彩桂試管苗的繼代增殖培養(yǎng)方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明涉及一種彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，包括如下步驟：以彩桂新萌發(fā)的嫩枝為外植體，將外植體消毒滅菌后，在無(wú)菌條件切成1～1.5cm的小段，接種到腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4～5周后產(chǎn)生腋芽；將腋芽切割成1～1.5cm的頂芽或莖段，接種到相同的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，經(jīng)4～5周培養(yǎng)獲得叢生芽；其中，培養(yǎng)過(guò)程是在每天光照14小時(shí)、光合有效光量子束密度為40～50μmol/m2·s以及溫度為24～26℃的條件下進(jìn)行，所述腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基或繼代增殖培養(yǎng)基為：基本培養(yǎng)基+TDZ0.1-0.5mg/L+KT0.1-1.0mg/L+瓊脂5.5g/L+白砂糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5.8。本發(fā)明具有：繁殖速度更快，生產(chǎn)不受限于季節(jié)變化的特點(diǎn)。有效彌補(bǔ)了扦插苗的缺陷。
【專(zhuān)利說(shuō)明】彩桂試管苗的繼代增殖培養(yǎng)方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及組培試管苗快繁【技術(shù)領(lǐng)域】，具體是一種彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 彩桂為木犀科（Oleaceae)木犀屬常綠小喬木或灌木，彩桂葉片獨(dú)特的色澤變化而 顯示出其觀賞價(jià)值高，作為我國(guó)重要的園林和經(jīng)濟(jì)樹(shù)種，市場(chǎng)前景廣闊。尤其是彩桂品種中 的五色彩葉桂。
[0003] 木犀屬植物多數(shù)為中國(guó)的觀賞花木和優(yōu)良的園林樹(shù)種，其中，桂花為中國(guó)的十大 名花之一，形、色、香、韻俱佳，具有很高的觀賞價(jià)值。目前，國(guó)內(nèi)的彩葉桂有云田彩桂、銀邊 彩桂等品種，葉片最終呈花葉狀態(tài)，類(lèi)似金邊黃楊，喧賓奪主，反而掩蓋了秋天賞花的本性。 唯獨(dú)五色彩葉桂隨季節(jié)的變化，葉色在春、夏和早秋出現(xiàn)逐步變色過(guò)程，到秋季開(kāi)花時(shí)節(jié)， 葉片恢復(fù)常綠，一如傳統(tǒng)八月桂，陪襯出花的嬌美。桂花一年三季基本都在長(zhǎng)芽，五色彩葉 桂的每一片新葉都有這個(gè)變色過(guò)程，也就是五色彩葉桂樹(shù)全年基本是色彩斑斕，所以觀賞 價(jià)值極高。
[0004] 五色彩桂的繁殖一般采用嫩枝扦插，生產(chǎn)受限于季節(jié)變化且其扦插繁殖需要大量 的插穗，由于插穗來(lái)源的不一致可能導(dǎo)致扦插苗生長(zhǎng)整齊度較組培苗差等。
[0005] 快繁技術(shù)在農(nóng)業(yè)【技術(shù)領(lǐng)域】得到了廣泛應(yīng)用，但對(duì)于每個(gè)品種的植物，技術(shù)方法千 差萬(wàn)別，目前尚未見(jiàn)關(guān)于利用組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行五色彩葉桂試管苗的快繁技術(shù)的報(bào)道。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于提供一種彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，不但保持彩桂的優(yōu)良 特性，而且克服扦插技術(shù)之不足。
[0007] 本發(fā)明所解決的問(wèn)題可以采用以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)： 一種彩桂試管苗的繼代增殖培養(yǎng)方法，包括如下步驟： 以彩桂新萌發(fā)的嫩枝為外植體，將外植體消毒滅菌后，在無(wú)菌條件切成1?I. 5cm的 小段，接種到腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4?5周后產(chǎn)生腋芽；將腋芽切割成1?I. 5cm的 頂芽或莖段，接種到相同的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，經(jīng)過(guò)4?5周培養(yǎng)獲得叢生芽；其 中，培養(yǎng)條件是在每天光照14小時(shí)，光合有效光量子束密度為40?50 μ mol/m2 · s以及溫 度為24?26°C的條件下進(jìn)行，所述的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基或繼代增殖培養(yǎng)基為：基本培養(yǎng)基 +TDZ0. 1-0. 5mg/L+KT0. 1-1. 0 mg/L+ 瓊脂 5. 5g/L+ 白砂糖 30g/L，調(diào)節(jié) pH 至 5. 8。
[0008] 在此培養(yǎng)基上培養(yǎng)，平均增殖比例達(dá)到1:3. 5,且長(zhǎng)勢(shì)良好，經(jīng)過(guò)多代培養(yǎng)增殖系 數(shù)穩(wěn)定，此方法不僅保持了彩桂的優(yōu)良特性，而且，較常規(guī)的扦插技術(shù)相比，繁殖速度更快， 生產(chǎn)不受限于季節(jié)變化。
[0009] 在上述方案基礎(chǔ)上，所述的基本培養(yǎng)基由：大量元素、微量元素、有機(jī)物和鐵鹽組 成，具體為： 大量元素：硝酸鉀1100 mg/L、硝酸銨412mg/L、七水硫酸鎂1500mg/L、磷酸二氫鉀340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化鉀500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸錳16. 9mg/L、二水鑰酸鈉0· 25mg/L、七水硫酸鋅 14. 3mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 25mg/L ; 有機(jī)物：肌醇108mg/L、煙酸5mg/L、維生素 BI 13. 5mg/L、維生素 B6 I. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ;和 鐵鹽：七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L。
