專利名稱：利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于姜科(Zingiberaceae)姜黃屬(Curcuma)所羅門姜黃(Curcumasoloensis Valeton)和紅艷郁金(Curcuma rubescence Roxb.)花丼苗生產(chǎn)技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及一種利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法。通過該方法能夠利用薄片培養(yǎng)技術(shù)快速獲得大量的所羅門姜黃和紅艷郁金試管苗，再將試管苗移栽到自封袋中進(jìn)行裝袋培養(yǎng)，從而獲得大量所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗。
背景技術(shù)：
所羅門姜黃為姜科姜黃屬、多年生根莖狀草本花卉植物，原產(chǎn)于所羅門群島，我國廣東已引種栽培，在華南地區(qū)種植時表現(xiàn)良好。所羅門姜黃是多年生球根花卉，株高O. 4 O.6m,葉片披針形或長圓狀披針形，綠色，葉中脈上有紫色條紋，可盆栽或地栽做觀葉植物；花形奇特，花序形如寶塔，色澤艷麗，質(zhì)地如玉般高雅，具有很高的觀賞特性，是極好的鮮切花品種；花序持續(xù)時間長，可作花鏡、花壇布置。所羅門姜黃通常采用分切根狀莖進(jìn)行繁殖，繁殖系數(shù)低，難以滿足大規(guī)模生產(chǎn)和流通要求。專利申請201010127400. O公開了一種所羅門姜黃的組織培養(yǎng)繁殖方法，該方法通過利用不定芽反復(fù)繼代方法獲得所羅門姜黃離體植株，繁殖系數(shù)較低，培養(yǎng)周期長，移栽室外的植物需要6 8個月才能開花。紅艷郁金株高I. 3 I. 8m,其葉片翠綠,葉柄艷紅,全株紅綠相襯，高雅脫俗，觀葉觀花俱佳，是上等的切花材料和上佳盆栽材料，還可做庭院栽培，極具開發(fā)潛力。通常采用分切根狀莖進(jìn)行繁殖，但自然狀態(tài)下繁殖系數(shù)很低，難以滿足大規(guī)模生產(chǎn)需求和流通要求。到目前為止，還沒有關(guān)于紅艷郁金快繁技術(shù)的研究報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法。該方法采用薄片培養(yǎng)技術(shù)獲得大量的試管苗，將所獲得的試管苗用自封袋進(jìn)行裝袋培養(yǎng)，成功實(shí)現(xiàn)試管苗的裝袋存活，為所羅門姜黃和紅艷郁金的快速繁殖提供新的途徑，有利于迅速實(shí)現(xiàn)所羅門姜黃和紅艷郁金大規(guī)模產(chǎn)業(yè)化生產(chǎn)的要求。本發(fā)明的目的通過下述方案實(shí)現(xiàn)一種利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，包括如下步驟(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)以所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽為外植體，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)出不定芽；(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到健壯的植株；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)取步驟(2)得到的植株，從其基部切取薄片，接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B中進(jìn)行培養(yǎng)，得到健壯的不定芽；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到健壯的植株；
(5)花卉苗的生產(chǎn)將土壤裝入自封袋中，將步驟(4)中得到的植株移栽到自封袋土壤中，置于陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃或紅艷郁金的花卉苗；步驟(I)中所述的所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽優(yōu)選采用以下方法進(jìn)行前處理取所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽，用水沖洗干凈后用洗潔精泡25 30分鐘，再用水沖洗25 30分鐘后用70 75wt%酒精進(jìn)行表面消毒60 90秒，最后用O. lwt%升汞消毒15 20分鐘，切取長O. 5 2. Ocm的芽作為外植體；所述的培養(yǎng)的條件優(yōu)選為于26 28 °C、30 μ mol · m 2S 1光強(qiáng)(白色突光燈)、16L/8D光照條件培養(yǎng)20 30天；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A優(yōu)選為MS培養(yǎng)基+3mg · L_16-BA+0. 2mg · L—1 NAA+30g · L—1鹿糖+7g · L—1瓊脂，pH 5. 6 5. 9,高溫高壓滅菌；
