一種越橘的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種越橘的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟：（1）選材；（2）芽啟動培養(yǎng)；（3）增殖繼代培養(yǎng)；（4）生根培養(yǎng)；（5）煉苗移栽。本發(fā)明所述的越橘的組織配方方法通過改良基本培養(yǎng)基的成分及含量，同時輔助合理的培養(yǎng)方法，使得越橘的外植體繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良種化程度高，以使得最終培育得到的越橘具有良好的推廣和應用價值。
【專利說明】一種越橘的組織培養(yǎng)方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種越橘的組織培養(yǎng)方法，屬于植物學【技術領域】。
【背景技術】
[0002]適于越橘繁殖的方式有很多種，如，扦插繁殖、根狀莖扦插繁殖、分株繁殖和種子繁殖等。上述繁殖方法具有繁殖周期長、易感染真菌性病害、良種化程度降低，而劣質(zhì)種苗的使用又導致越橘固有的優(yōu)良特性日益喪失，這在一定程度上約束了該樹種的發(fā)展和推廣應用。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]為了克服現(xiàn)有技術的不足，本發(fā)明的目的在于提供一種培育周期短、可有效降低越橘的染病幾率，提高其應用價值的越橘的組織培養(yǎng)方法。
[0004]為了實現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明是通過以下技術方案來實現(xiàn)的:
一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟:
(1)選材:在3-5月，選取生長健壯的半木質(zhì)化的新稍，清水沖洗3-5次后，用濾紙吸干水分，然后，在超凈工作臺上，將新稍用0.1%的升汞滅菌5-10min后，用無菌水清洗3_5次，再濾紙吸干水分后備 用；
(2)芽啟動培養(yǎng):從步驟(1)處理過的新稍上剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，形成外植體，將所述的外植體的基部插入芽啟動培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000—2500 lx，光照時間12h / d的條件下，進行30-40d的培養(yǎng)，形成新枝；
(3)增殖繼代培養(yǎng):將步驟(2)所述的新枝接種在增殖繼代培養(yǎng)基中，在溫度為25-300C，光照強度2000—2500 Ix,光照時間12_16h / d的條件下，每隔40_50d繼代一次，獲得大量新枝；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的新枝轉移到生根培養(yǎng)基中誘導生根，培養(yǎng)40-50d后進行煉苗移栽；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的新枝首先在培養(yǎng)室適應7-15d，然后在室溫條件下，清水洗滌3-5次，去掉基部的培養(yǎng)基，然后移栽到大棚內(nèi)的苗盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗30-35d后進行常規(guī)管理。
[0005]進一步，所述的芽啟動培養(yǎng)基包括:改良MS + 0.05~0.1 mgL^BA + 1.0~
2.0mgL-1ZT + 1.0 ~2.0gL-1 瓊脂 + lOgL-1 蔗糖，且 pH 值為 5.2。
[0006]所述的增殖繼代培養(yǎng)包括改良MS + 1.0~2.0mgr1BA + 1.0~2.0mgL^1ZT + 0.1~0.2mgL^NAA + 1.0 ~2.0gL^1 瓊脂 + IOgL^1 蔗糖，且 pH 值為 5.2。
[0007]而所述的生根培養(yǎng)基包括1/2改良MS + 0.05~0.1mgL-1 IBA + O~0.01mgL-1NAA+ 0.6 ~1.0gL—1 瓊脂 + IOgL-1 鹿糖,且 pH 值為 5.2。
[0008]且,上述的改良MS包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑。
[0009]其中，所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應的濃度為:硝酸鉀190mg/L ;硫酸銨165mg/L ;七水硫酸鎂350 mg/L ;四水硝酸鈣680mg/L ;無水磷酸二氫鉀100mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉73.4mg/L ;七水硫酸亞鐵18.5 mg/L。
