本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域，特別涉及一種提高香蕉成活率的組織培養(yǎng)方法。
背景技術(shù)：
：香蕉屬于芭蕉科芭蕉屬為多年，起源于亞洲熱帶地區(qū)，是世界主要鮮果種類之一。香蕉屬于三倍體有高度不育性，果實(shí)沒(méi)有種子，只能通過(guò)無(wú)性繁殖傳代，常用的繁殖手段為組織培養(yǎng)，自20世紀(jì)60年代以來(lái)，植物組織培養(yǎng)技術(shù)不斷地發(fā)展，并逐步完善成熟，雖然植物組培的理論研究已相當(dāng)精深，但技術(shù)環(huán)節(jié)還存在不少問(wèn)題，例如在組織培養(yǎng)消毒過(guò)程中，常用的消毒劑選用的是化學(xué)制劑、農(nóng)藥、紫外線等，利用消毒劑在消毒過(guò)程中，消毒時(shí)間的掌握很重要，時(shí)間過(guò)長(zhǎng)極易對(duì)植物造成危害，降低成活率，消毒時(shí)間過(guò)短又不能起到消毒的作用，造成污染。多年來(lái)國(guó)內(nèi)外研究者對(duì)消毒劑進(jìn)行了廣泛研究和篩選,但至今沒(méi)有發(fā)現(xiàn)一種能滿足理想條件的消毒劑。常用的組織培養(yǎng)基選用的是MS培養(yǎng)基，培養(yǎng)基原料較貴，配置復(fù)雜，而且做為大生產(chǎn)時(shí)，成本較大。目前，我國(guó)常用的滅菌消毒劑主要以升汞為主,國(guó)內(nèi)外對(duì)汞的毒性作用進(jìn)行了大量的研究,證實(shí)汞對(duì)細(xì)胞的每一生長(zhǎng)過(guò)程都有重要影響,所以經(jīng)過(guò)升汞滅菌的外植體,需徹底除去殘留的Hg+,以消除微量的殘留升汞對(duì)外植體的傷害。例如，中國(guó)專利CN105284618A公開(kāi)了一種香蕉無(wú)MS組織培養(yǎng)的方法，該發(fā)明提供了一種香蕉無(wú)MS組織培養(yǎng)的方法，使用木薯酒精厭氧發(fā)酵液替代基本培養(yǎng)基MS，該方案可以降低生產(chǎn)成本，變廢為寶，但該方案并沒(méi)有對(duì)消毒劑進(jìn)行改進(jìn)，因此，在現(xiàn)行的組織培養(yǎng)中需要提供一種理想的消毒劑，不僅能對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒，還不會(huì)對(duì)外植體進(jìn)行侵害，同時(shí)還能降低組培的生產(chǎn)成本的組織培養(yǎng)方法。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：鑒于上述內(nèi)容，有必要提供一種理想的消毒劑，不僅能對(duì)外植體進(jìn)行表面消毒，還不會(huì)對(duì)外植體進(jìn)行侵害，同時(shí)還能降低組培的生產(chǎn)成本的組織培養(yǎng)方法。為達(dá)到上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是：一種提高香蕉成活率的組織培養(yǎng)方法，該組織培養(yǎng)方法包括以下步驟：(1)培養(yǎng)前20h-24h對(duì)培養(yǎng)室進(jìn)行滅菌消毒；(2)外植體的選擇：選擇香蕉吸芽為外植體，長(zhǎng)2cm-3cm，直徑1cm-2cm；(3)外植體的滅菌：外植體經(jīng)過(guò)水沖洗、75％的酒精浸泡瀝干后，在質(zhì)量濃度為5％-8％的植物處理液中浸泡10min-20min進(jìn)行滅菌，所述植物處理液的組成及重量百分?jǐn)?shù)如下：30％-50％的靈芝浸出液、10％-20％的辣蓼草汁、10％-20％的大蒜汁、10％-20％的洋蔥汁、5％-10％的藿香汁、5％-10％的仙人掌汁。(4)初始誘導(dǎo)培養(yǎng)：將滅菌后的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為26℃-28℃，用5紅3綠2藍(lán)光質(zhì)的LED光燈進(jìn)行光照，光照強(qiáng)度為400Lx-1000Lx，光照時(shí)間為20h-25h；(5)繼代培養(yǎng)：將誘導(dǎo)培養(yǎng)后長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)溫度為26-28℃，用4紅3綠3白LED光燈進(jìn)行光照，光照強(qiáng)度為600Lx-1200Lx，光照時(shí)間為20h-25h，隨著外植體的生長(zhǎng)不斷更換培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)4-6代后將長(zhǎng)成生根苗的幼苗轉(zhuǎn)接到放有培養(yǎng)基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中進(jìn)行培養(yǎng)；(6)煉苗：將營(yíng)養(yǎng)杯中的香蕉幼苗放在大棚中進(jìn)行煉苗，煉苗溫度為24℃-28℃，光照為日光照射。