所述的高溫高壓滅菌的條件優(yōu)選為在121°C、1. 06kg/cm2滅菌15min ；步驟(2)中所述的培養(yǎng)的條件優(yōu)選為于26 28 °C、30 μ mol · m 2S 1光強(qiáng)(白色突光燈)、16L/8D光照條件培養(yǎng)15 20天；所述的成苗培養(yǎng)基優(yōu)選為1/2MS培養(yǎng)基+15g · Γ1蔗糖+7g · Γ1瓊脂，pH 5. 6
5.9,聞溫聞壓滅囷；所述的高溫高壓滅菌的條件優(yōu)選為在121°C、1. 06kg/cm2滅菌15min ；步驟(3)中所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B優(yōu)選為MS培養(yǎng)基+ (I 5) mg · Ll-BA+ (O. I O. 2)mg · L_1NAA+30g · L—1 鹿糖 +7g · L—1 瓊脂，pH 5· 6 5· 9,高溫高壓滅菌；所述的高溫高壓滅菌的條件優(yōu)選為在121°C、1. 06kg/cm2滅菌15min ；所述的培養(yǎng)的條件優(yōu)選為于26 28 °C、30 μ mol · m 2S 1光強(qiáng)(白色突光燈)、16L/8D光照條件培養(yǎng)20 25天；所述的薄片的厚度優(yōu)選為O. 5 O. 8mm ;步驟(3)中，從一株植物可切取6 8個薄片；培養(yǎng)20 25天后，有的薄片可獲得高達(dá)8個不定芽，有的可獲得2 3個不定芽，有的只能獲得I個不定芽；當(dāng)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA濃度為3mg -Γ1時，從一株植物最多可獲得15個不定芽，增殖系數(shù)最高達(dá)15倍；不定芽長到I 2cm后即可轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上進(jìn)行成苗培養(yǎng)；如果不急需擴(kuò)繁，也可留苗繼續(xù)在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上培養(yǎng)2 3個月，形成含有大量根系的成熟苗后再直接用于切取薄片；也可以將步驟(3)中獲得的不定芽移栽到自封袋土壤中，置于陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃或紅艷郁金的花卉苗；步驟(4)中所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · L-1蔗糖+7g · L-1瓊脂，ρΗ5· 6 5. 9，高溫高壓滅菌；所述的高溫高壓滅菌的條件優(yōu)選為在121°C、1. 06kg/cm2滅菌15min ；所述的培養(yǎng)的條件優(yōu)選為26 28°C、30 μ mol · πΓΥ1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件；培養(yǎng)時間優(yōu)選為15 20天，如果為留種使用，可在培養(yǎng)基上保留半年以上；步驟(4)中，得到的健壯植株在成苗培養(yǎng)基中又會產(chǎn)生新的不定芽，該不定芽也可直接移栽到自封袋土壤中進(jìn)行花卉苗的生產(chǎn)；步驟(5)中所述的土壤優(yōu)選為富含有機(jī)質(zhì)的土壤，如從花卉市場購買的用于花卉栽培的有機(jī)土、靚土 ；所述的土壤優(yōu)選采用濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液一次澆透，整個過程不再需要施肥，視土壤的干濕情況可適當(dāng)補(bǔ)充水分；所述的自封袋優(yōu)選為15cm X 20cm或7cm X 15cm的自封袋；自封袋所用土壤量和種植植物數(shù)量根據(jù)自封袋的大小而確定；所述的自封袋為15cmX20cm的自封袋時,每袋優(yōu)選種植植物2 4棵,土壤的用量優(yōu)選為每袋50 100暈升；所述的自封袋為7cmX 15cm的自封袋時，每袋優(yōu)選種植植物I棵，土壤的用量優(yōu)選為每袋25 40毫升；所述的植株優(yōu)選為長至6 8cm帶根的不定芽或者從成苗培養(yǎng)基上獲得的植株；步驟(5)中，將步驟(4)中得到的植株移栽到自封袋土壤后，應(yīng)適當(dāng)遮陰，保持自封袋內(nèi)濕潤；在夏季溫度高達(dá)36°C的環(huán)境中馴化，上盆移栽存活率仍然可達(dá)99%以上；植株在自封袋中培養(yǎng)7天后可上盆栽培，盆栽植株繼續(xù)在遮陰、保持土壤濕潤的條件下培養(yǎng)一個月，即可轉(zhuǎn)入正常的栽培管理；花卉苗可在自封袋中保存I周到2個月，根據(jù)需要進(jìn)行上 盆移栽；需要獲得大量的健壯的花卉苗的時候，可根據(jù)生產(chǎn)規(guī)模的需要，調(diào)節(jié)步驟(3)和步驟(4)的重復(fù)頻率，重復(fù)步驟(3)和步驟(4)的操作；也可根據(jù)需要把多余的芽直接保留在誘導(dǎo)培養(yǎng)基上或者轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)獲得成熟苗，以成熟苗來保留品種，保留時間可達(dá)半年以上；在需要大量苗的時候，直接取成熟苗作為外植體用于切取薄片。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下的優(yōu)點(diǎn)及效果( I)本發(fā)明利用植物組織細(xì)胞的全能性和植物薄片培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)過外植體的取材、消毒、不定芽的誘導(dǎo)、薄片的切取、成苗進(jìn)而獲得所羅門姜黃或紅艷郁金花卉苗。