本發(fā)明涉及一種植物播種時種子滅菌的方法，尤其涉及一種蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法。
背景技術(shù)：
蘭科植物的果實為蒴果，在自然條件下蒴果成熟以后開裂，釋放種子。由于蒴果是封閉結(jié)構(gòu)，未開裂時其種子潔凈無菌，可以直接對果莢進行進行表面消毒即可，其內(nèi)部的種子可直接用于無菌萌發(fā)。但在蘭花的雜交育種過程中，由于疏忽，未能及時采收果莢，經(jīng)常會遇到果莢成熟期一到就開裂的現(xiàn)象，或者貯運過程中蘭花果莢開裂，一旦開裂種子容易受到污染。
由于蘭科植物種子十分細小且質(zhì)量輕，常規(guī)表面消毒方法較為復(fù)雜，且消毒效果較差，易造成種子的損失及消毒時間不均勻等問題，進而影響其無菌萌發(fā)成功率。針對微小種子表面消毒的試驗技術(shù)目前已有若干研究，但尚無針對蘭科植物種子的合適消毒方法的研究。因此合適的蘭科植物種子表面消毒技術(shù)，對于蘭科植物無菌萌發(fā)及工廠化育苗具有重要意義。
技術(shù)實現(xiàn)要素：
本發(fā)明的目的是提供一種蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法。
本發(fā)明的目的是通過以下技術(shù)方案實現(xiàn)的：
本發(fā)明的蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法，包括果莢未開裂時的滅菌方法和果莢開裂時種子的滅菌方法：
果莢未開裂時，將莢果去除宿存花被、蕊柱、果柄，經(jīng)自來水洗凈后，置于5％次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘，用75％的酒精表面消毒3分鐘，直接在酒精燈上灼燒去除莢果表面酒精，完成消毒；
果莢開裂時，將種子放置于3cm×4cm大小的300目尼龍網(wǎng)袋中，熱熔封口，將尼龍網(wǎng)袋置于10.0ml離心管中，再向離心管中加入消毒液，使消毒液液面沒過尼龍網(wǎng)，放置20-40min，用無菌水沖洗幾遍，完成消毒。
由上述本發(fā)明提供的技術(shù)方案可以看出，本發(fā)明實施例提供的蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法，可有效控制消毒時間，保證表面消毒效果，且操作簡便，對種子活力無影響，是一種適用于蘭科植物種子及類似微小種子的消毒方法。
具體實施方式
下面對本發(fā)明實施例中的技術(shù)方案進行清楚、完整地描述，顯然，所描述的實施例僅僅是本發(fā)明一部分實施例，而不是全部的實施例?；诒景l(fā)明的實施例，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實施例，都屬于本發(fā)明的保護范圍。
本發(fā)明的蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法，其較佳的具體實施方式是：
包括果莢未開裂時的滅菌方法和果莢開裂時種子的滅菌方法：
果莢未開裂時，將莢果去除宿存花被、蕊柱、果柄，經(jīng)自來水洗凈后，置于5％次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘，用75％的酒精表面消毒3分鐘，直接在酒精燈上灼燒去除莢果表面酒精，完成消毒；
果莢開裂時，將種子放置于3cm×4cm大小的300目尼龍網(wǎng)袋中，熱熔封口，將尼龍網(wǎng)袋置于10.0ml離心管中，再向離心管中加入消毒液，使消毒液液面沒過尼龍網(wǎng)，放置20-40min，用無菌水沖洗幾遍，完成消毒。
所述消毒液的組成為：7-8ml2％質(zhì)量百分含量的次氯酸鈉+0.01％吐溫-20。
用1-2ml0.1％瓊脂溶液高壓滅菌后沖洗尼龍網(wǎng)袋中的滅菌后的種子，并與種子混勻，得到種子懸浮液，然后用移液槍將種子懸浮液吸取至培養(yǎng)基表面，將培養(yǎng)基封口，水平方向旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿或培養(yǎng)瓶，使種子均勻地分布在培養(yǎng)基表面，進行培養(yǎng)。
本發(fā)明的蘭科植物無菌播種時種子滅菌的方法，包括果莢未開裂時的滅菌方法和果莢開裂時種子的滅菌方法。未開裂時其種子潔凈無菌，可以直接對果莢進行進行表面消毒即可。對開裂果莢需要對種子進行滅菌處理，蘭科植物種子微小，質(zhì)量極輕，在無菌播種時，常規(guī)表面滅菌方法較為復(fù)雜，且滅菌效果較差，極易造成種子的損失。本發(fā)明對蘭花種子進行消毒，可有效控制消毒時間，保證表面消毒效果，且操作簡便，對種子活力無影響，是一種適用于蘭科植物種子及類似微小種子的消毒方法。
具體實施例：
包括果莢而未開裂時的滅菌和果莢開裂時種子的滅菌。
果莢未開裂時，將莢果去除宿存花被、蕊柱、果柄，經(jīng)自來水洗凈后，置于5％次氯酸鈉溶液中消毒20分鐘，用75％的酒精表面消毒3分鐘，直接在酒精燈上灼燒去除莢果表面酒精，這樣就可以完成消毒。
果莢開裂時，消毒方法包括消毒液處理和無菌水洗滌兩個步驟，均在超凈工作臺上進行。
1)將種子放置于3cm×4cm大小的300目尼龍網(wǎng)袋中，熱熔封口。將尼龍網(wǎng)袋置于10.0ml離心管中，再向離心管中加入消毒液(消毒液的組成為：7-8ml2％(質(zhì)量百分含量)次氯酸鈉+0.01％吐溫-20)，使消毒液液面沒過尼龍網(wǎng)，蓋上離心管的蓋子，放置20-40min，期間搖動混勻3-5次；最后將離心管的底部向上傾斜，使消毒液流出。
2)洗滌：向步驟1)的離心管中加入無菌水，無菌水隨即流入離心管底部并浸沒尼龍袋，用手轉(zhuǎn)動數(shù)次；再將離心管的底部向上傾斜，使無菌水流出。如此重復(fù)洗滌4-5次。得到消毒的種子。
用1-2ml0.1％瓊脂溶液(0.1g瓊脂溶于100ml水中，并高壓滅菌)沖洗尼龍網(wǎng)袋中的種子，并將上述1-2ml0.1％瓊脂溶液與種子混勻，得到種子懸浮液；然后用移液槍將種子懸浮液吸取至培養(yǎng)基表面，將培養(yǎng)基封口，水平方向旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)皿(或培養(yǎng)瓶)，使種子均勻地分布在培養(yǎng)基表面(以便于以后的統(tǒng)計)，進行培養(yǎng)。播種密度以每瓶的種子數(shù)量以大致都能接觸到培養(yǎng)基為度，太密時會影響發(fā)芽率及發(fā)芽后的正常生長。
以上所述，僅為本發(fā)明較佳的具體實施方式，但本發(fā)明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明披露的技術(shù)范圍內(nèi)，可輕易想到的變化或替換，都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。因此，本發(fā)明的保護范圍應(yīng)該以權(quán)利要求書的保護范圍為準。