山楊良種銀×山1333的組織培養(yǎng)方法
【專利摘要】山楊良種銀×山1333的組織培養(yǎng)方法，它涉及一種植物的培養(yǎng)方法。本發(fā)明要解決現(xiàn)有山楊良種銀×山1333植株組織培養(yǎng)困難、繁殖系數(shù)低、組培生根苗不健壯及移栽成活率低的問(wèn)題。本發(fā)明是按以下步驟完成：一、外植體的采集和前處理；二、外植體的分化培養(yǎng)；三、不定芽的繼代增殖培養(yǎng)；四、不定芽的生根培養(yǎng)；五、再生組培苗的煉苗；六、山楊良種銀×山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗，即得到高度為40cm～50cm的山楊良種銀×山1333組培苗的容器苗。本發(fā)明應(yīng)用在植物組織培養(yǎng)領(lǐng)域。
【專利說(shuō)明】山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法
【技術(shù)領(lǐng)域】[0001]本發(fā)明涉及一種植物的組織培養(yǎng)方法。
【背景技術(shù)】[0002]楊樹是我國(guó)北方普遍公認(rèn)的用材林、防護(hù)林和園林綠化的優(yōu)質(zhì)速生樹種，但是在近半個(gè)世紀(jì)引選的1000多個(gè)品種中，沒(méi)有適于林區(qū)山地用材林造林的品種。而我國(guó)是以山地著稱于世的國(guó)家，山區(qū)占國(guó)土面積的三分之二以上，因此開展山地楊樹新品種推廣轉(zhuǎn)化十分必要。東北地區(qū)鄉(xiāng)土樹種中的山楊(Populus davidiana Dode)分布廣泛、適應(yīng)性強(qiáng)、材質(zhì)優(yōu)良，適于林區(qū)山地用材林的營(yíng)造。但是其生長(zhǎng)速度緩慢，年平均胸徑生長(zhǎng)僅4_左右；扦插生根十分困難，繁殖率低；造林難成活，保存率低；心腐嚴(yán)重，20年生山楊心腐率高達(dá)70%，因此過(guò)去利用山楊造林很少。[0003]黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所從“六五”到“九五”，主持了《新選楊樹用材和綠化品系研究》黑龍江省科技重點(diǎn)項(xiàng)目和《山楊良種選育》國(guó)家科技攻關(guān)專題，歷經(jīng)二十年，從不同種源，不同雜交組合的1800多個(gè)無(wú)性系中，選育出了銀X山1333 (P.albaXP.davidianCL.‘1333’)，2010年該品種通過(guò)了黑龍江省森工林區(qū)林木品種審定委員會(huì)組織的良種審定。該良種是適于林區(qū)山地營(yíng)造速生豐產(chǎn)用材林的優(yōu)質(zhì)山楊雜交新品種，其干形通直，雄株，不飛絮，干皮白色，抗性強(qiáng)，生長(zhǎng)快，材質(zhì)好，17年生胸徑達(dá)17.99cm~19.0Ocm,樹高達(dá)15.37m~16.60m,單株材積0.87835m3~1.0866m3，是山地楊樹用材林、工業(yè)原料林、紙漿原料林等速生豐產(chǎn)林和城市園林綠化基地建設(shè)不可多得的良種資源。良種與鄉(xiāng)土山楊相比較:1、抗逆性高:種源提高10.1%，家系提高14%，無(wú)性系提高17% ;2、材積生長(zhǎng)量實(shí)際增益高:種源提高23.46%，家提高系47.2%，無(wú)性系提高61.47% ;3、木材基本密度高:種源提高
5.18%，家系提高6.12%，無(wú)性系提高6.61%。山楊良種銀X山1333填補(bǔ)了我國(guó)北方缺乏山地造林闊葉樹速生樹種的空白。山楊良種銀X山1333均為25年左右的成年樹木，許多研究表明，樹木性狀的表現(xiàn)力在一定生長(zhǎng)階段通常與年齡成正相關(guān)，而營(yíng)養(yǎng)繁殖能力卻與年齡成負(fù)相關(guān)。樹木個(gè)體一旦達(dá)到充分表現(xiàn)其優(yōu)良性狀的年齡時(shí)，往往失去了旺盛的營(yíng)養(yǎng)繁殖能力，這為組織培養(yǎng)提供了依據(jù)。山楊良種銀X山1333根分蘗能力強(qiáng)，但扦插生根極為困難，這影響了山楊良種銀X山1333的規(guī)?；敝撑c推廣。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0004]本發(fā)明的目的是為了解決現(xiàn)有山楊良種銀X山1333植株組織培養(yǎng)困難、繁殖系數(shù)低、組培生根苗不健壯及移栽成活率低的問(wèn)題，而提供山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法。[0005]本發(fā)明山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，是按以下步驟完成:[0006]一、外植體的采集和前處理:將山楊良種銀X山1333植株的外植體在流水下沖洗1h~2h后，用質(zhì)量濃度為70%~75%乙醇溶液對(duì)表面進(jìn)行消毒IOs~20s，然后用無(wú)菌水沖洗2~3遍,再用0.1%氯化萊消毒2.0min~4.0min后,用無(wú)菌水沖洗3~5遍,最后用無(wú)菌濾紙吸干無(wú)菌水，并對(duì)外植體進(jìn)行處理，得到已消毒的外植體；
[0007]二、外植體的分化培養(yǎng):將步驟一中得到的已消毒的外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d，光強(qiáng)2500Lx~3500Lx和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)30d~45d，得到山楊良種銀X山1333的不定芽；
[0008]三、繼代增殖培養(yǎng):將步驟二中得到的山楊良種銀X山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養(yǎng)基中，在溫度231:~261:、光照時(shí)間10h/d~12h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)得到1.5cm~2.0cm高的山楊良種銀X山1333不定芽；
