專利名稱：一種金線蓮的組培繁殖方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及植物組織培養(yǎng)方法，尤其是涉及一種金線蓮的組培快速繁殖方法。
背景技術(shù)：
由于金線蓮具備顯著的藥用功效，具有清熱、涼血、降血壓、抗菌、抗癌等功效，因此金線蓮的藥用價值已被世人所認(rèn)可，并被廣泛地使用。但是金線蓮在自然條件下繁殖率低、生長速度很慢，加之自然條件的惡化和人類行為破壞，已導(dǎo)致其瀕臨滅絕，致使金線蓮供不應(yīng)求。為滿足市場的需求，金線蓮的人工繁殖及培養(yǎng)技術(shù)被大量研究及應(yīng)用。在種子繁殖、扦插繁殖和組培繁殖中，組培繁殖是最適合金線蓮人工培育的繁殖方法，組培繁殖技術(shù) 是實(shí)現(xiàn)金線蓮規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化培育和生產(chǎn)的最優(yōu)技術(shù)。中國專利CN102090341A公開一種金線蓮的快繁方法，包括種苗消毒、芽誘導(dǎo)、芽增殖、幼苗培養(yǎng)、根誘導(dǎo)、試管苗移栽，所述芽增殖的培養(yǎng)基為去除肌醇的MS+ZnS04 · 7H206mg/L+KH2P04180mg/L+6-BA4mg/L+NAAlmg/L+2% 蔗糖。中國專利CN102100171A公開一種金線蓮水培方法，該方法將金線蓮種苗清洗消毒后，移植到培養(yǎng)盤中，置于裝有水培營養(yǎng)液的培養(yǎng)槽內(nèi)培育，每IOL水培營養(yǎng)液中含有四水硝酸鈣65(T800mg，硝酸銨5(T60mg，硝酸鉀28(T350mg，磷酸二氫鉀10(Tl30mg，硫酸鎂35(T380mg,碘化鉀O. 5 O. 8mg,硫酸錳2 5mg，鑰酸鈉O. 2 O. 3mg,氯化鈷O. I O. 2mg,硼酸2 4mg,硫酸鋅O. 5 lmg,硫酸銅O. 3^0. 5mg,鐵鹽溶液3 5ml ;鐵鹽溶液是由水、七水硫酸亞鐵和乙二胺四乙酸二鈉配制而成。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供能夠快速促進(jìn)金線蓮莖段的快速繁殖并生長的一種金線蓮的組培繁殖方法。本發(fā)明包括以下步驟I)取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒；2)莖段不定芽的誘導(dǎo)；3)組培苗的培育；4)組培苗移栽。在步驟I)中，所述金線蓮最好選用野生金線蓮；所述外植體為除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段；所述外植體消毒的具體方法可為( I)將外植體置于流動水中沖洗；所述沖洗的時間可為I 3h。(2)對沖洗后的外植體浸潤滅菌；所述滅菌可在水平超凈工作臺內(nèi)完成，外植體放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的時間可為10 30s。(3)將步驟(2)浸潤滅菌后的外植體放入HgCl溶液滅菌，所述HgCl溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)可為O. 1%，所述滅菌的時間可為5 20min。
(4)將步驟(3)處理后的外植體用無菌水進(jìn)行涮洗，所述涮洗的條件可為涮洗5 10次,每次涮洗的時間可為I 5min。在步驟2)中，所述莖段不定芽的誘導(dǎo)方法可為將已消毒的外植體莖段切成3段，分別接種于MS培養(yǎng)基上，莖段不定芽誘導(dǎo)后，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)后得到組培苗；所述切成3段可切成上段、中段和下段，所述上段切除莖尖，所述上段、中段和下段的長度可分別為O. 5 I. Ocm,所述上段、中段和下段最好每段均帶有I 2個節(jié)間；所述培養(yǎng)的時間可為2 4個月；所述增殖培養(yǎng)基的組分為MS培養(yǎng)基+細(xì)胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA) O. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，KT) O. I O. 5mg/L+生長素Ca-萘乙酸，NAA>0. I O. 5mg/L+ 吲哚丁酸(IBA)O. I O. 5mg/L+ 水解酪蛋白(CH) O. 3 O. 5g/L+香蕉50 80g/L+活性碳O. 5 I. 5g/L+鹿糖25 40g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;增殖培養(yǎng)基的pH可為5. 8 6。