本發(fā)明能快速繁殖種苗，比現(xiàn)有技術(shù)的繁殖系數(shù)(5 10倍)有了顯著的提高(本發(fā)明的繁殖系數(shù)為10 15倍)；所用的植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA的濃度較低，(現(xiàn)有技術(shù)的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中6-BA的濃度為5 IOmg · L4,本發(fā)明的6-BA的濃度為I 5mg · L4,最佳濃度為3mg · I71),投入少，產(chǎn)出高；同時也避免了由于培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量過高而導(dǎo)致組培苗可能出現(xiàn)的生長減弱、莖葉細(xì)小、玻璃化等現(xiàn)象。采用本發(fā)明，經(jīng)過一年半的循環(huán)擴(kuò)繁，所羅門姜黃或紅艷郁金試管苗有效率仍高達(dá)95%以上。(2)在通常的植物離體快繁技術(shù)中，都是通過以芽繁芽不斷增殖獲得大量的不定芽，但繼代次數(shù)過多，容易導(dǎo)致不定芽退化、出現(xiàn)大量無效苗的現(xiàn)象。在本發(fā)明中，通過從成熟的植株切取薄片獲得不定芽，一方面可在短時間獲得大量的試管苗，同時可通過保留成熟植株作為外植體代替不定芽作為外植體，避免用以芽繁芽技術(shù)時出現(xiàn)芽退化后需要重新從室外獲取材料、經(jīng)過消毒獲得外植體的麻煩。(3)本發(fā)明采用的薄片厚度只有O. 5 O. 8mm，可以及時暴露殘留在植株中的某些生長遲緩的微生物，避免由于這些污染物持續(xù)許多代而引起的組培苗生長減弱或黃化的現(xiàn)象。
(4)所羅門姜黃和紅艷郁金不定芽或試管苗在離體培養(yǎng)過程中都極易生根。當(dāng)生產(chǎn)上急需大量種苗時，也可直接選取有根的、健壯的不定芽移栽到自封袋中，縮短培養(yǎng)周期。將植株移栽到自封袋中，在高達(dá)36°C的環(huán)境中植株成活率仍高達(dá)99%以上，出苗快、穩(wěn)定，苗壯，其中所羅門姜黃移栽室外后3. 5 4. 5個月即可開花，開花率達(dá)到99%以上。本技術(shù)為滿足所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的規(guī)?；褪袌龌峁┝艘粭l有效的途徑。


圖I為實(shí)施例I所羅門姜黃薄片再生體系的建立及所羅門姜黃花卉苗的生產(chǎn)過程。圖2為實(shí)施例5紅艷郁金薄片再生體系的建立及紅艷郁金花卉苗的生產(chǎn)過程。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合實(shí)施例及附圖對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)的描述，但本發(fā)明的實(shí)施方式不限于此。實(shí)施例I(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)取所羅門姜黃(Curcuma soloensis Voel,取自廣州市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心。下同。)的根狀莖萌發(fā)出的新芽，用自來水沖洗干凈后用洗潔精泡30分鐘，再用自來水流動沖洗30分鐘后用70wt%酒精進(jìn)行表面消毒60秒，最后用
O.1 〖％升汞消毒19分鐘，在超凈工作臺上切取O. 5cm的芽作為外植體，接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度26 、30μπιΟ1 · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)15天誘導(dǎo)出不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg -Γ^-ΒΑ+Ο. 2mg -L^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 9,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中，促進(jìn)苗生根成熟，培養(yǎng)條件為溫度26°C、30 μ mol 光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)18天獲得健壯的植株；所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · L-1蔗糖+7g · L-1瓊脂，pH 5. 9，121 °C > 1. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)將步驟(2)獲得的植株切取薄片(薄片厚0. 5 0. 