壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法
【專利摘要】本發(fā)明涉及壺瓶碎米薺培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其包括如下步驟：取材及處理、愈傷誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)、生根培養(yǎng)以及移栽。本發(fā)明培養(yǎng)方法簡便，都使用常用的培養(yǎng)基，成本低，成活率高，是一種值得推廣的壺瓶碎米薺的快速培養(yǎng)方法。
【專利說明】壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及壺瓶碎米薺培養(yǎng)領(lǐng)域，尤其涉及一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]壺瓶碎米薺，是我國特有的十字花科碎米薺屬植物新種，當(dāng)?shù)匕傩兆鲆吧卟私?jīng)常采食，單株重達(dá)400克，具有超強(qiáng)的富硒能力，但是限于其產(chǎn)量較低，急需一種簡易的培養(yǎng)技術(shù)。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0003]本發(fā)明提供一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其方法簡便、成活率高。
[0004]本發(fā)明實(shí)施例提供一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其包括如下步驟:
取材及處理:取壺瓶碎米薺的莖、幼葉或葉柄，清水沖洗后消毒處理；
愈傷誘導(dǎo):將壺瓶碎米薺接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，在溫度20-25攝氏度、光照強(qiáng)度20-27摩爾/平方米/秒、光照10~17小時(shí)/天的環(huán)境下培養(yǎng)13~15天，壺瓶碎米薺外植體可見有綠色愈傷組織形成；
不定芽的誘導(dǎo):形成的愈傷組織續(xù)生長25~35天，至愈傷組織上形成綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)12~17天，大量叢生芽生成；
生根培養(yǎng):叢生芽長至2-3厘米時(shí)，將叢生芽進(jìn)行切割后接種到生根培養(yǎng)基上，25~30天根系形成，成為再生苗；
移栽:選根系發(fā)達(dá)的再生苗，煉苗4~8天后洗凈培養(yǎng)基，移栽到蛭石、泥炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜，弱光環(huán)境下生長8~12天后移至自然條件下生長。
[0005]對(duì)上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)為:所述取材及處理步驟中消毒處理后將壺瓶碎米薺材料剪成0.5厘米Χ0.5厘米小方塊。
[0006]優(yōu)選地，所述消毒處理步驟具體為:在2飛攝氏度低溫處理6~15小時(shí)后，用50%~90%酒精浸泡2~10秒，用無菌水沖洗數(shù)次，用0.05%~0.2%的氯化汞溶液浸泡消毒數(shù)分鐘，再用無菌水沖洗數(shù)次。
[0007]其中，所述誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為:MS+6_BA 2.0毫克/升+NAA 0.1，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，pH為5.8，在110-130攝氏度下濕熱滅菌10-30分鐘。
[0008]其中，所述生根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA 0.3，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，pH為5.8，在110~130攝氏度下濕熱滅菌10~30分鐘。
[0009]所述移栽步驟中，蛭石、泥炭土和珍珠巖的比例為1:1:1。
[0010]所述取材及處理中，清水沖洗時(shí)間為廣2小時(shí)。
[0011]優(yōu)選地，所述愈傷誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)以及生根培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20~25攝氏度、光照強(qiáng)度20~27摩爾/平方米/秒、光照10~17小時(shí)/天。[0012]本實(shí)施例壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，有益效果是:
通過在培養(yǎng)基上經(jīng)過愈傷誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)以及生根培養(yǎng)后移栽培育，培養(yǎng)方法簡便，都使用常用的培養(yǎng)基，成本低，成活率高，是一種值得推廣的壺瓶碎米薺的快速培養(yǎng)方法。
【具體實(shí)施方式】
[0013]為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案和優(yōu)點(diǎn)更加清楚，下面將對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步地詳細(xì)描述。
[0014]實(shí)施例1: 本實(shí)施例提供一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其包括如下步驟:
制作培養(yǎng)基:
誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基:用MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.1，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)PH至5.8，在121攝氏度下濕熱滅菌20分鐘。
[0015]生根培養(yǎng)基:用1/2MS+NAA 0.3，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)pH至5.8，在121攝氏度下濕熱滅菌20分鐘。
[0016]取材及處理:取壺瓶碎米薺的莖、幼葉或葉柄，清水沖洗2小時(shí)，在4攝氏度低溫處理12小時(shí)后,用75%酒精浸泡7秒,用無菌水沖洗3次,用0.1%的氯化萊溶液浸泡消毒10分鐘，再用無菌水沖洗3次，將壺瓶碎米薺材料剪成0.5厘米X0.5厘米的小方塊。
[0017]愈傷誘導(dǎo):將壺瓶碎米薺接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，在溫度23攝氏度、光照強(qiáng)度24摩爾/平方米/秒、光照14小時(shí)/天的環(huán)境下培養(yǎng)，4天后培養(yǎng)基出現(xiàn)愈傷組織，呈現(xiàn)淡綠色，14天后，80%以上葉柄外植體可見有綠色愈傷組織形成。
[0018]不定芽的誘導(dǎo):形成的愈傷組織在相同的培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境下繼續(xù)生長30天，至愈傷組織上形成綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)15天，大量叢生芽生成。
[0019]生根培養(yǎng):叢生芽長至2-3厘米時(shí)，將叢生芽進(jìn)行切割后接種到生根培養(yǎng)基上，相同的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)30天后根系形成，生根率為100%，成為再生苗。
[0020]移栽:選根系發(fā)達(dá)的再生苗，煉苗7天后洗凈培養(yǎng)基，移栽到蛭石、泥炭土和珍珠巖比例1:1:1的混合基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜，弱光環(huán)境下生長10天后移至自然條件下生長即可。
[0021]經(jīng)檢測，上述移栽的壺瓶碎米薺再生苗成活率達(dá)90%以上。
[0022]實(shí)施例2:
本實(shí)施例提供一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其包括如下步驟:
制作培養(yǎng)基:
誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基:用MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.1，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)PH至5.8，在110攝氏度下濕熱滅菌10分鐘。
[0023]生根培養(yǎng)基:用1/2MS+NAA 0.3，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)pH至5.8，在110攝氏度下濕熱滅菌10分鐘。
[0024]取材及處理:取壺瓶碎米薺的莖、幼葉或葉柄，清水沖洗I小時(shí)，在2攝氏度低溫處理6小時(shí)后,用50%酒精浸泡2秒,用無菌水沖洗3次,用0.05%的氯化萊溶液浸泡消毒10分鐘，再用無菌水沖洗3次，將壺瓶碎米薺材料剪成0.5厘米X0.5厘米的小方塊。[0025]愈傷誘導(dǎo):將壺瓶碎米薺接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，在溫度20攝氏度、光照強(qiáng)度20摩爾/平方米/秒、光照10小時(shí)/天的環(huán)境下培養(yǎng)，3天后培養(yǎng)基出現(xiàn)愈傷組織，呈現(xiàn)淡綠色，13天后，80%以上葉柄外植體可見有綠色愈傷組織形成。
[0026]不定芽的誘導(dǎo):形成的愈傷組織在相同的培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境下繼續(xù)生長25天，至愈傷組織上形成綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)12天，大量叢生芽生成。
[0027]生根培養(yǎng):叢生芽長至2-3厘米時(shí)，將叢生芽進(jìn)行切割后接種到生根培養(yǎng)基上，相同的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)25天后根系形成，生根率為100%，成為再生苗。
[0028]移栽:選根系發(fā)達(dá)的再生苗，煉苗4天后洗凈培養(yǎng)基，移栽到蛭石、泥炭土和珍珠巖比例1:1:1的混合基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜，弱光環(huán)境下生長8天后移至自然條件下生長即可。
[0029]實(shí)施例3:
本實(shí)施例提供一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其包括如下步驟: 制作培養(yǎng)基: 誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基:用MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.1，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)pH至5.8，在130攝氏度下濕熱滅菌30分鐘。
