【技術(shù)領(lǐng)域】

本發(fā)明屬于中藥栽培技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種抗腫瘤藥材細(xì)梗香草的育苗方法。

背景技術(shù)：

細(xì)梗香草(lysimachiacapillipeshemsl.)，又名排草、香排草、香草、毛柄珍珠菜，系報春花科(primulaceae)珍珠菜屬植物，主要分布在我國的四川、江西、福建、廣州、貴州、浙江、河南、臺灣等地。細(xì)梗香草作為藥材標(biāo)準(zhǔn)，目前僅見江西省地方以“滿山香”為正名收載，未收載于《中國藥典》。細(xì)梗香草性甘、味平，全草入藥。民間用于治療感冒咳喘、風(fēng)濕痛、月經(jīng)不調(diào)、神經(jīng)衰弱、補(bǔ)虛、驅(qū)蛔、抗腫瘤。

浙江大學(xué)田景奎教授通過對細(xì)梗香草全草化學(xué)成分的研究，從中共分離得到了16個化合物，皂苷和黃酮是該植物中的主要成分，并對細(xì)梗香草單體皂苷進(jìn)行抗腫瘤體外活性篩選，發(fā)現(xiàn)細(xì)梗香草所含的皂苷b有非常強(qiáng)的抑制卵巢癌細(xì)胞a2780細(xì)胞的作用(ic50<0.1g/ml)，有很好的開發(fā)前景。以細(xì)梗香草皂苷b為單體抗腫瘤新藥已經(jīng)獲得國家重大科技專項候選藥物的資助，近年來華中科技大學(xué)、浙江中醫(yī)藥大學(xué)、湖南城市學(xué)院、福建中醫(yī)藥大學(xué)、東南師范大學(xué)紛紛開展了有關(guān)細(xì)梗香草抗腫瘤有效成分的提取、抗腫瘤活性等研究。

現(xiàn)有細(xì)梗香草藥材多為野生，且零星分布，資源蘊(yùn)藏量非常有限，難以形成規(guī)模。為確保細(xì)梗香草的研究順利進(jìn)行，從1995年開始，龍巖市農(nóng)科所在全國率先開展細(xì)梗香草野生馴化、種苗繁育、gap示范種植研究，從中掌握了適宜的育苗技術(shù)，為今后大面積規(guī)范化種植細(xì)梗香草生產(chǎn)提供優(yōu)質(zhì)種苗、科學(xué)依據(jù)和技術(shù)指導(dǎo)。

相關(guān)資料顯示江蘇農(nóng)牧科技職業(yè)學(xué)院姜宗慶等人研究了一種細(xì)梗香草扦插育苗方法，通過該方法扦插苗生根率高達(dá)93.1％，萌芽率達(dá)83.7，并確保細(xì)梗香草有效藥用含量，但目前未見有應(yīng)用于生產(chǎn)的報道。

目前尚未有細(xì)梗香草種子育苗的報道，現(xiàn)有的研究都為龍巖市農(nóng)科所所做，部分藥農(nóng)也有采取扦插的方式進(jìn)行繁苗，但扦插繁苗存在著以下缺點(diǎn)：1、扦條來源不易，繁殖系數(shù)小，每畝繁苗不超過3萬；2、勞時耗力、人力成本高；3、占用田地多，租金成本高；4、扦插苗屬于無性繁殖手段，不能避免種苗帶毒。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)問題在于提供一種簡單易行的抗腫瘤藥材細(xì)梗香草的育苗方法。

本發(fā)明是這樣實現(xiàn)的：

一種抗腫瘤藥材細(xì)梗香草的育苗方法，其特征在于：包括如下步驟：

步驟一：種子的選擇：

在竹林地種植的生長旺盛的細(xì)梗香草中選擇抗腫瘤活性成分含量高的品種，于每年10月底至11月上旬進(jìn)行朔果的采收，選擇大而飽滿、顏色黃褐色、成熟度高、不帶病斑的健康朔果；采收后及時進(jìn)行充分曬干，輕輕碾壓并吹去果殼及不成熟的種子，留下純凈的成熟健康的種子，種子參數(shù)為：發(fā)芽率≥75％，凈度≥90％，千粒重≥0.2g，水分≤10％；