進(jìn)一步的，所述誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：COD含量為300mg/L-800mg/L的15％-20％木薯酒精廢液，2.0g/L-4.0g/L的蔗糖溶液，5.0g/L-8.0g/L的靈芝浸出液，5.0g/L-8.0g/L的香蕉葉汁，2.0g/L-5.0g/L的辣蓼草汁，5.0g/L-8.0g/L的瓊脂，0.1mg/L-0.5mg/L的吲哚丁酸。進(jìn)一步的，所述繼代培養(yǎng)基組成為：COD含量為500mg/L-1000mg/L的15-20％木薯酒精廢液，5.0g/L-8.0g/L的蔗糖溶液，5g/L-10g/L的靈芝浸出液，5.0g/L-10.0g/L的辣蓼草汁，6.0g/L-10.0g/L的瓊脂。進(jìn)一步的，所述營(yíng)養(yǎng)杯基質(zhì)的重量百分比組成為：40％-60％的椰糠、20％-30％的稻桿，10％-20％的黃沙，5％-10％的有機(jī)肥。進(jìn)一步的，所述步驟(4)的LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-紅-藍(lán)-紅-綠-藍(lán)-紅-綠-紅”。進(jìn)一步的，所述步驟(5)的LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-白-紅-綠-白-紅-綠-白-紅”。本發(fā)明具有如下有益效果：1、本發(fā)明選用植物處理液替代消毒劑，該植物處理液組成及重量百分?jǐn)?shù)如為：30％-50％的靈芝浸出液、10％-20％的辣蓼草浸出液、10％-20％的大蒜汁、10％-20％的洋蔥汁、5％-10％的藿香浸出液、5％-10％的仙人掌浸出液；靈芝浸出液具有強(qiáng)烈的抑制細(xì)菌作用，能對(duì)外植體進(jìn)行有效消毒，但是靈芝浸出液含量過(guò)高會(huì)抑制外植體的生長(zhǎng)，可以使用辣蓼草配合進(jìn)行殺菌，辣蓼草能有促進(jìn)植物生長(zhǎng)的作用，但是僅用辣蓼草和靈芝并不能達(dá)到殺菌濃度，發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)可以添加大蒜汁和藿香進(jìn)行殺毒，大蒜汁性質(zhì)不穩(wěn)定及易失去活性，但是大蒜汁的殺菌能力很強(qiáng)，與藿香進(jìn)行配合利用藿香散發(fā)的氣味進(jìn)行消毒，形成一個(gè)相對(duì)無(wú)菌無(wú)毒的生長(zhǎng)環(huán)境，利用上述的植物處理液與植物間不會(huì)造成拮抗作用，對(duì)外植體表面進(jìn)行消毒不會(huì)對(duì)外植體造成侵害。2、本發(fā)明的誘導(dǎo)培養(yǎng)基選用COD含量為300mg/L-800mg/L的15％-20％木薯酒精廢液為培養(yǎng)基主要成分，木薯酒精廢液在經(jīng)過(guò)發(fā)酵、厭氧處理含有豐富的無(wú)機(jī)鹽離子，同時(shí)含有豐富的有機(jī)質(zhì)能促進(jìn)外植體的生長(zhǎng)，對(duì)廢液的二次利用能降低組培成本，但是發(fā)酵液中含有較高濃度的菌群，發(fā)明人通過(guò)研究發(fā)現(xiàn)可以通過(guò)添加靈芝浸出液、辣蓼草來(lái)抑制細(xì)菌的生長(zhǎng)，香蕉浸出液中含有豐富的葉綠素，可促進(jìn)外植體的光合作用，吲哚丁酸能促進(jìn)外植體生根，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在此配方下的培養(yǎng)基中能充分促進(jìn)外植體的誘導(dǎo)培養(yǎng)；外植體在誘導(dǎo)培養(yǎng)之后，生長(zhǎng)能力較強(qiáng)，在繼代培養(yǎng)時(shí)不需要添加吲哚丁酸進(jìn)行生根，也不需要添加香蕉浸出液來(lái)提高葉綠素含量，發(fā)明人發(fā)現(xiàn)在此繼代培養(yǎng)基配方下能充分促進(jìn)外植體的繼代培養(yǎng)；為了提高煉苗效率，發(fā)明人經(jīng)過(guò)不斷試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)40％-60％椰糠、20％-30％稻桿，10％-20％黃沙，5％-10％有機(jī)肥最接近外界生長(zhǎng)環(huán)境，同時(shí)含有豐富的有機(jī)肥可做為營(yíng)養(yǎng)杯的基質(zhì)可提高煉苗效率。