8mm),接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是溫度26°C、30 μ mol · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)20天獲得健壯的不定芽，不定芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上繼續(xù)培養(yǎng)，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+2mg ^Ll-BA-O. Img · L ^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 9,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上，經(jīng)過18天的培養(yǎng)，獲得有大量不定根的健壯的植株；(5)花卉苗的生產(chǎn)將富含有機(jī)質(zhì)的土壤裝入15cmX20cm的塑料自封袋中，每袋100毫升，澆透濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液；取步驟(4)中得到的健壯的植株，清洗根部培養(yǎng)基后移栽到自封袋土壤中，每袋4棵，放置在陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃的花卉苗，植株成活率為100%;圖I為實(shí)施例I所羅門姜黃薄片再生體系的建立及其花卉苗的生產(chǎn)過程，其中A用于切取薄片用的成熟植株(bar=lcm);B從一株成熟植株上所切取的部分薄片(bar=5mm);C從一個薄片上長出的3個芽(bar=lcm) ；D從一個薄片上長出的8個芽(bar=lcm) ；E將試管苗移栽到自封袋中I周，馴化成活(bar=3cm)疋在自封袋中保留2個月后的成活花卉苗(bar=6cm) ；G自封袋中I個月的苗上盆移栽2個月，花卉苗全部成活(bar=20cm) ;H自封袋中I個月的苗上盆移栽3個月，花卉苗整齊開花(bar=30cm)。實(shí)施例2(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)取所羅門姜黃的根狀莖萌發(fā)出的新芽，用自來水沖洗干凈后用洗潔精泡30分鐘，再用自來水流動沖洗30分鐘后用75wt%酒精進(jìn)行表面消毒75秒，最后用O. lwt%升汞消毒17分鐘，在超凈工作臺上切取Icm的芽作為外植體，接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度27 、30μπιΟ1 · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)20天誘導(dǎo)出不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg L ^-BA+O. 2mg *L ^AA+SOg *L 1 鹿糖 +7g *L 1 瓊脂，pH 5. 8,121。。、I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中，促進(jìn)苗生根成熟， 培養(yǎng)條件為溫度27°C、30 μ mol 光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)17天獲得健壯的植株；所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · L-1蔗糖+7g · L-1瓊脂，pH 5. 8，121 °C > 1. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)將步驟(2)獲得的植株切取薄片(薄片厚O. 5 O. 8mm),接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是溫度27°C、30 μ mol · IrT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)25天獲得健壯的不定芽，不定芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上繼續(xù)培養(yǎng)，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+3mg ^Ll-BA-O. 15mg · L ^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 8,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上，經(jīng)過17天的培養(yǎng)，獲得有大量不定根的健壯的植株；(5)花卉苗的生產(chǎn)將富含有機(jī)質(zhì)的土壤裝入15cmX20cm的塑料自封袋中，每袋50毫升，澆透濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液；取步驟(4)中得到的健壯的植株，清洗根部培養(yǎng)基后移栽到自封袋土壤中，每袋2棵，放置在陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃的花卉苗，植株成活率為99. 5%。實(shí)施例3(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)取所羅門姜黃的根狀莖萌發(fā)出的新芽，用自來水沖洗干凈后用洗潔精泡30分鐘，再用自來水流動沖洗30分鐘后用72wt%酒精進(jìn)行表面消毒90秒，最后用0. 1 丨％升汞消毒15分鐘，在超凈工作臺上切取I. 