【】本發(fā)明涉及松材線蟲病鑒定領(lǐng)域，特別涉及一種苗期馬尾松抗松材線蟲病精準鑒定的方法。

背景技術(shù)

0、
背景技術(shù)：

1、馬尾松(pinus?massoniana)是我國生態(tài)建設(shè)和脂材兩用的主要造林樹種，利用價值高，用途廣泛，在我國多地均有栽培和分布，其松脂、樹皮和花粉被廣泛應(yīng)用于林產(chǎn)化工、建筑、栲膠、保健品等行業(yè)。馬尾松生命力極強、生態(tài)適應(yīng)性廣泛，是荒山造林和生態(tài)林建設(shè)的主要先鋒樹種。在我國林業(yè)經(jīng)濟發(fā)展與生態(tài)建設(shè)中，馬尾松起到舉足輕重的作用?，F(xiàn)有技術(shù)中廣大林業(yè)科技工作者在馬尾松種質(zhì)資源收集、篩選與保存方面開展了大量研究，選育出了一大批速生、豐產(chǎn)的優(yōu)良品系，但已得到利用的種質(zhì)資源不足全部資源的30％。從當前馬尾松產(chǎn)業(yè)發(fā)展來看，受病蟲害尤其當前松材線蟲病的嚴重影響。

2、松材線蟲病是由松材線蟲(bursaphelenchus?xylophilus)寄生在松樹體內(nèi)引發(fā)的一種特大毀滅性森林病害，該病蔓延速度快、染病植株死亡率高，被稱為“松樹癌癥”。大量研究表明，樹種內(nèi)的單株間存在明顯的抗性差異，即使在易感樹種中也存在抗性極高的單株，抗性品種選育已成為林木病蟲害防治有效的長遠對策。馬尾松生長周期長，通過對苗期馬尾松進行松材線蟲接種，篩選抗病植株是當前選育馬尾松抗松材線蟲病品系的主要方法。目前，在馬尾松主產(chǎn)區(qū)通過苗木接種線蟲的方法，先后選育出了一批速生、豐產(chǎn)、抗病潛力大的種質(zhì)。但整體上看，相較黑松、赤松等松材線蟲病高感樹種，馬尾松接種較為困難，接種效果重復(fù)穩(wěn)定性差。根據(jù)文獻報道來看，影響線蟲接種成功的因素眾多，但目前尚無一套完整的松材線蟲接種的技術(shù)體系。為此，本申請從試驗材料遺傳來源、苗木類型、接種環(huán)境條件、接種頭數(shù)等方面進行了研究，發(fā)現(xiàn)在優(yōu)化系列接種技術(shù)參數(shù)前提下，能精確進行馬尾松苗木抗病級別的鑒定，為馬尾松抗病種質(zhì)創(chuàng)制提供了科學的技術(shù)參考。

3、此外，在實際的線蟲鑒定過程中，我們發(fā)現(xiàn)，由于松樹的品種不同，發(fā)病時間相差很大，而且經(jīng)過檢驗，我們判定，馬尾松的抗性相對其他松樹更高，發(fā)病時間更長，為此，為了縮短發(fā)病時間，盡快判定馬尾松的感病情況并對感病進行分級，如何縮短發(fā)病時間是目前本領(lǐng)域中需要解決的問題。

技術(shù)實現(xiàn)思路

0、
技術(shù)實現(xiàn)要素：

1、鑒于上述內(nèi)容，從試驗材料遺傳來源、苗木類型、接種環(huán)境條件、接種頭數(shù)，縮短發(fā)病時間等方面進行了研究，發(fā)現(xiàn)在優(yōu)化系列接種技術(shù)參數(shù)前提下，能精確進行馬尾松苗木抗病級別的鑒定，為馬尾松抗病種質(zhì)創(chuàng)制提供了科學的技術(shù)參考。

2、為達到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：

3、一種苗期馬尾松抗松材線蟲病的精準鑒定方法，所述方法為：將馬尾松種子通過播種栽培或外植體通過組培后，在苗圃中培育1年得到苗期馬尾松；然后向馬尾松4-12個月的苗木植株接種線蟲，接種量為4000頭/株，然后在溫度為30-35℃、濕度為60％-70％、光照強度為8000lx-12000lx條件下培養(yǎng)，觀察并測定馬尾松的感病死亡頻率，當感病死亡頻率≤20％時，馬尾松評價為抗；當20％<感病死亡頻率≤30％時，馬尾松評價為中抗；當30％<感病死亡頻率≤40％時，馬尾松評價為中感；當40％<感病死亡頻率≤60％時，馬尾松評價為感；當感病死亡頻率>60％時，馬尾松評價為高感。

