一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，通過無菌處理、分化增殖、不定芽壯苗、生根培養(yǎng)、煉苗移栽等步驟，利用芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基進(jìn)行分步組織培養(yǎng)澳洲蘭豆。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過選擇適合的培養(yǎng)基對(duì)澳洲蘭豆進(jìn)行分步組織培養(yǎng)，從而提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，另外移栽成活率可以達(dá)到85％。
【專利說明】—種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及一種植物組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法?！颈尘凹夹g(shù)】
[0002]澳洲藍(lán)豆是豆科贗靛屬多年生宿根花卉植物。原產(chǎn)澳洲，常生于林緣。莖直立，高約50-100cm左右，成叢狀。羽狀復(fù)葉，互生、總狀花序生于莖頂，
[0003]花冠蝶形，藍(lán)色。花期4-5月。果實(shí)橢圓形或長(zhǎng)圓形；種子棕黃色，腎形?？梢月短焖薷蕉?。開春從基部萌發(fā)強(qiáng)壯新枝。喜冷涼，排水良好，通風(fēng)，陽光充足的地方，忌悶熱潮濕環(huán)境。澳洲藍(lán)豆比較怕陰暗濕熱環(huán)境，栽培的環(huán)境一定要通風(fēng)，向陽?？纱竺娣e片植做地被，也可叢植或配置于花境中，也是小庭院美化的優(yōu)良材料。從國(guó)外引進(jìn)的新品種，引種數(shù)量較少，其分株慢，市場(chǎng)需求量大，種苗供應(yīng)受限制。因此需要開發(fā)組培技術(shù)以提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，但是如何選擇組織培養(yǎng)基、組培的條件如何是需要亟待解決的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的就是為了克服上述現(xiàn)有技術(shù)存在的缺陷而提供一種進(jìn)行分步組織培養(yǎng)、提高成活率、保證母本性狀的組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法。
[0005]本發(fā)明的目的可以通過以下技術(shù)方案來實(shí)現(xiàn):
[0006]一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，采用以下步驟:
[0007](I)無菌處理
[0008]摘取澳洲藍(lán)豆植株剛萌發(fā)的頂芽,用水沖洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用無菌水沖洗5_6次,無菌濾紙吸干表面水份,芽段切成Icm接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24_26°C,光照為70-90 μ mol/ms,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0009](2)分化增殖
[0010]接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的芽段在培養(yǎng)4周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)I個(gè)月后將帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms,進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)；
[0011](3)不定芽壯苗
[0012]在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生的不定芽，將不定芽分成小叢或單芽置于壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90ymol/ms，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30天長(zhǎng)到2_3cm ;
[0013]⑷生根培養(yǎng)
[0014]將壯苗培養(yǎng)基中的不定芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長(zhǎng)至2_3em ；
[0015](5)煉苗移栽
[0016]生根培養(yǎng)40天根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后即可移栽室外，給予肥水管理即可。
[0017]芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L 或 MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
[0018]作為優(yōu)選的實(shí)施方式，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
[0019]增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L,MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L 或 MS+6-BA3mg/L+NAA(X 3mg/L。
[0020]作為優(yōu)選的實(shí)施方式，增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0021]壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L 或 MS+6_BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
[0022]作為優(yōu)選的實(shí)施方式，壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
[0023]生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.05mg/L、MS+NAA0.lmg/L 或 MS+NAA0.2mg/L。
[0024]作為優(yōu)選的實(shí)施方式，生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.lmg/L。
[0025]所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，上述培養(yǎng)基的pH值控制在5.8。
[0026]與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明通過選擇適合的培養(yǎng)基對(duì)澳洲蘭豆進(jìn)行分步組織培養(yǎng)，從而提高繁殖速度和苗木的整齊度，更好地保持原有的母本性狀，另外移栽成活率可以達(dá)到 85%。
【具體實(shí)施方式】
[0027]下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行詳細(xì)說明。
[0028]實(shí)施例1
[0029]一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，采用以下步驟:
[0030](1)無菌處理
[0031]摘取澳洲藍(lán)豆植株剛萌發(fā)的頂芽,用水沖洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用無菌水沖洗5-6次,無菌濾紙吸干表面水份,芽段切成Iem接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L,還包括鹿糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為70 μ mol/ms,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0032](2)分化增殖
[0033]接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的芽段在培養(yǎng)4周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)I個(gè)月后將帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BAlmg/L-+NAA0.1mg/L，還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為240C，光照為70 μ mol/ms，進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)；
[0034](3)不定芽壯苗
[0035]在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生的不定芽，將不定芽分成小叢或單芽置于壯苗培養(yǎng)基中，壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L，還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的PH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為70 μ mol/ms，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30天長(zhǎng)到2-3cm;
[0036](4)生根培養(yǎng)[0037]將壯苗培養(yǎng)基中的不定芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.05mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為24°C，光照為70μπιΟ1/πι8，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長(zhǎng)至2-3cm ；
[0038](5)煉苗移栽
