專利名稱：一種克氏原螯蝦家系建立的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于淡水蝦育種技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種克氏原螯蝦家系建立的方法。
背景技術(shù)：
克氏原螯奸iProcambarus clarkii),俗名淡水小龍奸，隸屬于節(jié)肢動物門、甲殼綱、十足目、蜊蛄科、原螯蝦屬。原產(chǎn)于北美洲，自20世紀30年代傳入我國后，現(xiàn)已廣泛分布于我國，并形成了可供利用的天然種群，特別是在長江中、下游地區(qū)生物種群量較大，已成為我國一種重要的淡水蝦類資源，也是長江中下游各省出口創(chuàng)匯的一個主導產(chǎn)品，深受國內(nèi)外市場的歡迎。據(jù)2011年漁業(yè)統(tǒng)計年鑒記載，2010年全國克氏原螯蝦養(yǎng)殖總面積約500萬畝，產(chǎn)量總計達563281噸，然而，目前人工養(yǎng)殖所需的苗種大多是從天然水域捕撈或是依靠上一年養(yǎng)殖的留塘蝦進行自繁自育和累代繁育，缺乏系統(tǒng)的良種保持和選育技術(shù)體系。因此，對克氏原螯蝦進行遺傳改良 ，選育出具有生長快速等優(yōu)良生長性狀的新品系，成為其產(chǎn)業(yè)發(fā)展的亟待需求。家系選育是選擇育種的方法之一，水產(chǎn)養(yǎng)殖動物的家系選育由于其養(yǎng)殖特點和繁殖生物學特性，而有較大困難，其中魚類的家系選育進展最好，已取得很大的成果。而甲殼類水產(chǎn)動物的家系選育由于整個生長過程伴隨有蛻殼等生物學特性而發(fā)展較為緩慢，現(xiàn)已有不少關(guān)于家系構(gòu)建方法及生長比較的研究，如張?zhí)鞎r等對中國對蝦家系建立及不同家系生長發(fā)育進行了初步研究；張呂平等對凡納濱對蝦全同胞家系的建立及生長比較進行了研究；楊國梁等研究了羅氏沼蝦大規(guī)模家系構(gòu)建及培育技術(shù)；楊其彬等研究了斑節(jié)對蝦4個不同群體建立家系的生長及存活；相建海等研究并申請了養(yǎng)殖對蝦家系的建立和良種選育方法的專利，也有學者通過構(gòu)建家系，利用家系進行遺傳力估計和構(gòu)建遺傳連鎖圖譜，但將家系選育運用于甲殼類的良種選育尚處于起步階段。由此可見，進行一個物種的家系選育首先要解決該物種家系構(gòu)建的技術(shù)，而物種不同相應(yīng)的構(gòu)建方法也會存在差異，關(guān)于克氏原螯奸家系建立和選育的研究尚未見文獻報道，同時家系也是進行遺傳分析的重要材料，對于深入分析不同親本的遺傳背景和構(gòu)建遺傳連鎖圖譜十分重要。關(guān)于克氏原螯蝦家系建立和選育的研究尚未見報道，本專利率先發(fā)明了克氏原螯蝦家系建立方法，以期為克氏原螯蝦大規(guī)模家系選育奠定基礎(chǔ)。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題，本發(fā)明目的在于在提供一種克氏原螯蝦家系建立的方法。本發(fā)明通過以下技術(shù)方案加以實現(xiàn):
所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于按以下工藝步驟:
I)親本的選擇及培育
從采購回來的克氏原螯蝦中挑選個體較大、附肢完整、活力較強親蝦作為備選親蝦，其中雄蝦體重大于等于30g/尾，雌蝦體重大于等于25g/尾，采用雌雄分開放養(yǎng)的方式在溫室水泥池內(nèi)進行培育，放養(yǎng)密度為40尾/m2，水溫20-25°C，不間斷充氣，培育期間用羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊交替投喂；
