一種抗鴨瘟組合物、凍干粉、制備方法及應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種抗鴨瘟組合物、凍干粉、制備方法及應(yīng)用，屬于獸用飼料添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】。該組合物由以下重量份的組分組成：抗鴨瘟卵黃抗體90～100份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子0.5～2份。該凍干粉由以下重量份的組分組成：抗鴨瘟卵黃抗體95～97份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子1～2份，滅活劑0.2～0.3份，防腐劑0.01～0.02份，耐熱凍干保護劑2.05～3.6份；具有降低保存條件，延長保存時間，抗體效價高、生物活性良好等優(yōu)點，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子與抗鴨瘟卵黃抗體配合使用具有防治鴨瘟病的功效，能提高鴨的免疫力和成活率，使用方便且成本低。
【專利說明】—種抗鴨瘟組合物、凍干粉、制備方法及應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明具體涉及一種飼料添加劑用抗鴨瘟組合物，以及抗鴨瘟凍干粉，同時還涉及該凍干粉的制備方法及應(yīng)用，屬于獸用飼料添加劑【技術(shù)領(lǐng)域】。

【背景技術(shù)】
[0002]鴨痕(Duckplape)又名鴨病毒性腸炎(Duck virus enteritis, DVE),是鴨、鵝和其他雁形目禽類的一種急性、熱性、敗血性傳染病。該病的特征是流行廣泛，傳播迅速，發(fā)病率和死亡率都高。早在1923年Baudet氏在荷蘭首次發(fā)現(xiàn)本病，直到1940年Bos氏首次提出鴨瘟的名稱，并確認(rèn)是一種不同于雞瘟的新病毒病。以后在歐、美各國均有本病發(fā)生的報道。鴨瘟在我國流行的正式報道是黃引賢1957年在廣東首先提出的，隨后武漢、上海、浙江、江蘇、廣西、湖南和福建等地陸續(xù)發(fā)現(xiàn)，至80年代傳播到東北各省。1957年以來，本病廣泛流行于我國華南、華中、華東養(yǎng)鴨業(yè)較發(fā)達地區(qū)，造成很大的經(jīng)濟損失。
[0003]1963年全國農(nóng)業(yè)科學(xué)規(guī)劃會議將防制鴨瘟作為重點課題，其后許多單位進行了大量的防治研究工作，并成功地研制了各類預(yù)防用疫苗，從而有效地控制了本病的發(fā)生和流行，有力地保障了養(yǎng)鴨業(yè)的發(fā)展。然而，人們通過疫苗類對鴨瘟進行免疫，早期效果較好，但是需要多次接種，操作麻煩，成本較高，容易使畜禽產(chǎn)生應(yīng)激反應(yīng)，且疫苗對于保藏條件要求較為苛刻，需在低溫下冷藏，室溫條件下一段時間則失效。因此，迫切需要一種能夠防治鴨瘟的產(chǎn)品。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]本發(fā)明的目的是提供一種抗鴨瘟組合物。
[0005]同時，本發(fā)明還提供一種抗鴨瘟凍干粉。
[0006]再者，本發(fā)明還提供一種抗鴨瘟凍干粉的制備方法。
[0007]最后，本發(fā)明提供一種抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用。
[0008]為了實現(xiàn)以上目的，本發(fā)明所采用的技術(shù)方案是:
[0009]一種抗鴨瘟組合物，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體90?100份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子0.5?2份。
[0010]一種抗鴨瘟凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體95?97份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子I?2份，滅活劑0.2?0.3份，防腐劑0.01?0.02份，耐熱凍干保護劑2.05?