5cm的芽作為外植體，接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度28°C、30ymol · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)18天誘導(dǎo)出不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg L ^-BA+O. 2mg *L ^AA+SOg *L 1 鹿糖 +7g *L 1 瓊脂，pH 5. 7,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中，促進(jìn)苗生根成熟，培養(yǎng)條件為溫度28°C、30 μ mol · IrT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)15天獲得健壯的植株；所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · Γ1蔗糖+7g · Γ1瓊脂，pH5. 7，121 °C > 1. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)將步驟(2)獲得的植株切取薄片(薄片厚0. 5 0. 8mm),接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是溫度28°C、30 μ mol · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)24天獲得健壯的不定芽，不定芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上繼續(xù)培養(yǎng)，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+Img ^Ll-BA-O. Img · L_1NAA+30g · L-1 鹿糖 +7g · L-1 瓊脂，pH5. 7,121。。、I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上，經(jīng)過15天的培養(yǎng)，獲得有大量不定根的健壯的植株；(5)花卉苗的生產(chǎn)將富含有機(jī)質(zhì)的土壤裝入15cmX20cm的塑料自封袋中，每袋70毫升，澆透濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液；取步驟(4)中得到的健壯的植株，清洗根部培養(yǎng)基后移栽到自封袋土壤中，每袋3棵，放置在陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃的花卉苗，植株成活率為99%。
實(shí)施例4(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)取所羅門姜黃的根狀莖萌發(fā)出的新芽，用自來水沖洗干凈后用洗潔精泡30分鐘，再用自來水流動沖洗30分鐘后用70wt%酒精進(jìn)行表面消毒60秒，用O. lwt%升汞消毒20分鐘，在超凈工作臺上切取2cm的芽作為外植體，接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度26 、30μπιΟ1 · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)17天誘導(dǎo)出不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg -L^-BA+O. 2mg · L ^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 6,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中，促進(jìn)苗生根成熟，培養(yǎng)條件為溫度26°C、30 μ mol 光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)20天獲得健壯的植株；所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · L-1蔗糖+7g · L-1瓊脂，pH 5. 6，121 °C > 1. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)將步驟(2)獲得的植株切取薄片(薄片厚O. 5 O. 8mm),接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是溫度26°C、30 μ mol · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)22天獲得健壯的不定芽，不定芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上繼續(xù)培養(yǎng)，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+5mg -Γ'Θ-ΒΑ+Ο. 2mg · L ^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 6,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上，經(jīng)過20天的培養(yǎng)，獲得有大量不定根的健壯的植株；(5)花卉苗的生產(chǎn)將富含有機(jī)質(zhì)的土壤裝入15cmX20cm的塑料自封袋中，每袋80毫升，澆透濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液；取步驟(4)中得到的健壯的植株，清洗根部培養(yǎng)基后移栽到自封袋土壤中，每袋3棵，放置在陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃的花卉苗，植株成活率為100%。