專利名稱:海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法
本發(fā)明系關(guān)于海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法，尤指可提高廿碳五烯酸含量，以提高所培養(yǎng)之海產(chǎn)綠藻中總脂價(jià)含量，且可加速生育速度的海產(chǎn)綠藻培養(yǎng)方法。
廿碳五烯酸(Eicosapentanoic acid以下稱EPA)是生物體內(nèi)各種前列腺素(Prostaglandin)關(guān)聯(lián)物質(zhì)之前驅(qū)體，近年來因發(fā)現(xiàn)具有抗血小板凝集等生理活性，頗受矚目。以往，EPA雖可由魚油分離精制，但對(duì)魚油中之總脂質(zhì)而言，EPA含量低至10-15%左右，且在魚油中，EPA以外的高純度不飽和脂肪酸中，含有較大量與EPA構(gòu)造相似的脂肪酸，不容易進(jìn)一步加以濃縮。
另方面，海產(chǎn)綠藻在一定條件下培養(yǎng)時(shí)，其EPA含量可達(dá)相當(dāng)于總脂肪酸量之30%左右或以上，比魚油為高。然而，海產(chǎn)綠藻之生育速度慢，且總脂肪酸含量低，故絕對(duì)量亦低，為其問題所在。
因此，本發(fā)明之目的，在于提供一種海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法，可提高總脂質(zhì)量(因而可提高EPA含量)而且可提高生育速度。
依照本發(fā)明所提供之海產(chǎn)綠藻培養(yǎng)方法，是利用海水系培養(yǎng)基培養(yǎng)海產(chǎn)綠藻，其特征為，在該培養(yǎng)基中，添加選自碳酸氫鹽，乙酸和乙酸鹽中，至少一種為碳源，并加生物素加以培養(yǎng)者。
茲進(jìn)一步詳述本發(fā)明。
如上所述，本發(fā)明海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法，其特征在于采用之培養(yǎng)基，系于海水系培養(yǎng)基中添加特定碳源及生物素。
所用基本培養(yǎng)基，凡天然海水或人工海水(總稱「海水培養(yǎng)基」)均可用。然而，在培養(yǎng)基中之氯化鈉濃度以0.1-0.2重量%為佳(使用天然海水時(shí)，可藉加水等以調(diào)節(jié)其濃度)。氯化鈉含量超出此范圍時(shí)，生育速度會(huì)顯著下降，附帶降低EPA含量。
依照本發(fā)明，在上述海水系培養(yǎng)基所添加之碳源，有碳酸氫鹽，乙酸，乙酸鹽，或其任二種以上之混合物。此碳源之添加量，通常為每公升培養(yǎng)基約30至1000毫克。此添加量未滿30毫克/公升培養(yǎng)基，則結(jié)果無法提高所培養(yǎng)綠藻之總脂質(zhì)含量，另方面，添加量如超過1000毫克/公升培養(yǎng)基，顯示不出效果有何特殊提高。碳源較佳添加量為100-600毫克/公升培養(yǎng)基。碳酸氫鈉之例有碳酸氫鈉，碳酸氫鉀等，乙酸鹽則有乙酸鈉，乙酸鉀，乙酸銨等。
依照本發(fā)明，與上述碳源同時(shí)添加于海水系培養(yǎng)基的生物素(biotin)，其量無特別規(guī)定，惟在0.1微克/公升培養(yǎng)基以下時(shí)，幾天效果。生物素較佳添加量為0.5-10微克。
除上述碳源和生物素外，海水系培養(yǎng)基尚可添加硫酸銨等氮源，過酸鈣等磷源。氮源以約100毫克/公升培養(yǎng)基之比率，而磷源以約10毫克/公升培養(yǎng)基之比率添加為佳。
培養(yǎng)基之pH值會(huì)隨培養(yǎng)時(shí)間經(jīng)過而變化，但至少在海產(chǎn)綠藻培養(yǎng)開始之前(即海產(chǎn)綠藻接種之前)的培養(yǎng)基，以設(shè)定于6至8之pH值為佳。