3.6 份。
[0011]所述的滅活劑為甲醛。
[0012]所述的防腐劑為硫柳汞。
[0013]優(yōu)選的，所述的耐熱凍干保護劑由以下重量份的組分組成:硒0.05?0.1份，維生素C0.5?I份，聚乙烯吡咯烷酮I?2份，甘氨酸0.5份。
[0014]一種抗鴨瘟凍干粉的制備方法，具體步驟如下:
[0015](I)分離毒株制備疫苗:取鴨瘟病毒株增殖、滅活后制得疫苗備用；
[0016](2)免疫健康雞群制備高免蛋:取步驟(I)制備的疫苗免疫接種健康雞群，當(dāng)抗體效價達到1:256時，收集高免蛋清理、消毒后晾干備用；
[0017](3)酸化處理:取步驟(2)制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入PH值為4.9?5.2的預(yù)冷酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后室溫下靜置沉淀；
[0018](4)取步驟(3)靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO4混合物，以提高抗體的解離度，離心得含有抗鴨瘟卵黃抗體的上清液；
[0019](5)取步驟(4)中的上清液，上清液中抗鴨瘟卵黃抗體的量為95?97份，再在上清液中加入I?2份的抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子，混勻后依次用0.45 μ m和0.22 μ m的濾膜過濾；
[0020](6)將步驟(5)的濾液濃縮得濃縮液，在濃縮液中依次加入0.2?0.3份的滅活齊IJ、0.01?0.02份的防腐劑及2.05?3.6份的耐熱凍干保護劑，混勻后經(jīng)預(yù)凍、凍干處理即得抗鴨瘟凍干粉。
[0021]所述步驟(2)中第一次使用滅活疫苗正常量，為103_2ELD5tlA).1ml鴨瘟病毒滅活疫苗1.5mL，間隔7天免疫I次，后續(xù)每次免疫增加I倍量，于第二次免疫后開始檢測抗體效價。
[0022]所述步驟(4)中NaCl與NaSO4的質(zhì)量比為4:1。
[0023]所述步驟(5)中的抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子可以為市售商品，也可以采用以下方法制備得到:
[0024]( I)用滅菌后的生理鹽水清洗用鴨瘟病毒抗原免疫過的豬脾臟，去其表面筋、脂肪等組織，再用生理鹽水沖洗；
[0025](2)將步驟(I)處理后的豬脾臟破碎，加入2倍預(yù)冷的PBS緩沖液，用組織勻漿儀將其勻質(zhì)得勻漿液；
[0026](3)在將步驟(2)中的勻漿液用超聲破碎儀處理1min得破碎液；
[0027](4)將步驟(3)的破碎液調(diào)至pH值為5.3?5.7,6000rpm離心30min，收集上清液；
[0028](5)將步驟(4)的上清液用微濾膜過濾，截留分子量7000道爾頓的物質(zhì)，收集上清液；
[0029](6)將步驟(5)的上清液用除菌濾膜過濾，得到抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子原液，4°C保存或凍干備用。
[0030]本發(fā)明凍干粉中加入的抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子可以將原液換算成轉(zhuǎn)移因子的含量加入，也可以加入經(jīng)凍干處理的轉(zhuǎn)移因子粉末。
[0031]一種抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用，步驟如下:取抗鴨瘟凍干粉，按照重量百分比為0.2?0.6%加入飼料中，混勻即得。
[0032]本發(fā)明的有益效果:
[0033]本發(fā)明飼料添加劑用抗鴨瘟凍干粉具有降低保存條件，延長保存時間，抗體效價高、生物活性良好等優(yōu)點，將其按一定比例加入飼料配方中，可以預(yù)防和治療鴨瘟，提高鴨的免疫力和成活率，使用方便，能降低成本和勞動力。該凍干粉將兩種具有不同生物活性的抗鴨瘟的生物物質(zhì)融合在一起，能提高防治鴨瘟的能力。其中，抗體是具有較強針對性的生物活性物質(zhì)，是屬于被動作用的生物活性物質(zhì)，不能有效調(diào)動機體的有效主動的機能，只能對相應(yīng)的病毒起到作用，轉(zhuǎn)移因子是一種特異的調(diào)節(jié)免疫機能的活性物質(zhì)，可以調(diào)節(jié)機體的有效的免疫系統(tǒng)機能，從而主動參與免疫，刺激淋巴細(xì)胞等體液主面的免疫。兩者聯(lián)用將大大提高攻守作用，提高機體的防治機能。本發(fā)明抗鴨瘟卵黃抗體能有效預(yù)防鴨瘟，對動物沒有毒副作用，環(huán)保、無殘留，將高免制得的抗鴨瘟卵黃抗體作為添加組分加入飼料中，能在較大程度上預(yù)防鴨瘟，加大添加量還能治療鴨瘟；抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子與抗鴨瘟卵黃抗體配合使用能提高單方的防治效果。
