專利名稱：一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁殖仙客來的方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種組織培養(yǎng)方法，具體涉及一種仙客來的組織培養(yǎng)方法。
背景技術：
仙客來，又名兔耳花、蘿卜海棠、一品冠等，為報春花科仙客來屬多年生草本植物，花形奇特，仙客來原產地在歐洲南部希臘等地中海地區(qū)，被愛花人士栽培的歷史已經有300多年以上了。在18世紀的時候曾以德國為栽培中心，后來更風靡了整個歐洲。由于園藝學家不斷地進行品種改良，終于把栽培中心移轉到了美國。并逐漸成為世界性的觀賞花卉，很受愛花者的推崇，因此被推舉為盆花的女王?，F(xiàn)栽培的均為雜交種，品種甚多。廣泛栽培于各溫帶地區(qū)，是著名的冬春季溫室盆花?；ㄆ陂L達數(shù)月，深受人們喜愛。圣馬力諾選上這種〃世界級〃的花卉來當國花的確相當有眼光。仙客來喜涼爽、濕潤及陽光充足的環(huán)境。生長和花芽分化的適溫為15-20°C，濕度70% -75%;冬季花期溫度不得低于10°C，若溫度過低，則花色暗淡，且易凋落；夏季溫度若達到28-30°C，則植株休眠，若達到35°C以上，則塊莖易于腐爛。幼苗較老株耐熱性稍強。為中日照植物，生長季節(jié)的適宜光照強度為28000LX，低于1500Lx或高于45000LX,則光合強度明顯下降。并且種植時要求疏松、肥沃、富含腐殖質、排水良好的微酸性沙壤土?；ㄆ?0月至翌年4月。
隨著世界上仙客來新品種的不斷開發(fā)和改良，我國仙客來栽培技術水平也隨之有了較大的改進和完善，主要表現(xiàn)在其生產周期的縮短和成品花品質的巨大提高?，F(xiàn)在仙客來的栽培周期已經由以前的2-3年縮短到了 8-12個月，近年成品花的品質也已接近國外的水平?，F(xiàn)在仙客來一般都用種子進行繁育，可以說一年中任何季節(jié)隨時都可以播種。但是播種時間的安排主要由種植者根據(jù)其成品花的上市時間、自己的生產設施條件以及所種品種的栽培周期長短而決定。也可采用分割球莖和組織培養(yǎng)繁殖，但是因為分割球莖的技術比較難以掌握，目前還沒有廣泛采用，利用組織培養(yǎng)進行無性繁殖的研究也比較少，并且技術也不成熟。發(fā)明內容
本發(fā)明主要解決的技術問題是提供一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁殖仙客來的方法。
為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的一個技術方案是: 一種利用組織培養(yǎng)技 術快速繁殖仙客來的方法，包括以下步驟: (I)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的仙客來球莖，剝去球莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗20min后放入清水中浸泡15min后，再在紫外燈下照射20min，繼而轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70 %的乙醇浸泡15秒，然后用無菌水沖洗2-3次，再用5%次氯酸鈉溶液消毒lOmin，無菌水沖洗2_3次；然后迅速加入3 %雙氧水浸泡殺菌8-10 min ,浸泡過程中經常搖動燒杯,然后倒掉升雙氧水液體,用無菌水沖洗4-5次后,再用無菌水浸泡備用。
(2)材料的處理:將消毒處理好的球莖用無菌濾紙吸干，在無菌條件下將材料按照上、中、下部分割開來，分別切成6-8mm的小塊，并且上、中、下部還有材料分別進行下一步培養(yǎng)。
(3)愈傷組織的誘導和芽的分化:將經過步驟(2)處理好的球莖切塊接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期llh/d，光強度為20001ux，空氣的相對濕度為70-75%，培養(yǎng)18-22天可以形成愈傷組織和芽的分化，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為 MS+ 瓊脂 6.0g/L+ GA3L 5mg/L+6_BA 1.2mg/L+ ZT 0.4mg/L + 蔗糖 25g/L。
(4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導的愈傷組織和分化出來的芽分別切下接種在繼代培養(yǎng)基上，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強度為23001ux，空氣的相對濕度繼續(xù)保持在70-75%，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L +6-BA2.0mg/L +NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+瓊脂8.0g/L ;經過15-20天長出小球莖。
(5)生根培養(yǎng):將分化出來的小球莖分別接種于下列誘導培養(yǎng)基中進行生根誘導:MS 培養(yǎng)基 + GA3 1.2mg/L+ 活性炭 4.8mg/L+ 瓊脂 7g/L+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 15mg/L，培養(yǎng)溫度為21-23°C，光照周期ll_13h/d，光強度為2200-24001x，PH值為6.5，相對濕度為70%左右，經過28天左右根系長出5-10個根時，即開始下一個階段。
(6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗一周左右，將長出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽光下曬1-2天，在曬的過程中要適當遮光，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、泥炭的混合比例為2: I: 2: 3的苗床上；將小苗取出用自來水沖洗去根部的瓊脂，避免損傷根， 然后用高錳酸鉀2000倍液浸泡8-12min后把小苗進行移栽，在移栽初期的3天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持在85%以上高濕度，并且控制光照強度小于14001x，之后逐漸揭去薄膜并適當增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。