3、發(fā)明人經(jīng)過(guò)研究發(fā)現(xiàn)在光照處理時(shí)，紅光能促進(jìn)外植體的生長(zhǎng)，而藍(lán)光則有顯著抑制作用，藍(lán)光能夠緩解外植體可溶性蛋白的降解，可溶性蛋白含量高，紅藍(lán)光組合處理可顯著提高了外植體中VC含量。在紅藍(lán)光LED燈處理上添加綠光LED燈處理時(shí)能促進(jìn)外植體的生長(zhǎng)和干物質(zhì)的積累，經(jīng)發(fā)明人不斷研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)選用5紅3綠2藍(lán)光質(zhì)的LED燈對(duì)外植體進(jìn)行燈照并按照“紅-綠-紅-藍(lán)-紅-綠-藍(lán)-紅-綠-紅”的順序進(jìn)行排布時(shí)，外植體的生長(zhǎng)情況最良好，各營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的指標(biāo)也最好；而白光相能顯著增加外植體的下胚軸的伸長(zhǎng)，經(jīng)發(fā)明人不斷研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)選用4紅3綠3白光質(zhì)的LED燈對(duì)外植體進(jìn)行燈照并按照“紅-綠-白-紅-綠-白-紅-綠-白-紅”的順序進(jìn)行排布時(shí)，能充分促進(jìn)外植體的生根生長(zhǎng)。【具體實(shí)施方式】本說(shuō)明書(shū)中公開(kāi)的所有特征，或公開(kāi)的所有方法或過(guò)程中的步驟，除了互相排斥的特征和/或步驟以外，均可以以任何方式組合。本說(shuō)明書(shū)(包括任何附加權(quán)利要求、摘要)中公開(kāi)的任一特征，除非特別敘述，均可被其他等效或具有類似目的的替代特征加以替換。即，除非特別敘述，每個(gè)特征只是一系列等效或類似特征中的一個(gè)例子而已。植物浸出液的制?。?1)靈芝浸出液：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的靈芝切塊放入研缽中搗碎研磨，研磨后放入燒杯中，將等質(zhì)量的蒸餾水倒入燒杯中進(jìn)行浸泡24h，用濾紙過(guò)濾，取濾液備用。(2)辣蓼草汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮辣蓼草剪碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。(3)大蒜汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮大蒜切碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。(4)洋蔥汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮大蒜切碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。(5)藿香汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮藿香剪碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。(6)仙人掌汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮仙人掌剪碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。(7)香蕉葉汁：稱取一定質(zhì)量的洗凈晾干的新鮮香蕉葉剪碎加入等質(zhì)量的蒸餾水，放入榨汁機(jī)中進(jìn)行榨汁，榨汁完成后放入燒杯中靜置2-4h，取上層清液體備用。