[0034]本發(fā)明采用健康雞群作為免疫對象，能降低毒株返祖的可能性，同時可以快速提高抗體效價至1:256，通過雞強化免疫后制成的卵黃抗體對鴨瘟防治效果突出，見效快、療效顯著，且針對性強。
[0035]本發(fā)明抗鴨瘟凍干粉中耐熱凍干保護劑采用硒、Vc、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)和甘氨酸四種組分，其中，硒是一種微量元素，具抗突變作用、抗氧化作用、促進致癌物的體內(nèi)滅活作用、抗細(xì)胞增殖作用、增強機體免疫力作用，調(diào)節(jié)并提高機體免疫功能的作用，使機體特異性免疫和非特異性免疫、體液免疫和細(xì)胞免疫功能處于相對平衡狀態(tài)，具有抗衰老作用，可以減緩生物活性物質(zhì)的有效活性的作用具有很多種，具有抗氧化性和避免日曬后的一系列的變化，還可以調(diào)節(jié)溫度變化對機體的適應(yīng)能力，同時還可以促進鐵質(zhì)和鈣質(zhì)的吸收作用；PVP是藥物的黏結(jié)劑、增溶劑、崩解劑、延效劑，利用PVP分子與藥物分子間的氫鍵締合作用可以起到與增溶、速效相反的延效、緩釋作用、控制PVP分子與藥物分子間的締合程度，可以使締合后藥物分子在人體內(nèi)緩慢地釋放出來，延緩其溶解速度，起到延長藥效地作用，同時具有明顯的生物保護功能；甘氨酸具有防腐、緩沖作用，也可以起到穩(wěn)定劑的作用。

【具體實施方式】
[0036]下述實施例僅對本發(fā)明作進一步詳細(xì)說明，但不構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
[0037]實施例1
[0038]本實施例的抗鴨瘟組合物，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體96份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子1.5份。
[0039]本實施例的抗鴨瘟凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體96份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子1.5份，甲醛0.2份，硫柳汞0.01份，硒0.05份，維生素C0.5份，聚乙烯吡咯烷酮I份，甘氨酸0.5份。
[0040]本實施例中抗鴨瘟凍干粉的制備方法，具體步驟如下:
[0041](I)毒株制備疫苗:取國家標(biāo)準(zhǔn)鴨瘟病毒株增殖、滅活后制得乳油劑疫苗備用；
[0042](2)免疫健康雞群制備高免蛋:取步驟(I)制備的乳油劑疫苗免疫接種健康雞群，第一次使用滅活疫苗正常量，為103_2ELD5tlA).1rnl鴨瘟病毒滅活疫苗1.5mL,間隔7天免疫I次，后續(xù)每次免疫增加I倍量，共免疫三次，于第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達到1:256時，開始收集高免蛋，高免蛋經(jīng)清理、消毒后晾干備用；
[0043](3)酸化處理:取步驟(2)制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入PH值為4.9的預(yù)冷酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后置于貯藏罐中于室溫下靜置沉淀；
[0044](4)取步驟(3)靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO4 (NaCl與NaSO4的質(zhì)量比為4:1)混合物混合物，以提高抗體的解離度，再在15000rpm/min下離心20min得含有抗鴨瘟卵黃抗體的上清液；
[0045](5)取步驟(4)中的上清液，上清液中抗鴨瘟卵黃抗體的量為96份，再在上清液中加入1.5份抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子，混勻后用0.45 μ m濾膜過濾，以截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，取濾液用0.22 μ m濾膜二次過濾；
[0046](6)將步驟(5)的濾液經(jīng)超濾裝置濃縮至卵黃抗體濃度為2.5mL/500羽份，在濃縮液中依次加入0.2份甲醛、0.01份硫柳汞、0.05份硒、0.5份維生素C、I份聚乙烯吡咯烷酮、