在步驟3)中，所述組培苗的培育方法可為將組培苗接種于生根培養(yǎng)基上，經(jīng)過 培育得到生根組培金線蓮苗，培育的環(huán)境條件為溫度(24±2)°C，光照時間llh/d，光照強(qiáng)度900 20001UX，培育時間為2 3個月；所述生根培養(yǎng)基的組分為1/2MS培養(yǎng)基+細(xì)胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA) O. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，KT) O. I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，NAA) O. I O. 5mg/L+水解酪蛋白(CH)O. 3 O. 5g/L+香蕉100 120g/L+活性碳I I. 5g/L+鹿糖15 30g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;生根培養(yǎng)基的pH可為5. 8 6。在步驟4)中，所述組培苗移栽方法可為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質(zhì)按質(zhì)量比的原料組成為泥炭土 菜園土 蛭石=2 : I : I。本發(fā)明提供了一套金線蓮的組培快速繁殖的方法，其優(yōu)點(diǎn)在于I.本發(fā)明選用不含頂芽和長根的中間莖段作為培養(yǎng)對象，成活率高，不定芽增殖率高。2.在培養(yǎng)基中加入香蕉對于促進(jìn)幼苗生長非常有利，葉片凈增量、發(fā)根數(shù)和鮮重凈增量高。3.經(jīng)過組培試驗(yàn)，增殖率可達(dá)5. 7倍。
具體實(shí)施例方式以下通過實(shí)施例對本發(fā)明做進(jìn)一步說明。實(shí)施例I :選取除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段作為外植體，本實(shí)施例通過以下四步進(jìn)行組培。I)取野生金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體進(jìn)行消毒。2)莖段不定芽的誘導(dǎo)。3)組培苗的培育。4)組培苗移栽。在外植體消毒過程需要準(zhǔn)備的器材及物品已消毒的燒杯、玻璃棒、70%酒精、
O.1%的HgCl溶液、無菌水、秒表等。具體的消毒過程為第一步，將外植體置于流動的自來水中沖洗約2h ；
第二步，對沖洗后的外植體浸潤滅菌。滅菌過程在水平超凈工作臺內(nèi)完成，外植體放置于已消毒的燒杯中并用70%酒精浸泡10 30s。第三步，滅菌劑處理。將經(jīng)過第二步處理后的外植體放入O. 1%的HgCl溶液滅菌約 IOmin。第四步，無菌水涮洗。對經(jīng)過第三步處理后的外植體用無菌水進(jìn)行涮洗，涮洗8次，每次3min。莖段不定芽的誘導(dǎo)過程為將消毒好的外植體(莖段)按上段(切除莖尖)、中段和下段切成長約(O. 5 I. O) cm、并帶有I 2個節(jié)間的小段，分別接種于MS培養(yǎng)基上。莖段不定芽誘導(dǎo)后，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，3個月后得到組培苗。組培苗的培育過程為將組培苗接種于生根培養(yǎng)基上，經(jīng)過培育得到生根組培金線蓮苗。本過程培育的環(huán)境條件為溫度(24±2) °C，光照時間llh/d，光照強(qiáng)度900 20001ux。培育時間為2 3個月。組培苗移栽過程為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質(zhì)原料及比例為泥炭土 菜園土 蛭石=2 : I : I。所述增殖培養(yǎng)基的組分及配比見表I。表I增殖培養(yǎng)基的組分
權(quán)利要求
1.一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于包括以下步驟 1)取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒； 2)莖段不定芽的誘導(dǎo)； 3)組培苗的培育； 4)組培苗移栽。
2.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述金線蓮選用野生金線蓮。
3.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述外植體為除去金線蓮葉片后的野生金線蓮莖段。