[0009]四、不定芽的生根培養(yǎng):將步驟三得到1.5cm~2.0cm苗高的山楊良種銀X山1333不定芽轉(zhuǎn)接到已滅菌的不定芽生根培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)至苗高為4cm~5cm且具有3~5片葉片，即得山楊良種銀X山1333再生組培苗；
[0010]五、再生組培苗的煉苗:在溫室內(nèi)，將步驟四中得到山楊良種銀X山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環(huán)境溫度20°C~25°C，濕度80%~95%，光照強(qiáng)度3500Lx~4500Lx的條件下進(jìn)行再生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀X山1333植株；
[0011]其中，所述的再生組培苗的煉苗，是按照下述步驟實(shí)現(xiàn)的:首先將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗Id~2d，然后在培養(yǎng)瓶瓶口面積的1/4~1/3沒(méi)有覆蓋物的條件下煉苗Id~2d，最后將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d~3d ;
[0012]六、山楊良種 銀X山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗:將步驟五中得到的山楊良種銀X山1333植株從培養(yǎng)瓶中取出，放入清水中洗凈根部附著的培養(yǎng)基，將山楊良種銀X山1333植株的根系保留1.0cm~1.5cm，用質(zhì)量濃度為1.00g/L~1.25g/L多菌靈浸泡15min~20min,再用無(wú)菌水沖洗3~5遍后移栽到已消毒的育苗基質(zhì)中在晝溫21°C~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和遮光率60%~70%的條件下培養(yǎng)3d_5d，然后在晝溫21V~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和遮光率30%~40%的條件下培養(yǎng)5d~IOd ;最后在晝溫21V~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和無(wú)遮光的條件下培養(yǎng)，待小苗成活且高度為40cm~50cm后，即得到山楊良種銀X山1333組培苗的容器苗。
[0013]本發(fā)明的有益效果:
[0014]本發(fā)明利用組織培養(yǎng)技術(shù)解決山楊良種銀X山1333常規(guī)繁殖存在的問(wèn)題，不僅可以獲得性狀高度一致的群體，而且大大加快了良種推廣的進(jìn)程，并為遺傳改良提供了新的途徑。
[0015]本發(fā)明提供了山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，解決了山楊良種銀X山1333植株的組織問(wèn)題，通過(guò)本發(fā)明山楊良種銀X山1333植株分化培養(yǎng)基進(jìn)行外植體不定芽分化分化率可達(dá)75%~88%，分化系數(shù)3.50~4.50 ;山楊良種銀X山1333的繼代增殖培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)可使繼代增殖系數(shù)為1.5~4.7 ;山楊良種銀X山1333的不定芽生根培養(yǎng)基培養(yǎng)可使生根率達(dá)到76.5%以上，生根5~14條，且生長(zhǎng)的根多健壯，完整的山楊良種銀X山1333再生苗的移栽成活率高達(dá)90.5%。
[0016]本發(fā)明山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，應(yīng)用山楊良種銀X山1333的培養(yǎng)基，培養(yǎng)得到的山楊良種銀X山1333再生組織的不定芽分化率、增殖系數(shù)高和生根率高，通過(guò)培養(yǎng)基獲得的山楊良種銀X山1333再生組織的試管苗移栽成活率高、組培苗生長(zhǎng)健壯、葉形葉色正常、皮下生根和新葉萌發(fā)快等優(yōu)點(diǎn)，能夠滿足商品化、工廠化大規(guī)模快速生產(chǎn)山楊良種銀X山1333無(wú)菌容器苗的需要，具有良好的應(yīng)用前景。
[0017]本發(fā)明克服了山楊良種銀X山1333母株年齡效應(yīng)、扦插生根困難、繁殖系數(shù)低、組培生根苗根系不健壯，移栽成活率低等問(wèn)題，能夠?yàn)樯唐坊?、工廠化大規(guī)模快速生產(chǎn)山楊良種銀X山1333無(wú)菌容器苗提供技術(shù)支撐，具有十分重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。
【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0018]圖1為【具體實(shí)施方式】一步驟二中葉片誘導(dǎo)的不定芽的圖片；
[0019]圖2為【具體實(shí)施方式】一步驟二中休眠芽誘導(dǎo)的不定芽的圖片；
[0020]圖3為【具體實(shí)施方式】一步驟三中不定芽的繼代增殖培養(yǎng)第30天的山楊良種銀X山1333苗的圖片；
[0021]圖4為【具體實(shí)施方式】一步驟四中得到的山楊良種銀X山1333再生組培苗的圖片;
[0022]圖5為【具體實(shí)施方式】一步驟四中得到的山楊良種銀X山1333再生苗的健壯根系的圖片；
[0023]圖6為具體實(shí)施方 式一步驟六中移栽到已消毒的基質(zhì)中第5天的山楊良種銀X山1333再生苗的圖片；
[0024]圖7為【具體實(shí)施方式】一步驟六中得到的長(zhǎng)至40cm~50cm高度的完整的山楊良種銀X山1333容器苗的圖片。