[0010]所述的微量營養(yǎng)元素的組分和其對應的濃度為:四水硫酸錳15.6mg/L ;硫酸鋅2.0mg/L ;硼酸 3.5 mg/L ;碘化鉀 0.5mg/L ;鑰酸鈉 0.3mg/L ;氯化鈷 0.05 mg/L，硫酸銅 0.02mg/L,
所述的有機試劑的組分和其對應的濃度為:鹽酸硫胺素0.1 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ;鹽酸批口多醇 1.5mg/L ;肌醇 100.0 mg/L。
[0011]本發(fā)明的有益效果是:本發(fā)明所述的越橘的組織配方方法通過改良基本培養(yǎng)基的成分及含量，同時輔助合理的培養(yǎng)方法，使得越橘的外植體繁殖速度快、繁殖周期短且繁殖率高、成活率高、不易感染真菌性病害、良種化程度高，以使得最終培育得到的越橘具有良好的推廣和應用價值。
【具體實施方式】
[0012]下面將結合具體實施例，詳細說明本發(fā)明的【具體實施方式】:
在本實施方式中，所有實施例中米用的改良MS均包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑，
其中，所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應的濃度為:硝酸鉀190mg/L ;硫酸銨165mg/L ;七水硫酸鎂350 mg/L ;四水硝酸鈣680mg/L ;無水磷酸二氫鉀100mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉73.4mg/L ;七水硫酸亞鐵18.5 mg/L。
[0013]所述的微量營養(yǎng)元素的組分和其對應的濃度為:四水硫酸錳15.6mg/L ;硫酸鋅
2.0mg/L ;硼酸 3.5 mg/L ;碘化鉀 0.5mg/L ;鑰酸鈉 0.3mg/L ;氯化鈷 0.05 mg/L，硫酸銅 0.02mg/L,
所述的有機試劑的組分和其對應的濃度為:鹽酸硫胺素0.1 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ;鹽酸批口多醇 1.5mg/L ;肌醇 100.0 mg/L。
[0014]實施例1:
一種越橘的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:在3月，選取生長健壯的半木質(zhì)化的新稍，清水沖洗3次后，用濾紙吸干水分，然后，在超凈工作臺上，將新稍用0.1%的升汞滅菌5min后，用無菌水清洗3次，再濾紙吸干水分后備用；
(2)芽啟動培養(yǎng):從步驟(1)處理過的新稍上剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，形成外植體，將所述的外植體的基部插入芽啟動培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000-2500lx，光照時間12h / d的條件下，進行30d的培養(yǎng)，形成新枝，莖段腋芽開始萌動，莖尖明顯伸長，50d左右芽點長成3cm左右的新梢，所述的芽啟動培養(yǎng)基包括:改良MS + 0.0Smgr1BA+ 1.0mgL-1ZT + 1.0gL-1 瓊脂 + IOgL-1 鹿糖,且 pH 值為 5.2 ；
(3)增殖繼代培養(yǎng):將步驟(2)所述的新枝接種在增殖繼代培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000-2500 lx，光照時間12_16h / d的條件下，每隔40d繼代一次，獲得大量新枝，建立起越橘新枝的再生體系，所述的增殖繼代培養(yǎng)包括改良MS + 1.0mg^1BA +
1.0mgL-1ZT + 0.1mgL-1NAA + 1.0gL-1 瓊脂 + IOgL-1 鹿糖,且 pH 值為 5.2 ；
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的新枝轉移到生根培養(yǎng)基中誘導生根，培養(yǎng)40d后，莖葉發(fā)育正常，根系生長健壯，然后進行煉苗移栽，所述的生根培養(yǎng)基包括1/2改良MS +
0.05mgL_1 IBA + 0.6gL_1 瓊脂 + IOgL-1 鹿糖,且 pH 值為 5.2 ；
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的新枝首先在培養(yǎng)室適應7d，然后在室溫條件下，清水洗滌3次，去掉基部的培養(yǎng)基，然后移栽到大棚內(nèi)的苗盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗30d后進行常規(guī)管理。
