本發(fā)明屬于園藝技術領域，具體涉及芍藥同一植株上開出兩種顏色花朵的方法。

背景技術：

芍藥是我國的傳統名花，芍藥科芍藥屬宿根花卉，在百花中位列“花相”，僅次于“花王”牡丹，歷來是繁榮興旺的象征。中國芍藥于公元536年傳入歐洲，19世紀初便開始在歐美等地盛行，主要用于庭院花卉和婚禮切花。目前，芍藥已在美國、法國、荷蘭、以色列、新西蘭、澳大利亞等50多個國家大規(guī)模產業(yè)化生產。我國芍藥栽培歷史悠久，迄今為止約有4000多年，因其花朵碩大、花色艷麗、花型美觀、花香馥郁等優(yōu)良的觀賞特性而在我國園林建設中得到了廣泛的應用，如芍藥專類園、花臺、花壇、花境、片植、叢植、群植等，是城鄉(xiāng)美化、綠化與凈化環(huán)境的良好植物。

我國芍藥品種資源豐富，迄今為止，已有超過600個品種，色澤包含了白色、粉色、紅色、紫色、墨色、藍色、綠色、黃色、復色等9大色系。但在現有芍藥品種中，在同一植株上只能長出單一顏色的花朵或者復色花(同一朵花兩種顏色)，這在當今社會已遠遠不能滿足人們對于花卉新、奇、特的需求。而如何能使一株芍藥開出兩種甚至更多不同顏色花朵，這是擺在生產者面前迫切需要解決的問題。在梅花上，胡一民在《怎樣使一株梅花開出兩種不同顏色的花？》一文中報道了兩種能使一株梅花開出兩種不同顏色花的方法，一種是選用復色梅花品種，另一種則采用人工嫁接法。中國發(fā)明專利(CN 100559930C)公開了一種同樣通過嫁接使在同一植株上長處兩種或多種不同顏色的桂花花朵。而在芍藥上，目前并沒有查找到關于這方面的報道，并且以上方法對于芍藥也并不適用。一方面，芍藥自身到目前為止還沒有培育出在同一植株上開出兩種不同顏色花朵的品種；另一方面，芍藥屬于草本，與梅花、桂花等木本植物相比，其嫁接的難度更大、成活率更低。因此，發(fā)明一種簡便的處理方法就顯得尤為必要。

技術實現要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種在同一芍藥植株上開出兩種顏色花朵的方法，該方法操作簡便、成功率高，可為芍藥在園林綠地中的進一步應用提供關鍵技術支撐。

本發(fā)明采用的技術方案是：

芍藥同一植株上開出兩種顏色花朵的方法，在芍藥展葉期至花蕾期的生長過程中，用濃度為1000mg·L^-1的調環(huán)酸鈣(Pro-Ca)溶液對芍藥同一植株的1/2枝葉進行噴霧。

具體地，約每周噴施一次，每次噴施均選擇在晴朗天氣的傍晚進行，并且植株葉片的正反面必須均勻噴到，直至溶液沿葉尖下流。

本發(fā)明方法主要是通過降低花瓣中類黃酮各組分的含量來使色澤變淡，而類黃酮的組分并沒有改變，從而能夠在芍藥同一植株上開出兩種顏色的花朵。

本發(fā)明的有益效果體現在：(1)該方法操作簡便，成功率高，成本低，易于在生產上推廣應用。(2)該方法實用效果顯著，能顯著改變芍藥花朵顏色，使同一芍藥植株上開出兩種顏色的花朵，使得植株更加絢麗多彩，提高了芍藥的觀賞價值和應用范圍。

附圖說明

圖1芍藥不同發(fā)育階段的花朵照片

S1，花蕾期；S2，初開期；S3，盛開期。

圖2花瓣色澤指標

圖3是2種樣品的HPLC圖

A，花色苷；B，花黃素；a1-a5為已鑒定的花色苷組分；f1-f3為已鑒定的花黃素組分。

具體實施方式

實施例1：

以芍藥品種‘魯紅’(購于山東菏澤春秋園藝中心)為試材來開展本研究工作，田間栽植于揚州大學園藝與植物保護學院芍藥種質資源圃(32°30′N，119°25′E)中：

1、調環(huán)酸鈣溶液的配制：本發(fā)明所使用的調環(huán)酸鈣(濃度為10％)為上海源葉生物科技有限公司生產，在配制調環(huán)酸鈣溶液時，直接使用去離子水配制成1000mg·L^-1，所有溶液現配現用。

2、田間處理：從芍藥植株露出地面展葉開始(2015年3月23日)，選擇生長狀況基本一致的植株50株，而后將每株的1/2枝葉進行掛牌標記，分別使用噴霧器對植株進行調環(huán)酸鈣溶液和去離子水(對照)的葉面噴霧處理，直至花蕾期(2015年4月28日)。每次噴施均選擇在晴朗天氣的傍晚進行，并且植株葉片的正反面必須均勻噴到，直至溶液沿葉尖下流。分別于2015年3月23日、3月31日、4月7日、4月14日、4月21日、4月28日各噴施一次，共6次，其余管理按照正常芍藥園的日常管理進行即可。