【具體實(shí)施方式】
[0025]【具體實(shí)施方式】一:本實(shí)施方式山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，是按以下步驟完成:
[0026]一、外植體的采集和前處理:將山楊良種銀X山1333植株的外植體在流水下沖洗Ih~2h后，用質(zhì)量濃度為70%~75%乙醇溶液對(duì)表面進(jìn)行消毒IOs~20s，然后用無(wú)菌水沖洗2~3遍,再用0.1%氯化萊消毒2.0min~4.0min后,用無(wú)菌水沖洗3~5遍,最后用無(wú)菌濾紙吸干無(wú)菌水，并對(duì)外植體進(jìn)行處理，得到已消毒的外植體；
[0027]二、外植體的分化培養(yǎng):將步驟一中得到的已消毒的外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d，光強(qiáng)2500Lx~3500Lx和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)30d~45d，得到山楊良種銀X山1333的不定芽；
[0028]三、繼代增殖培養(yǎng):將步驟二中得到的山楊良種銀X山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養(yǎng)基中，在溫度231:~261:、光照時(shí)間10h/d~12h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)得到1.5cm~2.0cm高的山楊良種銀X山1333不定芽；
[0029]四、不定芽的生根培養(yǎng):將步驟三得到1.5cm~2.0cm苗高的山楊良種銀X山1333不定芽轉(zhuǎn)接到已滅菌的不定芽生根培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)至苗高為4cm~5cm且具有3~5片葉片，即得山楊良種銀X山1333再生組培苗；
[0030]五、再生組培苗的煉苗:在溫室內(nèi)，將步驟四中得到山楊良種銀X山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環(huán)境溫度20°C~25°C，濕度80%~95%，光照強(qiáng)度3500Lx~4500Lx的條件下進(jìn)行再生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀X山1333植株；
[0031]其中，所述的再生組培苗的煉苗，是按照下述步驟實(shí)現(xiàn)的:首先將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗Id~2d，然后在培養(yǎng)瓶瓶口面積的1/4~1/3沒(méi)有覆蓋物的條件下煉苗Id~2d，最后將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d~3d ;
[0032]六、山楊良種銀X山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗:將步驟五中得到的山楊良種銀X山1333植株從培養(yǎng)瓶中取出，放入清水中洗凈根部附著的培養(yǎng)基，將山楊良種銀X山1333植株的根系保留1.0cm~1.5cm，用質(zhì)量濃度為1.00g/L~1.25g/L多菌靈浸泡15min~20min,再用無(wú)菌水沖洗3~5遍后移栽到已消毒的育苗基質(zhì)中在晝溫21°C~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和遮光率60%~70%的條件下培養(yǎng)3d_5d，然后在晝溫21°C~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和遮光率30%~40%的條件下培養(yǎng)5d~IOd ;最后在晝溫21°C~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和無(wú)遮光的條件下培養(yǎng)，待小苗成活且高度為40cm~50cm后，即得到山楊良種銀X山1333組培苗的容器苗。
[0033]本實(shí)施方式中步驟二中所述的愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基是由一種山楊良種銀X山1333植株再生基礎(chǔ)培養(yǎng)基(YS培養(yǎng)基)和濃度為0.lmg/L~1.5mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和Omg/L~0.lmg/L的激動(dòng)素(KT)組成。
[0034]本實(shí)施方式步驟三中所述的不定芽繼代增殖培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和0.lmg/L~1.0mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和Omg/L~0.05mg/L的萘乙酸(NAA)組成。
[0035]本實(shí)施方式步驟四中所述的不定芽生根培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和激素A組成，所述的激素A為0.lmg/L~2.0mg/L的吲哚丁酸(ΙΒΑ)、0.lmg/L~2.0mg/L的口引哚乙酸(IAA)和
0.0 lmg/L~2.0mg/L的萘乙酸(NAA)中的一種或幾種按任意比例組成。
[0036]本實(shí)施方式山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法中所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；