2)親本的配組及培育
采用定向交尾法進行配組，雌雄蝦比例為5:1，將配組后的每組親本分別暫養(yǎng)在室內(nèi)培育桶內(nèi)，自然交配，桶中放5-6塊弧形瓦片作為蝦巢，水溫20-25°C，不間斷充氣，暫養(yǎng)期間投喂羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊進行強化培育，每兩天吸污一次，2-3天進行一次1.5m3/h的流水刺激10-20分鐘；
3)抱卵蝦挑選和孵化
配組完成后，每隔10天檢查一次雌蝦抱卵情況，發(fā)現(xiàn)抱卵蝦后，將抱卵蝦挑出，每只抱卵蝦單獨放入孵化桶中 進行培養(yǎng)；每桶放一個弧形瓦片，桶內(nèi)水深保持在25-35cm，不間斷充氣，水溫20°C -24°C ；
4)幼蝦培育
孵化桶中有部分幼蝦離開母體時，將孵化桶連同抱卵雌蝦一并轉(zhuǎn)入500L大桶內(nèi)，待大桶和孵化桶內(nèi)水溫一致時，再將蝦轉(zhuǎn)入大桶，2-3天后，小蝦自動離開母體時，對小蝦進行計數(shù)，對母本進行測量、取樣、凍存，并將準備好的網(wǎng)片放入大桶，以供小蝦躲避和攀爬，幼蝦培育期間餌料以羅氏沼蝦粉狀料為主，同時添加螺旋藻粉及蛻殼素，每隔兩天吸污一次，吸污后立即補充新水；補充量為10-20% ；
5)供標記蝦培育及同塘養(yǎng)殖
幼蝦經(jīng)兩個月培育后，選取親本明確、幼蝦尾數(shù)多于200個，孵出時間相近的家系進行標準化養(yǎng)殖和生長對比試驗，幼蝦經(jīng)標準化養(yǎng)殖后，進行個體標記，個體標記后進行同塘養(yǎng)殖和家系選育。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟I)和步驟2)中羅氏沼蝦蝦料和帶魚塊交替投喂是指每投喂羅氏沼蝦2-3天投喂一次帶魚塊，每日投喂一次，一次投喂量為蝦體重量的8%-12%。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟2)中培育桶為500L白色長方形塑料桶，桶內(nèi)水位保持在18-25cm。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟3)中孵化桶為45L圓形桶。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟4)中添加的螺旋藻粉的量為羅氏沼蝦粉狀料的10-15%，蛻殼素的量為羅氏沼蝦粉狀料的0.5-1%，每天投喂一次，投喂量為幼蝦體重的0.5-1%。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟5)中標準化養(yǎng)殖是指將幼蝦放養(yǎng)于溫室內(nèi)500L大桶中，水溫25°C，水位保持在45-55cm，放養(yǎng)密度為150尾/桶，桶內(nèi)放置瓦片作為蝦巢，每天投喂羅氏沼蝦中蝦料和螺獅肉的混合料，不間斷充氣，每隔兩天吸污一次，吸污后補充新水，補充量為10-20%。所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述混合料中螺獅肉的重量占羅氏沼蝦中蝦料重量的15-20%。本發(fā)明方法設(shè)計合理，可操作性強，通過對克氏原螯蝦家系建立及早期生長比較的研究，為進行大規(guī)模家系構(gòu)建和選育奠定了基礎(chǔ)，有助于選育具有生長快速等優(yōu)良生長性狀的新品系，改變現(xiàn)有情況下苗種只能靠從天然水域捕撈或是依靠上一年養(yǎng)殖的留塘蝦進行自繁自育和累代繁育的狀況，形成系統(tǒng)的克氏原螯蝦良種保持和選育技術(shù)體系。
