用于觀察植物根系真菌的快速透明方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種用于觀察植物根系真菌的快速透明方法，是按質(zhì)量份組分配制成混合溶液，然后加水定容，最后與濃度為4～8％的NaClO溶液按照體積/體積比為19:1混合成透明溶液；采集新鮮植物根樣，流水沖洗干凈剪成根段并浸入透明溶液中，在溫度10～25℃浸泡5～10分鐘；沖洗至無透明溶液殘留，植物根系透明完成；對(duì)透明后植物根系進(jìn)行真菌定殖顯微觀察。本發(fā)明所采用透明溶液極好的保護(hù)了植物根系細(xì)胞，避免了對(duì)植物根系造成的細(xì)胞損傷，更有利于對(duì)植物根系及內(nèi)生真菌進(jìn)行觀察，減少了傳統(tǒng)透明方法繁瑣的操作過程及大量的等待時(shí)間，集合了快速、方便、保護(hù)根系細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)，極大的提高了植物根系的透明效率以及對(duì)植物根系的觀察效果。
【專利說明】用于觀察植物根系真菌的快速透明方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及植物學(xué)、植物共生和寄生微生物學(xué)，具體涉及一種用于觀察植物根系真菌的快速透明方法，屬于生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]根系是植物從土壤等介質(zhì)中獲取礦質(zhì)營(yíng)養(yǎng)和水分的器官，在植物學(xué)、植物共生和寄生微生物學(xué)領(lǐng)域，植物根系的透明與染色，對(duì)于植物根系的發(fā)育、微生物定位觀察至關(guān)重要。但同時(shí)對(duì)植物根系的透明時(shí)間又不能過長(zhǎng)，因?yàn)橥该鲿r(shí)間過長(zhǎng)會(huì)對(duì)植物根系細(xì)胞造成損傷，反倒不利于更好的觀察植物根系的真實(shí)情況。
[0003]為了保證在不損傷植物根系的情況下，又能清楚的觀察植物根系內(nèi)部的真實(shí)狀況，研宄人員展開了深入細(xì)致的研宄，提出了多種對(duì)植物根系透明的方法，目前用于植物根系透明的常用方法主要有以下兩種:一是將植物根系樣品剪成根段，然后使用5?10% KOH溶液作為透明液在90°C水浴鍋中水浴，當(dāng)溶液顏色較深時(shí)換新的透明液直至根系透明。此種透明方法對(duì)于幼根等顏色較淺的根系樣品效果較好，但對(duì)于植物老根等顏色較深的根系透明則需較長(zhǎng)時(shí)間的繁瑣操作，所以對(duì)植物根系的損傷較大；二是利用NaClO與HNO3對(duì)植物根系進(jìn)行快速透明，此種透明方法雖然對(duì)于顏色較深的植物老根進(jìn)行透明能夠節(jié)約時(shí)間，但是由于利用試劑的強(qiáng)氧化性和漂白性進(jìn)行的快速脫色易對(duì)植物根系造成損傷，導(dǎo)致植物根系斷節(jié)和細(xì)胞結(jié)構(gòu)不完整，而不能得到植物根系理想的觀察效果。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于克服目前用于植物根系透明方法所存在的弊端，而公開一種用于觀察植物根系真菌的快速透明方法。
[0005]為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案如下:
[0006]a.按以下質(zhì)量份組分配制混合溶液:NaCl 8，KCl 0.2，Na2HPO4.12H20 1.6?3.6，KH2PO40.2?0.24，再使用NaOH與HCl調(diào)節(jié)pH在7.0?8.0范圍；然后加水定容至1000份，最后將上述混合液與濃度為4?8%的NaClO溶液按照體積/體積比為19:1混合均勻成透明溶液，溫度4°C保藏；
[0007]b.采集新鮮植物根樣，流水沖洗干凈并剪成I?5cm長(zhǎng)根段；
[0008]c.將植物根段完全浸入透明溶液中，在溫度10?25°C浸泡5?10分鐘；
[0009]d.清水沖洗干凈至無透明溶液殘留，植物根系透明完成；
[0010]e.對(duì)透明后植物根系進(jìn)行真菌定殖顯微觀察。
[0011]本發(fā)明所采用透明溶液極好的保護(hù)了植物根系細(xì)胞，避免了對(duì)植物根系造成的細(xì)胞損傷，更有利于對(duì)植物根系及內(nèi)生真菌進(jìn)行觀察，減少了傳統(tǒng)透明方法繁瑣的操作過程及大量的等待時(shí)間，集合了快速、方便、保護(hù)根系細(xì)胞等優(yōu)點(diǎn)，極大的提高了植物根系的透明效率以及對(duì)植物根系的觀察效果。

