本發(fā)明屬于昆蟲性誘劑技術領域，具體涉及一種具有增效作用的紅棉鈴蟲性誘劑。

背景技術：

夜蛾科昆蟲有聽器，前翅肘脈顯若4支，多有副室的蛾類。本科昆蟲通稱夜蛾。全世界已知約2萬種，中國已知約1600種。成蟲均在夜間活動，趨光性強，多數(shù)種類對糖、酒、醋混合液表現(xiàn)有強的趨性。少數(shù)種類喙端鋒利，能刺破成熟的果實。絕大多數(shù)幼蟲植食性，為害方式多種多樣，有的鉆入地下為害，咬斷植株根莖、幼苗，如地老虎類；有的蛀莖或蛀果為害，如棉鈴蟲；有的則暴露在寄主表面為害，如粘蟲等。

昆蟲性信息素是一種在成蟲及交配過程，向體外釋放的能夠吸引同種異性昆蟲前去交配，起到通訊聯(lián)絡作用的微量化學物質(zhì)。用人工合成的性信息素或類似物防治害蟲時，通常稱為昆蟲性引誘劑，簡稱性誘劑。利用信息素防治害蟲具有高效、無毒、不傷害益蟲、不污染環(huán)境等優(yōu)點，國內(nèi)外對這一新技術的研究和應用都很重視。近年來，隨著人們對昆蟲與植物間化學相互作用的認識日益深化，利用化學生態(tài)原理，運用植物次生代謝產(chǎn)物等功能化合物調(diào)節(jié)、控制有害生物以保護目標植物的研究得到了長足的發(fā)展。研究表明，寄主植物自身產(chǎn)生并釋放的次生物質(zhì)能調(diào)控植食性昆蟲多種行為，諸如定向、交配產(chǎn)卵、取食、逃避、聚集、傳粉等行為(Fettig et al.,2012,Lait et al.,2003；Pan et al.,2013；吳利民等，2012)。但前期有關昆蟲引誘劑的研究主要集中在植物源揮發(fā)物與昆蟲信息素在害蟲防治中的單方面應用(Negri and Bernik,2008；Szendrei et al.,2011,Tooker et al.,2002)。近年來許多文獻報道，植物源物質(zhì)與昆蟲信息素協(xié)同對昆蟲行為起調(diào)控作用，證明植物源揮發(fā)物對試蟲性誘劑有顯著增效作用(Douglas et al,.1993；魯玉杰等，2003；王桂花等，2013)。用性信息素或性誘劑防治害蟲是一種無公害防治害蟲的新技術。雖然國內(nèi)外已有數(shù)百種昆蟲性誘劑得以應用，國內(nèi)外對紅棉鈴蟲性誘劑的研究僅有少量報道，且所制性誘劑的誘蛾效果很差，月累計誘蛾量不足20頭，亟需一種對紅棉鈴蟲高效的性誘劑。

技術實現(xiàn)要素：

針對現(xiàn)有技術中存在的問題，本發(fā)明的目的在于提供一種具有增效作用的紅棉鈴蟲性誘劑。

本發(fā)明采取的技術方案為：

一種具有增效作用的紅棉鈴蟲性誘劑，其特征在于，性誘劑與增效劑的重量比為(14-22):1，所述增效劑為順7-十二碳烯醋酸酯、2,6-二叔丁基對甲酚和乙酸反式-2-乙烯酯按照重量比2:3:2組成的混合物，所述性誘劑為L-異亮氨酸甲酯、反II-十四碳烯醋酸酯和1-氨基環(huán)己烷甲酸按照重量配比為1:1:3組成的混合物。

進一步的，所述的性誘劑:增效劑按照重量比為18:1組成的混劑，雌蟲的昆蟲觸角電位信號(EAG)反應值為5.392±0.13mV。

進一步的，所述的性誘劑:增效劑按照重量比為20:1組成的混劑，雄蟲的昆蟲觸角電位信號(EAG)反應值為8.34±0.57mV。

進一步的，所述的性誘劑:增效劑＝20:1時，每誘芯每日引誘雌蟲數(shù)達到最大值為26.61±0.61頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到332％。

進一步的，所述的性誘劑:增效劑＝18:1時，每誘芯每日引誘雄蟲數(shù)達到最大值為343.32±3.81頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到205％。