具體實施例方式通過以下具體實施例對本發(fā)明作進一步詳述。實施例1
2011年，采用太湖地區(qū)群體作為克氏原螯蝦基礎(chǔ)群體(從安吉孝豐的養(yǎng)殖戶處采購獲得)，在浙江省淡水水產(chǎn)研究所夾山漾基地的溫室內(nèi)進行了克氏原螯蝦家系構(gòu)建工作，具體內(nèi)容如下:
(一)親本的選擇及培育
克氏原螯蝦基礎(chǔ)群體采用太湖群體，從安吉養(yǎng)殖戶購得，從中選擇個體較大、附肢完整、活力較強的蝦作為親本。將采購回來的親本采取雌雄分開放養(yǎng)的方式在溫室水泥池內(nèi)進行培育，水泥池的規(guī)格為水深為30cm,放養(yǎng)密度約為40尾/m2,水溫20_25°C,不間斷充氣，投喂羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊進行親本培育，每投喂三天羅氏沼蝦中蝦料，接著投喂一天帶魚塊，循環(huán)交替交替投喂，每天投喂一次，每次投喂量占蝦體重量的8-12%。(二)親本的配組及強化培育
于2011年9月初運用定向交尾法進行配組，共配組48個，暫養(yǎng)于室內(nèi)白色長方形塑料桶(容積為500L,規(guī)格為59cmX 109cmX62cm)中，每桶放雌奸5尾,雄奸I尾，自然交配，桶中放5-6塊弧形瓦片作為蝦巢，水深約20cm，水溫20-25°C，不間斷充氣，投喂羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊進行強化培育，每投喂兩天羅氏沼蝦中蝦料，接著投喂一天帶魚塊，循環(huán)交替交替投喂，每天投喂一次，每次投喂量占蝦體重量的8-12%，每隔一天吸污一次，2-3天進行一次1.5m3/h的流水刺激20 -30分鐘。(三)抱卵蝦挑選和孵化
配組完成后，每隔10天檢查一次雌蝦抱卵情況，發(fā)現(xiàn)抱卵蝦后，將抱卵蝦挑出，在45L圓形桶中進行培養(yǎng)，每桶放一個弧形瓦片，水深約30cm，不間斷充氣，水溫保持在20°C-24°C。于9月28日至10月28日，共進行了 5次抱卵蝦檢查，獲得105尾抱卵蝦，其中屬于半同胞家系的為92尾。30天內(nèi)平均抱卵率為44.2%，單個配組最高抱卵率為100%，表明I尾雄蝦在I個月內(nèi)能夠為5尾雌蝦進行自然受精，平均每個配組產(chǎn)生2.18尾抱卵蝦。在水溫20-25°C的條件下，抱卵蝦經(jīng)17-30天孵化出苗，共有77尾抱卵蝦成功孵化出蝦苗，孵化成功率為72.74%。單個雌蝦孵化出小蝦數(shù)為304.56尾±140.66尾，本試驗中幼蝦數(shù)最大為681尾。(四)幼蝦培育
當孵化桶(45L小桶)中有部分幼蝦離開母體時，則將桶連同抱卵雌蝦、小蝦、瓦片一并轉(zhuǎn)至四號溫室內(nèi)的500L大桶(桶內(nèi)放瓦片作為蝦巢，水深約20cm)，待小桶內(nèi)與大桶內(nèi)的水溫一致時，再將蝦轉(zhuǎn)入大桶，2-3天后，待小蝦自動離開母體時，對小蝦進行計數(shù)，對母本進行測量、取樣、凍存，并將準備好的網(wǎng)片放入大桶，以供小蝦躲避和攀爬。幼蝦培育的餌料以羅氏沼蝦粉狀料添少許螺旋藻粉、蛻殼素等配制而成，其中螺旋藻粉的量占羅氏沼蝦粉狀料的10-15%，蛻殼素的量占羅氏沼蝦粉狀料的0.5-1%，每天投喂一次，一次投喂量占幼蝦體重的0.5-1%，幼蝦培育期間每隔2天吸污一次，以保證水質(zhì)清新，同時定期補充新水，補充量為10-20%。經(jīng)30天培育后，幼體規(guī)格可達1.8cm,幼蝦培育成活率為96.25%±2.58%(n=8)，2月齡蝦苗培育成活率為83%±11%。(五)供標記蝦培育及同塘養(yǎng)殖