3、指標測定：

(1)花瓣色澤觀察：使用TC-P2A型色差計(北京光學儀器廠)進行色澤測定，用a*(紅綠偏差)值來衡量花瓣色澤的深淺。

(2)花瓣色素的定性與定量分析：稱取1.0g新鮮花瓣，溶于6mL 70％甲醇-0.1％HCl中，置于4℃下24h。將提取液通過0.22μm微孔濾膜過濾，供色素的定性、定量分析使用。

利用LCQ Deca XP MAX液質聯用色譜儀(HPLC-ESI-MSⁿ)進行色素的定性分析。色譜柱為C₁₈TSK gel ODS-80Ts QA(4.6mm×250mm，Tosoh Co.Ltd.，日本)。流動相：A，10％甲酸；B，甲醇:乙腈:水(10:40:50，體積比)。洗脫梯度為：0min，10％B；30min，20％B；50min，30％B；60min，40％B；65min，50％B；70min，50％B；75min，10％B；90min，10％B。流速為0.8mL/min，柱溫保持30℃，進樣量為20μL。質譜分析條件：電噴霧離子化(ESI)，離子阱分析器，正離子檢測模式，選擇離子檢測(SIM)方式監(jiān)測MS²碎片，氮氣是干燥和噴霧氣體，全質量掃描，掃描范圍(m/z)50-1500u，毛細管電壓3500V，噴霧器壓力45Pa；毛細管出口電壓500V，干燥溫度300℃。

利用Agilent 1200-6460QQQ的HPLC-DAD分析系統進行色素的定量分析，包括柱溫箱(TCC-1260)及光電二極管陣列檢測器(DDA-1260)。色譜條件與上述色素定性分析條件一致?；ㄉ铡⒒S素的檢測波長分別為525nm、350nm，此外還對每個吸收峰在200～800nm范圍內進行全波長掃描。花瓣中類黃酮含量采用標準品半定量法，以mg/g新鮮花瓣計，分別計算花黃素相對于蘆丁和花色苷相對于錦葵素-3,5-O-二葡萄糖苷的含量，把兩者相加便得到總類黃酮含量。

4、結果：

(1)花瓣色澤

如圖1所示，在芍藥花朵的花蕾期、初開期、盛開期3個發(fā)育階段，調環(huán)酸鈣處理的花瓣色澤與對照相比均發(fā)生了改變，其a*值一直低于對照，并且兩者均呈現下降趨勢(圖2)。這表明，調環(huán)酸鈣處理能夠使芍藥花瓣色澤變淺，在同一芍藥植株上能開出深、淺兩者顏色的花朵，這與我們的視覺效果一致。

(2)花瓣色素的定性與定量分析

芍藥花瓣中呈色色素主要是類黃酮，根據類黃酮的紫外-可見吸收特征，分別檢測花瓣在525nm波長下的花色苷和350nm波長下的花黃素。如圖3所示，兩個樣品中出現的色譜峰基本一致，只是在峰面積上存在差異，調環(huán)酸鈣處理后花瓣中色素的峰面積基本都低于對照，其主要色譜峰的鑒定結果列于表1。

表1 鑒定的花色素成分

在525nm波長下檢測到的色譜峰共有5個得到鑒定，峰a1的[M+H]⁺m/z為611.18，碎片離子m/z為448.99和287.29。m/z 287表示矢車菊色苷元，由m/z 611失去2個葡萄糖基(質量數為162)的中性碎片而形成，表明該化合物為含有2個葡萄糖苷的矢車菊素，結合其光譜數據和文獻報道的質譜數據，推定該化合物為矢車菊色素-3,5-O-二葡萄糖苷。相似地，峰a3的[M+H]⁺m/z為625.22，碎片離子m/z為463.01和301.24。m/z 301表示芍藥色素苷元，由m/z 625失去2個葡萄糖基(質量數為162)的中性碎片而形成，表明該化合物為含有2個葡萄糖苷的芍藥色素，結合其光譜數據和文獻報道的質譜數據，推定該化合物為芍藥色素-3,5-O-二葡萄糖苷。依照同樣的方法，a2、a4、a5、f1、f2、f3分別為天竺葵色素-3,5-O-二葡萄糖苷、芍藥色素-3-O-葡萄糖苷、芍藥色素-3-O-丙二酰葡萄糖苷-5-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-丙二酰葡萄糖苷-7-O-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-半乳糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷。

表2花色素含量(ug/g FW)

以相關標樣為參照對類黃酮的含量進行相對定量，就組分而言，芍藥色素-3,5-O-二葡萄糖苷是Pro-Ca處理和對照花瓣中花色苷的主要成分(分別在花色苷中占52.97％和48.67％)，并且兩者中的每個色素成分均隨著花朵發(fā)育基本呈現下降趨勢。與此同時，各組分在對照中的含量基本都高于Pro-Ca處理。就總量而言，無論是花色苷還是花黃素，它們在Pro-Ca處理花瓣的總量均低于對照，分別為對照總量的51.43％和29.12％。此外，Pro-Ca處理花瓣的類黃酮總量也比對照要低，約為對照的35％。