一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)及其生根移栽的方法
【專利摘要】一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)及其生根移栽的方法，屬于植物無性繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】。其特征在于：所述基質(zhì)為泥炭、珍珠巖和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕。其生根移栽主要包括基質(zhì)的選取與配制、接種、培養(yǎng)、煉苗移栽等步驟。本發(fā)明的有益效果是：（1）選用一種基質(zhì)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的瓊脂固體培養(yǎng)基，不影響光皮樺組培苗的正常生長，煉苗移栽成活率達(dá)到95%；（2）本方法操作簡便，所采用的培養(yǎng)基及基質(zhì)成本低廉，易于獲取，降低了生產(chǎn)成本；（3）由無菌組織培養(yǎng)得到的光皮樺組培苗遺傳性狀穩(wěn)定，為光皮樺的遺傳改良提供基礎(chǔ)。
【專利說明】一種光皮枠組培苗生根基質(zhì)及其生根移栽的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明屬于植物無性繁殖【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種組培苗生根基質(zhì)及生根移栽方法。

【背景技術(shù)】
[0002]光皮樣IuminiferaH.Wink.),樣木科(Betulaceae)樣木屬落葉喬木，廣泛分布于我國南方，是一種用途廣泛的珍貴闊葉用材樹種。光皮樺材質(zhì)優(yōu)良，生長速度快，經(jīng)濟(jì)價值高，多數(shù)種質(zhì)童期較短(1.5年)，在材性、成花等性狀上具有豐富變異，是林木遺傳研究的優(yōu)良材料。
[0003]組織培養(yǎng)技術(shù)已經(jīng)成為植物品種快繁的主要手段之一，選用光皮樺的優(yōu)良材料，利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行無性繁殖，簡便、迅速且繁殖速度快，既可保持苗木的優(yōu)良遺傳特性，還可以大規(guī)模生產(chǎn)，對光皮樺的良種快繁與推廣具有重要意義。
[0004]以往光皮樺組織培養(yǎng)都是使用瓊脂固體培養(yǎng)基，雖然光皮樺組培再生體系日趨完善，但是通過各地生產(chǎn)實(shí)踐狀況分析發(fā)現(xiàn)，瓊脂固體培養(yǎng)基上生根的光皮樺組培苗移栽時根部容易損傷、根系易受微生物侵染腐爛，導(dǎo)致其移栽成活率很低，成為光皮樺優(yōu)良種苗擴(kuò)繁及大規(guī)模應(yīng)用的瓶頸。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)，以及利用該基質(zhì)進(jìn)行生根移栽的方法。
[0006]解決上述技術(shù)問題的技術(shù)方案是按以下步驟進(jìn)行的:
一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于主要包括如下步驟:)基質(zhì)的選取與配制；2)接種；3)培養(yǎng)；4)煉苗移栽；
所述步驟I)中基質(zhì)的主要組分為泥炭、珍珠巖和蛭石；將基質(zhì)混勻后用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕；所述步驟I)中基質(zhì)的主要組分為泥炭、珍珠巖和蛭石；將基質(zhì)混勻后用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕；所述液體培養(yǎng)基的PH值為5.88-5.92。
[0007]作為優(yōu)選，所述液體培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L。
[0008]作為優(yōu)選，MS液體培養(yǎng)基的配方為=KNO3:1900mg/L ；NH4NO3:1650 mg/L ；KH2PO4:170 mg/L ；MgS04*7H20:370 mg/L ；CaCl2.2Η20:440 mg/L ；K1:0.83 mg/L ；H3BO3:6.2 mg/L ；MnSO4*4H20:22.3 mg/L ；ZnSO4*7 H2O:8.6 mg/L ；Na2MoO4*2H20:0.25 mg/L ；CuS04*5 H2O:0.025 mg/L ；CoC12*6H20:0.025 mg/L ；Na2.EDTA:37.25 mg/L ;FeS04.7H20:27.85 mg/L ;肌醇:100 mg/L ;甘氨酸:2 mg/L ;鹽酸硫胺素:0.1 mg/L ;鹽酸卩比唆醇:0.5 mg/L ;煙酸:0.5mg/L ο