經(jīng)60天的幼蝦培育后，對各家系的蝦進行標準化養(yǎng)殖和生長對比試驗，主要處理為選取親本明確、幼蝦尾數(shù)多于200個、孵出時間相近的家系用于試驗，試驗在溫室內(nèi)(水溫250C )500L大桶內(nèi)進行，水深50cm，放養(yǎng)密度為150尾/桶，桶內(nèi)放瓦片作為蝦巢，并注意根據(jù)蝦的生長情況增加蝦巢的數(shù)量，每天投喂羅氏沼蝦中蝦料，搭配少量螺螄肉，螺絲肉的量占羅氏沼蝦中蝦料的15-20%，不間斷充氣，每隔2天吸污I次，并適時增添新水。幼蝦在溫室內(nèi)(21°C左右)培育至4月初即可進行個體標記(共23個家系)，再進行同塘養(yǎng)殖和家系選育；在室外培育至5月初可進行個體標記(共31個家系)，再進行同塘養(yǎng)殖和家系選育。該年度的克氏原螯奸同塘養(yǎng)殖在安吉溪龍鄉(xiāng)開展。實施例2
(一)親本回捕及強化培育
于2012年8月2日開始克氏原螯蝦家系構(gòu)建工作，對2011年培育的在安吉同塘養(yǎng)殖的蝦進行回捕，共捕回雄蝦453尾，雌蝦416尾?；夭兜某晌r經(jīng)IOppm高錳酸鉀浸泡消毒后，置于水泥池中進行養(yǎng) 殖，采取雌雄分放的方式，放養(yǎng)密度約為40尾/m2，以羅氏沼蝦中蝦料、帶魚塊為餌料進行產(chǎn)前強化培育。(二)親本配組
于2012年9月11日從中挑選個體較大、肢體完整、無損傷的成蝦作為構(gòu)建家系的親本，選擇率為17.26%。按照巢式設(shè)計的方法，雌雄5:1的比例進行配組和定向交尾，共配組30個。(三)抱卵蝦檢查及孵化
經(jīng)強化培育，于9月28日至10月19日，共進行了 3次抱卵蝦檢查(9月28日、10月8日、10月19日)，獲得125尾抱卵蝦，抱卵率為83.33%，配組內(nèi)雌蝦全部抱卵的配組有14個，平均每個配組產(chǎn)生4.17個抱卵蝦。將單個抱卵蝦置于I個45L圓形桶中進行培養(yǎng)，水深20cm，不間斷充氣，投喂羅氏沼蝦中蝦料，每天吸污一次，以防飼料霉變導致卵發(fā)生水霉病。在室溫條件下，抱卵蝦經(jīng)17-30天孵化出苗，共有110尾抱卵蝦成功孵化出蝦苗，孵化成功率為88%。單個雌蝦孵化出小蝦數(shù)為264.24±98.51尾。依據(jù)孵化出苗量> 150尾，選留66個家系，200尾以上的家系有51個。共構(gòu)建66個全同胞家系，其中64個為半同胞家系，平均每個父本選留2.2個家系。(四)幼體培育
幼蝦培養(yǎng)至幼蝦離開母體，對小蝦進行計數(shù)，將幼蝦轉(zhuǎn)移至500L塑料桶(130 cm x 73cm X 65cm)進行幼體培育。同時，對抱卵雌蝦進行采樣凍存，以備后期親子關(guān)系分析。每個家系幼蝦在500L塑料桶中進行培育，水溫15-20°C，置于一個塑料桶內(nèi)養(yǎng)殖，水深20cm，不間斷充氣。幼蝦培育餌料以羅氏沼蝦粉狀料添少許螺旋藻粉、蛻殼素等配制而成，期間每2天吸污一次，以保證水質(zhì)清新，同時定期補充新水。為避免幼蝦自相殘殺，并將洗凈并充分消毒的的50-100cm2尼龍網(wǎng)網(wǎng)片和5_6只瓦片放入大桶中，以供小蝦躲避和攀爬。(五)供標記蝦培育及同塘養(yǎng)殖
該年度在三號溫室(水溫保持在20°C左右)共培養(yǎng)27個家系，在室外培養(yǎng)39個家系。
數(shù)據(jù)分析及結(jié)果