[0030]生根培養(yǎng)基:用1/2MS+NAA 0.3，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，調(diào)節(jié)pH至5.8，在130攝氏度下濕熱滅菌30分鐘。
[0031]取材及處理:取壺瓶碎米薺的莖、幼葉或葉柄，清水沖洗2小時(shí)，在6攝氏度低溫處理15小時(shí)后,用90%酒精浸泡10秒,用無菌水沖洗3次,用0.2%的氯化萊溶液浸泡消毒10分鐘，再用無菌水沖洗3次，將壺瓶碎米薺材料剪成0.5厘米X0.5厘米的小方塊。
[0032]愈傷誘導(dǎo):將壺瓶碎米薺接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上，在溫度25攝氏度、光照強(qiáng)度27摩爾/平方米/秒、光照17小時(shí)/天的環(huán)境下培養(yǎng)，4天后培養(yǎng)基出現(xiàn)愈傷組織，呈現(xiàn)淡綠色，15天后，80%以上葉柄外植體可見有綠色愈傷組織形成。
[0033]不定芽的誘導(dǎo):形成的愈傷組織在相同的培養(yǎng)基及培養(yǎng)環(huán)境下繼續(xù)生長35天，至愈傷組織上形成綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)17天，大量叢生芽生成。
[0034]生根培養(yǎng):叢生芽長至2-3厘米時(shí)，將叢生芽進(jìn)行切割后接種到生根培養(yǎng)基上，相同的培養(yǎng)環(huán)境下培養(yǎng)30天后根系形成，生根率為100%，成為再生苗。
[0035]移栽:選根系發(fā)達(dá)的再生苗，煉苗8天后洗凈培養(yǎng)基，移栽到蛭石、泥炭土和珍珠巖比例1:1:1的混合基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜，弱光環(huán)境下生長12天后移至自然條件下生長即可。
[0036]經(jīng)檢測，上述移栽的壺瓶碎米薺再生苗成活率達(dá)90%以上。
[0037]以上是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本【技術(shù)領(lǐng)域】的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤飾，這些改進(jìn)和潤飾也視為本發(fā)明的保護(hù)范圍?！碧娲嗫?。
【權(quán)利要求】
1.一種壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于，包括依次進(jìn)行的如下步驟: 取材及處理:取壺瓶碎米薺的莖、幼葉或葉柄，清水沖洗后消毒處理； 愈傷誘導(dǎo):將壺瓶碎米薺接種在誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)13~15天，壺瓶碎米薺外植體可見有綠色愈傷組織形成； 不定芽的誘導(dǎo):形成的愈傷組織續(xù)生長25~35天，至愈傷組織上形成綠色芽點(diǎn)，繼續(xù)培養(yǎng)12~17天，大量叢生芽生成； 生根培養(yǎng):叢生芽長至2-3厘米時(shí)，將叢生芽進(jìn)行切割后接種到生根培養(yǎng)基上，25~30天根系形成，成為再生苗； 移栽:選根系發(fā)達(dá)的再生苗，煉苗41天后洗凈培養(yǎng)基，移栽到蛭石、泥炭土和珍珠巖的混合基質(zhì)中，覆蓋塑料薄膜，弱光環(huán)境下生長8~12天后移至自然條件下生長。
2.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于， 所述取材及處理步驟中消毒處理后將壺瓶碎米薺材料剪成0.5厘米X0.5厘米小方塊。
3.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述消毒處理步驟具體為:在2飛攝氏度低溫處理6~15小時(shí)后，用50%~90%酒精浸泡2^10秒，用無菌水沖洗數(shù)次，用0.05%~0.2%的氯化汞溶液浸泡消毒數(shù)分鐘，再用無菌水沖洗數(shù)次。
4.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為:MS+6-BA 2.0毫克/升+NAA 0.1，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，pH為5.8，在110-130攝氏度下濕熱滅菌10-30分鐘。
5.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述生根培養(yǎng)基為:1/2MS+NAA 0.3，并添加30克/升蔗糖和7克/升瓊脂，pH為5.8，在110~130攝氏度下濕熱滅菌10~30分鐘。
6.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述移栽步驟中，蛭石、泥炭土和珍珠巖的比例為1:1:1。
7.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述取材及處理中，清水沖洗時(shí)間為廣2小時(shí)。
8.如權(quán)利要求1所述壺瓶碎米薺的組織培養(yǎng)與快速繁殖方法，其特征在于: 所述愈傷誘導(dǎo)、不定芽的誘導(dǎo)以及生根培養(yǎng)步驟中，培養(yǎng)環(huán)境為溫度20-25攝氏度、光照強(qiáng)度20-27摩爾/平方米/秒、光照10~17小時(shí)/天。
【文檔編號(hào)】A01H4/00GK103651114SQ201210539976
【公開日】2014年3月26日 申請(qǐng)日期:2012年12月14日 優(yōu)先權(quán)日:2012年12月14日
【發(fā)明者】白宏鋒 申請(qǐng)人:湖北盛硒生物科技有限公司