[0009]作為優(yōu)選，所述基質(zhì)中泥炭:珍珠巖:蛭石=3:1:1 (體積比)。
[0010]所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于:所述基質(zhì)的配制方法如下: A:取泥炭、珍珠巖和蛭石，按泥炭:珍珠巖:蛭石=3:1:1的體積比將基質(zhì)混勻，裝進(jìn)提前洗凈晾干的組培瓶中，基質(zhì)厚度控制在3-4cm ；
B:按照MS培養(yǎng)基配方，配好液體培養(yǎng)基，加30g/L的蔗糖，完全溶解后，調(diào)節(jié)pH值至5.88-5.92 ；
C:取B中的液體培養(yǎng)基浸濕組培瓶中的基質(zhì)，蓋好瓶蓋，滅菌；滅菌條件為121 °C20min ；
D:滅菌后的培養(yǎng)基確保蓋子擰緊后放置在接種室或培養(yǎng)室，冷卻后使用。
[0011]所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟2)中的接種方法為:取光皮樺組培無菌苗，每片葉片留一半，把莖段剪成1.5-2cm的小段，每一段必須包含至少I個腋芽，正向插到基質(zhì)中，每瓶3-4段，然后蓋好瓶蓋；上述操作均在無菌條件下進(jìn)行。
[0012]所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟3)中的培養(yǎng)條件為:將接種莖段的培養(yǎng)瓶整齊擺放在培養(yǎng)架上，每瓶之間的間隔不少于2cm，以保證充足的光照；培養(yǎng)室條件是:光照強(qiáng)度45 μ mo I.m 2.s S光照時間16h,溫度25±2°C。
[0013]所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟4)中煉苗移栽的方法如下:
A:取培養(yǎng)2個月后的組培苗進(jìn)行在溫室內(nèi)進(jìn)行煉苗，條件為自然散射光，溫度25-28O，濕度 50-70% ；
B:將組培瓶移至溫室置于自然散射光下，采用逐漸開瓶的方式煉苗5-7d ;首先，不打開瓶蓋煉苗l-2d，然后將瓶蓋由打開1/5至完全打開，若發(fā)現(xiàn)植株葉子出現(xiàn)萎蔫，再將瓶蓋蓋回，使組培苗慢慢適應(yīng)外界環(huán)境，此過程中可適量向瓶內(nèi)灑些無菌水，防止植株萎蔫；
C:待瓶口完全打開后，直接帶基質(zhì)移出組培苗，分株后移栽于育苗杯或無紡布袋，分株時注意不要傷到根部；移栽前，育苗杯或無紡布袋中加入適量的黃泥、泥炭與珍珠巖混合基質(zhì)，澆透水備用；
D:移栽后在溫室中培養(yǎng)至組培苗成活、生長穩(wěn)定后，移至溫室外，進(jìn)行正常栽培管理。
[0014]所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述黃泥、泥炭與珍珠巖混合基質(zhì)的體積配比為:黃泥:泥炭與珍珠巖=2:1:1。
[0015]一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)，其特征在于:該基質(zhì)為泥炭、珍珠巖和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕。
[0016]所述的一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)，其特征在于所述基質(zhì)的體積配比為:泥炭:珍珠巖:蛭石==3:1:1 ;所述1^+蔗糖的液體培養(yǎng)基pH值5.88-5.92，蔗糖濃度為30g/L。
[0017]由于采用了上述技術(shù)方案，與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是:(1)選用一種基質(zhì)代替?zhèn)鹘y(tǒng)的瓊脂固體培養(yǎng)基，不影響光皮樺組培苗的正常生長，而煉苗移栽成活率卻可以達(dá)到95% ; (2)本方法操作簡便，所采用的培養(yǎng)基及基質(zhì)成本低廉，易于獲取，降低了生產(chǎn)成本；(3)由無菌組織培養(yǎng)得到的光皮樺組培苗遺傳性狀穩(wěn)定，為光皮樺的遺傳改良提供基礎(chǔ)。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0018]圖1為剛接種的光皮樺帶芽莖段； 圖2為培養(yǎng)2個月的光皮樺基質(zhì)生根組培苗；
圖3為煉苗后剛移栽的光皮樺組培苗；
圖4為移栽后I個月的光皮樺基質(zhì)生根苗。

【具體實(shí)施方式】
