一種鐵皮石斛組培細(xì)弱苗復(fù)壯方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種鐵皮石斛組培細(xì)弱苗復(fù)壯方法，該方法適用于鐵皮石斛組培苗中壯苗及定植培養(yǎng)后細(xì)弱苗復(fù)壯，屬植物生物【技術(shù)領(lǐng)域】。本發(fā)明組培苗以壯苗及定植培養(yǎng)中未到達(dá)要求的細(xì)弱苗為對(duì)象，通過(guò)植入該發(fā)明培養(yǎng)基可達(dá)到轉(zhuǎn)接或出苗標(biāo)準(zhǔn)，有效減少了組培苗過(guò)程中因生長(zhǎng)不均和營(yíng)養(yǎng)元素吸收差異造成細(xì)弱苗大量丟棄的現(xiàn)象，節(jié)約了生產(chǎn)成本。本發(fā)明提供的組培快繁方法，經(jīng)過(guò)65天的復(fù)壯培養(yǎng)，直徑可增粗約40%，極大地提高了組培苗中有效苗率，為鐵皮石斛組培苗生產(chǎn)降低了損耗成本。
【專利說(shuō)明】一種鐵皮石斛組培細(xì)弱苗復(fù)壯方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及植物生物技術(shù)中植物組織培養(yǎng)方法，具體地說(shuō)，涉及一種鐵皮石斛壯 苗或定植后細(xì)弱苗的復(fù)壯方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 鐵皮石斛是中華九大仙草之首，有極其豐富的藥用價(jià)值，野生資源極少，由于人們 長(zhǎng)期的野外采挖，野生的鐵皮石斛已經(jīng)到了瀕危的狀況。鐵皮石斛坐果率很低，種子不易發(fā) 芽，自然繁殖率極低。建立組培快繁體系可以從根本上解決這一問(wèn)題。
[0003] 迄今，鐵皮石斛組培技術(shù)相關(guān)專利已經(jīng)有很多，多數(shù)集中在鐵皮石斛繁殖配方及 種植方面，但對(duì)于鐵皮石斛中期壯苗及定植后細(xì)弱苗恢復(fù)等，尚未有專業(yè)的研究及專利。本 發(fā)明提出了一種鐵皮石斛細(xì)弱苗的復(fù)壯方式及配方，避免在轉(zhuǎn)接培養(yǎng)苗過(guò)程中因過(guò)多的細(xì) 弱苗丟棄產(chǎn)生的成本浪費(fèi)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的目的，本發(fā)明提供了如下的技術(shù)方案： 培育鐵皮石斛組培苗選取鐵皮石斛蒴果為外植體，經(jīng)常規(guī)組培消毒后將種子撒播在原 球莖誘導(dǎo)培養(yǎng)基MS+香蕉50g/L+馬鈴薯50g/L+蛋白胨lg/L，PH5. 8 ;分化培養(yǎng)基為MS+ 香蕉50g/L+馬鈴薯50g/L+6-BA(6-芐氨基嘌呤）I. 5mg/L;壯苗生根培養(yǎng)基為1/2MS(大 量元素減半）+〇? 5mg/LNAA(萘乙酸）+50g/L香蕉+50g/L馬鈴薯+0? 25g/L活性炭。pH為 5.8。在壯苗及生根后，仍有一些莖粗達(dá)不到標(biāo)準(zhǔn)的組培苗，栽植入本壯苗培養(yǎng)基。因馬鈴 薯中含淀粉成分較多，能補(bǔ)充必要的碳源等物質(zhì)，對(duì)細(xì)弱苗復(fù)壯有積極的作用，本發(fā)明以MS 為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加物為馬鈴薯80g/L，香蕉40g/L，NAA為0.4mg/L，同時(shí)調(diào)整pH為5.8， 即為MS+NAAO. 4mg/L+馬鈴薯80g/L+香蕉40g/L+瓊脂粉6g/L+蔗糖30g/L。培養(yǎng)基在 121. 3°C，103. 42kPa條件下滅菌20分鐘，冷卻凝固后待用。將細(xì)弱苗接種至復(fù)壯培養(yǎng)基中， 放置于培養(yǎng)室中進(jìn)行培養(yǎng)，光強(qiáng)度為人工輔助光1200LUX，自然光2000LUX，溫度為20-23°C; 光暗交替時(shí)間為12小時(shí)/天。培養(yǎng)約60天-70天。
[0005] 本發(fā)明相對(duì)現(xiàn)有技術(shù)的有益效果為：1.此發(fā)明通過(guò)改良基礎(chǔ)培養(yǎng)基配方，使得細(xì) 弱苗的粗壯度提高40%。圖1細(xì)弱苗轉(zhuǎn)入復(fù)壯培養(yǎng)基及正常培養(yǎng)基的表現(xiàn)。其中A是細(xì)弱 苗轉(zhuǎn)入本發(fā)明培養(yǎng)基培養(yǎng)60天后的苗情況圖。B是細(xì)弱苗轉(zhuǎn)入正常壯苗生根培養(yǎng)基60天 后的苗情況圖。2.此發(fā)明建立了有效的鐵皮石斛細(xì)弱苗復(fù)壯方法，減少了生產(chǎn)浪費(fèi)，降低了 生產(chǎn)成本，提升了組培苗的有效利用率。

【具體實(shí)施方式】
[0006] 培養(yǎng)基配方篩選實(shí)施例 基本培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基，添加物為馬鈴薯與香蕉，使用四因素五水平正交設(shè)計(jì)法，馬 鈴薯添加量為 〇g/L、20g/L、40g/L、60g/L、80g/L;香蕉的添加量為 0g/L、20g/L、40g/L、 60g/L、80g/L，NAA加量為Omg/L、0. 4mg/L、0. 8mg/L、l.Omg/L、2.Omg/L;6_BA的添加 量為Omg/L、lmg/L、1.5mg/L、2mg/L、4mg/L;pH為 5.8，人工輔助光 12001^父，自然光 2000LUX，光暗交替時(shí)間為12h/d。溫度為18-23°C。查閱正交表設(shè)計(jì)方法共設(shè)計(jì)25組實(shí)驗(yàn)， 其中MS+NAAO. 4mg/L+馬鈴薯80g/L+香蕉40g/L+瓊脂粉6g/L+蔗糖30g/L壯苗配方，其直 徑可增粗40%，達(dá)到了出苗的直徑要求。
[0007] 表1四因素五水平正交設(shè)計(jì)表

【權(quán)利要求】
1. 培養(yǎng)基改良：因馬鈴薯中含淀粉成分較多，能補(bǔ)充必要的碳源等物質(zhì)，對(duì)細(xì)弱苗復(fù) 壯有積極的作用，本發(fā)明以MS為基礎(chǔ)培養(yǎng)基，添加物為馬鈴薯80g/L，香蕉40 g/L，萘乙酸 NAA為0. 4mg/L，同時(shí)調(diào)整pH為5. 8,即為MS+NAAO. 4mg/L+馬鈴薯80g/L+香蕉40g/L+瓊脂 粉 6g/L+ 鹿糖 30g/L。
2. 根據(jù)權(quán)利1所述的組培繁殖方法，其特征在于所述的復(fù)壯培養(yǎng)的條件，培養(yǎng)室中光 強(qiáng)度為人工輔助光1200LUX，自然光2000LUX，溫度為20-23°C ;光暗交替時(shí)間為12h/d。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104472360SQ201410721617
【公開(kāi)日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月3日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月3日
【發(fā)明者】田曉玲, 楊曉寅, 馬知遙, 楊瑞 申請(qǐng)人:紅河州巨豐生物科技有限公司