4、進一步的，所述馬尾松為通過組培獲得的無性系苗木。

5、進一步的，所述馬尾松苗木的苗齡為8個月。

6、進一步的，所述線蟲接種前經(jīng)過活化液活化，所述活化液由桑葉汁、柑橘皮汁和/或柚子皮汁配制而得。

7、進一步的，所述線蟲接種前經(jīng)過活化液活化，所述活化液由桑葉汁：柑橘皮汁：柚子皮汁按照體積比為2:2-4:3-5混合而得。

8、進一步的，所述桑葉汁、柑橘皮汁和柚子皮汁的制備方法為：將相應(yīng)原料和水按照固液質(zhì)量比為2:1混合、粉碎、研磨后過濾，取濾液即得。

9、進一步的，所述活化液活化線蟲時體積比為5％。

10、進一步的，所述活化液活化線蟲后接種的鑒定方法為：

11、將桑葉汁、柑橘皮汁和柚子皮汁按相應(yīng)體積比混合后制備得線蟲活性液，然后將線蟲活性液和蒸餾水混合配制成體積百分數(shù)為5％的溶液；接種20000條線蟲，制備成線蟲混懸液1ml，然后采用皮接法對苗期馬尾松植株進行接種，接種量為線蟲混懸液200μl(約4000頭)，接種完成后，在人工控制種植環(huán)境溫度為30℃，土壤相對濕度為60％，光照強度為8000lx的條件下栽培；統(tǒng)計發(fā)病時間對苗期馬尾松進行分級，分級方案為：當發(fā)病時間≤8d時，馬尾松植株判定為高感；當8d<發(fā)病時間≤10d時，馬尾松植株判定為感；當10d<發(fā)病時間≤15d時，馬尾松植株判定為中感；當15d<發(fā)病時間≤25d時，馬尾松植株判定為中抗；當發(fā)病時間>25d時，馬尾松植株判定為抗。

12、本發(fā)明具有如下有益效果：

13、本申請通過調(diào)查土壤相對濕度、光照強度、接種量、環(huán)境溫度、苗木品系、苗齡等相關(guān)指標得出了馬尾松在自然條件下最容易感染線蟲的條件，得出了通過感病死亡頻率來對馬尾松進行分級的方法，此外，課題組通過對自然環(huán)境下感染的條件進行不斷優(yōu)化，利用植物液制備出了對植物無損傷的線蟲活性液，經(jīng)驗證，采用線蟲活性液之后，能大大縮短馬尾松苗期的感病時間，通過優(yōu)化活性液，給出了馬尾松苗期線蟲接種時，通過判定發(fā)病時間來快速對馬尾松感病情況進行分級的方法，大大縮短了馬尾松的分級判定時間。

技術(shù)特征：

1.一種苗期馬尾松抗松材線蟲病的精準鑒定方法，其特征在于，所述方法為：將馬尾松種子通過播種栽培或外植體通過組培后，在苗圃中培育4-12個月得到苗期馬尾松；然后向馬尾松4-12個月的苗木植株接種線蟲，接種量為4000頭/株，然后在溫度為30-35℃、濕度為60％-70％、光照強度為8000lx-12000lx條件下培養(yǎng)，觀察并測定馬尾松的感病死亡頻率，當感病死亡頻率≤20％時，馬尾松評價為抗；當20％<感病死亡頻率≤30％時，馬尾松評價為中抗；當30％<感病死亡頻率≤40％時，馬尾松評價為中感；當40％<感病死亡頻率≤60％時，馬尾松評價為感；當感病死亡頻率>60％時，馬尾松評價為高感。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述馬尾松為通過組培獲得的無性系苗木。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述馬尾松苗木的苗齡為8個月。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述線蟲接種前經(jīng)過活化液活化，所述活化液由桑葉汁、柑橘皮汁和/或柚子皮汁配制而得。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述線蟲接種前經(jīng)過活化液活化，所述活化液由桑葉汁：柑橘皮汁：柚子皮汁按照體積比為2:2-4:3-5混合而得。

6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述桑葉汁、柑橘皮汁和柚子皮汁的制備方法為：將相應(yīng)原料和水按照固液質(zhì)量比為2:1混合、粉碎、研磨后過濾，取濾液即得。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述活化液活化線蟲時體積比為5％。

8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的精準鑒定方法，其特征在于，所述活化液活化線蟲后接種的鑒定方法為：

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及松材線蟲病鑒定領(lǐng)域，特別涉及本申請通過調(diào)查土壤相對濕度、光照強度、接種量、環(huán)境溫度、苗木品系、苗齡等相關(guān)指標得出了馬尾松在自然條件下最容易感染線蟲的條件，總結(jié)出了通過感病死亡頻率來對馬尾松進行分級的方法，此外，課題組通過對自然環(huán)境下感染的條件進行不斷優(yōu)化，利用植物液制備出了對植物無損傷的線蟲活性液，經(jīng)驗證，采用線蟲活性液之后，能大大縮短馬尾松苗期的感病時間，通過優(yōu)化活性液，給出了馬尾松苗期線蟲接種時，通過判定發(fā)病時間來快速對馬尾松感病情況進行分級的方法，大大縮短了馬尾松的分級判定時間。

技術(shù)研發(fā)人員：王胤,姚瑞玲,黃華艷,鐘雅婷,于松毛,羅輯,莫如江,李枷霖,武建云
受保護的技術(shù)使用者：廣西壯族自治區(qū)林業(yè)科學研究院
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/12/19