本發(fā)明涉及棉花枯萎病的生物防治領(lǐng)域，具體涉及雞糞沼液用于防治棉花枯萎病的應(yīng)用及防治方法。

背景技術(shù)：

棉花枯萎病是由尖孢鐮刀菌(fusariumoxysporum)引起的一種世界性病害，自1931年傳入我國(guó)，之后逐漸蔓延，于20世紀(jì)60年代達(dá)到高峰，分布廣泛，危害嚴(yán)重，重病年份造成毀種絕收。盡管之后隨著抗病品種的種植，該病得到有效控制，但隨著抗蟲棉的種植，棉花枯萎病又有回升趨勢(shì)。分析主要原因，種植規(guī)?；?、集中化導(dǎo)致輪作困難；抗病育種年限較長(zhǎng)、工作量大且容易喪失抗性；化學(xué)農(nóng)藥很難達(dá)到棉株的維管束部位發(fā)揮作用，效果差且污染環(huán)境，不符合綠色可持續(xù)發(fā)展農(nóng)業(yè)要求等。利用生物產(chǎn)品防治病蟲害的發(fā)生具有經(jīng)濟(jì)、環(huán)境友好型等特點(diǎn)。隨著沼氣產(chǎn)品的大量使用，沼液作為有機(jī)肥的使用量逐漸增加。沼氣發(fā)酵是由種類繁多的微生物共同參與的一個(gè)復(fù)雜的生化反應(yīng)。發(fā)酵后產(chǎn)生的沼液和沼渣中含有大量元素n、p、k；微量元素fe、zn、b等及nh3、h2s、酚類、醛、酸等多種物質(zhì)，發(fā)酵產(chǎn)物是一種能夠改善土壤結(jié)構(gòu)和生態(tài)系統(tǒng)的有機(jī)肥。隨著集約化養(yǎng)殖的大量發(fā)展，沼氣和沼渣的排放量越來越多，沼液的綜合利用在沼液處理中扮演的角色越來越重要。

目前，雞糞沼液在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中主要作為改善棉花品質(zhì)和產(chǎn)量的有機(jī)肥料，但是，雞糞沼液用于防治棉花枯萎病尚未見報(bào)道。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的是提供雞糞沼液抑制棉花枯萎病菌的應(yīng)用。

本發(fā)明的再一目的是提供雞糞沼液在棉花枯萎病防治上的應(yīng)用。

本發(fā)明的再一目的是提供雞糞沼液防治棉花枯萎病的方法。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，本發(fā)明提供了雞糞沼液在棉花枯萎病防治上的應(yīng)用，其中雞糞沼液可購(gòu)買獲得，例如“新壯態(tài)”品牌雞糞沼液，是將雞糞經(jīng)厭氧發(fā)酵所得，其主要成分為氮、磷、鉀、鈣、硼、硒、鋅、腐植酸、蛋白質(zhì)、糖類、核酸、微生物代謝物等。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，向棉苗施加雞糞沼液的方法包括：滴灌80l/ha～560l/ha施加雞糞沼液，或者，噴施10～400倍稀釋的雞糞沼液。

據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，提供了防治棉花枯萎病的方法，所述方法包括對(duì)棉苗施用雞糞沼液的步驟。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，對(duì)棉苗滴灌濃度為0.25％～1.75％的雞糞沼液稀釋液，或者，對(duì)棉苗噴施10～400倍稀釋的雞糞沼液。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，對(duì)棉苗滴灌五次雞糞沼液，或者，對(duì)棉苗噴施五次雞糞沼液。

根據(jù)本發(fā)明的具體實(shí)施方式，試驗(yàn)結(jié)果表明：

1、雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病菌具有較好的抑制效果

將雞糞沼液加入到pda培養(yǎng)基中，配制成不同濃度。在pda培養(yǎng)基中，當(dāng)雞糞沼液的濃度≧0.5％時(shí)，對(duì)枯萎病菌的抑制效果顯著，最高抑制率可達(dá)100％。

2、雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病菌分生孢子萌發(fā)具有較好的抑制效果

在查氏培養(yǎng)基中加入雞糞沼液，配制成不同濃度；然后加入棉花枯萎病菌分生孢子，使分生孢子的終濃度為1×10⁶個(gè)ml^-1。25℃恒溫培養(yǎng)，3h后鏡檢孢子萌發(fā)情況。雞糞沼液不同濃度的處理均顯著抑制棉花枯萎病菌的孢子萌發(fā)，最高抑制率達(dá)到93.1％。

3、雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病的防治作用

由溫室盆栽試驗(yàn)結(jié)果可知，雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病有一定的防治作用。播種后4周對(duì)照組棉花枯萎病病情指數(shù)為60.6，而雞糞沼液噴霧和灌根處理組最低病情指數(shù)分別為15.5和21.5，表明雞糞沼液的兩種使用方式均可以降低棉花枯萎病的發(fā)生。溫室試驗(yàn)和病圃試驗(yàn)均顯示雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病有很好的控制作用。雞糞沼液作為雞糞的厭氧發(fā)酵物，使用后不僅可以增加土壤肥力，還可以生物防治棉花枯萎病，因此，本發(fā)明具有很大的應(yīng)用前景。

附圖說明

圖1為生長(zhǎng)速率法測(cè)定雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病菌的抑菌效果圖，其中，a為對(duì)照；b、c、d表示雞糞沼液的體積分?jǐn)?shù)為1.0％、4.0％、10％的處理。

圖2雞糞沼液葉面噴施防治棉花枯萎病效果圖，其中，a：空白對(duì)照；b：濃度為1.75％的雞糞沼液灌根處理。

圖3雞糞沼液灌根處理防治棉花枯萎病效果圖，其中，a：空白對(duì)照；b：10倍雞糞沼液稀釋液葉面噴施處理。

具體實(shí)施方式

實(shí)施例1：生長(zhǎng)速率法檢測(cè)雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

