一種微生態(tài)制劑、飼料添加劑及預(yù)混料的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種微生態(tài)制劑、飼料添加劑及預(yù)混料。本發(fā)明以一株屎腸球菌為出發(fā)菌株，通過紫外誘變處理，篩選獲得耐高溫、耐膽鹽菌株，該菌株與出發(fā)菌株相比，耐高溫存活率提高22.31倍，耐膽鹽（0.3%BS）存活率3.40倍，耐膽鹽（0.6%BS）存活率27.69倍。本發(fā)明的屎腸球菌經(jīng)過10次以上傳代培養(yǎng)不退化，具有遺傳穩(wěn)定性。用本發(fā)明屎腸球菌制備的誘食劑誘使對蝦平均攝食速度較快，對蝦攝食量比對照組提高約10%；在陰雨天中，保持了對蝦正常攝食，增強了對蝦的抗逆性。CGMCC No913420140508
【專利說明】-種微生態(tài)制劑、飼料添加劑及預(yù)混料
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，涉及一種微生態(tài)制劑、飼料添加劑及預(yù)混料。
【背景技術(shù)】
[0002] 屎腸球菌/aeci腫）屬腸球菌屬，是人及動物腸道中正常菌群的一 部分。還用于改善食品和飼料的質(zhì)量。它相對于嚴格厭氧、培養(yǎng)保藏苛刻的雙歧桿菌、乳桿 菌來說，便于生產(chǎn)和使用。1989年美國FDA公布將屎腸球菌納入直接用于動物的菌種之一。 大量實驗證明，由屎腸球菌組成的益生素可提高幼年畜禽的體增重，改善飼料報酬，減少腹 瀉率，降低死亡率。另外，屎腸球菌代謝產(chǎn)生有機酸、雙乙酰、過氧化氫、細菌素等，這些物質(zhì) 具有抑制病原菌與腐敗菌、提高機體免疫力、改善畜禽產(chǎn)品品質(zhì)的生理功效。因此，屎腸球 菌在食品工業(yè)及畜牧生產(chǎn)中有著廣泛的應(yīng)用前景。
[0003] 另一方面，屎腸球菌同大部分乳酸菌一樣，其耐高溫性等抗逆性能差，該因素制約 了其大規(guī)模生產(chǎn)應(yīng)用。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0004] 為了解決上述問題，本發(fā)明通過誘變，提供較高熱耐受性和膽鹽耐受性的屎腸球 菌，且顯著高于野生菌株，應(yīng)用在水產(chǎn)養(yǎng)殖中，提高蝦的采食速度。
[0005] 本發(fā)明首先提供一種屎腸球菌(/?ierococcm /aeciw?)新菌株，其保藏號為 CGMCC No. 9134。
[0006] 本發(fā)明的屎腸球菌分離自豬腸道，并通過紫外誘變篩選獲得，具體過程如下： (1)生長曲線的測量：出發(fā)菌株來源于豬腸道，經(jīng)鑒定為屎腸球菌，革蘭氏染色，菌體 形態(tài)見圖1。將其活化兩次，接入500mL液體培養(yǎng)基（1L三角瓶）中，37°C培養(yǎng)，每兩小時測 一次OD值。橫坐標為時間，縱坐標為OD值，繪制生長曲線。同時用螺旋自動接種儀測量菌 濃度。
[0007] (2)菌懸液的制備：將出發(fā)菌活化f 2次后，接種于500mL液體培養(yǎng)基（IL三角 瓶)中，根據(jù)生長曲線，37°C振蕩培養(yǎng)8-10h到對數(shù)生長期，取菌液用滅菌的生理鹽水洗菌3 次，將其配制成濃度為IX 108cfu/mL菌懸液。
[0008] (3)致死率：取6個直徑為6 cm的無菌培養(yǎng)皿，每平皿加入3~5 mL菌液。紫外 預(yù)熱20-30min，在攪拌狀態(tài)下，選用15-20 W的紫外燈，照射距離為28 cm，照射時間分別為 IOs、20s、40s、60s、2min、4min。根據(jù)誘變時間做適當稀釋，各取100 μ L涂平板，每個稀 釋度有3個平行。將原液稀釋至ΚΓ6, KT7作為對照，每個稀釋度有3個平行。避光，37°C培 養(yǎng)3d。計算致死率，結(jié)果見下表。
[0009] 表1紫外誘變致死率
【權(quán)利要求】
1. 一種屎腸球菌/aecitt?)新菌株，其保藏號為CGMCC No. 9134。
2. 含有權(quán)利要求1所述菌株的微生態(tài)制劑。
3. 含有權(quán)利要求1所述的菌株的飼料添加劑，其特征在于，飼料添加劑中所述屎腸球 菌的活菌數(shù)為l〇9-l〇lclcfu/ml。
4. 含有權(quán)利要求3所述飼料添加劑的預(yù)混料。
5. 權(quán)利要求1所述的菌株在水產(chǎn)誘食中的應(yīng)用。
【文檔編號】A23K1/16GK104388327SQ201410386448
【公開日】2015年3月4日 申請日期:2014年8月7日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月7日
【發(fā)明者】李曉清, 何增國, 王凡, 劉婷, 馬青山, 魯春雨 申請人:北京大北農(nóng)科技集團股份有限公司, 北京偉農(nóng)生物科技有限公司, 遼寧大北農(nóng)牧業(yè)科技有限責任公司