本發(fā)明涉及一種預(yù)防羅氏沼蝦肌肉白濁病的繁育方法，尤其涉及一種羅氏沼蝦spf（無病毒）苗種繁育方法。
背景技術(shù)：
羅氏沼蝦肌肉白濁病又稱為白體病、白尾病，是發(fā)生于羅氏沼蝦苗種階段的一種疾病，患病蝦體出現(xiàn)肌肉白濁、白斑或白尾癥狀，可在數(shù)天內(nèi)發(fā)生大量死亡，死亡率可高達(dá)60％以上，成為當(dāng)前羅氏沼蝦育苗、養(yǎng)殖的主要危害。研究表明，羅氏沼蝦肌肉白濁病的病原為羅氏沼蝦諾達(dá)病毒，傳播途徑以垂直傳播為主，但其水平傳播也有極強的感染能力。我公司運用elisa方法和rt—pcr方法的病毒診斷技術(shù)進(jìn)行了羅氏沼蝦無病毒苗種繁育技術(shù)研究，成功地為我國主要育苗區(qū)及養(yǎng)殖區(qū)提供無病毒種蝦及無病毒苗種，并有效地預(yù)防羅氏沼蝦肌肉白濁病的流行。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明為了解決上述問題提供了一種預(yù)防羅氏沼蝦肌肉白濁病的流行，以及羅氏沼蝦spf（無病毒）苗種繁育方法，實施羅氏沼蝦spf（無病毒）苗種繁育的方法。
本發(fā)明的技術(shù)方案是：采取下述步驟：
（一）無病毒親蝦選育：
1）苗種選擇：每年4月底～5月初，選用自繁或沒有發(fā)病史育苗場生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)健康淡化苗種，規(guī)格在體長0.82cm以上，個體均勻，體質(zhì)健壯，且具有較強的逆游能力，并經(jīng)過羅氏沼蝦諾達(dá)病毒tas—elisa方法檢測而呈陰性的蝦苗；
2）蝦苗暫養(yǎng)：選擇具有隔離措施以及經(jīng)過嚴(yán)格消毒的水泥池或大棚內(nèi)土池進(jìn)行培育，水泥池中的放養(yǎng)密度為4500～4950尾/m2，大棚內(nèi)土池中的放養(yǎng)密度為2500～2950尾/m2，水溫25℃，飼料采用具有較高營養(yǎng)價值的蛋羹、蝦片、羅氏沼蝦混合飼料等，暫養(yǎng)期間，每日仔細(xì)觀察蝦苗活動情況、攝食情況等，及時挑選可疑的蝦苗進(jìn)行病毒檢測，在1個月的暫養(yǎng)期內(nèi)至少經(jīng)過8次的病毒檢測且檢測結(jié)果呈陰性，5月20日以后，外塘水溫在22℃以上，將蝦苗放入具有隔離措施的池塘養(yǎng)殖，而該池塘應(yīng)無發(fā)病史，并要求在蝦苗放養(yǎng)前經(jīng)過嚴(yán)格消毒；
3）池塘養(yǎng)殖：6月～10月間進(jìn)行池塘養(yǎng)殖，管理工作嚴(yán)格按照羅氏沼蝦養(yǎng)殖技術(shù)操作規(guī)范進(jìn)行，并定期檢查蝦苗生長狀況，以及應(yīng)用elisa方法進(jìn)行病毒檢測；
4）蝦苗培育期間的消毒隔離措施：蝦苗暫養(yǎng)、池塘養(yǎng)殖期間的培育用水均用蓄水池對水源進(jìn)行沉淀和消毒處理，同時注意不使用來歷不明的冰凍野雜魚作為養(yǎng)殖飼料；
5）親蝦挑選：10月上句即可進(jìn)行親蝦挑選。應(yīng)挑選體格健壯、附肢完整、全身無病灶的蝦體，且雌雄比例為2-3：l；
（二）親蝦越冬期的強化培育：
1）越冬池的預(yù)處理：越冬池在使用前用30ppm高錳酸鉀溶液浸泡一周以上，清塘后刷洗干凈，待用；
2）適宜環(huán)境條件的調(diào)控：越冬期間，水溫以控制在2l℃-22℃為宜，在越冬初期，因蝦體剛剛進(jìn)入溫室而機械損傷較重，可以將水溫適當(dāng)提高l℃～2℃，待蝦體攝食量增加且恢復(fù)體質(zhì)后再降為越冬水溫；
