專利名稱：一種拮抗楊梅潰瘍病菌的黃三素鏈霉菌的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物病害的生物防治，屬于植物保護學科中的生物防治研究與應用領域。
背景技術：
楊梅潰瘍病是許多楊梅種植區(qū)的重要病害，極易造成樹勢衰弱，影響楊梅產量和品質。目前防治該病害的方法主要是利用化學藥劑葉枯唑和農用鏈霉素涂抹，其他藥劑防效均不夠理想。從病害防治角度，僅兩種藥劑用于病害防治不夠豐富，還需開發(fā)其它有效藥劑供農業(yè)生產選擇使用。為了給研制新型生物農藥提供基礎，豐富防治楊梅潰瘍病的藥劑種類，本發(fā)明中從土壤中篩選了一株放線菌YZF3菌株，其能有效抑制楊梅潰瘍病菌(Pseudomonas syringae pv.myricae)生長。經鑒定該生防菌為黃三素鏈霉菌 (Streptomyces fIavotricini)。該菌株對楊梅潰瘍病菌的抑制效果與農用鏈霉素相當，明顯優(yōu)于化學藥劑葉枯唑。 因此可以用黃三素鏈霉菌YZF3研發(fā)新型生物農藥，用于楊梅潰瘍病的生物防治。發(fā)明內容
針對防治楊梅潰瘍病的藥劑種類少問題，篩選了生防微生物黃三素鏈霉菌YZF3。 該菌株對楊梅潰瘍病菌的抑制效果與農用鏈霉素相當，優(yōu)于化學藥劑葉枯唑。目前已完成對病菌的抑制效果測定和種類鑒定。
自然界蘊含著許多有益微生物，從環(huán)境中大量篩選，得到生防微生物是生物藥劑研制的基礎工作，也是業(yè)內慣用的工作模式。放線菌是一類產生抗生素的菌類，以楊梅潰瘍病菌為目標細菌，從土壤中篩選能抑制該細菌的放線菌，是一種效率較高的篩選生防微生物的方法。
本發(fā)明公開了一種拮抗楊梅潰瘍病菌黃三素鏈霉菌(Streptomyces flavotricini) YZF3，它的保藏編號為 CGMCC N0.7529。
黃三素鏈霉菌YZF3菌株能有效抑制楊梅潰瘍病菌，效果明顯優(yōu)于葉枯唑，與農用鏈霉素相當，有防治楊梅潰瘍病的潛力。與化學藥劑相比，使用YZF3菌株防治植物病害沒有環(huán)境污染、農藥殘留等問題。


圖1是黃三素鏈霉菌YZF3菌株對楊梅潰瘍病菌的拮抗效果。
圖2是YZF3菌株的菌體形態(tài)(XlOOO)。
本發(fā)明所述YZF3菌株于2013年4月28日保存于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，(北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所)，分類命名為黃三素鏈霉菌(Sti^ptomyces flavotricini )，保藏編號為CGMCC7529。
具體實施方式
( I)采集土樣，去除石子等大顆粒物質，碾碎風干，過篩。
(2) 20g樣品放置于200mL無菌水中，充分震蕩，以此液為母液，梯度稀釋。
(3)取10_6稀釋液0.1mL涂布高氏一號平板。
(4) 28V條件下培養(yǎng)7天。
(5)分離不同顏色、性狀的單菌落，保存。
(6)將楊梅潰瘍病菌(菌株由本實驗室從慈溪市楊梅園病株上分離獲得，經形態(tài)和分子生物學鑒定為楊梅潰瘍病菌)與30°C的細菌培養(yǎng)基混勻，冷卻后制成平板，在平板上打孔，挖去瓊脂塊，在孔中滴入分離菌株的菌懸液20μ L，28°C培養(yǎng)，觀察抑菌圈大小。(7)保留有抑菌圈的菌株，進行單菌落純化。
(8)連續(xù)轉代多代，用(6)方法再測菌株的抑菌圈，確定拮抗穩(wěn)定性。篩篩選出的菌株命名為YZF3。如圖1。圖中培養(yǎng)皿中對照孔(左下孔)周圍病菌已長滿，其它3個孔滴加了 YZF3菌液，在其周圍形成了明顯的空白圈即抑菌圈，說明YZF3菌株發(fā)酵過程中能產生抑制物質使周圍的病菌不能生長。
(9 )對YZF3菌株進行種類鑒定。
(10)采用生理生化(形態(tài)特征、培養(yǎng)特征和生理生化特征)和分子生物學方法(16S rRNA基因序列分析)進行菌株種類鑒定。
形態(tài)特征:革蘭氏染色陽性；在ISP2瓊脂、ISP3瓊脂、ISP4瓊脂、ISP5瓊脂及 Bennett’s瓊脂培養(yǎng)基上生長7天后，基內菌絲發(fā)育良好，無橫隔，不斷裂；氣生菌絲生長良好、多分支；孢子絲直、柔曲，孢子圓形或卵圓形、光滑(圖2)。
培養(yǎng)特征:菌株YZF3的培養(yǎng)特征見表1:
表I菌株YZF3的培養(yǎng)特征
權利要求
1.一種拮抗楊梅潰瘍病菌的菌株,是菌黃三素鏈霉菌(Streptomyces fIavotricini ) YZF3，它的保藏編號為CGMCC N0.7529。
2.黃三素鏈霉菌(Stre ptomycesfIavotricini)CGMCC N0.7529在防治楊梅潰瘍病中的應用。
全文摘要
本發(fā)明涉及植物病害的生物防治，屬于植物保護學科中的生物防治研究與應用領域。本發(fā)明公開了一株拮抗楊梅潰瘍病菌黃三素鏈霉菌(Streptomyces flavotricini)YZF3，它的保藏編號為CGMCC No.7529。該菌株能有效抑制楊梅潰瘍病菌，效果明顯優(yōu)于葉枯唑，與農用鏈霉素相當，有防治楊梅潰瘍病的潛力。與化學藥劑相比，使用YZF3菌株防治植物病害沒有環(huán)境污染、農藥殘留等問題。
文檔編號A01P1/00GK103205389SQ20131017654
公開日2013年7月17日 申請日期2013年5月13日 優(yōu)先權日2013年5月13日
發(fā)明者童蘊慧, 陳孝仁, 鄭金土, 張同心 申請人:揚州大學