專利名稱：枯草芽孢桿菌yb-05、其微生物制劑及其應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種生防微生物，具體涉及一種枯草芽孢桿菌YB-05、其微生物制劑及
其應用。
背景技術：
枯草芽孢桿菌5^07/5.),具有生長繁殖快、營養(yǎng)簡單,能產(chǎn)生耐熱抗逆的芽孢，對人畜無害、環(huán)境兼容性好、能夠抑制多種植物病害、不易使農(nóng)作物產(chǎn)生抗藥性。而且批量生產(chǎn)工藝簡單，成本也較低，施用方便，儲存期長等優(yōu)點，因此，是一種理想的生防微生物。目前該菌已經(jīng)在黃瓜、辣椒、水稻、小麥、玉米等農(nóng)作物上顯出很好的病害防治效果。在植物真菌病害生物防治方面，澳大利亞開發(fā)的枯草芽孢桿菌A-13對麥類胡蘿卜立枯病以及其他土傳性病害具有很好的防治效果并具有增產(chǎn)作用。趙百鴿等用枯草芽孢桿菌B-903有效防治蘋果輪紋病，田間噴淋保護和貯前浸果處理還可降低爛果率。何紅等分離的辣椒內(nèi)生枯草芽孢桿菌Bs-2和BS-1，對膠孢炭疽菌引起的辣椒苗和果炭疽病有良好的防治效果，菌株培養(yǎng)液對苗炭疽病的防效為81.5% 93.3%，對果炭疽病的防效為80%
100% ο小麥全蝕病(Take-all)是由禾頂囊殼小麥變種ipaeumannomyces graminis var.tritici)侵染小麥根部引起的一種世界毀滅性病害。該病是一種典型的土傳病害，病菌從小麥苗期至成株期均可危害，而且該病一旦發(fā)生，蔓延速度很快，危害嚴重。發(fā)病輕者可造成小麥減產(chǎn)10% 20%，嚴重時可達50%以上，甚至絕收。對于該病的防治，目前仍然以化學防治為主，缺乏有效的抗病品種和高效的生防制劑，利用微生物之間的拮抗作用對小麥全蝕病進行生物防治具有廣闊的應用前景。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種具有拮抗小麥全蝕病作用和廣譜的抑菌效果的枯草芽孢桿菌YB-05及其生物制劑，并給出了其生物制劑的方制備方法。為解決上述技術問題，本發(fā)明采用的技術方案是:
分離出了一種枯草芽孢桿菌YB-05，其保藏編號為CGMCC N0.6498。制備出一種微生物制劑，所含活性成分為上述枯草芽孢桿菌YB-05或/和其代謝產(chǎn)物。所述枯草芽孢桿菌YB-05在防治小麥全蝕病中的應用，種子拌種處理，種子加水比例3:100，將藥劑按比例與水充分混合，均勻拌種后，敞開晾干備用。在小麥拔節(jié)期和抽穗期YB-05制劑防治效果較好，收獲期防治效果最好為YB-05，與12.5%全蝕凈相當，顯著高于市售生防制劑的77.8%，表明YB-05持效期較長，在田間表現(xiàn)很好的防治效果。本發(fā)明具有積極有益的效果:
所分離出的枯草芽孢桿菌YB-05 CGMCC N0.6498對小麥全蝕的抑菌帶邊緣清晰且抑菌效果明顯，發(fā)現(xiàn)其表現(xiàn)出較為廣譜的抑菌效果，其中對番茄灰霉病菌、棉花黃萎病菌、小麥全蝕病菌等的抑菌效果較好。在小麥全蝕病的生物防治中具有重要的應用價值。田間在小麥拔節(jié)期和抽穗期YB-05制劑防治效果較好，收獲期防治效果最好為YB-05，與12.5%全蝕凈相當，顯著高于市售生防制劑的77.8%，表明YB-05持效期較長，在田間表現(xiàn)很好的防治效果。本發(fā)明所述枯草芽孢桿菌YB-05，已于2012年9月3日保藏在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，其簡稱為CGMCCJia:北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號中國科學院微生物研究所，該還枯草芽孢桿菌YB-05的保藏編號為CGMCC N0.6498。


圖1:菌株YB-05對小麥全蝕病的抑菌效果 圖2:菌株YB-05的菌落特征 圖3:菌株YB-05的分子進化樹圖。
具體實施例方式為了使本發(fā)明更加容易理解，下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限止本發(fā)明的范圍，下列實施例中未提及的具體實驗方法，通常按常規(guī)實 驗方法進行。實施例1枯草芽孢桿菌YB-05的分離、篩選