3）飼料投喂：飼料是親蝦性腺發(fā)育的基礎(chǔ)，飼料投喂既要保證親蝦的營養(yǎng)需求，又要保證其適口性，越冬期間，可采用以人工配合飼料為主，再補充以動物性餌料進(jìn)行投喂，并定期在飼料中添加復(fù)合維生素、免疫多糖等強化親蝦營養(yǎng)，增強其免疫力，也避免了親蝦產(chǎn)生厭食情況；
4）加強管理：養(yǎng)殖用水的水源要確保未受病原污染，并定期對越冬水體進(jìn)行消毒，每天對溫室內(nèi)的工具及車間也應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格消毒；
5）定期對親蝦進(jìn)行病毒檢測：每日觀察親蝦攝食情況、活動情況，發(fā)現(xiàn)可疑的親蝦要立即進(jìn)行病毒檢測，越冬期間，每月至少保證有一次以上的病毒檢測記錄；
（三）無病毒苗種的繁育技術(shù)：
1）水源的預(yù)處理：在冬季水溫較低時池塘注水，并用生石灰對池水進(jìn)行消毒，經(jīng)過1-2個月的沉淀、消毒處理，池水的水質(zhì)指標(biāo)在育苗季節(jié)達(dá)到較好的狀態(tài)；
2）親蝦的強化培育：在整個育苗期內(nèi)，增加動物性餌料的投喂，并在飼料中添加復(fù)合維生素、免疫多糖物質(zhì)，日投喂量為蝦體體重的5％～7％，且根據(jù)蝦體攝食情況隨時調(diào)整投喂量，增加換水量和換水頻率以保持水質(zhì)的清新，促使親蝦性腺快速成熟而在池中進(jìn)行交配產(chǎn)卵；
3）病害防治：育苗池與育苗工具在使用前后要嚴(yán)格洗凈消毒，每次捕蝦操作后，用高濃度的高錳酸鉀徹底消毒親蝦池，育苗用水在進(jìn)水時用200目的紗絹對水源進(jìn)行過濾，定期對幼體進(jìn)行病毒檢測。
所述親蝦的強化培育：選擇3個群體的健康親蝦進(jìn)行定向搭配，為滿足家系構(gòu)建需要，3個群體共搭配100組組合，為建立父系半同胞家系，每箱布親蝦1雄5雌；按照交配設(shè)計的組合數(shù)，共布置100個交尾網(wǎng)箱，每個交尾網(wǎng)箱內(nèi)至少要收集到兩尾交尾雌蝦，雌蝦抱卵后轉(zhuǎn)移至另外的孵育網(wǎng)箱內(nèi)進(jìn)行幼體孵育，孵育網(wǎng)箱規(guī)格與交尾網(wǎng)箱相同；
1）環(huán)境條件標(biāo)準(zhǔn)化：從親蝦交配、抱卵孵育、幼體培育、淡化，至仔蝦中間培育，使每個家系在各階段的培育條件保持一致，主要包括各階段水的鹽度、水溫、餌料和充氣等條件，為了便于管理，將5d內(nèi)形成的家系放在同一個池子的不同網(wǎng)箱中進(jìn)行統(tǒng)一管理；
2）數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：第1次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：親蝦見幼后，用200目的紗絹網(wǎng)將幼體移出，隨即取3000尾幼體放入水體為15l的小桶內(nèi)培育；第2次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：當(dāng)幼體9日齡時，計數(shù)1000尾移入0.5mx0.5mx0.5m網(wǎng)箱培育；第3次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：當(dāng)仔蝦淡化完畢后，取400尾放入12m2水泥池中進(jìn)行中間培育；