實(shí)施例5(I)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)取紅艷郁金(Curcuma rubescenceRoxburgh,取自廣州市農(nóng)業(yè)技術(shù)推廣中心。)的根狀莖萌發(fā)出的新芽，用自來水沖洗干凈后用洗潔精泡30分鐘，再用自來水流動沖洗30分鐘后用70wt%酒精進(jìn)行表面消毒60秒，最后用0. lwt%升汞消毒20分鐘，在超凈工作臺上切取2cm的芽作為外植體，接種到芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為溫度26°C、30ymol · IrTiV1光強(qiáng)(白色突光燈)、16L/8D光照條件下,培養(yǎng)25天誘導(dǎo)出不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg -Γ^-ΒΑ+Ο. 2mg -Γ'ΝΑΑ+βOg · L-1 鹿糖 +7g · L-1 瓊脂，pH 5. 9,121。。、I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；
(2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中，促進(jìn)苗生根成熟，培養(yǎng)條件為溫度26°C、30 μ mol 光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)20天獲得健壯的植株；所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g · L-1蔗糖+7g · L-1瓊脂，pH 5. 9，121 °C > 1. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(3)薄片不定芽的誘導(dǎo)將步驟(2)獲得的植株切取薄片(薄片厚O. 5 O. 8mm),接種在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上中進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)條件是溫度26°C、30 μ mol · HT2iT1光強(qiáng)(白色熒光燈)、16L/8D光照條件下，培養(yǎng)18天獲得健壯的不定芽，不定芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B上繼續(xù)培養(yǎng)，得到有大量不定根的不定芽；所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+2mg ^Ll-BA-O. Img · L ^AA+SOg · L 1 鹿糖 +7g · L 1 瓊脂，pH 5. 9,121°C > I. 06kg/cm2 滅菌 15min ；(4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上，經(jīng)過20天的培養(yǎng)，獲得有大量不定根的健壯的植株；(5)花卉苗的生產(chǎn)將富含有機(jī)質(zhì)的土壤裝入15cmX20cm的塑料自封袋中，每袋 100毫升，澆透濃度為1/20MS培養(yǎng)基的無機(jī)鹽溶液；取步驟(4)中得到的健壯的植株，清洗根部培養(yǎng)基后移栽到自封袋土壤中，每袋4棵，放置在陰涼處培養(yǎng)，得到紅艷郁金的花卉苗，植株成活率為99%。圖2為實(shí)施例5紅艷郁金薄片再生體系的建立及其花卉苗的生產(chǎn)過程，其中A用于切取薄片用的成熟植株(bar=lcm) ；B從一株成熟植株上所切取的部分薄片(bar=5mm) ；C從一個薄片上長出的3個芽(左邊)和2個芽(右邊)(bar=lcm)山將試管苗移栽到自封袋中2周，馴化成活(bar=3cm) ；E花卉苗剛移栽到花盆中(bar=3cm) ；G上盆移栽2個月后，花卉苗健壯生長(bar=4cm) ；H上盆移栽3個月，花卉苗整齊生長(bar=15cm)。上述實(shí)施例為本發(fā)明較佳的實(shí)施方式，但本發(fā)明的實(shí)施方式并不受上述實(shí)施例的限制，其他的任何未背離本發(fā)明的精神實(shí)質(zhì)與原理下所作的改變、修飾、替代、組合、簡化，均應(yīng)為等效的置換方式，都包含在本發(fā)明的保護(hù)范圍之內(nèi)。
權(quán)利要求