實(shí)施例1：在培養(yǎng)前20h向關(guān)閉門窗的培養(yǎng)室地面噴灑石灰粉，向空氣中噴灑濃度為75％的醫(yī)用酒精，進(jìn)行滅菌消毒；選擇無(wú)病蟲(chóng)害的香蕉吸芽為外植體，長(zhǎng)2cm，直徑1cm；用自來(lái)水對(duì)外植體進(jìn)行沖洗9min，撈出后用濃度為75％的酒精溶液浸泡5min，外植體瀝干后在質(zhì)量濃度為5％的植物處理液中浸泡10min(植物處理液的組成及重量百分?jǐn)?shù)如下：37％的靈芝浸出液、10％的辣蓼草汁、17％的大蒜汁、20％的洋蔥汁、8％的藿香汁、8％的仙人掌汁)；將滅菌后的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)(誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：COD含量為300mg/L的15％木薯酒精廢液，2.0g/L的蔗糖溶液，5.0g/L的靈芝浸出液，5.0g/L的香蕉葉汁，2.0g/L的辣蓼草汁，5.0g/L的瓊脂，0.1mg/L的吲哚丁酸)，培養(yǎng)溫度為26℃，用5紅3綠2藍(lán)光質(zhì)的LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-紅-藍(lán)-紅-綠-藍(lán)-紅-綠-紅”，光照強(qiáng)度為400Lx，光照時(shí)間為20h；將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行繼代培養(yǎng)(繼代培養(yǎng)基組成為：COD含量為500mg/L的15％木薯酒精廢液，5.0g/L的蔗糖溶液，5g/L的靈芝浸出液，5.0g/L的辣蓼草汁，6.0g/L的瓊脂)，培養(yǎng)溫度為26，用4紅3綠3白LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-白紅-綠-白-紅-綠-白-紅”，光照強(qiáng)度為600-1200Lx，光照時(shí)間為20h-25h，隨著外植體的生長(zhǎng)不斷更換培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)4代后將長(zhǎng)成生根苗的幼苗轉(zhuǎn)接到放好培養(yǎng)基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中進(jìn)行培養(yǎng)(營(yíng)養(yǎng)杯基質(zhì)的重量百分比組成為：40％的椰糠、30％的稻桿，20％的黃沙，10％的有機(jī)肥)；將營(yíng)養(yǎng)杯中的香蕉幼苗放在大棚中進(jìn)行煉苗，煉苗溫度為24℃，光照為日光照射。實(shí)施例2：在培養(yǎng)前22h向關(guān)閉門窗的培養(yǎng)室地面噴灑石灰粉，向空氣中噴灑濃度為75％的醫(yī)用酒精，進(jìn)行滅菌消毒；選擇無(wú)病蟲(chóng)害的香蕉吸芽為外植體，長(zhǎng)3cm，直徑2cm；用自來(lái)水對(duì)外植體進(jìn)行沖洗12min，撈出后用濃度為75％的酒精溶液浸泡7min，外植體瀝干后在質(zhì)量濃度為8％的植物處理液中浸泡20min(植物處理液的組成及重量百分?jǐn)?shù)如下：50％的靈芝浸出液、15％的辣蓼草汁、10％的大蒜汁、10％的洋蔥汁、5％的藿香汁、10％的仙人掌汁)；將滅菌后的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)(誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：COD含量為800mg/L的20％木薯酒精廢液，4.0g/L的蔗糖溶液，8.0g/L的靈芝浸出液，8.0g/L的香蕉葉汁，5.0g/L的辣蓼草汁，8.0g/L的瓊脂，0.5mg/L的吲哚丁酸)，培養(yǎng)溫度為28℃，用5紅3綠2藍(lán)光質(zhì)的LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-紅-藍(lán)-紅-綠-藍(lán)-紅-綠-紅”，光照強(qiáng)度為1000Lx，光照時(shí)間為25h；將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行繼代培養(yǎng)(繼代培養(yǎng)基組成為：COD含量為1000mg/L的20％木薯酒精廢液，8.0mg/L的蔗糖溶液，10mg/L的靈芝浸出液，10.0mg/L的辣蓼草汁，10.0g/L的瓊脂)，培養(yǎng)溫度為28℃，用4紅3綠3白LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