步驟二：種子的處理：

在播種前一天，將步驟一中選取的種子裝入紗布袋中，用清水或150-450ppm的赤霉素溶液在常溫下浸泡24h后備用；

步驟三：苗床的處理：

選擇塑料大棚內(nèi)或露天大田中土壤疏松、團(tuán)粒結(jié)構(gòu)好的田塊，畝施復(fù)合肥30-60kg，利用小型起壟機(jī)起壟，壟寬90-110m，壟高20-30cm，在整畦的最后階段，每平米的畦上加入3-6kg的商品有機(jī)肥或天然腐質(zhì)土與畦面5-10cm的土壤充分拌勻整平，澆透水備用；

步驟四：播種：

在11月中下旬，將步驟二中處理好的種子濾干水分，每50g種子拌入10-20kg的潮濕細(xì)沙充分拌勻進(jìn)行撒播，每畝用種量100-200g；

播種后用噴霧器噴濕畦面，搭蓋塑料小拱棚進(jìn)行保溫保濕；

步驟五：育苗期管理：

出苗前，每隔10天打開小拱棚進(jìn)行通風(fēng)透氣并澆水；出苗后根據(jù)天氣條件，陽光強(qiáng)烈時打開拱棚兩端進(jìn)行透氣，保持拱棚內(nèi)氣溫不高于30℃，控制濕度在50％-60％左右，每隔10天結(jié)合澆水進(jìn)行施肥，澆施0.8％-1％的尿素，施肥后及時噴施少量的清水；每隔30天進(jìn)行一次雜草的清除，采用人工拔除的方式；

步驟六：成苗移栽：

在次年三月的中下旬移栽，在撥苗前一天傍晚澆透水，拔苗時盡量帶土。

本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：1、本發(fā)明的育苗方法培育的種苗得到的細(xì)梗香草藥材的抗腫瘤成分(皂苷b)含量高達(dá)3％以上，明顯高于野生細(xì)梗香草藥材中抗腫瘤成分(皂苷b)含量。2、本發(fā)明的育苗方法簡單易行，便于為藥農(nóng)掌握。提高育苗效率、節(jié)約人工、土地成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。3、本發(fā)明的育苗方法產(chǎn)生的細(xì)梗香草種苗一致性高，健康不帶病毒，繁殖系數(shù)高，每畝可繁育種苗30萬苗，產(chǎn)值可達(dá)3萬元，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

【具體實施方式】

一種抗腫瘤藥材細(xì)梗香草的育苗方法，包括如下步驟：

步驟一：種子的選擇：

在竹林地種植的生長旺盛的細(xì)梗香草中選擇抗腫瘤活性成分含量高的品種，于11月上旬進(jìn)行朔果的采收，選擇大而飽滿、顏色黃褐色、成熟度高、不帶病斑的健康朔果；采收后及時進(jìn)行充分曬干，輕輕碾壓并吹去果殼及不成熟的種子，留下純凈的成熟健康的種子，種子參數(shù)為：發(fā)芽率≥75％，凈度≥90％，千粒重≥0.2g，水分≤10％；

步驟二：種子的處理：

在播種前一天，將步驟一中選取的種子裝入紗布袋中，用清水或300ppm的赤霉素溶液在常溫下浸泡24h后備用；

步驟三：苗床的處理：

選擇塑料大棚內(nèi)或露天大田中土壤疏松、團(tuán)粒結(jié)構(gòu)好的田塊，畝施復(fù)合肥50kg，npk比例為20：15：15，利用小型起壟機(jī)起壟，壟寬100m，壟高20-30cm，在整畦的最后階段，每平米的畦上加入5kg的商品有機(jī)肥或天然腐質(zhì)土與畦面8cm的土壤充分拌勻整平，澆透水備用；

步驟四：播種：

在11月中下旬，將步驟二中處理好的種子濾干水分，每50g種子拌入15kg的潮濕細(xì)沙充分拌勻進(jìn)行撒播，每畝用種量150g；

播種后用噴霧器噴濕畦面，搭蓋塑料小拱棚進(jìn)行保溫保濕；

步驟五：育苗期管理：

出苗前，每隔10天打開小拱棚進(jìn)行通風(fēng)透氣并澆水；出苗后根據(jù)天氣條件，陽光強(qiáng)烈時打開拱棚兩端進(jìn)行透氣，保持拱棚內(nèi)氣溫不高于30℃，控制濕度在50％-60％左右，每隔10天結(jié)合澆水進(jìn)行施肥，澆施0.8％-1％的尿素，施肥后及時噴施少量的清水；每隔30天進(jìn)行一次雜草的清除，采用人工撥除的方式；