[0037]每IL的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為330mg/L~350mg/L的KN03、390mg/L ~410mg/L NH4NO3>90mg/L ~100mg/L 的 CaCl2 *2H20,360mg/L ~380mg/L 的 MgSO4.7Η20、540mg/L ~560mg/L 的 Ca (NO3)2 *4H20>580mg/L ~620mg/L 的 K2SO4 和 350mg/L ~380mg/L KH2PO4 組成；
[0038]每IL的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的Η3Β03、22.3mg/L 的 MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2H20 和 0.25mg/L的 CuSO4.5H20 組成；
[0039]每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7H20和36mg/L ~38mg/L 的 Na2-EDTA 組成；
[0040]每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為鹿糖15g/L~25g/L、4mg/L~6mg/L的鹽酸硫胺素、0.3mg/L~0.6mg/L的煙酸、0.6mg/L~3mg/L的鹽酸吡卩多醇、80mg/L~110mg/L的肌醇和lmg/L~3mg/L的甘氨酸；
[0041]每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.0g/L~6.0g/L。
[0042]【具體實(shí)施方式】二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一的不同點(diǎn)在于，步驟一中所述山楊良種銀X山1333植株的外植體為:從健壯的、沒(méi)有傷口和沒(méi)有病蟲的25年生的山楊良種銀X山1333植株上取外植體，每年I~2月份采集山楊良種銀X山1333植株帶休眠芽的莖段，每年5份采集山楊良種銀X山1333植株的葉片，每年5月份采集山楊良種銀X山1333植株的帶腋芽的莖段。采取山楊良種銀X山1333植株的外植體時(shí)，應(yīng)在晴好的天氣的中午或下午。其他與【具體實(shí)施方式】一相同。
[0043]【具體實(shí)施方式】三:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一或二的不同點(diǎn)在于，步驟一所述的對(duì)外植體進(jìn)行處理是指將休眠芽從莖上剝離，并剝?nèi)ネ饷骥[片和最外層葉片，或者將葉片帶葉柄和不帶葉柄部分分別切割成0.8X0.8cm2~1.2X1.2cm2的正方形，或者將帶腋芽的莖段切割成0.5cm~1.5cm。其他與【具體實(shí)施方式】一或二相同。
[0044]【具體實(shí)施方式】四:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至三之一的不同點(diǎn)在于，步驟一中所述的已消毒的外植體為休眠芽、腋芽、帶葉柄葉片或不帶葉柄葉片。其他與具體實(shí)施方
式一至三之一相同。
[0045]【具體實(shí)施方式】五:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至四之一的不同點(diǎn)在于，步驟一中所述的外植體為腋芽。其他與【具體實(shí)施方式】一至四之一相同。
[0046]本實(shí)施方式外植體為腋芽時(shí)，愈傷組織誘導(dǎo)的分化率高到56.2%，啟動(dòng)僅為14天，莖節(jié)長(zhǎng)達(dá)1.2cm。
[0047]【具體實(shí)施方式】六:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至五之一的不同點(diǎn)在于，步驟二所述的不定芽分化培養(yǎng)基是由YS培養(yǎng)基和濃度為1.0mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和
0.lmg/L的激動(dòng)素(KT)組成；
[0048]其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/L NH4N03、96mg/L 的 CaC l2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3)2.4H20、600mg/I^3K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7Η20和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3B03、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。其他與【具體實(shí)施方式】一至五之一相同。
[0049]【具體實(shí)施方式】七:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至六之一的不同點(diǎn)在于，步驟二所述的外植體分化培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度24°C~26°C，光照時(shí)間14h/d，光強(qiáng)3000Lx，濕度75~78%，培養(yǎng)時(shí)間30d。其他與【具體實(shí)施方式】一至六之一相同。
[0050]【具體實(shí)施方式】八:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至七之一的不同點(diǎn)在于，步驟三中所述的繼代增殖培養(yǎng)基是指由YS培養(yǎng)基和0.5mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和
0.03mg/L的萘乙酸(NAA)組成；