-白紅-綠-白-紅-綠-白-紅”，光照強(qiáng)度為1200Lx，光照時(shí)間為25h，隨著外植體的生長(zhǎng)不斷更換培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)6代后將長(zhǎng)成生根苗的幼苗轉(zhuǎn)接到放好培養(yǎng)基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中進(jìn)行培養(yǎng)(營(yíng)養(yǎng)杯基質(zhì)的重量百分比組成為：60％的椰糠、25％的稻桿，10％的黃沙，5％的有機(jī)肥)；將營(yíng)養(yǎng)杯中的香蕉幼苗放在大棚中進(jìn)行煉苗，煉苗溫度為28℃，光照為日光照射。實(shí)施例3：在培養(yǎng)前24h向關(guān)閉門窗的培養(yǎng)室地面噴灑石灰粉，向空氣中噴灑濃度為75％的醫(yī)用酒精，進(jìn)行滅菌消毒；選擇無(wú)病蟲(chóng)害的香蕉吸芽為外植體，長(zhǎng)2.5cm，直徑1.5cm；用自來(lái)水對(duì)外植體進(jìn)行沖洗11min，撈出后用濃度為75％的酒精溶液浸泡6min，外植體瀝干后在質(zhì)量濃度為5％-8％的植物處理液中浸泡15min(植物處理液的組成及重量百分?jǐn)?shù)如下：30％的靈芝浸出液、20％的辣蓼草汁、20％的大蒜汁、15％的洋蔥汁、10％的藿香汁、5％的仙人掌汁)；將滅菌后的外植體接種在誘導(dǎo)培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行誘導(dǎo)培養(yǎng)(誘導(dǎo)培養(yǎng)基組成為：COD含量為500mg/L的18％木薯酒精廢液，3.0g/L的蔗糖溶液，6.0g/L的靈芝浸出液，6.0g/L的香蕉葉汁，3.0g/L的辣蓼草汁，7.0g/L的瓊脂，0.3mg/L的吲哚丁酸)，培養(yǎng)溫度為27℃，用5紅3綠2藍(lán)光質(zhì)的LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-紅-藍(lán)-紅-綠-藍(lán)-紅-綠-紅”，光照強(qiáng)度為800Lx，光照時(shí)間為23h；將長(zhǎng)出新芽的外植體轉(zhuǎn)接入繼代培養(yǎng)基中在培養(yǎng)箱中進(jìn)行繼代培養(yǎng)(繼代培養(yǎng)基組成為：COD含量為700mg/L的16％木薯酒精廢液，7.0g/L的蔗糖溶液，7g/L的靈芝浸出液，7.0g/L的辣蓼草汁，8.0g/L的瓊脂)，培養(yǎng)溫度為27℃，用4紅3綠3白LED光燈進(jìn)行光照，LED燈安裝在暗箱頂部，為單色LED燈管，燈管進(jìn)行間隔排列，排列順序?yàn)椤凹t-綠-白-紅-綠-白-紅-綠-白-紅”，光照強(qiáng)度為1000Lx，光照時(shí)間為22h，隨著外植體的生長(zhǎng)不斷更換培養(yǎng)基，繼代培養(yǎng)5代后將長(zhǎng)成生根苗的幼苗轉(zhuǎn)接到放好培養(yǎng)基質(zhì)的營(yíng)養(yǎng)杯中進(jìn)行培養(yǎng)(營(yíng)養(yǎng)杯基質(zhì)的重量百分比組成為：50％的椰糠、28％的稻桿，14％的黃沙，8％的有機(jī)肥)；將營(yíng)養(yǎng)杯中的香蕉幼苗放在大棚中進(jìn)行煉苗，煉苗溫度為26℃，光照為日光照射。對(duì)照組1：按照實(shí)施例2的步驟進(jìn)行組織培養(yǎng)，省去植物浸泡液滅菌步驟，形成植物浸泡液的空白試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算在繼代培養(yǎng)前外植體成活情況。對(duì)照組2：按照實(shí)施例2的步驟進(jìn)行組織培養(yǎng)，將誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基的主要成分替換成常用的MS培養(yǎng)基，并向其中加入實(shí)施例2的植物提取物，即誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為：MS培養(yǎng)基，4.0g/L的蔗糖溶液，8.0g/L的靈芝浸出液，8.0g/L的香蕉葉汁，5.0g/L的辣蓼草汁，8.0g/L的瓊脂，0.5mg/L的吲哚丁酸；繼代培養(yǎng)基成分為：MS培養(yǎng)基，8.0mg/L的蔗糖溶液，10g/L的靈芝浸出液，10.0g/L的辣蓼草汁，10.0g/L的瓊脂；形成木薯酒精廢液培養(yǎng)基的空白試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算在繼代培養(yǎng)前外植體及繼代培養(yǎng)后生根苗移植進(jìn)營(yíng)養(yǎng)杯前5cm生根苗成活情況。