[0010] 本發(fā)明中，細(xì)胞分裂素為T(mén)DZ0. 1-0. 5mg/L和ΚΤ0. 1-1. 0 mg/L，再進(jìn)一步優(yōu)選，所 述細(xì)胞分裂素為T(mén)DZO. 3mg/L和KIU 5mg/L。 toon] 本發(fā)明所述的彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法具有：繁殖速度更快，生產(chǎn)不受限于 季節(jié)變化的特點(diǎn)。有效彌補(bǔ)了扦插苗的缺陷。

【具體實(shí)施方式】
[0012] 以下通過(guò)實(shí)施例進(jìn)一步闡述本發(fā)明。
[0013] 本發(fā)明的彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，它包括如下步驟： 以彩桂新萌發(fā)的嫩枝為外植體，將外植體消毒滅菌后，在無(wú)菌條件切成1?I. 5cm的小 段，接種到腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4?5周后產(chǎn)生腋芽；將腋芽切割成1?I. 5cm的頂芽 或莖段，接種到相同的培養(yǎng)基中進(jìn)行繼代增殖培養(yǎng)，培養(yǎng)4?5周獲得叢生芽；其中，上述培 養(yǎng)過(guò)程是在每天光照14小時(shí)、光合有效光量子束密度為40?50 μ mol/m2 · s以及溫度為 24?26°C的條件下進(jìn)行，所述腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基或繼代增殖培養(yǎng)基由基本培養(yǎng)基、細(xì)胞分裂 素、瓊脂5. 5g/L和白砂糖30g/L組成，并調(diào)節(jié)pH至5. 8。
[0014] 所述基本培養(yǎng)基包括： 大量元素：硝酸鉀1100 mg/L、硝酸銨412mg/L、七水硫酸鎂1500mg/L、磷酸二氫鉀340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化鉀500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸錳16. 9mg/L、二水鑰酸鈉0· 25mg/L、七水硫酸鋅 14. 3mg/L、碘化鉀(λ 83mg/L、六水氯化鈷(λ 025mg/L、五水硫酸銅(λ 25mg/L ; 有機(jī)物：肌醇108mg/L、煙酸5mg/L、維生素 B113. 5mg/L、維生素 B61. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ； 鐵鹽：七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L。
[0015] 所述細(xì)胞分裂素為T(mén)DZ0. 1-0. 5mg/L和ΚΤ0. 1-1. 0 mg/L，再進(jìn)一步優(yōu)選，所述細(xì)胞 分裂素為 TDZ0. 3 mg/L 和 ΚΤ0. 5mg/L。
[0016] 彩桂組培繼代增殖培養(yǎng)基最佳激素配比篩選試驗(yàn)，結(jié)果如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，包括如下步驟： 以彩桂新萌發(fā)的嫩枝為外植體，將外植體消毒滅菌后，在無(wú)菌條件切成1?1. 5cm的小 段，接種到腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中，培養(yǎng)4?5周后產(chǎn)生腋芽；將腋芽切割成1?1. 5cm的頂芽 或莖段，接種到相同的培養(yǎng)基中進(jìn)行增殖培養(yǎng)，獲得叢生芽；其中，培養(yǎng)過(guò)程是在每天光照 14小時(shí)、光合有效光量子束密度為40?50 y mol/m2 ? s以及溫度為24?26°C的條件下進(jìn) 行，所述的腋芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基或繼代增殖培養(yǎng)基為：基本培養(yǎng)基+TDZ0. 1-0. 5mg/L+KT0. 1-1. 0 mg/L+瓊脂5. 5g/L+白砂糖30g/L，調(diào)節(jié)pH至5. 8。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的外植體消毒滅菌方法，其特征在于：所述的消毒是將外植體 在75%酒精溶液進(jìn)行30秒鐘表面消毒，再用0. 05%的HgCl2溶液消毒12分鐘，最后用無(wú)菌 水沖洗5?6次完成消毒過(guò)程。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，其特征在于：所述的基本培 養(yǎng)基由： 大量元素：硝酸鉀1100 mg/L、硝酸銨412mg/L、七水硫酸鎂1500mg/L、磷酸二氫鉀340 mg/L、二水氯化興440mg/L、氯化鉀500 mg/L、硝酸興417mg/L ; 微量元素：硼酸12. 4mg/L、一水硫酸錳16. 9mg/L、二水鑰酸鈉0? 25mg/L、七水硫酸鋅 14. 3mg/L、碘化鉀0? 83mg/L、六水氯化鈷0? 025mg/L、五水硫酸銅0? 25mg/L ; 有機(jī)物：肌醇108mg/L、煙酸5mg/L、維生素B1 13. 5mg/L、維生素B6 1. 2mg/L、甘氨酸 3. 75mg/L ;和 鐵鹽：七水硫酸亞鐵27. 8mg/L、乙二胺四乙酸二鈉37. 3mg/L。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的彩桂試管苗繼代增殖培養(yǎng)方法，其特征在于：TDZ0. 3mg/L和 KTO. 5mg/L作為細(xì)胞分裂素。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK104365477SQ201410461693
【公開(kāi)日】2015年2月25日 申請(qǐng)日期:2014年9月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月12日
【發(fā)明者】陳權(quán), 肖建梅 申請(qǐng)人:上海綠力農(nóng)業(yè)科技有限公司