進一步的，在誘捕紅棉鈴蟲夜蛾科昆蟲中的應用。

利用具有增效作用的紅棉鈴蟲性誘劑的嗅覺反應測試方法，其特征在于，具體包括如下步驟：

(1)刺激樣品的配制

植物源揮發(fā)物單劑的配制:各化合物均用甲醇作溶劑，配置成0.1，1，10μg/μl3個濃度，以甲醇作對照；

植物源揮發(fā)物與性誘劑混劑的配制：本發(fā)明將順7-十二碳烯醋酸酯、2,6-二叔丁基對甲酚和乙酸反式-2-乙烯酯按照重量比2:3:2比例混合配制成增效劑，將L-異亮氨酸甲酯、反II-十四碳烯醋酸酯和1-氨基環(huán)己烷甲酸按照重量配比為1:1:3比例混合配制成性誘劑，以1μg/μl的母液，按照性誘劑:增效劑＝14:1、16:1、18:1、20:1、22:1的比例混合，所配混劑用于室內(nèi)電生理及行為測試；

(2)通過“Y”型嗅覺儀測定紅棉鈴蟲對各種試劑的敏感性大小，嗅覺儀置于暗室，室溫27℃，空氣流速500mL/min，試驗中取10ul各試劑滴加在濾紙條上，并放入“Y”型管側(cè)臂進氣口處，甲醇做對照，每組重復后對調(diào)試驗組和對照組位子，避免試驗誤差；每次試驗后換新的濾紙條，每種試劑3次重復，同種試劑測完后更換“Y”型管，用過的“Y”型管用丙酮清洗，60℃烘干；每組試驗挑取10頭當日出土且活性強的試蟲，放入“Y”型管主臂端口，10min后觀察試蟲分布情況，并計算反應率、相對反應率、反應系數(shù)進行數(shù)據(jù)分析；

反應率＝[(味源管中蟲數(shù)+對照管中蟲數(shù))/測試總蟲數(shù)]；

選擇反應率＝[味源管中蟲數(shù)/(味源管中蟲數(shù)+對照管中蟲數(shù))]。

增效劑與紅棉鈴蟲性誘劑組成的混劑的田間誘蟲試驗方法，其特征在于，具體包括如下步驟：選擇田間試驗基地，每60m設置一個誘捕器，所述誘捕器由頂蓋、漏斗型裝置、交叉擋板和收集裝置組成，其中交叉擋板設于頂蓋下方，漏斗裝置設于交叉擋板之間，收集裝置設于漏斗裝置下方，誘捕器(頂端)的懸掛高度為2.0m，用360ug/ul的母液將性誘劑:增效劑配制成14:1、16:1、18:1、20:1、22:1五個不同比例的誘芯，所述誘芯載體主要成分為脫脂棉，濃度為360mg/誘芯，誘芯在冰箱集中冷凍保存，以植物源揮發(fā)物質(zhì)單劑和性誘劑作為對照組，每天每誘芯三個重復，選取五個出土日數(shù)據(jù)進行分析。每天誘捕結(jié)束后，記錄各誘捕器誘蟲數(shù)量，計算誘芯對性誘劑的增效效果，計算方法如下：

本發(fā)明的有益效果為：

本發(fā)明的紅棉鈴蟲性誘劑中的性誘劑為L-異亮氨酸甲酯、反II-十四碳烯醋酸酯和1-氨基環(huán)己烷甲酸按照重量配比為1:1:3比例混合配制成，針對夜蛾科昆蟲具有引誘作用，其含有紅棉鈴蟲通過對比寄主植物葉片揮發(fā)物質(zhì)的有效成 分，將順7-十二碳烯醋酸酯、2,6-二叔丁基對甲酚和乙酸反式-2-乙烯酯按照重量比2:3:2比例混合配制成增效劑，使其與性誘劑相結(jié)合，從而達到降低成本，提高害蟲誘捕率等目的，通過觸角電位反應(electroantennogram,EAG)，并結(jié)合“Y”型嗅覺儀篩選出紅棉鈴蟲比較敏感的化學物質(zhì)，測試寄主植物揮發(fā)物質(zhì)對性誘劑引誘紅棉鈴蟲的增效作用，結(jié)果表明增效劑能引起雌雄蟲較強的電位反應和嗅覺反應；將其與性誘劑以不同比例混合后，行為學試驗顯示雌雄蟲對混劑的EAG和嗅覺反應值較好。

田間誘集試驗顯示增效劑對性誘劑誘芯存在協(xié)同增效作用，當性誘劑:增效劑＝18:1時，每誘芯每日引誘雌蟲數(shù)達到最大值為26.61±0.61頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到332％；性誘劑:增效劑＝20:1時，每誘芯每日引誘雄蟲數(shù)達到最大值為343.32±3.81頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到205％。本專利為協(xié)同利用植物揮發(fā)性物質(zhì)和昆蟲性信息素來監(jiān)控和防治紅棉鈴蟲提供了依據(jù)。