對(duì)照組3：按照實(shí)施例2的步驟進(jìn)行組織培養(yǎng)，將誘導(dǎo)培養(yǎng)基、繼代培養(yǎng)基的植物浸出液成分省去，即誘導(dǎo)培養(yǎng)基成分為COD含量為800mg/L的20％木薯酒精廢液，4.0g/L的蔗糖溶液，8.0g/L的瓊脂，0.5mg/L的吲哚丁酸；繼代培養(yǎng)基成分為：COD含量為1000mg/L的20％木薯酒精廢液，8.0g/L的蔗糖溶液，10.0g/L的瓊脂；形成培養(yǎng)基中植物浸出液的空白試驗(yàn)，統(tǒng)計(jì)并計(jì)算在繼代培養(yǎng)前外植體及繼代培養(yǎng)后生根苗移植進(jìn)營(yíng)養(yǎng)杯前5cm生根苗成活情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果分析：1、成活率：統(tǒng)計(jì)并計(jì)算實(shí)施例1-3和對(duì)照組1的繼代培養(yǎng)前外植體成活率；統(tǒng)計(jì)并計(jì)算對(duì)照組1-3和對(duì)照組2、對(duì)照組3的繼代培養(yǎng)前外植體成活率，繼代培養(yǎng)后生根苗移栽進(jìn)營(yíng)養(yǎng)杯前5cm生根苗成活率，香蕉幼苗移栽定植后10d、20d、30d成活率，具體情況見(jiàn)表1。表1香蕉組培成活情況實(shí)施例1-3的成活率比對(duì)照組1高，說(shuō)明使用植物處理液進(jìn)行消毒可提高植物外植體成活率；實(shí)施例1-3的成活率與對(duì)照組2的外植體成活率、5cm生根苗成活率無(wú)明顯區(qū)別，說(shuō)明木薯酒精廢液與常用的組培MS培養(yǎng)基成分相近，能夠保證組培苗、外植體的成活率，可以替代MS培養(yǎng)基，但是對(duì)照組2苗木成活率明顯低于實(shí)施例1-3的成活率說(shuō)明用木薯酒精廢液制成的培養(yǎng)基香蕉苗質(zhì)量更好；實(shí)施例1-3的各成活率比對(duì)照組3高，說(shuō)明在誘導(dǎo)培養(yǎng)與繼代培養(yǎng)中植物浸出液能進(jìn)行有效消毒，提高組培苗、外植體、移栽的成活率。2、組培苗生長(zhǎng)情況：隨機(jī)抽取100個(gè)香蕉外植體為樣本，將實(shí)施例1-3和對(duì)照組1的香蕉外植體的染菌情況；隨機(jī)抽取100個(gè)香蕉生根苗為樣本，將實(shí)施例1-3和對(duì)照組2、對(duì)照組3的生根苗的根系生長(zhǎng)情況進(jìn)行對(duì)比，統(tǒng)計(jì)生根苗的根數(shù)、測(cè)量生根苗的根長(zhǎng)和根粗具體情況見(jiàn)表2。表2組培苗生長(zhǎng)情況表樣本源染菌數(shù)(株)平均根長(zhǎng)cm最長(zhǎng)跟cm平均根粗mm最粗根mm根數(shù)實(shí)施例185.448.470.560.707.12實(shí)施例275.428.560.540.726.91實(shí)施例355.418.450.560.717.02對(duì)照組1205.228.010.510.696.98對(duì)照組292.113.120.200.344.15對(duì)照組3145.328.980.500.716.97實(shí)施例1-3的染菌數(shù)明顯低于對(duì)照組1，說(shuō)明植物處理液能對(duì)外植體進(jìn)行消毒，提高植物外植體成活率；實(shí)施例1-3、對(duì)照組1、對(duì)照組3的根長(zhǎng)、根粗、根數(shù)明顯大于對(duì)照組2，說(shuō)明木薯酒精廢液能明顯提高香蕉幼苗的質(zhì)量。綜上所述，本發(fā)明的組織培養(yǎng)方法是一種能提香蕉外植體成活率，不會(huì)對(duì)外植體進(jìn)行侵害，同時(shí)還能降低成本的組培方法。上述說(shuō)明是針對(duì)本發(fā)明較佳可行實(shí)施例的詳細(xì)說(shuō)明，但實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明的專利申請(qǐng)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3