[0019]下面通過具體實(shí)施例，進(jìn)一步詳細(xì)介紹本發(fā)明。
[0020]實(shí)施例1
(I)基質(zhì)配方和配制
光皮樺組培苗生根基質(zhì)配方:泥炭:珍珠巖:蛭石=3:1:1 (體積比)，以MS+30g/L蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕；
具體配制方法
A、按照比例將基質(zhì)混勻，裝進(jìn)提前洗凈晾干的組培瓶中，基質(zhì)厚度控制在3-4cm；
B、按照MS培養(yǎng)基配方，配好液體培養(yǎng)基，加30g/L的蔗糖，完全溶解后，調(diào)節(jié)pH值至5.88-5.92 ；
C、取30ml左右的液體培養(yǎng)基浸濕組培瓶中的基質(zhì)，基質(zhì)的量30 ml左右，蓋好蓋子，在瓶子上注明標(biāo)簽，高溫高壓滅菌，滅菌條件為121°C 20min ；
D、滅菌后的培養(yǎng)基確保蓋子擰緊后放置在接種室或培養(yǎng)室，冷卻后可以使用，一般不要超過2周；
MS 培養(yǎng)基配方如下:大量元素:KN03:1900mg/L ；NH4NO3:1650 mg/L ；KH2PO4:170 mg/L ；MgSO4*7H20:370 mg/L ；CaCl2.2Η20:440 mg/L ；
微量元素:KI:0.83 mg/L ；H3BO3:6.2 mg/L ；MnSO4*4H20:22.3 mg/L ；ZnSO4*7 H2O:8.6mg/L ；Na2MoO4*2H20:0.25 mg/L ；CuSO4*5 H2O:0.025 mg/L ；CoC12*6H20:0.025 mg/L ；
鐵鹽:Na2.EDTA:37.25 mg/L ;FeS04.7H20:27.85 mg/L ；
有機(jī)成分:肌醇:100 mg/L ;甘氨酸:2 mg/L ;鹽酸硫胺素:0.1 mg/L ;鹽酸批唆醇:0.5mg/L ;煙酸:0.5 mg/L ο
[0021]實(shí)施例2:
(I)接種
在本實(shí)驗室內(nèi)選定一個光皮樺無性系G49-3，2014年7月16日選取該無性系生長健壯的組培苗，組培苗莖段需略有木質(zhì)化，不能過于幼嫩。在超凈工作臺上取出幼苗，剪掉近根部較老莖段，每片葉片只留半張，把莖段剪成包含至少一個腋芽的1.5-2cm小段，接進(jìn)提前配好并滅好菌的基質(zhì)培養(yǎng)基中，在16h光照，25±2°C溫度條件下培養(yǎng)。
[0022](2)煉苗
2014年9月15日，選取高度在5-7cm且生長健壯的基質(zhì)培養(yǎng)組培苗，在自然散射光，溫度25-28 °C，濕度50-70%的溫室內(nèi)煉苗；。
[0023]溫室煉苗Id后，開蓋1/5 Ih后，發(fā)現(xiàn)組培苗葉片出現(xiàn)萎蔫，立即重新蓋好瓶蓋，約2h后幼苗恢復(fù)正常；
重新開蓋，向組培瓶內(nèi)灑少量無菌水，每天逐漸增加開蓋程度并注意保濕；
2014年9月19日，打開蓋子，嘗試讓組培苗完全開蓋生長；次日發(fā)現(xiàn)組培苗未出現(xiàn)萎蔫，生長狀況良好。
[0024](3)移栽
2014年9月20日，提前拌好基質(zhì)裝進(jìn)育苗杯中，澆透水備用，基質(zhì)配比為黃泥:泥炭與珍珠巖=2:1:1 (體積比)；
帶基質(zhì)直接取出組培苗，分株后移栽進(jìn)育苗杯，做好標(biāo)記，在溫室內(nèi)培養(yǎng)；
5-7d后，組培苗未出現(xiàn)萎蔫、爛根，生長正常，將其移至室外培養(yǎng)；
30d后，統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，幼苗成活率可以達(dá)到95 %。
[0025]本方法的關(guān)鍵是接種時以基質(zhì)培養(yǎng)基代替瓊脂固體培養(yǎng)基，并確保無菌條件；煉苗初期要時刻觀察，一旦幼苗葉片萎蔫應(yīng)立即蓋好瓶蓋；移栽初期仍然需要足夠的溫度和空氣濕度。
【權(quán)利要求】
1.一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于主要包括如下步驟:1)基質(zhì)的選取與配制； 2)接種； 3)培養(yǎng)； 4)煉苗移栽； 所述步驟I)中基質(zhì)的主要組分為泥炭、珍珠巖和蛭石；將基質(zhì)混勻后用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕；所述液體培養(yǎng)基的pH值為5.88-5.92。