[0051]其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/L NH4N03、96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3)2.4H20、600mg/I^3K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7Η20和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3B03、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。其他與【具體實(shí)施方式】一至七之一相同。
[0052]【具體實(shí)施方式】九:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至八之一的不同點(diǎn)在于，步驟三所述的繼代增殖培養(yǎng)的培養(yǎng)條件為溫度24°C~26°C，光照時(shí)間12h/d，光強(qiáng)2500Lx，其中為光源為白熾日光燈，濕度75~78%,培養(yǎng)時(shí)間35d。其他與【具體實(shí)施方式】一至八之一相同。
[0053]【具體實(shí)施方式】十:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至九之一的不同點(diǎn)在于，步驟四中所述的不定芽生根培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和激素組成，所述的激素為1.5mg/L的吲哚丁酸(IBA)和0.0 lmg/L~0.02mg/L的萘乙酸組成；
[0054]其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/L NH4N03、96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3)2.4H20、600mg/I^3K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7Η20和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3B03、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。其他與【具體實(shí)施方式】一至九之一相同。
·[0055]【具體實(shí)施方式】十一:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至十之一的不同點(diǎn)在于，步驟四所述的不定芽生根的培養(yǎng)條件為溫度24°C~26°C、光照時(shí)間13h/d、光強(qiáng)3000LX、光源為白熾日光燈和濕度75%~78%。其他與【具體實(shí)施方式】一至十之一相同。
[0056]【具體實(shí)施方式】十二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至十一之一的不同點(diǎn)在于，步驟五所述的再生組培苗的煉苗，是按照下述步驟實(shí)現(xiàn)的:首先將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗Id~2d，然后在培養(yǎng)瓶瓶口面積的1/4~1/3沒(méi)有覆蓋物的條件下煉苗Id~2d，最后將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d~3d ;其中，所述的將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開是指將固定培養(yǎng)瓶瓶口的封口膜的橡皮筋松開，培養(yǎng)瓶瓶口的封口膜仍在培養(yǎng)瓶瓶口處。
[0057]【具體實(shí)施方式】十二:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至十一之一的不同點(diǎn)在于，步驟六中所述的育苗基質(zhì)是指全沙土、全壤土、沙土與壤土體積比1:1的混合基質(zhì)、沙土與壤土體積比為2:1的混合基質(zhì)、草炭土與黑土體積比1:1的混合基質(zhì)、草炭土、黑土與蛭石體積比1:1:1的混合基質(zhì)或蛭石與壤土體積比為1:1的混合基質(zhì)，且最上層的蛭石的厚度與混合基質(zhì)厚度的比為1: (10~12);
[0058]其中，所述的已消毒的育苗基質(zhì)是將育苗基質(zhì)在115°C~121°C溫度下進(jìn)行高溫消毒20min~30min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其他與【具體實(shí)施方式】一至十一之一相同。
[0059]【具體實(shí)施方式】十三:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至十二之一的不同點(diǎn)在于，步驟六中所述的育苗基質(zhì)是蛭石與壤土體積比為1:1的混合基質(zhì)，且最上層的蛭石的厚度與混合基質(zhì)厚度的比為1:10 ;
[0060]其中，所述的已消毒的育苗基質(zhì)是將育苗基質(zhì)在115°C~121°C溫度下進(jìn)行高溫消毒20min~30min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。其他與【具體實(shí)施方式】一至十二之一相同。
[0061]【具體實(shí)施方式】十四:本實(shí)施方式與【具體實(shí)施方式】一至十三之一的不同點(diǎn)在于，步驟六中所述的完整的山楊良種銀X山1333再生組培苗的煉苗在育苗基質(zhì)培養(yǎng)過(guò)程中每周施用1/2MS營(yíng)養(yǎng)液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)每30d用MS大量元素1000倍稀釋液追肥。其他與【具體實(shí)施方式】一至十三之一相同。
[0062]通過(guò)以下驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證本發(fā)明的有益效果:
[0063]驗(yàn)證實(shí)驗(yàn)一:
[0064]本驗(yàn)證試驗(yàn)山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，是按以下步驟完成:
[0065]一、外植體的采集和前處理:每年5月份采集帶腋芽的莖段，外植體在流水下沖洗
1.5h后，用質(zhì)量濃度為75%乙醇溶液表面消毒15s，然后用無(wú)菌水沖洗3遍，再用0.1%氯化汞消毒2.5min，用無(wú)菌水沖洗5遍，最后用無(wú)菌濾紙吸干無(wú)菌水，并對(duì)外植體進(jìn)行處理，將帶有腋芽的莖段切割至0.5~1.5cm，得到的已消毒的腋芽外植體；
[0066]二、外植體的分化培養(yǎng):將步驟一中得到的已消毒的腋芽外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養(yǎng)基中，在 溫度24°C~26°C、光照時(shí)間14h/d、光強(qiáng)3000Lx和濕度75%~78%的條件下培養(yǎng)30d，得到山楊良種銀X山1333的不定芽；
[0067]三、繼代增殖培養(yǎng):將步驟二中得到的山楊良種銀X山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養(yǎng)基中，在溫度24°C~26°C、光照時(shí)間12h/d，光強(qiáng)2500Lx，光源為白熾日光燈，濕度75%~78%的條件下培養(yǎng)35d，得到1.5cm~2.0cm高的山楊良種銀X山1333不
定芽；
[0068]四、不定芽的生根培養(yǎng):將步驟三得到1.5cm~2.0cm苗高的山楊良種銀X山1333不定芽轉(zhuǎn)接到已滅菌的不定芽生根培養(yǎng)基中，在溫度24°C~26°C、光照時(shí)間12h/d、光強(qiáng)3000Lx、光源為白熾日光燈和濕度75%~78%的條件下培養(yǎng)至苗高為4~5cm且具有3~5片葉片，即得完整的山楊良種銀X山1333再生苗；
[0069]五、再生組培苗的煉苗:在溫室內(nèi)，將步驟四中得到完整的山楊良種銀X山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環(huán)境溫度25°C~28°C，濕度80%~95%，光照強(qiáng)度4000Lx的條件下進(jìn)行再生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀X山1333植株；
[0070]其中，所述的再生組培苗的煉苗，具體過(guò)程是按下述實(shí)現(xiàn):首先將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗Id~2d，然后在培養(yǎng)瓶瓶口面積的1/4~1/3沒(méi)有覆蓋物的條件下煉苗Id~2d，最后將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d~3d ;其中，所述的將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開是指將固定培養(yǎng)瓶瓶口的封口膜的橡皮筋松開，培養(yǎng)瓶瓶口的封口膜仍在培養(yǎng)瓶瓶口處。
[0071]六、山楊良種銀X山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗:將步驟五中得到的山楊良種銀X山1333植株從培養(yǎng)瓶中取出，放入清水中洗凈根部附著的培養(yǎng)基，將山楊良種銀X山1333植株的根系保留1.0cm~1.5cm，用質(zhì)量濃度為1.25g/L的多菌靈浸泡15min~20min，再用無(wú)菌水沖洗3~5遍后移栽到已消毒的育苗基質(zhì)中進(jìn)行:現(xiàn)在晝溫21 °C~29 °C，夜溫18 °C~21 °C，濕度80%~95%，遮光率60%~70%的條件下培養(yǎng)4d，然后在晝溫21°C~29°C，夜溫18°C~21°C，濕度80%~95%，遮光率30%~40%的條件下培養(yǎng)8d ;最后在晝溫21°C~29°C，夜溫18°C~21°C，濕度80%~95%，無(wú)遮光的條件下培養(yǎng)，待小苗成活且高度為40cm~50cm后，得到山楊良種銀X山1333組培苗的容器苗。
[0072]本驗(yàn)證試驗(yàn)選取的外植體為山楊良種銀X山1333植株的腋芽。
[0073]本驗(yàn)證試驗(yàn)一種山楊良種銀X山1333植株再生培養(yǎng)基的愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和濃度為1.0mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和0.lmg/L的激動(dòng)素(KT)組成。
[0074]本驗(yàn)證試驗(yàn)一種山楊良種銀X山1333植株再生培養(yǎng)基的繼代增殖培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和0.5mg/L的6-芐基胺基嘌呤(6-BA)和0.03mg/L的萘乙酸(NAA)組成。 [0075]本驗(yàn)證試驗(yàn)一種山楊良種銀X山1333植株再生培養(yǎng)基的不定芽生根培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和激素組成，所述的激素為1.5mg/L的吲哚丁酸和0.0 lmg/L的萘乙酸(NAA)組成。
[0076]其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/L NH4N03、96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3)2.4H20、600mg/I^3K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7Η20和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3B03、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。