本發(fā)明的有益效果是: (1)提供了一種完整的仙客來組織培養(yǎng)的技術方法，建立了一套完整的仙客來組織培養(yǎng)快速繁殖體系。
(2)仙客來的上、中、下部分化能力不同，將上、中、下部還有基部的材料分別進行下一步培養(yǎng)，有利于材料的形成愈傷組織的時間比較統(tǒng)一，有利于管理； (3)移栽的過程中采取必要的措施控制了生長的溫度，使仙客來在適宜的溫度下進行繁殖，提高了幼苗的質量和成活率，由于合理的移植，幼苗的成活率達到95%以上。
具體實施方式
下面對本發(fā)明的較佳實施例進行詳細闡述，以使本發(fā)明的優(yōu)點和特征能更易于被本領域技術人員理解，從而對本發(fā)明的保護范圍做出更為清楚明確的界定。
實施例1 一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁殖仙客來的方法，包括以下步驟: (I)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的仙客來球莖，剝去球莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗20min后放入清水中浸泡15min后，再在紫外燈下照射20min，繼而轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70 %的乙醇浸泡15秒，然后用無菌水沖洗2次，再用5%次氯酸鈉溶液消毒lOmin，無菌水沖洗2次；然后迅速加入3 %雙氧水浸泡殺菌8 min ,浸泡過程中經常搖動燒杯,然后倒掉升雙氧水液體,用無菌水沖洗4次后，再用無菌水浸泡備用。
(2)材料的處理:將消毒處理好的球莖用無菌濾紙吸干，在無菌條件下將材料按照上、中、下部分割開來，分別切成6mm的小塊，并且上、中、下部還有材料分別進行下一步培養(yǎng)。
(3)愈傷組織的誘導和芽的分化:將經過步驟(2)處理好的球莖切塊接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期llh/d，光強度為20001ux，空氣的相對濕度為70%，培養(yǎng)22天可以形成愈傷組織和芽的分化，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+瓊脂 6.0g/L+ GA3L 5mg/L+6-BA 1.2mg/L+ ZT 0.4mg/L + 蔗糖 25g/L。
(4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導的愈傷組織和分化出來的芽分別切下接種在繼代培養(yǎng)基上，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強度為23001ux，空氣的相對濕度繼續(xù)保持在70%，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L +6-BA2.0mg/L +NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+瓊脂8.0g/L ;經過18天長出小球莖。
(5)生根培養(yǎng):將分化出來的小球莖分別接種于下列誘導培養(yǎng)基中進行生根誘導:MS 培養(yǎng)基 + GA3 1.2mg/L+ 活性炭 4.8mg/L+ 瓊脂 7g/L+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 15mg/L，培養(yǎng)溫度為21°C，光照周期13h/d，光強度為24001x，PH值為6.5，相對濕度為70%左右，經過26天根系長出5-10個根時，即開始下一個階段。
(6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗一周左右，將長出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽光下曬I天，在曬的過程中要適當遮光，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、泥炭的混合比例為2: I: 2: 3的苗床上；將小苗取出用自來水沖洗去根部的瓊脂，避免損傷根，然后用高錳酸鉀2000倍液浸泡Smin后把小苗進行移栽，在移栽初期的3天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持在85%以上高濕度，并且控制光照強度小于14001x，之后逐漸揭去薄膜并適當增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。
實施例2 一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁 殖仙客來的方法，包括以下步驟: (I)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的仙客來球莖，剝去球莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗20min后放入清水中浸泡15min后，再在紫外燈下照射20min，繼而轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70 %的乙醇浸泡15秒，然后用無菌水沖洗3次,再用5%次氯酸鈉溶液消毒lOmin，無菌水沖洗3次；然后迅速加入3%雙氧水浸泡殺菌10 min ,浸泡過程中經常搖動燒杯,然后倒掉升雙氧水液體,用無菌水沖洗5次后，再用無菌水浸泡備用。
(2)材料的處理:將消毒處理好的球莖用無菌濾紙吸干，在無菌條件下將材料按照上、中、下部分割開來，分別切成8mm的小塊，并且上、中、下部還有材料分別進行下一步培養(yǎng)。
(3)愈傷組織的誘導和芽的分化:將經過步驟(2)處理好的球莖切塊接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期llh/d，光強度為20001ux，空氣的相對濕度為75%，培養(yǎng)18天可以形成愈傷組織和芽的分化，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+瓊脂 6.0g/L+ GA3L 5mg/L+6-BA 1.2mg/L+ ZT 0.4mg/L + 蔗糖 25g/L。