本發(fā)明研發(fā)的利用具有增效作用的紅棉鈴蟲性誘劑，無論是用來做蟲情測報還是用誘捕法和干擾交配法直接防治紅棉鈴蟲蟲害，均有利于充分發(fā)揮生物防治的威力，在保護天敵的同時提高防治效果，另外避免施用化學農(nóng)藥可減少污染，保護環(huán)境，經(jīng)濟效益、社會效益和生態(tài)效益顯著。使用劑量極微，可把害蟲誘集在很小的范圍內(nèi)予以處理。作用具高度專屬性，不誤傷其它有益生物。不產(chǎn)生抗性，并在降低繁殖力的同時降低其種群數(shù)量，從而取得綜合紡治效果。

具體實施方式

下面結(jié)合具體的實驗以及結(jié)果分析進一步說明本發(fā)明。

1、材料與方法

(1)供試昆蟲及試劑

供試昆蟲：紅棉鈴蟲采自山東省青島市某花生研究所試驗基地，采回的紅棉鈴蟲成蟲雌雄分開后，分別在有通氣孔的培養(yǎng)箱中以新鮮榆樹葉飼養(yǎng)，培養(yǎng)箱中土壤濕度保持在18％-20％之間。供試昆蟲在試驗前饑餓處理24小時。

供試試劑：試驗所用試劑購于Sigma公司，各試劑純度均在95％以上。具體試劑見表1。

行為反應測試儀器：(1)觸角電位儀由微動操縱器INR-5、數(shù)據(jù)采集控制器IDAC-4、氣味刺激控制裝置cs-05和觸角電位記錄顯示輸出裝置組成，產(chǎn)自德國Syntech公司。(2)嗅覺儀由以下幾部分組成:ACO-006型電磁式空氣壓縮機(廣東省日生集團有限公司生產(chǎn))、活性炭空氣凈化裝置及LZB-4型玻璃轉(zhuǎn)子流量計(常州雙環(huán)熱工儀表有限公司生產(chǎn))、250ml特氏多孔濾瓶(內(nèi)裝水)、三通管、Y型嗅覺儀(兩臂長12cm，基管長20cm，兩臂夾角45°，管徑3.5cm)。誘芯和誘捕器：試驗中采用的誘芯及其配套的誘捕器均由山東花生研究所研制提供。誘芯載體主要成分為脫脂棉，濃度為360mg/誘芯。誘捕器由頂蓋、漏斗型裝置、交叉擋板和收集裝置組成，其中交叉擋板設于頂蓋下方，漏斗裝置設于交叉擋板之間，收集裝置設于漏斗裝置下方，具有強揮發(fā)性的誘芯在冰箱集中冷凍保存。

(2)試驗方法

1)刺激樣品的配制

植物源揮發(fā)物單劑的配制:各化合物均用甲醇作溶劑，配置成0.1，1，10μg/μl3個濃度，以甲醇作對照；

植物源揮發(fā)物與性誘劑混劑的配制：本發(fā)明將順7-十二碳烯醋酸酯、2,6-二叔丁基對甲酚和乙酸反式-2-乙烯酯按照重量比2:3:2比例混合配制成增效劑，將L-異亮氨酸甲酯、反II-十四碳烯醋酸酯和1-氨基環(huán)己烷甲酸按照重量配比為1:1:3比例混合配制成性誘劑，以1μg/μl的母液，按照性誘劑:增效劑＝14:1、16:1、18:1、20:1、22:1的比例混合，所配混劑用于室內(nèi)電生理及行為測試；

2)觸角處理及EAG測試程序

參考zhou等紅棉鈴蟲觸角處理方法(Zhou et al.,2009)。用微量進樣器抽取10ul各化學試劑樣品，滴加到對折濾紙片上(25mm×8mm)，待試劑揮發(fā)5min后用鑷子將濾紙片放入巴斯德管中，封口膜封住巴斯德管兩端，樣品在管中揮發(fā)5min后測定，刺激歷期為500ms，刺激間隔約30s。持續(xù)氣流的流速與刺激氣流的流速同為4mL/s，每頭蟲只取用1根觸角，每個處理測試6根觸角，每根觸角重復3次，對照與處理組的測定交替進行，以甲醇為空白對照。

3)嗅覺反應測試

本專利通過“Y”型嗅覺儀測定紅棉鈴蟲對各種試劑的敏感性大小。嗅覺儀置于暗室，室溫27℃，空氣流速500mL/min。試驗中取10ul各試劑滴加在濾紙條上，并放入“Y”型管側(cè)臂進氣口處，甲醇做對照，每組重復后對調(diào)試驗組和對照組位子，避免試驗誤差。每次試驗后換新的濾紙條，每種試劑3次重復，同種試劑測完后更換“Y”型管，用過的“Y”型管用丙酮清洗，60℃烘干。每組試驗挑取10頭當日出土且活性強的試蟲，放入“Y”型管主臂端口，10min后觀察試蟲分布情況，并計算反應率、相對反應率、反應系數(shù)進行數(shù)據(jù)分析。