0.5份甘氨酸，混勻后置于-80°C下充分冷凍，而后置于凍干機中凍干即得。
[0047]本實施例中抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子的制備方法為:
[0048]( I)用滅菌后的生理鹽水清洗用鴨瘟病毒抗原免疫過的豬脾臟，去其表面筋、脂肪等組織，再用生理鹽水沖洗；
[0049](2)將步驟(I)處理后的豬脾臟破碎，加入2倍預(yù)冷的PBS緩沖液，用組織勻漿儀將其勻質(zhì)得勻漿液；
[0050](3)在將步驟(2)中的勻漿液用超聲破碎儀處理1min得破碎液；
[0051](4)將步驟(3)的破碎液調(diào)至pH值為5.5，6000rpm離心30min，收集上清液；
[0052](5)將步驟(4)的上清液用微濾膜過濾，截留分子量7000道爾頓的物質(zhì)，收集上清液；
[0053](6)將步驟(5)的上清液用除菌濾膜過濾，得到抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子原液，凍干備用。
[0054]本實施例的抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用，步驟如下:取抗鴨瘟凍干粉，按照重量百分比為0.2%加入飼料中，混勻即得。
[0055]實施例2
[0056]本實施例的抗鴨瘟組合物，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體95份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子2份。
[0057]本實施例的抗鴨瘟凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體95份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子2份，甲醛0.3份，硫柳汞0.02份，硒0.1份，維生素Cl份，聚乙烯吡咯烷酮2份，甘氨酸0.5份。
[0058]本實施例中抗鴨瘟凍干粉的制備方法，具體步驟如下:
[0059](I)毒株制備疫苗:取國家標(biāo)準(zhǔn)犬細(xì)小病毒株增殖、滅活后制得乳油劑疫苗備用；
[0060](2)免疫健康雞群制備高免蛋:取步驟(I)制備的乳油劑疫苗免疫接種健康雞群，第一次使用滅活疫苗正常量，為103_2ELD5tlA).1rnl犬細(xì)小病毒滅活疫苗1.5mL,間隔7天免疫I次，后續(xù)每次免疫增加I倍量，共免疫三次，于第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達到1:256時，開始收集高免蛋，高免蛋經(jīng)清理、消毒后晾干備用；
[0061](3)酸化處理:取步驟(2)制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入PH值為4.9的預(yù)冷酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后置于貯藏罐中于室溫下靜置沉淀；
[0062](4)取步驟(3)靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO4 (NaCl與NaSO4的質(zhì)量比為4:1)混合物，以提高抗體的解離度,再在15000rpm/min下離心20min得含有抗鴨瘟卵黃抗體的上清液；
[0063](5)取步驟(4)中的上清液，上清液中抗鴨瘟卵黃抗體的量為95份，再在上清液中加入2份抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子(制備方法同實施例1)，混勻后用0.45 μ m濾膜過濾，以截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，取濾液用0.22 μ m濾膜二次過濾；
[0064](6)將步驟(5)的濾液經(jīng)超濾裝置濃縮至卵黃抗體濃度為2.5mL/500頭份，在濃縮液中依次加入0.3份甲醛、0.02份硫柳汞、0.1份硒、I份維生素C、2份聚乙烯吡咯烷酮、0.5份甘氨酸，混勻后置于_80°C下充分冷凍，而后置于凍干機中凍干即得。
[0065]本實施例的抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用，步驟如下:取抗鴨瘟凍干粉，按照重量百分比為0.4%加入飼料中，混勻即得。
[0066]實施例3
[0067]本實施例的抗鴨瘟組合物，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體97份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子I份。