土樣采集:在商水縣譚莊鎮(zhèn)小麥田小麥根際，采用五點采樣，采樣時鏟去表層5 cm土層，取新鮮土樣500 g,用保鮮袋帶回。將5份土樣混勻后取500 g作為土壤樣品(采集時間:2010年4月20日；具體采集地點:河南省周口市商水縣譚莊鎮(zhèn)；采集人:楊麗榮)。枯草芽孢桿菌的分離與純化:稱取5g 土壤樣品，置于盛有45mL無菌蒸懼水的三角瓶中，小火加熱至懸浮液沸騰，維持15min，然后靜止5min，吸取上清液依次稀釋至10_2和10_3，將不同稀釋度的上層清液涂布于LB平板培養(yǎng)基上。并將培養(yǎng)基倒置于37°C恒溫培養(yǎng)過夜，最后挑取形態(tài)、色澤、大小與枯草芽孢桿菌類似的單菌落轉(zhuǎn)接到LB平板培養(yǎng)基上，于37°C培養(yǎng)2d后，記錄其編號，再挑選單菌落接種到LB斜面培養(yǎng)基上保存。經(jīng)過土壤樣品微生物分離，共分離出98株類似枯草芽孢桿菌菌株，然后通過平板對峙法進行初篩得到對小麥全蝕病菌有拮抗作用的菌株36株，通過杯蝶法進行復篩得到拮抗作用較強的菌株6株(表I )，其中以YB-05菌株拮抗效果最好(見圖1)。表I六株拮抗菌對小麥全蝕病菌的抑制效果
權利要求
1.一種枯草芽孢桿菌YB-05，其保藏編號為CGMCC N0.6498。
2.一種微生物制劑，其特征在于，所含活性成分為權利要求1所述枯草芽孢桿菌YB-05或/和其代謝產(chǎn)物。
3.權利要求2所述微生物制劑制備方法，包括如下步驟: (1)菌株培養(yǎng)與制備:將枯草芽孢桿菌YB-05接種到TSA試管斜面培養(yǎng)基上，28 35°C下培養(yǎng)24 36小時獲得菌體； (2)種子液制備:將步驟(I)制備的試管菌種接入TSB培養(yǎng)液內(nèi)，在28 32°C下震蕩培養(yǎng)12 16小時制成種子液； (3)發(fā)酵培養(yǎng)基制備:分別取葡萄糖、玉米粉、黃豆餅粉、磷酸氫二鉀加水配制成含葡萄糖1.2%、玉米粉1.8%、黃豆餅粉3%、磷酸氫二鉀0.2%的培養(yǎng)液； (4)液體發(fā)酵生產(chǎn):對發(fā)酵設備及培養(yǎng)基滅菌后，將種子液按5%的接種量接種于步驟配好的培養(yǎng)液，在27 34°C下發(fā)酵培養(yǎng)至少36 48小時后，收集發(fā)酵液即得菌劑； (5)將所述步驟(4)中液體菌劑與填料按一定比例混合制成母液，經(jīng)噴霧干燥機干燥制成母粉；在母粉中添加填料、助劑、穩(wěn)定劑、保護劑制成含有如下成分的生物制劑:發(fā)酵液70%、填料10%、助劑10%、穩(wěn)定劑2.0%、保護劑0.10%，余量為膨潤土。
4.權利要求1所述枯草芽孢桿菌菌株YB-05或權利要求2所述微生物制劑在抑制番茄灰霉病菌、黃瓜灰霉病菌、小麥紋枯病菌、小麥全蝕病菌、小麥赤霉病菌、蘋果褐斑病菌、山藥炭疽病菌、西瓜枯萎病菌、辣椒枯萎病菌、芝麻枯萎病菌、黃瓜疫病菌、棉花紅腐病菌中的應用。
5.權利要求1所述枯 草芽孢桿菌YB-05或權利要求2所述微生物制劑在防治小麥全蝕病中的應用。
6.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，在小麥拔節(jié)期或/和抽穗期施用權利要求2所述的微生物制劑。
7.根據(jù)權利要求6所述的應用，其特征在于，在小麥收獲期施用權利要求1所述的枯草芽孢桿菌YB-05。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種枯草芽孢桿菌菌株YB-05及其菌劑制備方法，該菌株保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCNO.6498。所述微生物菌劑利用枯草芽孢桿菌YB-05菌株發(fā)酵液噴霧干制備粉劑。本發(fā)明的YB-05菌株及其菌劑抑菌譜廣、抑菌效果好，對小麥全蝕病、番茄灰霉病菌、小麥紋枯病菌和黃瓜疫病菌等有較強的抑制作用；該菌劑可用于小麥全蝕病、番茄灰霉病菌、小麥紋枯病菌和黃瓜疫病等的高效無毒、使用簡單、不造成環(huán)境污染。
文檔編號A01N63/00GK103074271SQ20121051891
公開日2013年5月1日 申請日期2012年12月6日 優(yōu)先權日2012年12月6日
發(fā)明者楊麗榮, 薛保國, 全鑫, 馬毅輝 申請人:河南省農(nóng)業(yè)科學院植物保護研究所