本發(fā)明公開了一種用于治理薇甘菊微生物制劑的制備方法，屬于外來入侵有害生物綜合防控的技術領域。

背景技術：

薇甘菊又名小花假澤蘭，菊科假澤蘭屬植物，多年生草質或稍木質藤本，具蔓生莖，原產(chǎn)中、南美洲，現(xiàn)廣泛分布于東南亞，是危害經(jīng)濟作物和森林植被的主要害草。薇甘菊生命力強，生長快，無性繁殖能力強，種子產(chǎn)量高且傳播速度快，種子數(shù)量多而小，借助風力、動物、昆蟲以及人類活動進行遠距離傳播，莖比葉具有更強的強光適應能力和光合能力，但莖的這些光合作用的具體作用仍不清楚，莖節(jié)和節(jié)間都能生根，每個節(jié)的葉腋都可長出一對新枝，形成新植株；薇甘菊生長能快速覆蓋生境，遇草覆蓋，遇樹則攀援，不僅能使其他植物失去光合作用導致死亡，且可以通過釋放化感物質，抑制和危害其他植物生長，并能降低土壤肥力有效性。

目前薇甘菊的防治方法有人工清除法、化學藥劑防治等，人工清除法是利用人工清除使短期內(nèi)薇甘菊的覆蓋度減少，對野外大面積的森林，人工清除不但不能減輕危害，反而會加重，如果不能每年清理2～3次以上，人工清除就會造成薇甘菊生長更加旺盛，危害更大，人工清除薇甘菊在3個月后恢復生長了80%，6個月后恢復生長100%?；瘜W藥劑防治主要是利用25%森泰和森草凈（70%嘧磺隆粉劑）按一定量對薇甘菊施藥進行防治，但是施藥很難被薇甘菊充分吸收，效果緩慢、成本高、防治效率低且易對其他植物產(chǎn)生危害。

技術實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術問題：針對化學藥劑效果緩慢、成本高，防治效率低且易對其他植物產(chǎn)生危害的問題，本發(fā)明以牛糞、沼液、廢棄香菇菌棒作為菌源，以泥煤作為營養(yǎng)物，通過發(fā)酵擴大種群，利用n-甲基-n-亞硝基脲作為誘導劑，以新鮮薇甘菊莖的榨汁液作為篩選營養(yǎng)物，獲得目標混合菌，再通過富集培養(yǎng)，獲得以新鮮薇甘菊莖為營養(yǎng)物的菌種，隨后使用煅燒后葡萄糖浸泡過的蛭石作為載體，吸附微生物，使用海藻酸鈉進行包裹，從而制得用于治理薇甘菊微生物制劑，本發(fā)明制得的微生物制劑中的微生物以薇甘菊的莖作為營養(yǎng)物，切斷薇甘菊的無性繁殖及種子的產(chǎn)生，治理薇甘菊效果好，有效解決了化學藥劑效果緩慢、成本高，防治效率低且易對其他植物產(chǎn)生危害的問題。

為解決上述技術問題，本發(fā)明采用如下所述的技術方案是：

（1）按重量份數(shù)計，取50～60份牛糞、40～50份泥煤、14～16份沼液及6～9份廢棄香菇菌棒，放入混合機中，以180r/min攪拌30～40min，再將攪拌混合物鋪撒于水泥池中，鋪灑厚度為8～13cm，使用稻草覆蓋混合物，覆蓋厚度為2～4cm，覆蓋2～3天；

（2）按質量比1:50:200～1:50:300，取n-甲基-n-亞硝基脲、新鮮薇甘菊莖和質量分數(shù)為2％葡萄糖溶液放入榨汁機中進行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆蓋混合物結束后，撤去稻草，自然通風13～19天，在自然通風的時間段內(nèi)隔32～34h以120r/min攪拌撤去稻草后的混合物10～15min，同時隔4～6天向撤除稻草后的混合物中加入與步驟（1）混合物中沼液等質量的榨汁液；

（3）在上述自然通風結束后，按質量比1:5，取上述通風后的混合物與無菌水放入攪拌機中，以150r/min攪拌30～50min，再使用紗布對攪拌混合物進行過濾，收集過濾液；