按照植物病害研究法常用的生長(zhǎng)速率測(cè)定法，測(cè)定棉花枯萎病病原菌的生物活性：用直徑5mm打孔器取菌落邊緣生長(zhǎng)旺盛的病原菌，放在雞糞沼液處理的pda平板上面，以培養(yǎng)基內(nèi)加等量的無菌水作為對(duì)照，每個(gè)處理重復(fù)5次，置于25℃恒溫培養(yǎng)，用十字交叉法測(cè)定每個(gè)菌落的菌落直徑，取其平均值，求出抑制菌絲生長(zhǎng)率：

抑制菌絲生長(zhǎng)率＝(對(duì)照菌落直徑-處理菌落直徑)/(對(duì)照菌落直徑-5)×100％

表1雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌菌絲生長(zhǎng)的抑制作用

表1顯示了雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌絲生長(zhǎng)的抑制作用，最高抑制率可達(dá)100％。圖1為生長(zhǎng)速率法測(cè)定雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病菌的抑菌效果圖，實(shí)施結(jié)果表明：雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌菌絲生長(zhǎng)具有很好的抑制作用，隨著雞糞沼液濃度的增加，抑制率呈上升趨勢(shì)；當(dāng)雞糞沼液濃度≧0.50％時(shí)，達(dá)到顯著水平，當(dāng)雞糞沼液濃度達(dá)到10.00％時(shí)，抑菌率達(dá)到100％。

實(shí)施例2凹玻片法檢測(cè)雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用

將棉花枯萎病菌分生孢子懸浮液用滅菌的紗布雙重過濾、稀釋，配制成濃度為1×10⁶個(gè)ml^-1，分生孢子懸浮液備用。將一定量的雞糞沼液和200微升的孢子懸浮液用czapek液體培養(yǎng)基容至1.5ml，充分混勻，使雞糞沼液的濃度分別為0.25％、0.500％、1.00％、2.00％、3.00％、4.00％、5.00％、7.00％、10.00％，每個(gè)濃度重復(fù)三次。吸取20微升上述混合液于凹玻片凹槽中，將凹玻片放入加有保濕紗布的培養(yǎng)皿中，25℃恒溫培養(yǎng)，3h后鏡檢孢子萌發(fā)情況，每個(gè)處理3個(gè)重復(fù)，每個(gè)重復(fù)5個(gè)視野，計(jì)算孢子萌發(fā)率，以czapek液體培養(yǎng)基作為對(duì)照，計(jì)算抑制率。

表2雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發(fā)的抑制作用

表2顯示雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病病原菌分生孢子萌發(fā)的影響，不同濃度的雞糞沼液均能抑制孢子萌發(fā)，且效果顯著，隨著雞糞沼液濃度的增加，抑制效果呈增加趨勢(shì)，最高抑制率為93.1％。

實(shí)施例3雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病的防治效果

采用基質(zhì)接種法，將棉花枯萎病菌的玉米沙粒培養(yǎng)物，以0.6％的質(zhì)量比拌入無菌的生沙壤土中充分混合均勻，分裝到直徑6cm、高10cm的無地紙缽中；用55～60℃溫水浸泡冀棉11種子12h，每缽8粒均勻播種，覆蓋滅菌沙土約2cm厚。出苗后留苗5株，每個(gè)處理24個(gè)缽，每6個(gè)缽為一個(gè)重復(fù)，4次重復(fù)，隨機(jī)排列。雞糞沼液灌根處理和葉面噴施處理分開擺放。其中灌根試驗(yàn)設(shè)置7個(gè)不同濃度(見表3)，播種后即刻進(jìn)行灌根處理，每缽用15.0ml的雞糞沼液稀釋液灌根，每4天灌根一次，共5次，對(duì)照為相應(yīng)的清水處理，其他時(shí)間正常管理；葉面噴施設(shè)置6個(gè)不同濃度(見表4)，于子葉展開后進(jìn)行，每缽噴施4.0ml雞糞沼液稀釋液，每4天噴施一次，共5次，對(duì)照為相應(yīng)的清水處理，其他時(shí)間正常管理。溫室溫度控制在22℃-28℃，按5級(jí)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行病害的分級(jí)調(diào)查，計(jì)算病株率、病情指數(shù)和防治效果。

病情指數(shù)＝[σ(各級(jí)病株數(shù)×相應(yīng)病級(jí))/(調(diào)查總株數(shù)×4)]×100

表3溫室環(huán)境條件下雞糞沼液灌根對(duì)棉花枯萎病菌的抑制作用

表3顯示了在溫室環(huán)境條件下雞糞沼液灌根對(duì)棉花枯萎病菌的抑制作用，如表3所示，結(jié)果表明在溫室環(huán)境條件下，雞糞沼液灌根對(duì)棉花枯萎病具有顯著控制作用，1.75％雞糞沼液灌根5次，對(duì)棉花枯萎病的防治效果達(dá)64.5％(圖2)。

表4溫室環(huán)境條件下噴施雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病菌的抑制作用

表4顯示了在溫室條件下噴施雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病菌的抑制作用，如表4所示，結(jié)果表明在溫室條件下，噴施雞糞沼液對(duì)棉花枯萎病具有很好的防治作用，當(dāng)稀釋倍數(shù)為50倍時(shí)，對(duì)棉花枯萎病的防效達(dá)51.1％；當(dāng)雞糞沼液的稀釋10倍時(shí)，對(duì)棉花枯萎病的防治效果達(dá)68.8％(圖3)。