(4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導的愈傷組織和分化出來的芽分別切下接種在繼代培養(yǎng)基上，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強度為23001ux，空氣的相對濕度繼續(xù)保持在75%，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L +6-BA2.0mg/L +NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+瓊脂8.0g/L ;經過16天長出小球莖。
(5)生根培養(yǎng):將分化出來的小球莖分別接種于下列誘導培養(yǎng)基中進行生根誘導:MS 培養(yǎng)基 + GA3 1.2mg/L+ 活性炭 4.8mg/L+ 瓊脂 7g/L+IBA0.5mg/L+ 蔗糖 15mg/L，培養(yǎng)溫度為23°C，光照周期12h/d，光強度為22001x，PH值為6.5，相對濕度為70%左右，經過28天根系長出5-10個根時，即開始下一個階段。
(6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗一周左右，將長出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽光下曬2天，在曬的過程中要適當遮光，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、泥炭的混合比例為2: I: 2: 3的苗床上；將小苗取出用自來水沖洗去根部的瓊脂，避免損傷根，然后用高錳酸鉀2000倍液浸泡12min后把小苗進行移栽，在移栽初期的3天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持在85%以上高濕度，并且控制光照強度小于14001x，之后逐漸揭去薄膜并適當增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。
以上所述僅為本發(fā)明的實施例，并非因此限制本發(fā)明的專利范圍，凡是利用本發(fā)明說明書內容所作的等效結構或等效流程變換，或直接或間接運用在其他相關的技術領域，均同理包括在本 發(fā)明的專利保護范圍內。
權利要求
1.一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁殖仙客來的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)外植體的選擇與消毒處理:首先選用生長健壯、成熟的新鮮的仙客來球莖，剝去球莖最外層干皺的鱗片和基部殘余老根，流水沖洗20min后放入清水中浸泡15min后，再在紫外燈下照射20min，繼而轉入超凈工作臺，在超凈工作臺上先用70 %的乙醇浸泡15秒，然后用無菌水沖洗2-3次，再用5%次氯酸鈉溶液消毒lOmin，無菌水沖洗2_3次；然后迅速加入3%雙氧水浸泡殺菌8-10 min ,浸泡過程中經常搖動燒杯,然后倒掉升雙氧水液體,用無菌水沖洗4-5次后,再用無菌水浸泡備用； (2)材料的處理:將消毒處理好的球莖用無菌濾紙吸干，在無菌條件下將材料按照上、中、下部分割開來，分別切成6-8mm的小塊，并且上、中、下部還有材料分別進行下一步培養(yǎng); (3)愈傷組織的誘導和芽的分化:將經過步驟(2)處理好的球莖切塊接種到愈傷組織誘導培養(yǎng)基中，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期llh/d，光強度為20001ux，空氣的相對濕度為70-75%，培養(yǎng)18-22天可以形成愈傷組織和芽的分化，所述愈傷組織誘導培養(yǎng)基為MS+瓊脂 6.0 g/L+ GA3L 5mg/L+6_BA 1.2mg/L+ ZT 0.4mg/L + 鹿糖 25g/L ； (4)繼代培養(yǎng):將步驟(3)中誘導的愈傷組織和分化出來的芽分別切下接種在繼代培養(yǎng)基上，PH6.5，培養(yǎng)溫度為24°C，光照周期12h/d，光強度為23001ux，空氣的相對濕度繼續(xù)保持在70-75%，所述的培養(yǎng)基為1/2MS+蔗糖35mg/L +6-BA2.0mg/L +NAA0.5mg/L+KT0.5mg/L+瓊脂8.0g/L ;經過15-20天長出小球莖； (5)生根培養(yǎng):將分化出來的小球莖分別接種于下列誘導培養(yǎng)基中進行生根誘導:MS培養(yǎng)基+ GA3 1.2mg/L+活性炭4.8mg/L+瓊脂7g/L+IBA0.5mg/L+蔗糖15mg/L，培養(yǎng)溫度為21-23°C，光照周期ll_13h/d，光強度為2200-24001x，PH值為6.5，相對濕度為70%左右，經過28天左右根系長出5-10個根時，即開始下一個階段； (6)煉苗移栽:先將培養(yǎng)瓶移至溫室，自然條件下煉苗一周左右，將長出新根的小鱗莖從培養(yǎng)瓶中取出，在陽光下曬1-2天，在曬的過程中要適當遮光，然后將其移栽到由腐殖土、蛭石、珍珠巖、泥炭的混合比例為2: I: 2: 3的苗床上；將小苗取出用自來水沖洗去根部的瓊脂，避 免損傷根，然后用高錳酸鉀2000倍液浸泡8-12min后把小苗進行移栽，在移栽初期的3天內，用塑料薄膜覆蓋，以保持在85%以上高濕度，并且控制光照強度小于14001x，之后逐漸揭去薄膜并適當增加光照，直至將移栽苗置于自然條件下。
全文摘要
本發(fā)明公開一種利用組織培養(yǎng)技術快速繁殖仙客來的方法，具體包括對外植體的選擇與消毒處理、材料處理、愈傷組織的誘導和芽的分化、繼代培養(yǎng)、生根培養(yǎng)以及煉苗移栽等步驟，這種組織培養(yǎng)技術提高了仙客來的繁殖效率，也提高了球莖的利用率。
文檔編號A01H4/00GK103238526SQ201310211918
公開日2013年8月14日 申請日期2013年5月31日 優(yōu)先權日2013年5月31日
發(fā)明者陳勇明 申請人:常熟市佳盛農業(yè)科技發(fā)展有限公司