本發(fā)明涉及農(nóng)業(yè)作物抗病研究
技術領域：
，具體地說是一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法。
背景技術：
：蘿卜是十字花科蘿卜屬的1～2年生草本雙子葉植物，是我國第二大蔬菜，在我國已有2700多年的栽培歷史，品種資源近2000份，其品種資源類型十分豐富，各生態(tài)區(qū)域均有適合本區(qū)域消費習慣和不同季節(jié)生長的傳統(tǒng)地方品種。我國蘿卜年播種面積已逾1830萬畝，全國各省、市、縣區(qū)都有種植，蘿卜產(chǎn)品周年供應全國并遠銷日本、中國香港、中國臺灣和東南亞等地區(qū)。高山地區(qū)是目前蘿卜周年生產(chǎn)的重點生產(chǎn)區(qū)域，湖北省高山蘿卜種植近180萬畝，占到全國蘿卜生產(chǎn)總面積的十分之一。然而黑腐病是高山蘿卜生產(chǎn)中重要的病害之一，嚴重影響到高山蘿卜生產(chǎn)的品質(zhì)和產(chǎn)量，目前常用剪葉法和噴霧法等方法對高山蘿卜進行抗黑腐病抗病性鑒定，以利于獲得抗黑腐病的種質(zhì)資源和選育新的抗病品種；但使用上述接種方法時，具有因菌液分布不均勻，導致需要反復接種的問題，拉長了鑒定周期，誤差大、實用性差。因此，如何有效地解決高山蘿卜抗黑腐病品種的選育是目前亟待解決的問題。技術實現(xiàn)要素：為了克服上述技術缺陷，本發(fā)明提供一種方法簡單、直接有效、鑒定周期短的一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法。一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法，包括以下具體步驟：S1、供試材料的選?。簩⑹只剖卟松虾诟〔≡鳛楣┰嚥≡?、備用；再將無菌土壤、發(fā)酵的有機肥、過磷酸鈣、草木灰按照配比混合作為供試土壤、裝于穴盤備用，最后選取至少一種種質(zhì)資源進行后續(xù)鑒定試驗；S2、接種：6月10日至7月31日在高山蘿卜主產(chǎn)區(qū)將步驟S1準備的蘿卜種播種于步驟S1備用的穴盤后置入苗床，再進行病蟲害管理、摩擦接種；S3、根據(jù)步驟S2的發(fā)病情況進行病情指數(shù)分級，并制定抗病性評價標準。一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法，其優(yōu)點是：在蘿卜生長周期，采用摩擦接種方法，克服了現(xiàn)有剪葉法和噴霧法接種時可能因菌液分布不均勻而導致結果不準確的影響，減少了因接種不均勻而需要反復接種的次數(shù)；另外該接種方法較其它方法能夠更短時間內(nèi)發(fā)生癥狀，避免因反復接種使得鑒定周期拉長，幼苗錯過最佳的接種時間，苗齡越來越大后植株抗性越來越強，而不易分辨材料的抗性差異，減少工作量、直接有效、實用性強。具體實施方式一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法，包括以下具體步驟：S1、供試材料的選取：將十字花科蔬菜上黑腐病病原菌為供試病原菌、備用；再將無菌土壤、發(fā)酵的有機肥、過磷酸鈣、草木灰按照配比混合作為供試土壤、裝于穴盤備用，最后選取至少一種種質(zhì)資源進行后續(xù)鑒定試驗；S2、接種：6月10日至7月31日在高山蘿卜主產(chǎn)區(qū)將步驟S1準備的蘿卜種播種于步驟S1備用的穴盤后置入苗床，再進行病蟲害管理、摩擦接種；S3、根據(jù)步驟S2的發(fā)病情況進行病情指數(shù)分級，并制定抗病性評價標準。優(yōu)選地，步驟S1中，病原菌選取地址為高山蘿卜主產(chǎn)區(qū)；優(yōu)選地，步驟S1中，無菌土壤：發(fā)酵的有機肥：過磷酸鈣：草木灰的質(zhì)量配比為500：15：7：15；通過增加有機肥恢復土壤生態(tài)環(huán)境，加入過磷酸鈣調(diào)整土壤中酸性并補充鈣元素，而使用草木灰抑制出苗時土壤中病害的侵染。優(yōu)選地，步驟S2中穴盤播種為：將步驟S1穴盤中的供試土壤先用水澆透，再在每穴的中心點打深度為1.3～1.5cm的洞穴，將蘿卜種播于洞穴中，用步驟S1中備用的供試土壤覆蓋于種子上，且覆蓋深度不大于0.5cm，最后將覆土后的穴盤置于苗床上培養(yǎng)，且苗床內(nèi)的培養(yǎng)溫度為20℃～30℃；進一步地，步驟S2中病蟲害管理為：對播種后的蘿卜按照當?shù)卮筇锕芾矸椒ㄟM行栽培管理，隔天澆水一次；優(yōu)選地，步驟S2中摩擦接種為：先采用步驟S1備用的供試病原菌稀釋至濃度為1×107cfu/mL的病菌液、備用；當蘿卜生長于5～6片葉時采用砂紙粘取備用的病菌液涂于葉片，且每株涂三片，接種后保濕48h，且于接種后4～7天調(diào)查發(fā)病情況；進一步地，病菌液涂于葉片時，以葉片中心點為接種點向四周涂抹，且涂抹面積占全葉2/3，每蘸一次菌液，在相同部位同一方向，摩擦兩次。