（4）按重量份數(shù)計，取40～45份酵母浸膏、33～35份牛肉膏、24～26份瓊脂、13～15份無菌水、12～14份葡萄糖、6～8份甘露醇、1～2份磷酸氫二鉀及0.8～1.6份磷酸二氫鉀，攪拌均勻，并殺菌消毒，得培養(yǎng)基，按質量比1:6～1:8，將上述過濾液與培養(yǎng)基混合均勻，并將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中，控制溫度為28～35℃，培養(yǎng)23～26h，培養(yǎng)結束后將培養(yǎng)基取出，使用無菌水以10ml/s淋洗培養(yǎng)基表面至其表面無菌絲，收集淋洗液，備用；

（5）取蛭石放入煅燒爐中，設定溫度為800℃，煅燒1～2h，自然冷卻至室溫，收集煅燒物，將煅燒物浸泡于質量分數(shù)為5％葡萄糖溶液中浸泡2～4h，再進行過濾，收集濾渣放入風干機中風干，將風干后的濾渣放入粉碎機中粉碎，過200目篩，收集過篩粉末，得載體；

（6）按質量比1:8，將上述載體與步驟（4）備用的淋洗液混合均勻，靜置14～16h，再加入上述載體質量2～4％的海藻酸鈉，以140r/min攪拌50～70min，隨后過濾，將過濾物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，收集冷凍干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制劑。

本發(fā)明的應用方法是：將本發(fā)明所得的微生物制劑與水按1:1000～1:1500的比例混合5～8分鐘，得到的藥劑裝入噴桶中，均勻將藥劑噴灑在薇甘菊上，噴灑量為30～50l/畝，噴灑后即可。經(jīng)檢驗，本發(fā)明所得的微生物制劑能有效的滅除薇甘菊，噴灑7～12天后，薇甘菊的去除率為95％～100％，10～13個月薇甘菊恢復率≦2％，同時，還增加了原區(qū)域的植被覆蓋率，改造了受危害的區(qū)域。

本發(fā)明與其他方法相比，有益技術效果是：

（1）本發(fā)明所得的微生物制劑對滅除薇甘菊的效率高，減低用藥量及防治成本，方便簡單易于推廣；

（2）本發(fā)明所得的微生物制劑無刺激性氣味，且不易對其他植物產(chǎn)生危害，對使用人員無危害。

具體實施方式

按重量份數(shù)計，取50～60份牛糞、40～50份泥煤、14～16份沼液及6～9份廢棄香菇菌棒，放入混合機中，以180r/min攪拌30～40min，再將攪拌混合物鋪撒于水泥池中，鋪灑厚度為8～13cm，使用稻草覆蓋混合物，覆蓋厚度為2～4cm，覆蓋2～3天；按質量比1:50:200～1:50:300，取n-甲基-n-亞硝基脲、新鮮薇甘菊莖和質量分數(shù)為2％葡萄糖溶液放入榨汁機中進行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆蓋混合物結束后，撤去稻草，自然通風13～19天，在自然通風的時間段內(nèi)隔32～34h以120r/min攪拌撤去稻草后的混合物10～15min，同時隔4～6天向撤除稻草后的混合物中加入與混合物中沼液等質量的榨汁液；在上述自然通風結束后，按質量比1:5，取上述通風后的混合物與無菌水放入攪拌機中，以150r/min攪拌30～50min，再使用紗布對攪拌混合物進行過濾，收集過濾液；按重量份數(shù)計，取40～45份酵母浸膏、33～35份牛肉膏、24～26份瓊脂、13～15份無菌水、12～14份葡萄糖、6～8份甘露醇、1～2份磷酸氫二鉀及0.8～1.6份磷酸二氫鉀，攪拌均勻，并殺菌消毒，得培養(yǎng)基，按質量比1:6～1:8，將上述過濾液與培養(yǎng)基混合均勻，并將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中，控制溫度為28～35℃，培養(yǎng)23～26h，培養(yǎng)結束后將培養(yǎng)基取出，使用無菌水以10ml/s淋洗培養(yǎng)基表面至其表面無菌絲，收集淋洗液，備用；取蛭石放入煅燒爐中，設定溫度為800℃，煅燒1～2h，自然冷卻至室溫，收集煅燒物，將煅燒物浸泡于質量分數(shù)為5％葡萄糖溶液中浸泡2～4h，再進行過濾，收集濾渣放入風干機中風干，將風干后的濾渣放入粉碎機中粉碎，過200目篩，收集過篩粉末，得載體；按質量比1:8，將上述載體與備用的淋洗液混合均勻，靜置14～16h，再加入上述載體質量2～4％的海藻酸鈉，以140r/min攪拌50～70min，隨后過濾，將過濾物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，收集冷凍干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制劑。