【專利附圖】

【附圖說明】
[0012]附圖1是本發(fā)明應(yīng)用于新鮮楊樹根系透明效果對(duì)照?qǐng)D。
[0013]附圖中A為開始加入0.4% NaClO溶液時(shí)的狀態(tài)，B為開始加入透明溶液時(shí)的狀態(tài)，C為加入0.4% NaClO溶液10分鐘后的狀態(tài)，D為加入透明溶液10分鐘后的狀態(tài)。
[0014]附圖2是本發(fā)明應(yīng)用于新鮮楊樹根系透明、染色并壓片后的顯微觀察圖。
[0015]附圖中A為使用透明溶液觀察楊樹根系真菌的狀態(tài)，B為使用0.4% NaClO溶液觀察根系真菌的狀態(tài)，箭頭指示為根系斷節(jié)處。

【具體實(shí)施方式】
[0016]以下結(jié)合實(shí)施例及附圖對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案做進(jìn)一步詳細(xì)描述:
[0017]a.按以下質(zhì)量組分配制混合溶液:NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4.12H20 3.6g，KH2PO40.24g，再使用NaOH與HCl調(diào)節(jié)pH在7.4，加水定容至1L，取95ml混合溶液與5ml濃度為8%的NaClO溶液混合均勻成透明溶液，溫度4°C保藏；
[0018]b.采集新鮮楊樹根樣，流水沖洗干凈，剪成5cm長(zhǎng)根段；
[0019]c.將楊樹根段完全浸入透明溶液中，在溫度20°C浸泡10分鐘；
[0020]d.清水沖洗干凈至無透明溶液殘留，楊樹根系透明完成；
[0021]e.對(duì)透明后楊樹根系進(jìn)行真菌定殖顯微觀察:將透明后楊樹根系使用10% H2O2軟化2分鐘，2% HCl酸化3分鐘后，再用臺(tái)盼藍(lán)染液染色，并用乳酸與甘油按體積/體積比為I:1脫色后制作壓片觀察并拍照。
[0022]由附圖可見，本發(fā)明透明效果與對(duì)照組差異雖然不大，但本發(fā)明透明溶液澄清，而對(duì)照組溶液渾濁，這是由于對(duì)照組透明時(shí)間過長(zhǎng)對(duì)植物根系造成損傷導(dǎo)致組織液大量外漏的結(jié)果，同時(shí)對(duì)照組透明方法的根系呈現(xiàn)大量斷節(jié)，而本發(fā)明中植物根系觀察效果較好，并未產(chǎn)生損傷。
【權(quán)利要求】
1.用于觀察植物根系真菌的快速透明方法，其特征在于所采用的技術(shù)方案如下: ￡1.按以下質(zhì)量份組分配制混合溶液8，1(01 0.2，似2冊(cè)04 ? 12^01.6?3.6，狃2？0及2?0.24，再使用版10?與！￠1調(diào)節(jié)邱在7.0?8.0范圍；然后加水定容至1000份，最后將上述混合液與濃度為4?8%的版1(^10溶液按照體積/體積比為19: 1混合均勻成透明溶液，溫度41:保藏； 匕采集新鮮植物根樣，流水沖洗干凈并剪成1?5(3111長(zhǎng)根段； .0.將植物根段完全浸入透明溶液中，在溫度10?251:浸泡5?10分鐘； (1.清水沖洗干凈至無透明溶液殘留，植物根系透明完成； 6.對(duì)透明后植物根系進(jìn)行真菌定殖顯微觀察。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于觀察植物根系真菌的快速透明方法，其特征在于: ￡1.按以下質(zhì)量組分配制混合溶液觀口如，1(01 0.28，似2！?。?4 ? 12^03.68，狃2？0及248，再使用恥0?與抝1調(diào)節(jié)邱在7.4，加水定容至1匕取9501混合溶液與501濃度為8%的似010溶液混合均勻成透明溶液，溫度41:保藏； 匕采集新鮮楊樹根樣，流水沖洗干凈，剪成5(3111長(zhǎng)根段； .0.將楊樹根段完全浸入透明溶液中，在溫度201:浸泡10分鐘； (1.清水沖洗干凈至無透明溶液殘留，楊樹根系透明完成； . 0.對(duì)透明后楊樹根系進(jìn)行真菌定殖顯微觀察:將透明后楊樹根系使用10% ??！202軟化2分鐘，2%此1酸化3分鐘后，再用臺(tái)盼藍(lán)染液染色，并用乳酸與甘油按體積/體積比為1:1脫色后制作壓片觀察并拍照。
【文檔編號(hào)】A01G31/00GK104472331SQ201410719663
【公開日】2015年4月1日 申請(qǐng)日期:2014年12月1日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月1日
【發(fā)明者】唐明, 李朕, 吳娜 申請(qǐng)人:西北農(nóng)林科技大學(xué)