[0077]本驗(yàn)證試驗(yàn)中步驟六中所述的育苗基質(zhì)為蛭石與壤土體積比為1:1的混合基質(zhì)，且最上層的蛭石的厚度與混合基質(zhì)厚度的比為1:10 ;其中所述的已消毒的育苗基質(zhì)是將育苗基質(zhì)在115°c~121°C溫度下進(jìn)行高溫消毒20min~30min后即得消毒后的育苗基質(zhì)。。
[0078]本驗(yàn)證試驗(yàn)步驟六中所述的完整的山楊良種銀X山1333再生組培苗的煉苗在育苗基質(zhì)培養(yǎng)過(guò)程中每周施用1/2MS營(yíng)養(yǎng)液補(bǔ)充營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)每30d用MS大量元素1000倍稀釋液追肥。
[0079]本驗(yàn)證試驗(yàn)中山楊良種銀X山1333愈傷組織誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基培養(yǎng)的愈傷組織分化可達(dá)88%，分化系數(shù)為4.23 ;山楊良種銀X山1333的繼代增殖基培養(yǎng)可使繼代增殖系數(shù)為4.7 ;山楊良種銀X山1333的不定芽生根培養(yǎng)基培養(yǎng)可使生根率達(dá)到87.5%，生根5~11條，移栽成活率高于90.5%。
[0080]本驗(yàn)證試驗(yàn)克服了山楊良種銀X山1333母株年齡效應(yīng)、扦插生根困難、繁殖系數(shù)低、組培生根苗根系不健壯，移栽成活率低等問(wèn)題，能夠?yàn)樯唐坊⒐S化大規(guī)?？焖偕a(chǎn)山楊良種銀X山1333無(wú)菌容器苗提供技術(shù)支撐，具有十分重要的社會(huì)和經(jīng)濟(jì)效益。
[0081]本
【發(fā)明內(nèi)容】
不僅限于上述各實(shí)施方式的內(nèi)容，其中一個(gè)或幾個(gè)【具體實(shí)施方式】的組合同樣也可以實(shí)現(xiàn)發(fā)明的目的。
【權(quán)利要求】
1.山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，是按以下步驟完成: 一、外植體的采集和前處理:將山楊良種銀X山1333植株的外植體在流水下沖洗Ih~2h后，用質(zhì)量濃度為70%~75%乙醇溶液對(duì)表面進(jìn)行消毒IOs~20s，然后用無(wú)菌水沖洗2~3遍,再用0.1%氯化萊消毒2.0min~4.0min后,用無(wú)菌水沖洗3~5遍,最后用無(wú)菌濾紙吸干無(wú)菌水，并對(duì)外植體進(jìn)行處理，得到已消毒的外植體； 二、外植體的分化培養(yǎng):將步驟一中得到的已消毒的外植體接種到已滅菌的不定芽分化培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d，光強(qiáng)2500Lx~3500Lx和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)30d~45d，得到山楊良種銀X山1333的不定芽； 三、繼代增殖培養(yǎng):將步驟二中得到的山楊良種銀X山1333不定芽接種到已滅菌的繼代增殖培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間10h/d~12h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)得到1.5cm~2.0cm高的山楊良種銀X山1333不定芽； 四、不定芽的生根培養(yǎng):將步驟三得到1.5cm~2.0cm苗高的山楊良種銀X山1333不定芽轉(zhuǎn)接到已滅菌的不定芽生根培養(yǎng)基中，在溫度23°C~26°C、光照時(shí)間12h/d~14h/d、光強(qiáng)2500Lx~3500Lx、光源為白熾日光燈和濕度70%~80%的條件下培養(yǎng)至苗高為4cm~5cm且具有3~5片葉片，即得山楊良種銀X山1333再生組培苗； 五、再生組培苗的煉苗:在溫室內(nèi)，將步驟四中得到山楊良種銀X山1333再生組培苗置于溫室苗床上，在環(huán)境溫度20°C~25°C，濕度80%~95%，光照強(qiáng)度3500Lx~4500Lx的條件下進(jìn)行再 生組培苗的煉苗，得到山楊良種銀X山1333植株； 其中，所述的再生組培苗的煉苗，是按照下述步驟實(shí)現(xiàn)的:首先將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物松開煉苗Id~2d，然后在培養(yǎng)瓶瓶口面積的1/4~1/3沒(méi)有覆蓋物的條件下煉苗Id~2d，最后將培養(yǎng)瓶瓶口的覆蓋物全部去除煉苗2d~3d ; 六、山楊良種銀X山1333組培苗出瓶定植后得到容器苗:將步驟五中得到的山楊良種銀X山1333植株從培養(yǎng)瓶中取出，放入清水中洗凈根部附著的培養(yǎng)基，將山楊良種銀X山1333植株的根系保留1.0cm~1.5cm，用質(zhì)量濃度為1.00g/L~1.25g/L多菌靈浸泡15min~20min,再用無(wú)菌水沖洗3~5遍后移栽到已消毒的育苗基質(zhì)中在晝溫21V~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和遮光率60%~70%的條件下培養(yǎng)3d_5d，然后在晝溫21°C~29 °C、夜溫18 V~21°C、濕度80%~95%和遮光率30%~40%的條件下培養(yǎng)5d~IOd ;最后在晝溫21°C~29°C、夜溫18°C~21°C、濕度80%~95%和無(wú)遮光的條件下培養(yǎng)，待小苗成活且高度為40cm~50cm后，即得到山楊良種銀X山1333組培苗的容器苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一中所述山楊良種銀X山1333植株的外植體為:從健壯的、沒(méi)有傷口和沒(méi)有病蟲的25年生的山楊良種銀X山1333植株上取外植體，每年I~2月份采集山楊良種銀X山1333植株帶休眠芽的莖段，每年5份采集山楊良種銀X山1333植株的葉片，每年5月份采集山楊良種銀X山1333植株的帶腋芽的莖段。