反應率＝[(味源管中蟲數(shù)+對照管中蟲數(shù))/測試總蟲數(shù)]；

選擇反應率＝[味源管中蟲數(shù)/(味源管中蟲數(shù)+對照管中蟲數(shù))]。

4)植物源揮發(fā)物與性誘劑混劑的田間誘蟲試驗

田間試驗在山東省花生研究所某試驗基地進行。每60m設置一個誘捕器，誘捕器(頂端)的懸掛高度為2.0m。用360ug/ul的母液(李曉等，2012)將性誘劑與增效劑配制成14:1、16:1、18:1、20:1、22:1五個不同比例的誘芯，以植物源揮發(fā)物質(zhì)單劑和性誘劑作為對照組，每天每誘芯三個重復，選取五個出土日數(shù)據(jù)進行分析。每天誘捕結(jié)束后，記錄各誘捕器誘蟲數(shù)量，計算誘芯對性誘劑的增效效果。計算方法如下：

1.5數(shù)據(jù)處理

使用spss 16.0軟件對數(shù)據(jù)進行計算分析，多重比較采用Duncan氏新復極差法。

2、結(jié)果

(1)寄主植物揮發(fā)物質(zhì)對性誘劑的增效試驗

由2.1可知，雌雄紅棉鈴蟲對增效劑的EAG反應值和嗅覺反應值均高于其 他試劑，并且雌雄紅棉鈴蟲對1ug/ul濃度的試劑有較高的敏感性，因此本專利選取增效劑，分別與性誘劑按不同比例(m:m)配制成1ug/ul的混劑(以下簡稱混劑)，進行增效測試。

1)混劑對紅棉鈴蟲觸角電位反應的影響

紅棉鈴蟲雌雄蟲對不同配比組的EAG反應值不同(表1)。當性誘劑：增效劑為18:1時，雌蟲EAG反應值顯著高于其它配比組，為5.392±0.13mV。雄蟲對20:1的性誘劑：增效劑混劑的EAG反應值顯著高于其他配比組，為8.34±0.57mV。

表1紅棉鈴蟲對性誘劑與寄主植物揮發(fā)物質(zhì)混合試劑的EAG反應

表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標準誤。同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)Duncan氏新復極差法檢驗在P<0.05水平差異顯著。

*表中數(shù)值均為以性誘劑作為CK的EAG值。

2)混劑對紅棉鈴蟲嗅覺反應的影響

由表5可以看出，所選試蟲的反應率均在80％以上，且各處理間沒有顯著性差異，說明試蟲健康，本研究實驗結(jié)果可靠。從選擇反應率可以看出，紅棉鈴蟲對不同配比組的嗅覺反應值不同。當性誘劑：增效劑為18:1和20:1時，雌蟲的嗅覺反應值最高，分別為0.93±0.06和0.96±0.06，顯著高于其他配比組。

表2紅棉鈴蟲對性誘劑與寄主植物揮發(fā)物質(zhì)混合試劑的嗅覺反應*

表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標準誤。同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)Duncan氏新復極差法檢驗在P<0.05水平差異顯著。

*表中數(shù)值均為以性誘劑作為CK的嗅覺反應值。

(3)田間成蟲誘捕效果分析

綜合2.2EAG反應和嗅覺反應結(jié)果，雌雄紅棉鈴蟲對增效劑各混合試劑敏感性均高于其他配組，因此將性誘劑與增效劑以各種比例混合，進行田間試驗。

由表3可知，各混劑誘捕紅棉鈴蟲成蟲的數(shù)量均顯著高于乙酸反式-2-乙烯酯單劑或性誘劑。當性誘劑：增效劑＝18:1時，每誘芯每日引誘雌蟲數(shù)達到最大值，為26.61±0.61頭，顯著高于性誘劑的23.67±0.45頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到332％。針對雄蟲而言，當性誘劑：增效劑＝20:1時，每誘芯日誘蟲量最大，為343.32±3.81頭，顯著高于性誘劑的109±2.61頭，增效劑對性誘劑的增效效果達到205％。

表3紅棉鈴蟲性誘劑與植物源揮發(fā)物混劑的田間誘捕效果分析

表中數(shù)據(jù)為平均數(shù)±標準誤。同列數(shù)據(jù)后不同字母表示經(jīng)Duncan氏新復極差法檢驗在P<0.05水平差異顯著。

以上所述并非是對本發(fā)明的限制，應當指出：對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發(fā)明實質(zhì)范圍的前提下，還可以做出若干變化、改型、添加或替換，這些改進和潤飾也應視為本發(fā)明的保護范圍。