用Excel和SAS8.0統(tǒng)計分析軟件進行數(shù)據(jù)處理，運用簡單相關(guān)和多元偏相關(guān)分析進行指標間的相關(guān)性分析，采用ANOVA進行方差分析并通過Duncan法進行多重比較檢驗差異顯著性?？耸显r家系構(gòu)建的基本情況
2011年的實驗共配組48個，親本培育成活率約85%。于9月28日至10月28日，共進行了 5次抱卵蝦檢查(9月28日、10月8日、10月13日、10月18日、10月28日)，獲得105尾抱卵蝦,其中屬于父系半同胞家系的為92尾。平均抱卵率(30天)為44.2%，平均每個配組產(chǎn)生2.18尾抱卵蝦，單個配組最高抱卵率為100%，表明I尾雄蝦在I個月內(nèi)能夠為5尾雌蝦進行自然受精。在水溫20-25°C的條件下，抱卵蝦經(jīng)17-30天孵化出苗，共有77尾抱卵蝦成功孵化出蝦苗，孵化成功率為72.74%ο經(jīng)30天培育，幼體規(guī)格達1.8cm,幼蝦培育成活率為 96.25%±2.58% (n=8)。幼蝦數(shù)與雌、雄蝦體重、體長等指標的相關(guān)分析
對每個家系的孵化幼蝦數(shù)進行統(tǒng)計，可知單個雌蝦孵化出小蝦數(shù)的平均值為304.56尾±140.66尾，在本試驗中孵化幼蝦數(shù)最多的為681尾(幼蝦數(shù)及雌雄蝦指標具體情況見表I)。經(jīng)對幼蝦數(shù)與雌、雄蝦體重、體長等指標進行多元偏相關(guān)分析表明，經(jīng)對幼蝦數(shù)與雌、雄蝦體重、體長等指標進行多元相關(guān)和偏相關(guān)分析表明，克氏原螯蝦幼蝦數(shù)與雌蝦的體重、體長、頭胸甲長的Pearson偏相關(guān)系數(shù)分別為-0.0578 (p=0.6246)、0.1219 (p=0.3008)、0.1387 (p=0.2387);與雄蝦體重、體長、頭胸甲長的Pearson偏相關(guān)系數(shù)分別為-0.04366(ρ=0.7257)、0.0844 (ρ=0.4972)、-0.0692 (ρ= 0.5777)。P 值均大于 0.05，表明幼蝦數(shù)與雌、雄蝦體重、體長等指標的相關(guān)性不顯著，可能與親本培育質(zhì)量、性腺指數(shù)、孵化率等其他指標相關(guān)性較大。 表I家系構(gòu)建基本情況
權(quán)利要求
1.一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于按以下工藝步驟: 1)親本的選擇及培育 從采購回來的克氏原螯蝦中挑選個體較大、附肢完整、活力較強親蝦作為備選親蝦，其中雄蝦體重大于等于30g/尾，雌蝦體重大于等于25g/尾，采用雌雄分開放養(yǎng)的方式在溫室水泥池內(nèi)進行培育，放養(yǎng)密度為40尾/m2，水溫20-25°C，不間斷充氣，培育期間用羅氏沼蝦蝦料和帶魚塊交替投喂； 2)親本的配組及培育 采用定向交尾法進行配組，雌雄蝦比例為5:1，將配組后的每組親本分別暫養(yǎng)在室內(nèi)培育桶內(nèi)，自然交配，桶中放5-6塊弧形瓦片作為蝦巢，水溫20-25°C，不間斷充氣，暫養(yǎng)期間投喂羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊進行強化培育，每兩天吸污一次，2-3天進行一次1.5m3/h的流水刺激10-20分鐘； 3)抱卵蝦挑選和孵化 配組完成后，每隔10天檢查一次雌蝦抱卵情況，發(fā)現(xiàn)抱卵蝦后，將抱卵蝦挑出，每只抱卵蝦單獨放入孵化桶中進行培養(yǎng)；每桶放一個弧形瓦片，桶內(nèi)水深保持在25-35cm，不間斷充氣，水溫20°C -24°C ； 