[0015]實施例2:
一種越橘的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:在5月，選取生長健壯的半木質(zhì)化的新稍，清水沖洗5次后，用濾紙吸干水分，然后，在超凈工作臺上，將新稍用0.1%的升汞滅菌IOmin后，用無菌水清洗5次，再濾紙吸干水分后備用；
(2)芽啟動培養(yǎng):從步驟(1)處理過的新稍上剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，形成外植體，將所述的外植體的基部插入芽啟動培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000-2500lx，光照時間12h / d的條件下，進行40d的培養(yǎng)，形成新枝，所述的芽啟動培養(yǎng)基包括:改良 MS + 0.1 HigL-1BA + 2.0mgL^1ZT + 2.0gL^1 瓊脂 + IOgL^1 蔗糖，且 pH 值為 5.2 ；
(3)增殖繼代培養(yǎng):將步驟(2)所述的新枝接種在增殖繼代培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度 2000-2500 lx，光照時間12_16h / d的條件下，每隔50d繼代一次，獲得大量新枝，所述的增殖繼代培養(yǎng)包括改良MS + 2.0mgL-1BA +2.0mgL^1ZT + 0.2mg^1NAA +
2.0gr1瓊脂+ IOgr1蔗糖，且pH值為5.2 ;
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的新枝轉移到生根培養(yǎng)基中誘導生根，培養(yǎng)40-50d后進行煉苗移栽，所述的生根培養(yǎng)基包括1/2改良MS + 0.1mgr1 IBA + 0.01mg^1NAA+ 1.0gL-1瓊脂+ IOgr1蔗糖，且pH值為5.2 ;
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的新枝首先在培養(yǎng)室適應15d，然后在室溫條件下，清水洗滌5次，去掉基部的培養(yǎng)基，然后移栽到大棚內(nèi)的苗盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗35d后進行常規(guī)管理。
[0016]實施例3:
一種越橘的組織培養(yǎng)方法，包括以下步驟:
(1)選材:在4月，選取生長健壯的半木質(zhì)化的新稍，清水沖洗4次后，用濾紙吸干水分，然后，在超凈工作臺上，將新稍用0.1%的升汞滅菌Smin后，用無菌水清洗4次，再濾紙吸干水分后備用；
(2)芽啟動培養(yǎng):從步驟(1)處理過的新稍上剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，形成外植體，將所述的外植體的基部插入芽啟動培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000-2500lx，光照時間12h / d的條件下，進行35d的培養(yǎng)，形成新枝，所述的芽啟動培養(yǎng)基包括:改良 MS + 0.08 HigL-1BA + 1.SmgL^1ZT + 1.5gL^ 瓊脂 + IOgL^1 蔗糖，且 pH 值為 5.2 ；
(3)增殖繼代培養(yǎng):將步驟(2)所述的新枝接種在增殖繼代培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000-2500 lx，光照時間12_16h / d的條件下，每隔45d繼代一次，獲得大量新枝，所述的增殖繼代培養(yǎng)包括改良MS + 1.5mgL^BA + 1.SmgL^1ZT + 0.1Smg^1NAA +
1.Sgr1瓊脂+ IOgr1蔗糖，且pH值為5.2 ;
(4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的新枝轉移到生根培養(yǎng)基中誘導生根，培養(yǎng)45d后進行煉苗移栽，所述的生根培養(yǎng)基包括1/2改良MS + 0.0Smgr1 IBA +0.0OSmgr1NAA +0.SgL-1瓊脂+ IOgr1蔗糖，且pH值為5.2 ;
(5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的新枝首先在培養(yǎng)室適應12d，然后在室溫條件下，清水洗滌4次，去掉基部的培養(yǎng)基，然后移栽到大棚內(nèi)的苗盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗32d后進行常規(guī)管理。