在表皮部分摩擦即可，不必磨至皮層將葉子揉爛，否則不易判斷是病菌侵染還是受傷癥狀。進一步地，選取每個單株上先長出的3片真葉上涂抹。進一步地，保濕方法為：搭建覆蓋有地膜的拱棚，且地膜四周用土壓實，上午10點至下午4點在拱棚上蓋上遮陽網(wǎng)，防止拱棚內(nèi)溫度過高燒苗，苗床內(nèi)保持90％空氣相對濕度。進一步地，遮蓋遮陽網(wǎng)時間為7月20日至8月20日的晴天,，防止保濕及田間管理生長期間拱棚內(nèi)溫度過高燒苗。優(yōu)選地，步驟S3中，病情指數(shù)調(diào)查按照發(fā)病病斑大小劃分為6個級別：0級：無癥狀；1級：在接種點周圍有直徑≤1mm壞死或者萎黃癥狀；3級：在接種點周圍有直徑≤5mm的病斑；5級：在接種點周圍有直徑5mm≤10mm的病斑；7級：在接種點周圍有多個直徑大于10mm的病斑；9級：葉片摩擦后的部位均萎蔫或者死亡。為了進一步說明本發(fā)明的技術方案，以下結合具體實例進行詳細說明：實施例一一種高山蘿卜苗期抗黑腐病鑒定方法，包括以下具體步驟：S1、供試材料的選取病原菌：以湖北省高山蘿卜主產(chǎn)區(qū)采集的十字花科蔬菜上黑腐病病原菌為供試病原菌，備用；供試土壤：將無菌土壤過篩后，取無菌土壤500份、發(fā)酵的有機肥15份、過磷酸鈣7份、草木灰15份充分混勻后裝入50個72孔穴盤中備用；準備100個蘿卜種質(zhì)資源進行后續(xù)鑒定試驗；S2、接種：①、6月10日在高山蘿卜主產(chǎn)區(qū)將100個蘿卜種質(zhì)資源播種于步驟S1備用的穴盤，且每個穴盤播種兩個蘿卜種質(zhì)資源，再用水將穴盤內(nèi)供試土壤澆透，在每穴的中心點打深度為1.3cm的洞穴，將蘿卜種播于洞穴中，用步驟S1中備用的供試土壤覆蓋于種子上，且覆蓋0.4cm，最后將覆土后的穴盤置于苗床上培養(yǎng)，且苗床內(nèi)的培養(yǎng)溫度為25℃。②、對播種后的蘿卜按照當?shù)卮筇锕芾矸椒ㄟM行栽培管理，隔天澆水一次；③、采用步驟S1備用的供試病原菌稀釋至濃度為1×107cfu/mL的病菌液、備用；當蘿卜生長于5片葉時，采用砂紙粘取備用的病菌液涂于每個單株先長出的3片真葉上，且以葉片中心點為接種點向四周涂抹，涂抹面積占全葉2/3，每蘸一次菌液，在相同部位同一方向，摩擦兩次即可；每株涂三片，接種后保濕48h，且于接種后第5天調(diào)查發(fā)病情況。S3、根據(jù)步驟S2的發(fā)病情況進行病情指數(shù)分級，并制定抗病性評價標準，具體如下：病情指數(shù)調(diào)查按照發(fā)病病斑大小劃分為6個級別：0級：無癥狀；1級：在接種點周圍有直徑≤1mm壞死或者萎黃癥狀；3級：在接種點周圍有直徑≤5mm的病斑；5級：在接種點周圍有直徑5mm≤10mm的病斑；7級：在接種點周圍有多個直徑大于10mm的病斑；9級：葉片摩擦后的部位均萎蔫或者死亡。根據(jù)上述實驗及所獲得的病情級別，制定抗病性評價標準如下：抗病性評價標準黑腐病病情指數(shù)(DI)抗病級別DI≤10高抗(HR)10＜DI≤20抗病(R)20＜DI≤40耐病(MR)40＜DI≤60感病(S)60＜DI≤100高感(HS)實施例二與實施例一不同之處在于：步驟S1中，供試土壤：將無菌土壤過篩后，取無菌土壤1000份、發(fā)酵的有機肥30份、過磷酸鈣14份、草木灰30份；步驟S2中，種植時間為6月15日，每穴的洞穴深度為1.5cm，且覆蓋深度為0.3cm，苗床內(nèi)的培養(yǎng)溫度為28℃；接種后第7天調(diào)查發(fā)病情況。實施例三與實施例一不同之處在于：步驟S1中，供試土壤：將無菌土壤過篩后，取無菌土壤250份、發(fā)酵的有機肥7.5份、過磷酸鈣3.5份、草木灰7.5份；步驟S2中，種植時間為7月1日，每穴的洞穴深度為1.4cm，且覆蓋深度為0.5cm，苗床內(nèi)的培養(yǎng)溫度為30℃；接種后第6天調(diào)查發(fā)病情況。以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，并不用以限制本發(fā)明，凡在本發(fā)明的精神和原則之內(nèi)，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。當前第1頁1 2 3