4.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟I)中，所述外植體消毒的具體方法為 (1)將外植體置于流動水中沖洗； (2)對沖洗后的外植體浸潤滅菌； (3)將步驟(2)浸潤滅菌后的外植體放入HgCl溶液滅菌； (4)將步驟(3)處理后的外植體用無菌水進(jìn)行涮洗。
5.如權(quán)利要求4所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟(I)中，所述沖洗的時間為I 3h ;在步驟(2)中，所述滅菌在水平超凈工作臺內(nèi)完成，外植體放置于已消毒的容器中并用酒精浸泡，所述浸泡的時間為10 30s ;在步驟(3)中，所述HgCl溶液的質(zhì)量分?jǐn)?shù)為O. 1%,所述滅菌的時間為5 20min ;在步驟(4)中，所述涮洗的條件為涮洗5 10次,每次涮洗的時間為I 5min。
6.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟2)中，所述莖段不定芽的誘導(dǎo)方法為將已消毒的外植體莖段切成3段，分別接種于MS培養(yǎng)基上，莖段不定芽誘導(dǎo)后，轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基，培養(yǎng)后得到組培苗。
7.如權(quán)利要求6所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于所述切成3段是切成上段、中段和下段，所述上段切除莖尖，所述上段、中段和下段的長度可分別為O. 5 I. 0cm，所述上段、中段和下段最好每段均帶有I 2個節(jié)間；所述培養(yǎng)的時間可為2 4個月。
8.如權(quán)利要求6所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于所述增殖培養(yǎng)基的組分為MS培養(yǎng)基+細(xì)胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA)0. I O. 5mg/L+激動素(6-糖基氨基嘌呤，ΚΤ)0. I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，ΝΑΑ)0. I O. 5mg/L+吲哚丁酸(IBA)O. I O. 5mg/L+水解酪蛋白(CH)O. 3 O. 5g/L+香蕉50 80g/L+活性碳O. 5 I. 5g/L+鹿糖25 40g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;增殖培養(yǎng)基的pH可為5. 8 6。
9.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟3)中，所述組培苗的培育方法為將組培苗接種于生根培養(yǎng)基上，經(jīng)過培育得到生根組培金線蓮苗，培育的環(huán)境條件為溫度24±2°C，光照時間llh/d，光照強(qiáng)度900 20001UX，培育時間為2 3個月；所述生根培養(yǎng)基的組分為1/2MS培養(yǎng)基+細(xì)胞分裂素(6-芐氨基腺嘌呤，6-BA)O. I O. 511^/1+激動素(6-糖基氨基嘌呤，1(1')0· I O. 5mg/L+生長素(a-萘乙酸，NAA)O. I O. 5mg/L+ 水解酪蛋白(CH) O. 3 O. 5g/L+ 香蕉 100 120g/L+ 活性碳 I I. 5g/L+鹿糖15 30g/L+瓊脂6. 5 8g/L ;生根培養(yǎng)基的pH可為:5· 8 6。
10.如權(quán)利要求I所述的一種金線蓮的組培繁殖方法，其特征在于在步驟4)中，所述組培苗移栽方法為將生根組培金線蓮苗移栽大棚，大棚的基質(zhì)按質(zhì)量比的原料組成為 泥炭土 菜園土 蛭石=2:1:1。
全文摘要
一種金線蓮的組培繁殖方法，涉及植物組織培養(yǎng)方法。提供能夠快速促進(jìn)金線蓮莖段的快速繁殖并生長的一種金線蓮的組培繁殖方法。取金線蓮的莖段作為外植體材料，將外植體消毒；莖段不定芽的誘導(dǎo)；組培苗的培育；組培苗移栽。選用不含頂芽和長根的中間莖段作為培養(yǎng)對象，成活率高，不定芽增殖率高。在培養(yǎng)基中加入香蕉對促進(jìn)幼苗生長非常有利，葉片凈增量、發(fā)根數(shù)和鮮重凈增量高。經(jīng)過組培試驗(yàn)，增殖率可達(dá)5.7倍。
文檔編號A01H4/00GK102907327SQ20121044259
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月7日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月7日
發(fā)明者方金鎮(zhèn), 鄭志紅, 方加強(qiáng) 申請人:廈門加晟生物科技有限公司