每年4月底開始，利用育種基礎(chǔ)群體，采用1雌對5雄完全雙列雜交策略組合交配放入交配網(wǎng)箱并編號記錄，家系規(guī)模建立150-200個全同胞及半同胞家系，交配后每天檢查親蝦抱卵情況并記錄，每7天將懷卵雌蝦移入孵幼網(wǎng)并編號記錄，經(jīng)20天左右可完成交配計劃；
抱卵親蝦經(jīng)15-20天的培育可孵出幼體，孵幼一般在1-2天內(nèi)完成，每個檢查幼體孵化情況，發(fā)現(xiàn)幼體孵出即進(jìn)行幼體標(biāo)準(zhǔn)化，每個家系標(biāo)準(zhǔn)化計數(shù)幼體2000尾放于育苗桶（池）中培育，主要培育條件有：水溫30℃、鹽度10-12‰、ph7.2-8.0，z1-z5投喂鹵蟲無節(jié)幼體，z5后補充投喂蛋羹；
經(jīng)20-23天左右幼體可變態(tài)仔蝦并將鹽度逐步淡化成1‰，仔蝦淡化后即可進(jìn)行第二次標(biāo)準(zhǔn)化，計數(shù)成活仔蝦總數(shù)，并標(biāo)準(zhǔn)化400尾仔蝦放入暫養(yǎng)水泥池；
蝦苗暫養(yǎng)前進(jìn)行諾達(dá)病毒檢測，采用tas-elisa或rt-pcr方法檢測成陰性的蝦苗，才能進(jìn)暫養(yǎng)池；
水泥池暫養(yǎng)蝦苗投喂淡水枝角類與羅氏沼蝦開口料、1#料，自然水溫25-30℃，經(jīng)25-30天的培育體長達(dá)2.5cm以上，此時應(yīng)盡早進(jìn)行標(biāo)記下塘；
在親蝦池水溫28℃的條件下，每隔10天挑選抱卵蝦一次，根據(jù)卵的顏色將抱卵蝦分成三個等級（灰、棕、黃），分池飼養(yǎng)，卵呈灰褐色的抱卵蝦可直接放入人工咸水中集中排幼，每平方米可放抱卵蝦50-60只，灰卵蝦經(jīng)1-2天的培育即可排出幼體，卵成棕色、黃色的抱卵蝦可放于清水池中暫養(yǎng)，經(jīng)過5-10天的培育，卵的顏色逐漸轉(zhuǎn)為灰色時，可逐漸向池中加入海水，幼體孵出后，用80目的紗絹網(wǎng)將抱卵蝦池中的幼體捕到苗池培育；
3）幼體培育條件控制：布苗密度控制在20-25萬尾/平方米，育苗溫度控制在30-31℃，育苗室的光照要求控制在1000lux以上，并能調(diào)節(jié)光照的強弱，但要避免光線過于集中，充氣量前期應(yīng)小呈微波狀，隨著幼體的生長、活動能力的增強，逐漸加大充氣量，后期調(diào)整充氣量為略顯沸騰狀態(tài)，在調(diào)整充氣量的同時，還應(yīng)使爆氣石在苗池內(nèi)分布均勻，水質(zhì)調(diào)控措施：z5前苗池每天排污一次，z5后每天排污二次，第9天移池，定期使用光合細(xì)菌、芽孢桿菌等有益微生物制劑來調(diào)控水質(zhì)；
4）人工海水配制：采用工業(yè)鹽按天然海水主要元素的成份配制而成，其組成中，除氯化鈉外，mg、ca、k三種離子的配比為3:1:1，鹽度在10-12‰、比重在1.005-1.007之間；
5）飼料投喂：在布苗的第二天早上，投喂孵化18小時的豐年蟲無節(jié)幼體進(jìn)行開食，投喂密度在10個/毫升，當(dāng)布苗后的第9天，即溞狀幼體發(fā)育到第五期（z5）以后，即可少量投喂人工制作的蛋羹，以后再慢慢增加，至z8以后投喂蛋羹為主，鹵蟲無節(jié)幼體為輔。
本發(fā)明能有效預(yù)防肌肉白濁病的發(fā)生，關(guān)鍵在于能否有效阻斷病原的傳播途徑，對于羅氏沼蝦肌肉白濁病病原的流行病學(xué)調(diào)查表明，其主要的傳播途徑是親蝦攜帶和傳播，通過對培育親蝦的苗種進(jìn)行跟蹤檢測，對養(yǎng)殖全過程采取隔離措施，充分保證所選親蝦的無病毒狀態(tài)。