實例1

按重量份數(shù)計，取50份牛糞、40份泥煤、14份沼液及6份廢棄香菇菌棒，放入混合機中，以180r/min攪拌30min，再將攪拌混合物鋪撒于水泥池中，鋪灑厚度為8cm，使用稻草覆蓋混合物，覆蓋厚度為2m，覆蓋2天；按質量比1:50:200，取n-甲基-n-亞硝基脲、新鮮薇甘菊莖和質量分數(shù)為2％葡萄糖溶液放入榨汁機中進行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆蓋混合物結束后，撤去稻草，自然通風13天，在自然通風的時間段內(nèi)隔32h以120r/min攪拌撤去稻草后的混合物10min，同時隔4天向撤除稻草后的混合物中加入與混合物中沼液等質量的榨汁液；在上述自然通風結束后，按質量比1:5，取上述通風后的混合物與無菌水放入攪拌機中，以150r/min攪拌30min，再使用紗布對攪拌混合物進行過濾，收集過濾液；按重量份數(shù)計，取40份酵母浸膏、33份牛肉膏、24份瓊脂、13份無菌水、12份葡萄糖、6份甘露醇、1份磷酸氫二鉀及0.8份磷酸二氫鉀，攪拌均勻，并殺菌消毒，得培養(yǎng)基，按質量比1:6，將上述過濾液與培養(yǎng)基混合均勻，并將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中，控制溫度為28℃，培養(yǎng)23h，培養(yǎng)結束后將培養(yǎng)基取出，使用無菌水以10ml/s淋洗培養(yǎng)基表面至其表面無菌絲，收集淋洗液，備用；取蛭石放入煅燒爐中，設定溫度為800℃，煅燒1h，自然冷卻至室溫，收集煅燒物，將煅燒物浸泡于質量分數(shù)為5％葡萄糖溶液中浸泡2h，再進行過濾，收集濾渣放入風干機中風干，將風干后的濾渣放入粉碎機中粉碎，過200目篩，收集過篩粉末，得載體；按質量比1:8，將上述載體與備用的淋洗液混合均勻，靜置14h，再加入上述載體質量2％的海藻酸鈉，以140r/min攪拌50min，隨后過濾，將過濾物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，收集冷凍干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制劑。

本發(fā)明的應用方法是：將本發(fā)明所得的微生物制劑與水按1:1000的比例混合5分鐘，得到的藥劑裝入噴桶中，均勻將藥劑噴灑在薇甘菊上，噴灑量為30l/畝，噴灑后即可。經(jīng)檢驗，本發(fā)明所得的微生物制劑能有效的滅除薇甘菊，噴灑7天后，薇甘菊的去除率為95％，10個月薇甘菊恢復率為2％，同時，還增加了原區(qū)域的植被覆蓋率，改造了受危害的區(qū)域。

實例2

按重量份數(shù)計，取60份牛糞、50份泥煤、16份沼液及9份廢棄香菇菌棒，放入混合機中，以180r/min攪拌40min，再將攪拌混合物鋪撒于水泥池中，鋪灑厚度為13cm，使用稻草覆蓋混合物，覆蓋厚度為4cm，覆蓋3天；按質量比1:50:300，取n-甲基-n-亞硝基脲、新鮮薇甘菊莖和質量分數(shù)為2％葡萄糖溶液放入榨汁機中進行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆蓋混合物結束后，撤去稻草，自然通風19天，在自然通風的時間段內(nèi)隔34h以120r/min攪拌撤去稻草后的混合物15min，同時隔6天向撤除稻草后的混合物中加入與混合物中沼液等質量的榨汁液；在上述自然通風結束后，按質量比1:5，取上述通風后的混合物與無菌水放入攪拌機中，以150r/min攪拌50min，再使用紗布對攪拌混合物進行過濾，收集過濾液；按重量份數(shù)計，取45份酵母浸膏、35份牛肉膏、26份瓊脂、15份無菌水、14份葡萄糖、8份甘露醇、2份磷酸氫二鉀及1.6份磷酸二氫鉀，攪拌均勻，并殺菌消毒，得培養(yǎng)基，按質量比1:8，將上述過濾液與培養(yǎng)基混合均勻，并將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中，控制溫度為35℃，培養(yǎng)26h，培養(yǎng)結束后將培養(yǎng)基取出，使用無菌水以10ml/s淋洗培養(yǎng)基表面至其表面無菌絲，收集淋洗液，備用；取蛭石放入煅燒爐中，設定溫度為800℃，煅燒2h，自然冷卻至室溫，收集煅燒物，將煅燒物浸泡于質量分數(shù)為5％葡萄糖溶液中浸泡4h，再進行過濾，收集濾渣放入風干機中風干，將風干后的濾渣放入粉碎機中粉碎，過200目篩，收集過篩粉末，得載體；按質量比1:8，將上述載體與備用的淋洗液混合均勻，靜置16h，再加入上述載體質量4％的海藻酸鈉，以140r/min攪拌70min，隨后過濾，將過濾物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，收集冷凍干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制劑。