4)幼蝦培育 孵化桶中有部分幼蝦離開母體時，將孵化桶連同抱卵雌蝦一并轉(zhuǎn)入500L大桶內(nèi)，待大桶和孵化桶內(nèi)水溫一致時，再將蝦轉(zhuǎn)入大桶，2-3天后，小蝦自動離開母體時，對小蝦進行計數(shù)，對母本進行測量、取樣、凍存，并將準備好的網(wǎng)片放入大桶，以供小蝦躲避和攀爬，幼蝦培育期間餌料以羅氏沼蝦粉狀料為主，同時添加螺旋藻粉及蛻殼素，每隔兩天吸污一次，吸污后立即補充新水；補充量為10-20% ； 5)供標記蝦培育及同塘養(yǎng)殖 幼蝦經(jīng)兩個月培育后，選取親本明確、幼蝦尾數(shù)多于200個，孵出時間相近的家系進行標準化養(yǎng)殖和生長對比試驗，幼蝦經(jīng)標準化養(yǎng)殖后，進行個體標記，個體標記后進行同塘養(yǎng)殖和家系選育。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟I)和步驟2)中羅氏沼蝦中蝦料和帶魚塊交替投喂是指每投喂羅氏沼蝦中蝦料2-3天投喂一次帶魚塊，每日投喂一次，一次投喂量為蝦體重量的8%-12%。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟2)中培育桶為500L白色長方形塑料桶，桶內(nèi)水位保持在18-25cm。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟3)中孵化桶為45L圓形桶。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟4)中添加的螺旋藻粉的量為羅氏沼蝦粉狀料的10-15%，蛻殼素的量為羅氏沼蝦粉狀料的.0.5-1%，每天投喂一次，投喂量為幼蝦體重的0.5-1%。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述步驟5)中標準化養(yǎng)殖是指將幼蝦放養(yǎng)于溫室內(nèi)500L大桶中，水溫25 °C，水位保持在45-55cm，放養(yǎng)密度為150尾/桶，桶內(nèi)放置瓦片作為蝦巢和網(wǎng)片，每天投喂羅氏沼蝦中蝦料和螺螄肉的混合料，不間斷充氣，每隔兩天吸污一次，吸污后補充新水，補充量為10-20%。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的一種克氏原螯蝦家系建立的方法，其特征在于所述混合料中螺螄肉的重量占羅氏沼蝦 中蝦料重量的15-20%。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種克氏原螯蝦家系建立的方法，包含以下步驟1)親本的選擇及培育，2)親本的配組及培育，3)抱卵蝦挑選和孵化，4)幼蝦培育，5)供標記蝦培育及同塘養(yǎng)殖。本發(fā)明方法設(shè)計合理，可操作性強，通過對克氏原螯蝦家系建立及早期生長比較的研究，為進行大規(guī)模家系構(gòu)建和選育奠定了基礎(chǔ)，有助于選育具有生長快速等優(yōu)良生長性狀的新品系，改變現(xiàn)有情況下苗種只能靠從天然水域捕撈或是依靠上一年養(yǎng)殖的留塘蝦進行自繁自育和累代繁育的狀況，形成系統(tǒng)的克氏原螯蝦良種保持和選育技術(shù)體系。
文檔編號A01K61/00GK103210863SQ20131013751
公開日2013年7月24日 申請日期2013年4月19日 優(yōu)先權(quán)日2013年4月19日
發(fā)明者顧志敏, 李飛, 李喜蓮, 賈永義, 黃鮮明, 朱俊杰, 楊元杰, 劉金殿, 章文敏 申請人:浙江省淡水水產(chǎn)研究所