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟一中所述的的已消毒的外植體為休眠芽、腋芽、帶葉柄葉片或不帶葉柄葉片。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟二所述的不定芽分化培養(yǎng)基是由YS培養(yǎng)基和濃度為1.0mg/L的6-芐基胺基嘌呤和0.lmg/L的激動(dòng)素組成； 其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/LNH4NO3>96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3) 2.4H20、600mg/L 的 K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7H20 和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每 1L的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3BO3、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每1L的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟三中所述的繼代增殖培養(yǎng)基是指由YS培養(yǎng)基和0.5mg/L的6-芐基胺基嘌呤和0.03mg/L的萘乙酸組成； 其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/LNH4NO3>96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3) 2.4H20、600mg/L 的 K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7H20 和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每 1L的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3BO3、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每IL的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每IL的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟四中所述的不定芽生根培養(yǎng)基由YS培養(yǎng)基和激素組成，所述的激素為1.5mg/L的吲哚丁酸(IBA)和0.0 lmg/L~0.02mg/L的萘乙酸組成； 其中，所述的YS培養(yǎng)基是由大量元素、微量元素、鐵鹽、有機(jī)成分、強(qiáng)度為1300g/cm2的瓊脂和水組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的大量元素由濃度為340mg/L的KN03、400mg/LNH4NO3>96mg/L 的 CaCl2.2H20、370mg/L 的 MgSO4.7H20、550mg/L 的 Ca (NO3) 2.4H20、600mg/L 的 K2S04、370mg/L KH2PO4,27.8mg/L 的 FeSO4.7H20 和 37.3mg/L 的 Na2-EDTA 組成；每 1L的YS培養(yǎng)基中所述的微量元素由濃度為0.83mg/L的K1、6.2mg/L的H3BO3、22.3mg/L的MnSO4.4Η20、8.6mg/L 的 ZnSO4.7Η20、0.25mg/L 的 Na2MoO4.2Η20 和 0.25mg/L 的 CuSO4.5Η20組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的鐵鹽由濃度為25mg/L~28mg/L的FeSO4.7Η20和36mg/L~38mg/L的Na2-EDTA組成；每1L的YS培養(yǎng)基中所述的有機(jī)成分為蔗糖20g/L、5mg/L的鹽酸硫胺素、0.5mg/L的煙酸、0.5mg/L的鹽酸吡B多醇、100mg/L的肌醇和2mg/L的甘氨酸；每1L的YS培養(yǎng)基中強(qiáng)度為1300g/cm2瓊脂的質(zhì)量含量為5.5g/L。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于在步驟四所述的在溫度24°C~26°C、光照時(shí)間13h/d、光強(qiáng)3000Lx、光源為白熾日光燈和濕度75%~78%的條件下培養(yǎng)至苗高為4cm~5cm且具有3~5片葉片，即得山楊良種銀X山1333再生組培苗。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的山楊良種銀X山1333的組織培養(yǎng)方法，其特征在于步驟六中所述的育苗基質(zhì)是指全沙土、全壤土、沙土與壤土體積比1:1的混合基質(zhì)、沙土與壤土體積比為2:1的混合基質(zhì)、草炭土與黑土體積比1:1的混合基質(zhì)、草炭土、黑土與蛭石體積比I:1:1的混合基質(zhì)或蛭石與壤土體積比為1:1的混合基質(zhì)，且最上層的蛭石的厚度與混合基質(zhì)厚度的比為1: (10~12); 其中所述的已消毒的育苗基質(zhì)是將育苗基質(zhì)在115°C~121°C溫度下進(jìn)行高溫消毒20min~30min后即得消毒·后的育苗基質(zhì)。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103583371SQ201310626728
【公開日】2014年2月19日 申請(qǐng)日期:2013年11月29日 優(yōu)先權(quán)日:2013年11月29日
【發(fā)明者】白卉, 李春明, 張妍妍, 李靜, 王艷敏 申請(qǐng)人:黑龍江省林業(yè)科學(xué)研究所