在本發(fā)明中，采用上述培養(yǎng)基時(shí)，海產(chǎn)綠藻(例如chlorellaminutissima)最好在15℃至25℃溫度培養(yǎng)。培養(yǎng)溫度超出此范圍時(shí)，生育速度下降，且綠藻中EPA含量有下降之虞。培養(yǎng)種間通常為3-20天。
依照本發(fā)明培養(yǎng)海產(chǎn)綠藻時(shí)，綠藻接種量無特別限制，通常是以0-0.5克(濕菌體重量)/公升培養(yǎng)基之比率接種。
依照本發(fā)明海產(chǎn)綠藻培養(yǎng)方法，可加快生育速度，保持總脂質(zhì)中所占EPA含量高，得以安定生產(chǎn)總脂質(zhì)含量高之海產(chǎn)綠藻，此與選自碳酸氫鹽，乙酸和乙酸鹽群中選出之至少一種碳源，以及生物素的相乘效果，據(jù)推論系脂肪酸生成第一步驟中，促進(jìn)丙二醯基COA生成之故。
又，利用光合作用之碳源供給方法，已知有將碳酸氣在暴氣中混入之方法，但依本發(fā)明，與習(xí)知方法相較，碳源之利用較佳，可降低生產(chǎn)成本。
依照本發(fā)明培養(yǎng)海產(chǎn)綠藻后，將培養(yǎng)綠藻菌體以適當(dāng)溶劑，例如己烷和異丙醇之混合溶劑萃取，分離脂質(zhì)成分，利用常法鹵化分解。除去不鹵化成分后，收集脂肪酸，以尿素附加物法飽和，并除去不飽和單脂肪酸。如此所得脂肪酸，其EPA含量相當(dāng)高，如欲再提高純度，則可利用矽膠等柱型色層分析法。藉此柱型色層分析法分離，可得95%以上之純度。
茲記述本發(fā)明實(shí)例如下。
實(shí)施例表1所示碳源和生物素，分別以該表所示比率(/公升培養(yǎng)基)，添加于海水系基本培養(yǎng)液(以下稱BM)調(diào)制成培養(yǎng)基，pH調(diào)節(jié)至7.4。基本培養(yǎng)液之組成如表2所示。如此備妥之各培養(yǎng)基。接種海產(chǎn)綠藻(0.1克/公升培養(yǎng)基)后以螢光燈連續(xù)照射，在20℃，于暴氣下培養(yǎng)4天。培養(yǎng)完成后，利用離心分離法收集菌體冷凍干燥后，萃取脂質(zhì)，分析脂肪酸組成分。結(jié)果如表3所示。又，生育速度是以培養(yǎng)完成時(shí)的菌體濃度(濕菌體重量/公升培養(yǎng)基)表示。
表1 (培養(yǎng)基組成分)
由表3所示結(jié)果可知，本發(fā)明方法(培養(yǎng)基4-6)與其他方法(培養(yǎng)基1-3)相較，確定生育速度加快，總脂質(zhì)含量增加。此結(jié)果雖不改變EPA含量，但依照本發(fā)明，可顯著提高EPA的總收量。
權(quán)利要求
1.海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法，系利用海水系培養(yǎng)基培養(yǎng)海產(chǎn)綠藻，其特征為，在該培養(yǎng)基中，添加選自碳酸氫鈉，乙酸和乙酸鈉中至少一種碳源，以及生物素，加以培養(yǎng)者。
2.如請(qǐng)求專利部分第1項(xiàng)之培養(yǎng)方法，其中，碳源添加量為每公升培養(yǎng)基30-1000毫克者。
3.如請(qǐng)求專利部分第1或2項(xiàng)之培養(yǎng)方法，其中，生物素添加量為每公升培養(yǎng)基0.5-10微克者。
專利摘要
海產(chǎn)綠藻之培養(yǎng)方法，系利用海水系培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)海產(chǎn)綠藻，其特征為，于該培養(yǎng)基中，添加選自碳酸氫鹽、乙酸和乙酸鹽中至少一種為碳源，并加生物素(biotin)以進(jìn)行培養(yǎng)者。
文檔編號(hào)A01G33/00GK85103042SQ85103042
公開日1986年10月15日 申請(qǐng)日期1985年4月20日
發(fā)明者瀨戶明, 藤田匡 申請(qǐng)人:日清制油株式會(huì)社導(dǎo)出引文BiBTeX, EndNote, RefMan