親蝦強化培育以及生產(chǎn)過程中的適宜環(huán)境條件是無病毒苗種培育的輔助措施。病原、蝦體、環(huán)境是一個相互作用、互相聯(lián)系的體系，正常情況下三者處于一個平衡體系中，若其中的一項發(fā)生改變，則必然引起整個系統(tǒng)的失衡，導(dǎo)致疾病的發(fā)生。對羅氏沼蝦肌肉白濁病的流行病學(xué)調(diào)查也驗證了這一點。因此，在繁育全過程中加強親蝦營養(yǎng)，在飼料中添加復(fù)合維生素、免疫多糖等物質(zhì)進(jìn)行投喂，可有效提高親蝦的體質(zhì)和免疫力。另外，在幼體培育過程中要保證適宜的環(huán)境條件。
預(yù)防羅氏沼蝦肌肉白濁病必須采取嚴(yán)格的消毒措施。嚴(yán)格的消毒措施是預(yù)防疾病的重要保證，目前，所有的羅氏沼蝦育苗場都幾乎建在疫區(qū)，消毒措施是保證苗場不被鄰近發(fā)病場傳染的關(guān)鍵。育苗車間嚴(yán)格用具消毒制度，對買苗客戶采取必要措施且限制客戶進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)，而客戶只進(jìn)入供苗區(qū)，進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)的所有人員的手及鞋均需嚴(yán)格消毒，可以確保無病毒攜帶進(jìn)入生產(chǎn)區(qū)。
具體實施方式
一種羅氏沼蝦spf（無病毒）苗種繁育方法，采取下述步驟：
（一）無病毒親蝦選育：
1）苗種選擇：每年4月底～5月初，選用自繁或沒有發(fā)病史育苗場生產(chǎn)的優(yōu)質(zhì)健康淡化苗種，規(guī)格在體長0.82cm以上，個體均勻，體質(zhì)健壯，且具有較強的逆游能力，并經(jīng)過羅氏沼蝦諾達(dá)病毒tas—elisa方法檢測而呈陰性的蝦苗；
2）蝦苗暫養(yǎng)：選擇具有隔離措施以及經(jīng)過嚴(yán)格消毒的水泥池或大棚內(nèi)土池進(jìn)行培育，水泥池中的放養(yǎng)密度為4500～4950尾/m2，大棚內(nèi)土池中的放養(yǎng)密度為2500～2950尾/m2，水溫25℃，飼料采用具有較高營養(yǎng)價值的蛋羹、蝦片、羅氏沼蝦混合飼料等，暫養(yǎng)期間，每日仔細(xì)觀察蝦苗活動情況、攝食情況等，及時挑選可疑的蝦苗進(jìn)行病毒檢測，在1個月的暫養(yǎng)期內(nèi)至少經(jīng)過8次的病毒檢測且檢測結(jié)果呈陰性，5月20日以后，外塘水溫在22℃以上，將蝦苗放入具有隔離措施的池塘養(yǎng)殖，而該池塘應(yīng)無發(fā)病史，并要求在蝦苗放養(yǎng)前經(jīng)過嚴(yán)格消毒；
3）池塘養(yǎng)殖：6月～10月間進(jìn)行池塘養(yǎng)殖，管理工作嚴(yán)格按照羅氏沼蝦養(yǎng)殖技術(shù)操作規(guī)范進(jìn)行，并定期檢查蝦苗生長狀況，以及應(yīng)用elisa方法進(jìn)行病毒檢測；
4）蝦苗培育期間的消毒隔離措施：蝦苗暫養(yǎng)、池塘養(yǎng)殖期間的培育用水均用蓄水池對水源進(jìn)行沉淀和消毒處理，同時注意不使用來歷不明的冰凍野雜魚作為養(yǎng)殖飼料；
5）親蝦挑選：10月上句即可進(jìn)行親蝦挑選。應(yīng)挑選體格健壯、附肢完整、全身無病灶的蝦體，且雌雄比例為2-3：l；