[0068]本實施例的抗鴨瘟凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體97份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子I份，甲醛0.25份，硫柳汞0.015份，硒0.075份，維生素C0.75份，聚乙烯吡咯燒酮1.5份，甘氨酸0.5份。
[0069]本實施例中抗鴨瘟凍干粉的制備方法，具體步驟如下:
[0070](I)毒株制備疫苗:取國家標(biāo)準(zhǔn)犬細(xì)小病毒株增殖、滅活后制得乳油劑疫苗備用；
[0071](2)免疫健康雞群制備高免蛋:取步驟(I)制備的乳油劑疫苗免疫接種健康雞群，第一次使用滅活疫苗正常量，為103_2ELD5tlA).1rnl犬細(xì)小病毒滅活疫苗1.5mL,間隔7天免疫I次，后續(xù)每次免疫增加I倍量，共免疫三次，于第二次免疫后開始檢測抗體效價，當(dāng)抗體效價達到1:256時，開始收集高免蛋，高免蛋經(jīng)清理、消毒后晾干備用；
[0072](3)酸化處理:取步驟(2)制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入PH值為5.0的預(yù)冷酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后置于貯藏罐中于室溫下靜置沉淀；
[0073](4)取步驟(3)靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO4 (NaCl與NaSO4的質(zhì)量比為4:1)混合物，以提高抗體的解離度,再在15000rpm/min下離心20min得含有抗鴨瘟卵黃抗體的上清液；
[0074](5)取步驟(4)中的上清液，上清液中抗鴨瘟卵黃抗體的量為97份，再在上清液中加入I份抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子(制備方法同實施例1)，混勻后用0.45 μ m濾膜過濾，以截流分子量大于200KD的大分子物質(zhì)，取濾液用0.22 μ m濾膜二次過濾；
[0075](6)將步驟(5)的濾液經(jīng)超濾裝置濃縮至卵黃抗體濃度為2.5mL/500頭份，在濃縮液中依次加入0.25份甲醛、0.015份硫柳汞、0.075份硒、0.75份維生素CU.5份聚乙烯吡咯烷酮、0.5份甘氨酸，混勻后置于-80°C下充分冷凍，而后置于凍干機中凍干即得。
[0076]本實施例的抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用，步驟如下:取抗鴨瘟凍干粉，按照重量百分比為0.6%加入飼料中，混勻即得。
[0077]對比例I
[0078]本對比例的飼料添加劑用抗鴨瘟卵黃抗體凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體98份，甲醛0.25份，硫柳汞0.015份，硒0.075份，維生素C0.75份，聚乙烯吡咯烷酮1.5份，甘氨酸0.5份。凍干粉的制備方法和應(yīng)用同實施例3。
[0079]對比例2
[0080]本對比例的飼料添加劑用抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子凍干粉，由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子98份，甲醛0.25份，硫柳汞0.015份，硒0.075份，維生素C0.75份，聚乙烯吡咯烷酮1.5份，甘氨酸0.5份。
[0081]試驗例I
[0082]預(yù)防效果試驗:使用7日齡雛鴨700只，其中100只作為對照隔離養(yǎng)，使用普通的飼料；100只作為空白組，采用普通飼料?’另500只試驗用隔離飼養(yǎng)，隨機分為5組，每組100只，使用實施例1~3及對比例I~2制備的飼料，飼料成分與對照組和空白組一致。飼養(yǎng)方式為自由采食，自由飲水，24h后，取試驗組和對照組中的雛鴨肌注接種稀釋后DVE病毒液，記錄120h死亡情況，試驗結(jié)果詳見下表1。
[0083]治療效果試驗:使用7日齡雛鴨600只，600只點眼接種稀釋后的DVE病毒液，飼養(yǎng)方式為自由采食和自由飲水，感染12h后，其中100只作為陽性對照組，使用普通飼料；另500只為試驗組，隨機分為5組，每組100只，使用實施例1~3及對比例I~2制備的飼料，飼料成分與陽性對照組一致，連續(xù)記錄120h各組的死亡情況，試驗結(jié)果詳見下表1。
[0084]表1各處理組防治鴨瘟的結(jié)果

【權(quán)利要求】
