本發(fā)明涉及生物工程領(lǐng)域，具體涉及一種低成本高效的白木香結(jié)香方法。

背景技術(shù)：

白木香(aquilariasinensis(lour.)gilg)為瑞香科沉香屬植物，是我國(guó)珍稀的植物資源，以其含樹脂的木材入藥，藥材名為沉香，是國(guó)產(chǎn)沉香的唯一正品來源。白木香的重要價(jià)值是其樹干在外部刺激(自然現(xiàn)象或人工)下，可分泌產(chǎn)生和積累樹脂類混合物，主要包括倍半萜類、2-(2-苯乙基)色酮類、芳香族等成分，俗稱結(jié)香。幾千年來，沉香的產(chǎn)生一直蒙上神秘的面紗，其樹脂在心材的形成與積累，是需外界自然現(xiàn)象或人工刺激后產(chǎn)生的。

自然條件下白木香結(jié)香少，山林中的白木香樹“有香者百無一二”，由于自然結(jié)香周期長(zhǎng)，結(jié)香機(jī)率低，因此多采用人工結(jié)香法。目前，有關(guān)白木香人工結(jié)香的方法研究逐漸增多，效果各異，化學(xué)結(jié)香是應(yīng)用較多的方法，有化合物之間的組合配方、有菌液與化合物組合的方法，較復(fù)雜、且成本較高。本研究方法以h2o2為結(jié)香誘導(dǎo)子，h2o2是植物響應(yīng)外界刺激的重要信號(hào)分子，在植物防御反應(yīng)中起重要的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)作用。白木香結(jié)香過程是對(duì)外界刺激的一種防御響應(yīng)的結(jié)果，因此，以h2o2作為誘導(dǎo)子進(jìn)行結(jié)香誘導(dǎo)，既有理論依據(jù)，又具有實(shí)踐應(yīng)用意義。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于一種低成本高效的白木香結(jié)香方法。

本發(fā)明所采取的技術(shù)方案是：

一種白木香結(jié)香方法，包含以下步驟：1)在白木香樹體鉆孔；2)將h2o2注入上述孔中；3)培養(yǎng)結(jié)香。

優(yōu)選的，鉆孔孔口向上與樹干呈45°夾角。

優(yōu)選的，鉆孔的孔間距為20～30cm。

優(yōu)選的，鉆孔深度達(dá)木質(zhì)部。

優(yōu)選的，鉆孔用膠布封口。

優(yōu)選的，h2o2的濃度為0.1～0.8mol/l。

優(yōu)選的，h2o2的輸入用量為每孔40～50ml。

優(yōu)選的，h2o2的輸入方式是連續(xù)7天注入，每天早9：00，晚5：00各一次。

本發(fā)明的有益效果是：該方法操作簡(jiǎn)便，成本低廉，可以有效提高白木香的結(jié)香速度，適合沉香的大規(guī)模生產(chǎn)。

附圖說明

圖1不同濃度h2o2對(duì)四年生白木香木質(zhì)部性狀的影響；其中a為濃度0.3mol·l^-1；b為濃度0.5mol·l^-1；c為濃度0.8mol·l^-1；d為濃度0.05mol·l^-1；e為未處理的空白對(duì)照。

圖2白木香輸液法結(jié)香的效果簡(jiǎn)圖。

圖3不同濃度h2o2處理對(duì)四年生白木香木質(zhì)部薄層色譜的影響；圖中a、b、c、d、e、f分別為0.8mol/l、0.5mol/l、0.3mol/lh2o2處理組、0.05mol/lh2o2處理組、未處理組以及對(duì)照藥材。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將0.1mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射40ml液體，連續(xù)注射7天。

實(shí)施例2

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將0.3mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射45ml液體，連續(xù)注射7天。

實(shí)施例3

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將0.5mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射50ml液體，連續(xù)注射7天。

實(shí)施例4

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將0.8mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射40ml液體，連續(xù)注射7天。

對(duì)比例1

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將0.05mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射50ml液體，連續(xù)注射7天。

對(duì)比例2

在白木香樹體鉆輸液洞孔3個(gè)，孔口向上與樹干呈45°夾角，深達(dá)木質(zhì)部中央。第一個(gè)孔距離地面30cm，第二個(gè)孔距離地面50cm，第三個(gè)孔距離地面70cm。將輸液袋注射器針頭插入輸液洞孔中，將1.2mol/l濃度的h2o2緩緩輸入。當(dāng)無液體輸入時(shí)，拔去針頭，用膠布封住孔口。每天早9：00，晚5：00各注射一次，每次每孔注射40ml液體，連續(xù)注射7天。

實(shí)驗(yàn)例

將實(shí)施例1～4和對(duì)比例1～2的白木香繼續(xù)培養(yǎng)6個(gè)月，6個(gè)月后，計(jì)算木質(zhì)部棕色區(qū)域面積(即結(jié)香區(qū)域)，計(jì)算公式是：棕色區(qū)域面積比例＝(棕色區(qū)域面積/橫切面總面積)*100％。每2克棕色部分需要3.14*3.1*3.1*1(30.1cm³)體積的棕色部分樹干，0.8mol/l處理扎一針，產(chǎn)生19.6*60cm³的棕色部分樹干，相當(dāng)于產(chǎn)生764％的醇溶性浸出物。結(jié)果如表1所示：

表1不同濃度h2o2白木香木質(zhì)部棕色區(qū)域面積的影響

進(jìn)一步按照2010版《中國(guó)藥典》，提取醇溶性浸出物。結(jié)果如下表所示：

表2化學(xué)誘導(dǎo)子h2o2對(duì)四年生白木香木質(zhì)部醇溶性浸出物含量影響

注：表中*表示差異顯著性水平(0.05水平)。

結(jié)果表明，當(dāng)h2o2的濃度達(dá)到在0.1～0.8mol/l時(shí)，可以促進(jìn)白木香結(jié)香。