步驟六：成苗移栽：

在次年三月的中下旬移栽，在撥苗前一天傍晚澆透水，撥苗時盡量帶土。

以下兩試驗來說明本發(fā)明的有益效果：

試驗一：

1.1試驗材料

從野生及原人工種植留下的細(xì)梗香草植株上收集種子，選取粒大飽滿，成熟度好的種子。

1.2試驗方法

試驗設(shè)三個因數(shù)，分別為a不同時間(a1：2009年10月、a2：2010年1月、a3：2010年2月三個時間)、b不同方式(b1：覆土、b2：不覆土)、c不同的苗床(c1：菜園土、c2：基質(zhì)﹤草炭土+黃泥﹥、c3：天然腐質(zhì)土)進(jìn)行了播種試驗，共18個處理，每個處理播種100粒種子，3次重復(fù)。播種后60天內(nèi)持續(xù)觀察出苗情況，記錄出苗時間、出苗數(shù)。

表一：不同播種時間、不同方式、不同苗床對種子發(fā)芽的影響

2結(jié)果與分析

2.1從表一可以看出，各處理的平均發(fā)芽率存在著極大的差別，各個因數(shù)對細(xì)梗香草種子播種發(fā)芽率影響差別極大，最高發(fā)芽率為處理a1b2c3的78.67％，而最低發(fā)芽率為a3b1c2的9.67％。

2.2三個因數(shù)中a(不同的播種時間)對種子的發(fā)芽率影響不大；b(不同方式)覆土與否對種子的發(fā)芽率存在著決定性的作用，覆土的處理種子發(fā)芽率極低；c(不同的苗床)對種子發(fā)芽率的影響也挺大，其中天然腐質(zhì)土最適宜種子的發(fā)芽，而基質(zhì)<草炭土+黃泥>不適宜作為細(xì)梗香草的播種基質(zhì)。

試驗二：

1材料與方法

1.1材料

本試驗于2011年11月29日在福建省龍巖市農(nóng)業(yè)科學(xué)所試驗室進(jìn)行，材料來源于2011年11月初在龍巖市江山鎮(zhèn)前村村采收的細(xì)梗香草種子。

1.2方法

1.2.1不同濃度赤霉素(ga3)處理對種子發(fā)芽的影響

隨機(jī)選取供試種子21份，每份100粒，裝入玻璃瓶中。將種子進(jìn)行如下處理：處理1用150ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理2用300ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理3用450ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理4用600ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理5用750ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理6用900ppm的赤霉素(ga3)溶液浸泡24h；處理7用清水中浸泡24h；處理8對照(未浸種)。以上8種處理，每個處理3次重復(fù)。將發(fā)芽所用培養(yǎng)皿洗凈，上面墊一層濾紙，每處理播100粒種子，分別均勻擺放于培養(yǎng)皿濾紙上。置于25℃光照培養(yǎng)箱內(nèi)。每天觀察一次種子萌發(fā)情況，并保持培養(yǎng)皿內(nèi)的濕度。

發(fā)芽率的計算發(fā)芽率(％)＝發(fā)芽種子數(shù)/試驗種子數(shù)×100

1.2.2不同處理對種子出苗及種苗生長的影響

隨機(jī)選取供試種子8份，每份100粒，進(jìn)行上述的8種不同處理后，11月29日播種于裝有基質(zhì)(草炭土+細(xì)土)的育苗穴盤中，各處理100粒種子播2盤，置于室內(nèi)常溫下，保持一定濕度，觀察不同處理種子的出苗及種苗生長情況。

2結(jié)果與分析

2.1不同濃度赤霉素(ga3)處理對種子發(fā)芽的影響

細(xì)梗香草種子于11月29日在25℃光照培養(yǎng)箱內(nèi)第5d開始萌發(fā)后，每隔2天統(tǒng)計不同處理的發(fā)芽數(shù)(見表1)。