[0039]生根培養(yǎng)40天根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后即可移栽室外，給予肥水管理即可。
[0040]實(shí)施例2
[0041]一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，采用以下步驟:
[0042](I)無菌處理
[0043]摘取澳洲藍(lán)豆植株剛萌發(fā)的頂芽,用水沖洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用無菌水沖洗5次,無菌濾紙吸干表面水份,芽段切成Icm接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0044](2)分化增殖
[0045]接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的芽段在培養(yǎng)4周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)I個(gè)月后將帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms，進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)；
[0046](3)不定芽壯苗
[0047]在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生的不定芽，將不定芽分成小叢或單芽置于壯苗培養(yǎng)基中，壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L，還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的PH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30天長(zhǎng)到2-3cm;
[0048](4)生根培養(yǎng)
[0049]將壯苗培養(yǎng)基中的不定芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.lmg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為25°C，光照為80 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長(zhǎng)至2-3cm ；
[0050](5)煉苗移栽
[0051]生根培養(yǎng)40天根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后即可移栽室外，給予肥水管理即可。
[0052]實(shí)施例3
[0053]一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，采用以下步驟:
[0054](I)無菌處理
[0055]摘取澳洲藍(lán)豆植株剛萌發(fā)的頂芽,用水沖洗2h,用75v/v%的乙醇浸泡30s, Iv/v% O升萊浸泡15min,再用無菌水沖洗6次,無菌濾紙吸干表面水份,芽段切成Icm接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L,還包括鹿糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照為90 μ mol/ms,進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)；
[0056](2)分化增殖
[0057]接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的芽段在培養(yǎng)4周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)I個(gè)月后將帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基上，增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照為90 μ mol/ms，進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)；
[0058](3)不定芽壯苗
[0059]在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生的不定芽，將不定芽分成小叢或單芽置于壯苗培養(yǎng)基中，壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的PH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照為90 μ mol/ms，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30天長(zhǎng)到2-3cm;
[0060](4)生根培養(yǎng)
[0061]將壯苗培養(yǎng)基中的不定芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.2mg/L,還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，培養(yǎng)基的pH值為5.8，控制培養(yǎng)溫度為26°C，光照為90 μ mol/ms，10天后幼苗基部分化出許多白色的根原基，30天后長(zhǎng)至2_3cm:
[0062](5)煉苗移栽
[0063]生根培養(yǎng)40天根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后即可移栽室外，給予肥水管理即可。
【權(quán)利要求】
1.一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，該方法采用以下步驟: (1)無菌處理 摘取澳洲藍(lán)豆植株剛萌發(fā)的頂芽，用水沖洗2h，用75v/v%的乙醇浸泡30s，lv/v% O升汞浸泡15min，再用無菌水沖洗5-6次，無菌濾紙吸干表面水份，芽段切成Icm接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行芽誘導(dǎo)培養(yǎng)； (2)分化增殖 接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的芽段在培養(yǎng)4周后可見愈傷組織，再培養(yǎng)I個(gè)月后將帶芽愈傷組織接種于增殖培養(yǎng)基上，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms,進(jìn)行分化增殖培養(yǎng)； (3)不定芽壯苗 在增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)出叢生的不定芽，將不定芽分成小叢或單芽置于壯苗培養(yǎng)基中，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms，進(jìn)行壯苗培養(yǎng)，30天長(zhǎng)到2_3cm ； (4)生根培養(yǎng) 將壯苗培養(yǎng)基中的不定芽轉(zhuǎn)接入生根培養(yǎng)基中誘導(dǎo)生根，控制培養(yǎng)溫度為24-26°C，光照為70-90 μ mol/ms, 1 0天后幼苗基部分化出許多白色的根原基,30天后長(zhǎng)至2_3cm ； (5)煉苗移栽 生根培養(yǎng)40天根系長(zhǎng)至l-2cm，選擇根系發(fā)達(dá)生長(zhǎng)健壯的無菌苗在室內(nèi)開瓶煉苗7天，取出后洗凈根部瓊脂，在溫室中馴化40天后即可移栽室外，給予肥水管理即可。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L 或MS+6-BA5.0mg/L+NAA0.5mg/L。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6-BA3.0mg/L+NAA0.3mg/L。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BAlmg/L-+NAA0.lmg/L、MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L 或MS+6-BA3mg/L+NAA0.3mg/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的增殖培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+6BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L、MS+6-BA1.0mg/L+NAA0.lmg/L 或MS+6-BA2mg/L+NAA0.2mg/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的壯苗培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+6-BA0.5mg/L+NAA0.lmg/L。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為 MS+NAA0.05mg/L、MS+NAA0.lmg/L 或 MS+NAA0.2mg/L。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的生根培養(yǎng)基的營(yíng)養(yǎng)成分為MS+NAA0.lmg/L。
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種組織培養(yǎng)澳洲蘭豆的方法，其特征在于，所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基、增殖培養(yǎng)基、壯苗培養(yǎng)基、生根培養(yǎng)基還包括蔗糖30g/L、瓊脂6g/L組成的基本成分，上 述培養(yǎng)基的pH值控制在5.8。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103749305SQ201410024961
【公開日】2014年4月30日 申請(qǐng)日期:2014年1月20日 優(yōu)先權(quán)日:2014年1月20日
【發(fā)明者】陳建華, 黃建榮, 沈勤 申請(qǐng)人:上海上房園藝有限公司, 上海上房園林植物研究所有限公司