1.一種利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于包括如下步驟 (1)外植體的消毒和不定芽的誘導(dǎo)以所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽為外植體，接種于芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A中進(jìn)行培養(yǎng)，誘導(dǎo)出不定芽； (2)不定芽成苗將步驟(I)誘導(dǎo)的不定芽轉(zhuǎn)入成苗培養(yǎng)基中進(jìn)行培養(yǎng)，得到健壯的植株; (3)薄片不定芽的誘導(dǎo)取步驟(2)得到的植株，從其基部切取薄片，接種在不定芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B中進(jìn)行培養(yǎng)，得到健壯的不定芽； (4)將步驟(3)的不定芽轉(zhuǎn)移到成苗培養(yǎng)基上培養(yǎng)，得到健壯的植株； (5)花卉苗的生產(chǎn)將土壤裝入自封袋中，將步驟(4)中得到的植株移栽到自封袋土壤中，置于陰涼處培養(yǎng)，得到所羅門姜黃或紅艷郁金的花卉苗。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基A為MS培養(yǎng)基+3mg -Γ'Θ-ΒΑ+Ο. 2mg -L^NAA+SOg -Γ1鹿糖+7g · L—1瓊脂，pH 5. 6 5. 9,高溫高壓滅菌。
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于所述的成苗培養(yǎng)基為1/2MS培養(yǎng)基+15g -Γ1蔗糖+7g -Γ1瓊脂，pH 5. 6 5. 9，聞溫聞壓滅囷。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于所述的芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基B為MS培養(yǎng)基+ (I Shg^Pe-BA+ (O. I O. 2)mg · L_1NAA+30g · L—1 鹿糖 +7g · L—1 瓊脂，pH 5· 6 5· 9,高溫高壓滅菌。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于步驟(3)中所述的薄片的厚度為O. 5 O. 8mm。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于 步驟(I)中 所述的所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽采用以下方法進(jìn)行前處理取所羅門姜黃或紅艷郁金的根狀莖萌發(fā)的芽，用水沖洗干凈后用洗潔精泡25 30分鐘，再用水沖洗25 30分鐘后用70 75wt%酒精進(jìn)行表面消毒60 90秒，最后用O. lwt%升汞消毒15 20分鐘，切取O. 5 2. Ocm的芽作為外植體； 所述的培養(yǎng)的條件為于26 28°C、30 μ mo I · πΓΥ1光強(qiáng)、16L/8D光照條件培養(yǎng)20 30天。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于步驟(2)中所述的培養(yǎng)的條件為于26 28°C、30ymol .nTY1光強(qiáng)、16L/8D光照條件培養(yǎng)15 20天。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于 步驟(3)中 所述的培養(yǎng)的條件為于26 28°C、30 μ mo I · πΓΥ1光強(qiáng)、16L/8D光照條件培養(yǎng)20 25天;所述的薄片的厚度為O. 5 O. 8mm。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于步驟(4)中所述的培養(yǎng)的條件為26 28°C、30ymol · πΓΥ1光強(qiáng)、16L/8D光照條件；培養(yǎng)時間為15 20天。
10.根據(jù)權(quán)利要求I所述的利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法，其特征在于步驟(5)中所述的植株為長至6 8cm帶根的不定芽或者從成苗培養(yǎng)基上獲得的植株。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種利用薄片培養(yǎng)技術(shù)生產(chǎn)所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗的方法及其應(yīng)用。該方法利用植物薄片培養(yǎng)技術(shù)，經(jīng)過外植體的取材、消毒、不定芽的誘導(dǎo)、薄片的切取、成苗進(jìn)而獲得所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗，繁殖種苗的速度快，繁殖系數(shù)高；所用的植物生長調(diào)節(jié)劑6-BA的濃度較低，投入少，產(chǎn)出高，也避免了由于培養(yǎng)基中細(xì)胞分裂素含量過高而導(dǎo)致組培苗可能出現(xiàn)的生長減弱、莖葉細(xì)小、玻璃化等現(xiàn)象。采用本發(fā)明，經(jīng)過一年半的循環(huán)擴(kuò)繁，所羅門姜黃和紅艷郁金試管苗有效率仍高達(dá)95%，所羅門姜黃移栽室外后3.5～4.5個月即可開花。本技術(shù)為滿足所羅門姜黃和紅艷郁金花卉苗提供的規(guī)?；褪袌龌峁┝艘粭l有效的途徑。
文檔編號A01H4/00GK102907325SQ201210438629
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月6日
發(fā)明者肖望, 涂紅艷, 黃斯娜, 管敏燕, 陳愛葵, 關(guān)見留 申請人:廣東第二師范學(xué)院