（二）親蝦越冬期的強化培育：
1）越冬池的預(yù)處理：越冬池在使用前用30ppm高錳酸鉀溶液浸泡一周以上，清塘后刷洗干凈，待用；
2）適宜環(huán)境條件的調(diào)控：越冬期間，水溫以控制在2l℃-22℃為宜，在越冬初期，因蝦體剛剛進(jìn)入溫室而機械損傷較重，可以將水溫適當(dāng)提高l℃～2℃，待蝦體攝食量增加且恢復(fù)體質(zhì)后再降為越冬水溫；
3）飼料投喂：飼料是親蝦性腺發(fā)育的基礎(chǔ)，飼料投喂既要保證親蝦的營養(yǎng)需求，又要保證其適口性，越冬期間，可采用以人工配合飼料為主，再補充以動物性餌料進(jìn)行投喂，并定期在飼料中添加復(fù)合維生素、免疫多糖等強化親蝦營養(yǎng)，增強其免疫力，也避免了親蝦產(chǎn)生厭食情況；
4）加強管理：養(yǎng)殖用水的水源要確保未受病原污染，并定期對越冬水體進(jìn)行消毒，每天對溫室內(nèi)的工具及車間也應(yīng)進(jìn)行嚴(yán)格消毒；
5）定期對親蝦進(jìn)行病毒檢測：每日觀察親蝦攝食情況、活動情況，發(fā)現(xiàn)可疑的親蝦要立即進(jìn)行病毒檢測，越冬期間，每月至少保證有一次以上的病毒檢測記錄；
（三）無病毒苗種的繁育技術(shù)：
1）水源的預(yù)處理：在冬季水溫較低時池塘注水，并用生石灰對池水進(jìn)行消毒，經(jīng)過1-2個月的沉淀、消毒處理，池水的水質(zhì)指標(biāo)在育苗季節(jié)達(dá)到較好的狀態(tài)；
2）親蝦的強化培育：在整個育苗期內(nèi)，增加動物性餌料的投喂，并在飼料中添加復(fù)合維生素、免疫多糖物質(zhì)，日投喂量為蝦體體重的5％～7％，且根據(jù)蝦體攝食情況隨時調(diào)整投喂量，增加換水量和換水頻率以保持水質(zhì)的清新，促使親蝦性腺快速成熟而在池中進(jìn)行交配產(chǎn)卵；
3）病害防治：育苗池與育苗工具在使用前后要嚴(yán)格洗凈消毒，每次捕蝦操作后，用高濃度的高錳酸鉀徹底消毒親蝦池，育苗用水在進(jìn)水時用200目的紗絹對水源進(jìn)行過濾，定期對幼體進(jìn)行病毒檢測。
所述親蝦的強化培育：選擇3個群體的健康親蝦進(jìn)行定向搭配，為滿足家系構(gòu)建需要，3個群體共搭配100組組合，為建立父系半同胞家系，每箱布親蝦1雄5雌；按照交配設(shè)計的組合數(shù)，共布置100個交尾網(wǎng)箱，每個交尾網(wǎng)箱內(nèi)至少要收集到兩尾交尾雌蝦，雌蝦抱卵后轉(zhuǎn)移至另外的孵育網(wǎng)箱內(nèi)進(jìn)行幼體孵育，孵育網(wǎng)箱規(guī)格與交尾網(wǎng)箱相同；
1）環(huán)境條件標(biāo)準(zhǔn)化：從親蝦交配、抱卵孵育、幼體培育、淡化，至仔蝦中間培育，使每個家系在各階段的培育條件保持一致，主要包括各階段水的鹽度、水溫、餌料和充氣等條件，為了便于管理，將5d內(nèi)形成的家系放在同一個池子的不同網(wǎng)箱中進(jìn)行統(tǒng)一管理；
2）數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：第1次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：親蝦見幼后，用200目的紗絹網(wǎng)將幼體移出，隨即取3000尾幼體放入水體為15l的小桶內(nèi)培育；第2次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：當(dāng)幼體9日齡時，計數(shù)1000尾移入0.5mx0.5mx0.5m網(wǎng)箱培育；第3次數(shù)量標(biāo)準(zhǔn)化：當(dāng)仔蝦淡化完畢后，取400尾放入12m2水泥池中進(jìn)行中間培育；
