一種低致死率的葉蟬微量注射方法
【專利摘要】本發(fā)明提供一種低致死率的葉蟬微量注射方法，屬于昆蟲生理生化研究領域。本方法提高注射效率和葉蟬存活率，減少人力和時間的消耗。昆蟲的微量注射會造成昆蟲軀體的機械損傷，嚴重時會導致蟲體死亡，因此對儀器和技術的要求較高，注射針口徑、材質(zhì)，昆蟲的齡期和注射位點，注射試劑和劑量，以及注射角度、時間和液體流速等因素都可影響昆蟲的存活率。而經(jīng)過本申請的注射方法，葉蟬存活率可達到55-100%。
【專利說明】一種低致死率的葉蟬微量注射方法
【技術領域】
[0001]本發(fā)明涉及一種低致死率的葉蟬微量注射方法，屬于昆蟲生理生化研究領域。
【背景技術】
[0002]葉蟬為一類害禾谷類、蔬菜、果樹和林木等的昆蟲。同翅目，葉蟬科。體長3-15毫米。該科昆蟲不僅危害農(nóng)作物，而且還傳播植物病毒病。研究葉蟬的生理生化特點，有利于揭示昆蟲與農(nóng)作物之間的關系，為昆蟲防治提供依據(jù)。
[0003]昆蟲的微量注射是指借助儀器，將微量液體狀試劑注入昆蟲內(nèi)，是昆蟲生理學研究的重要方法，是昆蟲生理生化實驗中最重要的技術之一。但是該方法會造成昆蟲軀體的機械損傷，嚴重時會導致蟲體死亡，因此對儀器和技術的要求較高，注射針口徑、材質(zhì)，昆蟲的齡期和注射位點，注射試劑和劑量，以及注射角度、時間和液體流速等因素都可影響昆蟲的存活率。目前微量注射儀主要有產(chǎn)生液壓的油泵、產(chǎn)生氣壓的空氣壓力泵等，注射體積范圍從皮升到納升。雖然儀器越精細，對昆蟲造成的傷害可能越小，但是微量注射對操作和材料要求還是比較高，如I)注射針拉制后的口徑，口徑越大，造成的傷口越大；2)昆蟲齡期，蟲體較大的昆蟲在注射后，傷口易愈合，存活率較高，但蟲體小的昆蟲，存活率低下；3)注射位點，多為腹部的節(jié)間膜，角度也視操作人員經(jīng)驗而定。因此影響該技術的因素有人為的和材料本身的，但其最終目的都是盡可能降低對昆蟲的傷害，保證昆蟲的存活率，以便后續(xù)實驗的良好開展。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的在于提供一種低致死率的葉蟬微量注射方法，提高注射效率，減少人力和時間的消耗。
[0005]為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用如下技術方案:
一種低致死率的葉蟬微量注射方法，其特征在于:包括以下步驟:
O使用垂直拉針儀拉制毛細管玻璃注射針，并在顯微鏡下檢查針頭，保證燒熔的玻璃不堵塞針頭；
2)將葉蟬收集在試管內(nèi)，冰上麻痹5-7分鐘，將微量上樣針前端的細管剪下，用于挑取注射后的葉蟬；同時壓扁剩余的小段細管頭部，用于入針時頂住葉蟬；
3)給玻璃注射針上樣，保證針頭接觸液體后可立刻出液，而后，調(diào)整注射針管角度為30-40。；
4)將麻痹后的葉蟬移至顯微鏡下，腹部朝上，移動針頭，將針尖對準后胸與第一腹節(jié)之間的節(jié)間膜正中位置；用壓扁后的微量上樣針細管頭頂住葉蟬頭部，防止入針時推動蟲體，然后小心入針，待針尖刺入蟲體后，調(diào)整顯微操作儀的油壓泵以控制注射劑量，最小注射劑量為2納升，最大注射劑量為0.2微升，然后把葉蟬輕輕撥離針頭，并蘸水粘附葉蟬，小心移入小型飼養(yǎng)籠；
5)待葉蟬蘇醒后，移入養(yǎng) 蟲室常規(guī)飼養(yǎng)。[0006]所述的微量上樣針為microloader微量上樣針。
[0007]所述注射劑量為為2納升-0.2微升，而不致死。
[0008]所述步驟4)中用針葉期的水稻苗或者微量上樣針剪下的細管把葉蟬輕輕撥離針頭。