[0017]本發(fā)明不但能解決越橘種質(zhì)退化的問題，達到優(yōu)良種苗脫毒、提純復壯及快速繁殖的目的，而且也是高效再生種子來源的重要途徑，還是進行遺傳轉化或誘變育種選育新品種的理想受體材料，以使得最終培育得到的越橘具有良好的推廣和應用價值。
[0018]以上已以較佳實施例公開了本發(fā)明，然其并非用以限制本發(fā)明，凡采用等同替換或者等效變換方式所 獲得的技術方案，均落在本發(fā)明的保護范圍之內(nèi)。
【權利要求】
1.一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)選材:在3-5月，選取生長健壯的半木質(zhì)化的新稍，清水沖洗3-5次后，用濾紙吸干水分，然后，在超凈工作臺上，將新稍用0.1%的升汞滅菌5-10min后，用無菌水清洗3_5次，再濾紙吸干水分后備用； (2)芽啟動培養(yǎng):從步驟(1)處理過的新稍上剪取l-2cm帶一個飽滿芽的莖段，形成外植體，將所述的外植體的基部插入芽啟動培養(yǎng)基中，在溫度為25-30°C，光照強度2000—2500 lx，光照時間12h / d的條件下，進行30-40d的培養(yǎng)，形成新枝； (3)增殖繼代培養(yǎng):將步驟(2)所述的新枝接種在增殖繼代培養(yǎng)基中，在溫度為25-300C，光照強度2000—2500 Ix,光照時間12_16h / d的條件下，每隔40_50d繼代一次，獲得大量新枝； (4)生根培養(yǎng):將外植體大量增殖后的新枝轉移到生根培養(yǎng)基中誘導生根，培養(yǎng)40-50d后進行煉苗移栽； (5)煉苗移栽:將步驟(4)得到的新枝首先在培養(yǎng)室適應7-15d，然后在室溫條件下，清水洗滌3-5次，去掉基部的培養(yǎng)基，然后移栽到大棚內(nèi)的苗盤中，保持空氣相對濕度在80%以上，然后馴化煉苗30-35d后進行常規(guī)管理。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的芽啟動培養(yǎng)基包括:改良 MS + 0.05 ~0.1 Higr1BA + 1.0 ~2.0mgL-1ZT + 1.0 ~2.0gL-1 瓊脂 + IOgL-1 蔗糖，且PH值為5.2。
3.根據(jù)權利要求1所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的增殖繼代培養(yǎng)包括改良MS + 1.0 ~2.0mgL-1BA + 1.0 ~2.0mgL-1ZT + 0.1 ~0.2mgL_1NAA + 1.0 ~2.0gL-1瓊脂+ IOgr1蔗糖，且pH值為5.2。
4.根據(jù)權利要求1所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基包括 1/2 改良 MS + 0.05 ~0.1mgL-1 IBA + O ~0.01mgL-1NAA + 0.6 ~1.0gL-1 瓊脂 + IOgL-1蔗糖，且PH值為5.2。
5.根據(jù)權利要求2-4任一項權利要求所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的改良MS包括常量營養(yǎng)兀素、微量營養(yǎng)兀素和有機試劑。
6.根據(jù)權利要求5所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的常量營養(yǎng)元素的組分和其對應的濃度為:硝酸鉀190mg/L ;硫酸銨165mg/L ;七水硫酸鎂350 mg/L ;四水硝酸鈣680mg/L ;無水磷酸二氫鉀100mg/L ;乙二胺四乙酸二鈉73.4mg/L ;七水硫酸亞鐵18.5 mg/L。
7.根據(jù)權利要求5所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法,其特征在于,所述的微量營養(yǎng)兀素的組分和其對應的濃度為:四水硫酸錳15.6mg/L ;硫酸鋅2.0mg/L ;硼酸3.5 mg/L ;碘化鉀 0.5mg/L ;鑰酸鈉 0.3mg/L ;氯化鈷 0.05 mg/L,硫酸銅 0.02 mg/L。
8.根據(jù)權利要求5所述的一種越橘的組織培養(yǎng)方法，其特征在于，所述的有機試劑的組分和其對應的濃度為:鹽酸硫胺素0.1 mg/L ;煙酸1.5 mg/L ;鹽酸批B多醇1.5mg/L ;肌醇.100.0 mg/L ο
【文檔編號】A01H4/00GK104012411SQ201410250457
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月9日 優(yōu)先權日:2014年6月9日
【發(fā)明者】趙蘭 申請人:趙蘭