每年4月底開始，利用育種基礎(chǔ)群體，采用1雌對5雄完全雙列雜交策略組合交配放入交配網(wǎng)箱并編號記錄，家系規(guī)模建立150-200個全同胞及半同胞家系，交配后每天檢查親蝦抱卵情況并記錄，每7天將懷卵雌蝦移入孵幼網(wǎng)并編號記錄，經(jīng)20天左右可完成交配計劃；
抱卵親蝦經(jīng)15-20天的培育可孵出幼體，孵幼一般在1-2天內(nèi)完成，每個檢查幼體孵化情況，發(fā)現(xiàn)幼體孵出即進(jìn)行幼體標(biāo)準(zhǔn)化，每個家系標(biāo)準(zhǔn)化計數(shù)幼體2000尾放于育苗桶（池）中培育，主要培育條件有：水溫30℃、鹽度10-12‰、ph7.2-8.0，z1-z5投喂鹵蟲無節(jié)幼體，z5后補充投喂蛋羹；
經(jīng)20-23天左右幼體可變態(tài)仔蝦并將鹽度逐步淡化成1‰，仔蝦淡化后即可進(jìn)行第二次標(biāo)準(zhǔn)化，計數(shù)成活仔蝦總數(shù)，并標(biāo)準(zhǔn)化400尾仔蝦放入暫養(yǎng)水泥池；
蝦苗暫養(yǎng)前進(jìn)行諾達(dá)病毒檢測，采用tas-elisa或rt-pcr方法檢測成陰性的蝦苗，才能進(jìn)暫養(yǎng)池；
水泥池暫養(yǎng)蝦苗投喂淡水枝角類與羅氏沼蝦開口料、1#料，自然水溫25-30℃，經(jīng)25-30天的培育體長達(dá)2.5cm以上，此時應(yīng)盡早進(jìn)行標(biāo)記下塘；
在親蝦池水溫28℃的條件下，每隔10天挑選抱卵蝦一次，根據(jù)卵的顏色將抱卵蝦分成三個等級（灰、棕、黃），分池飼養(yǎng)，卵呈灰褐色的抱卵蝦可直接放入人工咸水中集中排幼，每平方米可放抱卵蝦50-60只，灰卵蝦經(jīng)1-2天的培育即可排出幼體，卵成棕色、黃色的抱卵蝦可放于清水池中暫養(yǎng)，經(jīng)過5-10天的培育，卵的顏色逐漸轉(zhuǎn)為灰色時，可逐漸向池中加入海水，幼體孵出后，用80目的紗絹網(wǎng)將抱卵蝦池中的幼體捕到苗池培育；
3）幼體培育條件控制：布苗密度控制在20-25萬尾/平方米，育苗溫度控制在30-31℃，育苗室的光照要求控制在1000lux以上，并能調(diào)節(jié)光照的強弱，但要避免光線過于集中，充氣量前期應(yīng)小呈微波狀，隨著幼體的生長、活動能力的增強，逐漸加大充氣量，后期調(diào)整充氣量為略顯沸騰狀態(tài)，在調(diào)整充氣量的同時，還應(yīng)使爆氣石在苗池內(nèi)分布均勻，水質(zhì)調(diào)控措施：z5前苗池每天排污一次，z5后每天排污二次，第9天移池，定期使用光合細(xì)菌、芽孢桿菌等有益微生物制劑來調(diào)控水質(zhì)；
4）人工海水配制：采用工業(yè)鹽按天然海水主要元素的成份配制而成，其組成中，除氯化鈉外，mg、ca、k三種離子的配比為3:1:1，鹽度在10-12‰、比重在1.005-1.007之間；
5）飼料投喂：在布苗的第二天早上，投喂孵化18小時的豐年蟲無節(jié)幼體進(jìn)行開食，投喂密度在10個/毫升，當(dāng)布苗后的第9天，即溞狀幼體發(fā)育到第五期（z5）以后，即可少量投喂人工制作的蛋羹，以后再慢慢增加，至z8以后投喂蛋羹為主，鹵蟲無節(jié)幼體為輔。