本發(fā)明的應用方法是：將本發(fā)明所得的微生物制劑與水按1:1500的比例混合8分鐘，得到的藥劑裝入噴桶中，均勻將藥劑噴灑在薇甘菊上，噴灑量為50l/畝，噴灑后即可。經(jīng)檢驗，本發(fā)明所得的微生物制劑能有效的滅除薇甘菊，噴灑12天后，薇甘菊的去除率為100％，13個月薇甘菊恢復率為0％，同時，還增加了原區(qū)域的植被覆蓋率，改造了受危害的區(qū)域。

實例3

按重量份數(shù)計，取55份牛糞、45份泥煤、15份沼液及7份廢棄香菇菌棒，放入混合機中，以180r/min攪拌35min，再將攪拌混合物鋪撒于水泥池中，鋪灑厚度為10cm，使用稻草覆蓋混合物，覆蓋厚度為3cm，覆蓋3天；按質量比1:50:250，取n-甲基-n-亞硝基脲、新鮮薇甘菊莖和質量分數(shù)為2％葡萄糖溶液放入榨汁機中進行榨汁，收集榨汁液；在上述稻草覆蓋混合物結束后，撤去稻草，自然通風15天，在自然通風的時間段內(nèi)隔33h以120r/min攪拌撤去稻草后的混合物14min，同時隔5天向撤除稻草后的混合物中加入與混合物中沼液等質量的榨汁液；在上述自然通風結束后，按質量比1:5，取上述通風后的混合物與無菌水放入攪拌機中，以150r/min攪拌35min，再使用紗布對攪拌混合物進行過濾，收集過濾液；按重量份數(shù)計，取42份酵母浸膏、34份牛肉膏、25份瓊脂、14份無菌水、13份葡萄糖、7份甘露醇、1份磷酸氫二鉀及1.2份磷酸二氫鉀，攪拌均勻，并殺菌消毒，得培養(yǎng)基，按質量比1:7，將上述過濾液與培養(yǎng)基混合均勻，并將培養(yǎng)基置于恒溫培養(yǎng)箱中，控制溫度為30℃，培養(yǎng)25h，培養(yǎng)結束后將培養(yǎng)基取出，使用無菌水以10ml/s淋洗培養(yǎng)基表面至其表面無菌絲，收集淋洗液，備用；取蛭石放入煅燒爐中，設定溫度為800℃，煅燒2h，自然冷卻至室溫，收集煅燒物，將煅燒物浸泡于質量分數(shù)為5％葡萄糖溶液中浸泡3h，再進行過濾，收集濾渣放入風干機中風干，將風干后的濾渣放入粉碎機中粉碎，過200目篩，收集過篩粉末，得載體；按質量比1:8，將上述載體與備用的淋洗液混合均勻，靜置15h，再加入上述載體質量3％的海藻酸鈉，以140r/min攪拌60min，隨后過濾，將過濾物放入冷凍干燥機中冷凍干燥，收集冷凍干燥物，即可得用于治理薇甘菊微生物制劑。

本發(fā)明的應用方法是：將本發(fā)明所得的微生物制劑與水按1:1250的比例混合6.5分鐘，得到的藥劑裝入噴桶中，均勻將藥劑噴灑在薇甘菊上，噴灑量為40l/畝，噴灑后即可。經(jīng)檢驗，本發(fā)明所得的微生物制劑能有效的滅除薇甘菊，噴灑9.5天后，薇甘菊的去除率為97.5％，12個月薇甘菊恢復率為0.2％，同時，還增加了原區(qū)域的植被覆蓋率，改造了受危害的區(qū)域。