表二：不同濃度赤霉素(ga3)處理對種子發(fā)芽的影響

從表二可以看出，用不同處理即不同濃度的(150-900ppm)ga3和清水處理后均可促進(jìn)細(xì)梗香草種子發(fā)芽，不同濃度ga3處理的種子在第15天(12月14日)達(dá)到發(fā)芽高峰，此后ga3處理的發(fā)芽數(shù)不再增加；清水和對照處理的種子隨著處理時間的延長發(fā)芽數(shù)略有增加。在上述8個不同處理中，赤霉素處理的種子的發(fā)芽率均比清水處理的發(fā)芽率高，其中以450ppmga3處理效果最好，處理后15天發(fā)芽率最高，達(dá)到94％，其次是300ppmga3處理的發(fā)芽率達(dá)到90％，這兩種濃度的赤霉素處理種子的發(fā)芽率均達(dá)到90％以上，150ppmga3處理的發(fā)芽率為87％，600ppmga3處理的發(fā)芽率為80％，750ppmga3處理的發(fā)芽率為86％，900ppmga3處理的發(fā)芽率為82％，清水處理的發(fā)芽率為72％，對照(未浸種)的發(fā)芽率為最低，第15天的發(fā)芽率僅為16％。說明赤霉素處理種子發(fā)芽比清水處理種子發(fā)芽效果好，赤霉素處理種子以450ppm的濃度最好。

2.2不同處理對種子出苗及種苗生長的影響

不同處理的細(xì)梗香草種子于11月29日播種育苗穴盤后，到第二年的2月1日(播種后60天)統(tǒng)計出苗率，4月20日(播種后140天)觀察記載種苗生長情況，見表三。

表三：不同處理對種子出苗及種苗生長的影響

從表三可以看出，不同處理種子播于基質(zhì)后60天，處理3(450ppm)ga3處理的出苗率最高達(dá)88％，處理7清水處理的種子出苗率與其它不同濃度ga3處理的出苗率差別不大，對照未浸種的種子出苗率最低，只有32％。不同處理種子播于基質(zhì)后140天，6種不同濃度赤霉素處理的種苗均長勢不齊，苗高2-11㎝，2-10片葉，有明顯徒長，總體表現(xiàn)苗長勢弱；對照的種苗也表現(xiàn)長勢差，苗弱；而清水處理的種苗均長勢整齊，苗高6-8㎝，7-10片葉，苗粗壯。由此可以說明雖然赤霉素處理的種子最高出苗率比清水處理的種子出苗率要高出12個百分點(diǎn)，但清水處理的種子在后期種苗的生長表現(xiàn)長勢齊，苗粗壯，而赤霉素處理的種子在后期種苗的生長均表現(xiàn)長勢不齊，有明顯徒長，苗弱。

從試驗二可以得出：細(xì)梗香草種子的催芽處理，赤霉素處理種子和清水處理種子均能促進(jìn)種子發(fā)芽。在本試驗中不同濃度赤霉素處理種子以450ppm的濃度最好，15天發(fā)芽率可達(dá)到94％，比清水處理種子發(fā)芽效果更好。通過觀察不同處理對種子出苗及種苗生長的影響可以得出，清水處理的種子在種苗的生長勢方面比赤霉素處理的要強(qiáng)，表現(xiàn)長勢齊，苗粗壯。所以盡管赤霉素處理種子在發(fā)芽率和出苗率上比清水處理要高些，但在生產(chǎn)上也可以采用以清水浸泡細(xì)梗香草種子24h的方法，既簡單便捷，又對細(xì)梗香草的種苗生長起良好的促進(jìn)作用。

表四：本發(fā)明種子育苗與扦插育苗對比

本發(fā)明的育苗方法培育的種苗得到的細(xì)梗香草藥材的抗腫瘤成分(皂苷b)含量高達(dá)3％以上，明顯高于野生細(xì)梗香草藥材中抗腫瘤成分(皂苷b)含量。本發(fā)明的育苗方法簡單易行，便于為藥農(nóng)掌握。提高育苗效率、節(jié)約人工、土地成本，提高經(jīng)濟(jì)效益。本發(fā)明的育苗方法產(chǎn)生的細(xì)梗香草種苗一致性高，健康不帶病毒，繁殖系數(shù)高，每畝可繁育種苗30萬苗，產(chǎn)值可達(dá)3萬元，經(jīng)濟(jì)效益顯著。

以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施用例而已，并非用于限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換以及改進(jìn)等，均應(yīng)包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。