
發(fā)明者近藤泰三, 近藤敏男, 鹽本泰久 申請(qǐng)人:株式會(huì)社大塚制藥工場(chǎng)