[0009]本發(fā)明的優(yōu)點在于:注射位點容易入針,注射角度對蟲體損傷較小,注射劑量達到最大仍可保持較高存活率，減少人力和時間的消耗。
【具體實施方式】
[0010]材料:水稻苗，小型飼養(yǎng)籠，冰，試管，毛細管玻璃注射針(內(nèi)徑90mm)，microloader 微量上樣針(eppendoff )
儀器:eppendoff顯微操作儀injectman NK2, NARISHIGE垂直拉針儀PC-10，體視顯微鏡。
[0011]實施例1
使用NARISHIGE垂直拉針儀拉制毛細管玻璃注射針，并在體視顯微鏡下檢查針頭，保證燒熔的玻璃不堵塞針頭。
[0012]將2齡的葉蟬收集在試管內(nèi)，冰上麻痹5分鐘。將microloader微量上樣針前端的細管剪下，用于挑取注射后的葉蟬；同時壓扁剩余的小段細管頭部，用于入針時頂住葉蟬。
[0013]給玻璃注射針上樣,保證針頭接觸液體后可立刻出液。而后，調(diào)整顯微操作儀針管角度，30°。
[0014]將麻痹后的葉蟬移至體視顯微鏡下，腹部朝上，移動針頭，將針尖對準后胸與第一腹節(jié)之間的節(jié)間膜正中位置。用壓扁后的miCToloader微量上樣針細管頭頂住葉蟬頭部，防止入針時推動蟲體，然后小心入針。待針尖刺入蟲體后，調(diào)整顯微操作儀的油壓泵以控制注射劑量0.15微升(劑量大時，可見蟲體逐漸脹大)，用microloader微量上樣針剪下的細管把葉蟬輕輕撥離針頭，并蘸水粘附葉蟬，小心移入小型飼養(yǎng)籠。
[0015]待葉蟬蘇醒后，移入養(yǎng)蟲室常規(guī)飼養(yǎng)。
[0016]實施例2
以黑尾葉蟬為例，選 取1齡若蟲(體長約為1-1.5mm) 150頭，注射蒸餾水，12天后統(tǒng)計存活率，約為58.7%。選取3齡若蟲(體長約為2.0-2.5mm) 100頭，注射蒸餾水，7天后統(tǒng)計存活率，約為88%，12天后存活率74%。選取5齡若蟲(體長約為3.5_4mm)和成蟲(體長約為5mm)各70頭，12天后存活率為100%。
[0017]以上所述僅為本發(fā)明的較佳實施例，凡依本發(fā)明申請專利范圍所做的均等變化與修飾，皆應屬本發(fā)明的涵蓋范圍。
【權利要求】
1.一種低致死率的葉蟬微量注射方法，其特征在于:包括以下步驟: 1)使用垂直拉針儀拉制毛細管玻璃注射針，并在顯微鏡下檢查針頭，保證燒熔的玻璃不堵塞針頭； 2)將葉蟬收集在試管內(nèi)，冰上麻痹5-7分鐘，將微量上樣針前端的細管剪下，用于挑取注射后的葉蟬；同時壓扁剩余的小段細管頭部，用于入針時頂住葉蟬； 3)給玻璃注射針上樣，保證針頭接觸液體后可立刻出液，而后，調(diào)整注射針管角度為30-40。； 4)將麻痹后的葉蟬移至顯微鏡下，腹部朝上，移動針頭，將針尖對準后胸與第一腹節(jié)之間的節(jié)間膜正中位置；用壓扁后的微量上樣針細管頭頂住葉蟬頭部，防止入針時推動蟲體，然后小心入針，待針尖刺入蟲體后，調(diào)整顯微操作儀的油壓泵以控制注射劑量，最小注射劑量為2納升，最大注射劑量為0.2微升，然后把葉蟬輕輕撥離針頭，并蘸水粘附葉蟬，小心移入小型飼養(yǎng)籠； 5)待葉蟬蘇醒后，移入養(yǎng)蟲室常規(guī)飼養(yǎng)。
2.根據(jù)權利要求1所述的一種低致死率的葉蟬微量注射方法，其特征在于:所述的微量上樣針為microload er微量上樣針。
【文檔編號】A61D7/00GK103800095SQ201410067514
【公開日】2014年5月21日 申請日期:2014年2月27日 優(yōu)先權日:2014年2月27日
【發(fā)明者】陳倩, 魏太云, 陳紅燕, 賈東升, 毛倩卓, 吳維, 劉啟飛 申請人:福建農(nóng)林大學