1.一種抗鴨瘟組合物，其特征在于:由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體90?100份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子0.5?2份。
2.一種抗鴨瘟凍干粉，其特征在于:由以下重量份的組分組成:抗鴨瘟卵黃抗體95?97份，抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子I?2份，滅活劑0.2?0.3份，防腐劑0.01?0.02份，耐熱凍干保護劑2.05?3.6份。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗鴨瘟凍干粉，其特征在于:所述的滅活劑為甲醛。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗鴨瘟凍干粉，其特征在于:所述的防腐劑為硫柳汞。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述的抗鴨瘟凍干粉，其特征在于:所述的耐熱凍干保護劑由以下重量份的組分組成:硒0.05?0.1份，維生素C0.5?I份，聚乙烯吡咯烷酮I?2份，甘氨酸0.5份。
6.一種如權(quán)利要求2-5任一項所述的抗鴨瘟凍干粉的制備方法，其特征在于:具體步驟如下: (1)分離毒株制備疫苗:取鴨瘟病毒株增殖、滅活后制得疫苗備用； (2)免疫健康雞群制備高免蛋:取步驟(I)制備的疫苗免疫接種健康雞群，當(dāng)抗體效價達到1:256時，收集高免蛋清理、消毒后晾干備用； (3)酸化處理:取步驟(2)制備的高免蛋分離卵黃，加入等體積的無菌水，充分?jǐn)嚢柚令伾l(fā)白得卵黃溶液，在卵黃溶液中加入PH值為4.9?5.2的酸化水，加入量為卵黃溶液體積的8倍，混勻后靜置沉淀； (4)取步驟(3)靜置后的上清液，按體積加入0.8%的NaCl和NaSO4混合物，以提高抗體的解離度，離心得含有抗鴨瘟卵黃抗體的上清液； (5)取步驟(4)中的上清液，上清液中抗鴨瘟卵黃抗體的量為95?97份，再在上清液中加入I?2份的抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子，混勻后依次用0.45 μ m和0.22 μ m的濾膜過濾； (6)將步驟(5)的濾液濃縮得濃縮液，在濃縮液中依次加入0.2?0.3份的滅活劑、0.01?0.02份的防腐劑及2.05?3.6份的耐熱凍干保護劑，混勻后經(jīng)預(yù)凍、凍干處理即得抗鴨瘟凍干粉。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨瘟凍干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(2)中第一次使用滅活疫苗正常量，為103_2ELD5tlA).1ml鴨瘟病毒滅活疫苗1.5mL,間隔7天免疫I次，后續(xù)每次免疫增加I倍量，于第二次免疫后開始檢測抗體效價。
8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨瘟凍干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(4)中NaCl與NaSO4的質(zhì)量比為4:1。
9.根據(jù)權(quán)利要求6所述的抗鴨瘟凍干粉的制備方法，其特征在于:所述步驟(5)中的抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子采用以下方法制備得到: (1)用滅菌后的生理鹽水清洗用鴨瘟病毒抗原免疫過的豬脾臟，去其表面筋、脂肪等組織，再用生理鹽水沖洗； (2)將步驟(I)處理后的豬脾臟破碎，加入2倍預(yù)冷的PBS緩沖液，用組織勻漿儀將其勻質(zhì)得勻漿液； (3)在將步驟(2)中的勻漿液用超聲破碎儀處理1min得破碎液； (4)將步驟(3)的破碎液調(diào)至pH值為5.3?5.7，6000rpm離心30min，收集上清液； (5)將步驟(4)的上清液用微濾膜過濾，截留分子量7000道爾頓的物質(zhì)，收集上清液； (6)將步驟(5)的上清液用除菌濾膜過濾，得到抗鴨瘟轉(zhuǎn)移因子原液，4°C保存或凍干備用。
10.一種如權(quán)利要求2-5任一項所述的抗鴨瘟凍干粉在制備飼料中的應(yīng)用，其特征在于:步驟如下:取抗鴨瘟凍干粉，按照重量百分比為0.2?0.6%加入飼料中，混勻即得。
【文檔編號】A23K1/16GK104162156SQ201310312910
【公開日】2014年11月26日 申請日期:2013年7月24日 優(yōu)先權(quán)日:2013年7月24日
【發(fā)明者】吳紅云, 趙小中, 郭俊清 申請人:河南聯(lián)合英偉飼料有限公司