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于:所述液體培養(yǎng)基中蔗糖濃度為30g/L ； MS 液體培養(yǎng)基的配方為=KNO3:1900mg/L ；NH4NO3:1650 mg/L ；KH2PO4:170 mg/L ；MgSO4.7Η20:370 mg/L ；CaCl2*2H20:440 mg/L ；K1:0.83 mg/L ；H3BO3:6.2 mg/L ；MnS04*4H20:22.3 mg/L ；ZnSO4*7 H2O:8.6 mg/L ；Na2MoO4*2H20:0.25 mg/L ；CuSO4*5 H2O:0.025 mg/L ；CoC12.6H20:0.025 mg/L ；Na2.EDTA:37.25 mg/L ;FeS04.7H20:27.85 mg/L ;肌醇:100 mg/L ；甘氨酸:2 mg/L ;鹽酸硫胺素:0.1 mg/L ;鹽酸批卩多醇:0.5 mg/L ;煙酸:0.5 mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于:所述基質(zhì)體積配比為泥炭:珍珠巖:蛭石=3:1:1。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于:所述基質(zhì)的配制方法如下: A:取泥炭、珍珠巖和蛭石，按泥炭:珍珠巖:蛭石=3:1:1的體積比將基質(zhì)混勻，裝進(jìn)提前洗凈晾干的組培瓶中，基質(zhì)厚度控制在3-4cm ； B:按照MS培養(yǎng)基配方，配好液體培養(yǎng)基，加30g/L的蔗糖，完全溶解后，調(diào)節(jié)pH值至5.88-5.92 ； C:取B中的液體培養(yǎng)基浸濕組培瓶中的基質(zhì)，蓋好瓶蓋，滅菌；滅菌條件為121 °C20min ； D:滅菌后的培養(yǎng)基確保蓋子擰緊后放置在接種室或培養(yǎng)室，冷卻后使用。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟2)中的接種方法為:取光皮樺組培無菌苗，每片葉片留一半，把莖段剪成1.5-2cm的小段，每一段必須包含至少I個腋芽，正向插到基質(zhì)中，每瓶3-4段，然后蓋好瓶蓋；上述操作均在無菌條件下進(jìn)行。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟3)中的培養(yǎng)條件為:將接種莖段的培養(yǎng)瓶整齊擺放在培養(yǎng)架上，每瓶之間的間隔不少于2cm,以保證充足的光照；培養(yǎng)室條件是:光照強(qiáng)度45 μ mo I.πΓ2.s'光照時間16h,溫度25±2°C。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述步驟4)中煉苗移栽的方法如下: A:取培養(yǎng)2個月后的組培苗在溫室內(nèi)進(jìn)行煉苗，條件為自然散射光，溫度25-28°C，濕度 50-70% ； B:將組培瓶移至溫室置于自然散射光下，采用逐漸開瓶的方式煉苗5-7d;首先，不打開瓶蓋煉苗l-2d，然后將瓶蓋由打開1/5至完全打開，若發(fā)現(xiàn)植株葉子出現(xiàn)萎蔫，再將瓶蓋蓋回，使組培苗慢慢適應(yīng)外界環(huán)境，此過程中可適量向瓶內(nèi)灑些無菌水，防止植株萎蔫； C:待瓶口完全打開后，直接帶基質(zhì)移出組培苗，分株后移栽于育苗杯或無紡布袋，分株時注意不要傷到根部；移栽前，育苗杯或無紡布袋中加入適量的黃泥、泥炭與珍珠巖混合基質(zhì)，澆透水備用； D:移栽后在溫室中培養(yǎng)至組培苗成活、生長穩(wěn)定后，移至溫室外，進(jìn)行正常栽培管理。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種光皮樺組培苗基質(zhì)生根移栽的方法，其特征在于所述黃泥、泥炭與珍珠巖混合基質(zhì)的體積配比為:黃泥:泥炭與珍珠巖=2:1:1。
9.一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)，其特征在于:該基質(zhì)為泥炭、珍珠巖和蛭石混合物，并用MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基浸濕。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的一種光皮樺組培苗生根基質(zhì)，其特征在于所述基質(zhì)的體積配比為:泥炭:珍珠巖:蛭石==3:1:1 ;所述MS+蔗糖的液體培養(yǎng)基pH值5.88-5.92，蔗糖濃度為30g/L。
【文檔編號】A01H4/00GK104365485SQ201410731267
【公開日】2015年2月25日 申請日期:2014年12月5日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月5日
【發(fā)明者】牛明月, 林二培, 黃華宏, 董人琿, 童再康, 樓雄珍 申請人:浙江農(nóng)林大學(xué)